نحن هنا وصف أول ممارسة التصنيع الجيد (GMP) المتوافقة مع طريقة لانتاج الفيروسات محددة الخلايا الليمفاوية T السامة للخلايا (CTL) من دم الحبل السري، ومصدرا للخلايا T السذاجة في الغالب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
توسيع الخلايا اللمفاوية T السامة للخلايا من دم الحبل السري أن الفيروس المضخم للخلايا الهدف، فيروس ابشتاين بار، واتش
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العدوى بالفيروس بعد زرع الخلايا الجذعية هي من بين الأسباب الأكثر شيوعا للوفاة، خاصة بعد دم الحبل السري (CB) زرع (CBT) حيث CB لا تحتوي على أرقام ملموس من الخلايا T فيروس ذوي الخبرة التي يمكن أن تحمي من الإصابة المتلقي 1 - 4 نحن وآخرون أظهرت أن الفيروس محددة CTL ولدت من المانحين مصليا وغرست إلى المستلم آمنة واقية. 5-8 ومع ذلك، وحتى وقت قريب، لم يكن الفيروس خلايا T محددة يتم إنشاء من دم الحبل السري، من المحتمل بسبب غياب خلايا محددة فيروس T الذاكرة.
في محاولة لتقليد بشكل أفضل في ظروف فتيلة الجسم الحي من خلايا T السذاجة، أنشأنا الطريقة التي تستخدم الخلايا الجذعية المشتقة من CB (DC) transduced مع ناقلات الغدانية (Ad5f35pp65) التي تحتوي على مستضد CMV سائد مناعيا pp65، والقيادة وبالتالي خصوصية T الخلية نحو CMV واتش. [9] في البدء، ونحن نستخدم هذه أماهtured البلدان النامية وكذلك CB-T في الخلايا المشتقة وجود السيتوكينات IL-7، IL-12، وIL 15-10 الساعة تحفيز الثانية التي تستخدم EBV-تحولت الخلايا B، أو EBV LCL، التي تعبر عن كل من كامنة والتحللي مستضدات EBV. وتستخدم Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL لتحفيز خلايا T في حضور IL-15 في تحفيز الثانية. التحفيز لاحقة استخدام Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL وIL-2.
من الخلايا وحيدات النوى 50x10 6 CB نحن قادرون على توليد ما يزيد عن 150 × 10 خلايا الفيروسات محددة 6 T ليز أن مستضد نابض الأهداف والسيتوكينات الإفراج ردا على التحفيز المستضدية 11 هذه الخلايا تم تصنيعها بطريقة GMP المتوافقة فقط باستخدام وقد ترجمت الكسر 20٪ من وحدة دم الحبل السري ومجزأة للاستخدام السريري.
البروتوكول
1. وحيدات النوى خلية عزل (يوم 0)
- إدراج محول ارتفاع الأنبوب الإناث في ميناء مخرج الكسر 20٪ من الحبل وحدة الدم، وإزالة إرفاق حقنة الدم. نقل الدم إذابة إلى 20 مل من RPMI تحسنت في 50 مل أنبوب الطرد المركزي. شطف كيس الدم الحبل مع 5 مل من RPMI ونقل إلى أنبوب الطرد المركزي نفسه.
- أجهزة الطرد المركزي الخلايا لمدة 10 دقائق في ز × 400. نضح طاف.
- إعادة تعليق الخلايا في 20 مل من RPMI الدافئة. خلايا طبقة على 15 مل من Lymphoprep في 50 مل أنبوب الطرد المركز....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن الاستراتيجيات الحالية التي تهدف إلى السيطرة على العدوى الفيروسية بعد CBT تكون فعالة، ولكن ترتبط مع أنها السميات كبيرة، غالية الثمن، ولا تمنح حماية ضد العدوى على المدى الطويل في وقت لاحق. في الواقع، قد يكون استخدام بعض الأدوية المضادة للفيروسات يحد من التوسع في الخلايا T الفيروسات محددة من شأنها أن يكون الأمر خلاف ذلك واقية 14 وثمة خيار آخر هو ضخ خلايا الفيروسات محددة المانحة المستمدة T. نحن وغيرنا قد أظهرت أن الخلايا T هذه هي آمنة، فعالة، وفعالة من حيث التكلف.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل L. دان دنكان منحة بحثية تعاونية (CMB ونقابة الصحفيين المصرية)، المعهد الوطني للقلب والرئة، والدم المعهد (US4HL081007)، وسرطان الدم وسرطان الغدد الليمفاوية جمعية جائزة الباحث العلمي البحوث السريرية (CMB)، والمعهد الوطني للسرطان (RO1 CA06150816؛ نقابة الصحفيين المصرية).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | كتالوج رقم | |
| RPMI 1640 | إينفيتروجن | 21870-076 | |
| DC وسائل الإعلام | CellGenix | 20801-0500 | |
| EHAA (متوسطة اضغط على) | ايرفين العلمية | 9195 | |
| مصل الإنسان | الجوزاء بيو المنتجات | 100-110 | |
| الغاز نفاذية Cultureware 18 | ويلسون، وولف | 80040S | |
| IL-2 | تشيرون (TCH صيدلة) | ||
| IL-12 | NCI / CTEP | ||
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 | |
| IL-7 | R & D | AFL207 | |
| IL-1beta | R & D | AFL201 | |
| IL-6 | الخليةGenix | 1004-050 | |
| GM-CSF | TCH الصيدلة | ||
| IL-4 | R & D | AFL204 | |
| TNF-ألفا | R & D | AFL210 | |
| Ad5f35pp65 | BCM إنتاج النواقل CAGT مرفق | ||
| نقل البلازما مع مجموعة محول بالتركيبة الإناث | ميثاق الطبية | 89-550-66j | |
| Lymphoprep | NYCOMED | 1114550 |
المراجع
- Kennedy-Nasser, A. A. Comparable outcome of alternative donor and matched sibling donor hematopoietic stem cell transplant for children with acute lymphoblastic leukemia in first or second remission using alemtuzumab in a myeloablative conditioning regimen. Biol. Blood Marrow Transplant. 14, ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
