تصور انواع معينة ايليجانس استخدام الصبغة الحيوية محبة للدهون ، صلاح الغيدان

Summary

نقدم طريقة لتصور العيش في إهاب C. ايليجانس باستخدام صبغ أحمر فلوري محبة للدهون الجاذبة (1،1 '- dioctadecyl - 3 ، 3،3' ، 3' - tetramethylindocarbocyanine البركلورات) ، والذي يستخدم عادة في C. ايليجانس لتصور العصبونات المعرضة بيئيا. مع هذا البروتوكول الأمثل ، وجناح الكبير الملون والحلقي هياكل جليدية بواسطة الجاذبة ولاحظ باستخدام المجهر المركب.

Abstract

إهاب من C. ايليجانس هو بنية شديدة المقاومة التي تحيط الخارجي للحيوان ^1-4. إهاب لا يحمي فقط من الحيوان والبيئة ، ولكن كما يحدد شكل الجسم ويلعب دورا في حراك ^4-6. عدة طبقات يفرز من قبل خلايا البشرة تتكون من إهاب ، بما في ذلك طبقة الدهون الأبعد ^7.

دعا التلال كفافي في إهاب للحلقة نمط طول الحيوان وموجودة في جميع مراحل التنمية ^8. أجنحة هي التلال الطولية التي موجودة خلال مراحل معينة من التنمية ، بما في ذلك L1 ، dauer ، ومراحل البالغين ^2،9. يمكن أن الطفرات في الجينات التي تؤثر على المنظمة جليدية تغيير بنية الكولاجين جليدية والحيوان التشكل ^5،6،10،11 الجسم. بينما التصوير المجهري باستخدام جليدية مجمع مدينة دبي للإنترنت مع البصريات هو ممكن ، الطرق الحالية التي تبرز هياكل جليدية تشمل fluores¹² في المائة التحوير التعبير ، وتلطيخ الضد ¹³ ، والمجهر الإلكتروني ^1. جرثومة القمح المسمى راصة (WGA) كما تم استخدامها لتصور جليكوبروتينات جليدية ، ولكن محدودة في حل هياكل جليدية الدقيقة ^14. وقد لوحظ تلون سطح جليدية باستخدام صبغة الفلورسنت ، ولكن لم تتميز بالتفصيل ^15. نقدم طريقة لتصور العيش في C. إهاب ايليجانس باستخدام صبغ أحمر فلوري محبة للدهون الجاذبة (1،1 '- dioctadecyl - 3 ، 3،3' ، 3' - tetramethylindocarbocyanine البركلورات) ، والذي يستخدم عادة في C. ايليجانس الخلايا العصبية لتصور المعرضة بيئيا. هذا البروتوكول الأمثل لتلطيخ الجاذبة هو بسيط ، طريقة قوية لرؤية ارتفاع القرار من الفلورسنت للحلقة ، جناح الكبير والفرج ، وذيل الذكور ، وارتفاع الذيل خنثى في C. ايليجانس.

Protocol

1. إعداد صلاح الغيدان وصمة عار

1. يعد حل سهم الجاذبة ملغ / مل 20 (Biotium ، شركة ، هايوارد ، كاليفورنيا) في DMF. صلاح الغيدان هو الضوء الحساسة وحمايتها حتى من الضوء الجاذبة التي التفاف في احباط.
2. إنشاء تخفيف العمل الجاذبة بإضافة 0،6 الأسهم الجاذبة ميكرولتر إلى 399.4 M9 ميكرولتر لكل السكان. هذا يجب أن تعطي تخفيف العمل النهائية من 30 ميكروغرام / مل الجاذبة في M9. يمكن زيادتها لتصل هذه تلطيخ السكان متعددة في وقت واحد. درع الجاذبة من الضوء التفاف الأنبوب (ق) في احباط.

Discussion

طريقة تلوين الجاذبة المقدمة هنا يسمح للطريقة سريعة ومريحة نسبيا لتصور في إهاب ايليجانس جيم. بواسطة repurposing وتحسين طريقة تستخدم عادة لصورة الخلايا العصبية الحسية ^15،17 المعرضة بيئيا ، يمكن أن تستخدم لصبغ الجاذبة fluorescently كلا أجنحة وهياكل حلقية (الشكلان 1 و 2) ، فضلا عن الفرج ، وذيل الذكور ، وارتفاع الذيل خنثى (الشكل 3). لقد وجدنا أن الحل الحضانة والنفوذ الوقت قدرة الجاذبة للبشرة وصمة عار على الدوام (الجدول 1 ، الشكل 4). طريقة لتلوين الخلايا العصبية الجا.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
الكواشف	مرادفات	شركة	فهرس العدد	تعليقات
صلاح الغيدان	1،1 '- Dioctadecyl - 3 ، 3،3' ، 3' - tetramethylindocarbocyanine بيركلورات	Biotium ، وشركة	60010	الأسهم التخفيف : 20 ملغ / مل في DMF تمييع العمل : 30 ملغ / مل
DMF	ثنائي ميثيل الفورماميد	سيغما الدريخ ، وشركة	D4551
تريتون نصف إله عند الإغريق X - 100	Octylphenoxypolyethoxyethanol	VWR الدولية ، ذ.	EM - 9410
M9	22mm و KH 2 PO 4 ، 42mM نا 2 هبو 4 ، 86mM كلوريد الصوديوم ، 1MM MgSO 4
NGM	الخيطية النمو المتوسطة	المكافحة المتكاملة للآفات والعلم ، وشركة	11006-501	يمكن أن تكون مستعدة بعد بروتوكول آغار NGM 18
أجار أجار		EMD كيماويات ، وشركة	1،01614	4 ٪ في الماء
Levamisole	Levamisole هيدروكلوريد	سيغما الدريخ ، وشركة	31742	100 ميكرون -- 1 ملي levamisole على النحو المطلوب
مجهر الشرائح		VWR الدولية ، ذ.	16005-106
النظارات المجهر تغطية		VWR الدولية ، ذ.	16004-302
مجمع نطاق		كارل زايس ، وشركة	A1m	استخدام الأهداف لتلبية احتياجات التجربة
متوافق تصفية TRITC أو غيرها	&نبسب ؛	صفاء شركة تكنولوجيا	49005	باءت بالفشل DSRed (TRITC/Cy3) تعيين مرشح -- ET