A بروتوكول بسيط لاستخراج اليرقات من Hemocytes البرية

Summary

hemocytes الحشرات تنفيذ العديد من الوظائف الهامة، سواء المناعي وغير المناعة، في جميع مراحل التنمية الحشرات. معرفتنا الحالية للأنواع كرية دموية وظيفة يأتي من الدراسات على نماذج جينية الحشرات. هنا، نقدم طريقة لاستخراج، وقياس تصور hemocytes من اليسروع البرية.

Abstract

hemocytes الحشرات (أي ما يعادل الثدييات خلايا الدم البيضاء) تلعب دورا هاما في العديد من العمليات الفسيولوجية في جميع أنحاء دورة حياة حشرة ^1. في مراحل اليرقات من الحشرات تنتمي إلى أوامر من قشريات الجناح (الفراشات والعث) وذوات الجناحين (الذباب الحقيقي)، وتشكل hemocytes من الغدة الليمفاوية (جهاز متخصص المكونة للدم) أو الخلايا الجنينية ويمكن حملها حتى المرحلة الكبار. ويشارك في الهجرة hemocytes الجنينية الخلايا خلال تنظيم وتطوير الكيميائي أثناء الالتهاب. كما تشارك في موت الخلايا المبرمج الخلية وضرورية لمرحلة التطور الجنيني ^2. Hemocytes توسط الذراع الخلوية للاستجابة المناعة الفطرية الحشرات التي تضم عدة وظائف، مثل انتشار الخلايا تجميع الخلية، وتشكيل عقيدات، البلعمة والتغليف من الغزاة الأجانب ^3. كما أنها مسؤولة عن تدبير محدد الدفاعات الخلطية الحشرات خلال العدوى، مثل العلاقات العامةoduction من الببتيدات المضادة للميكروبات والجزيئات الأخرى المستجيب ^{4، 5.} وقد تم أساسا مورفولوجيا كرية دموية وظيفة درس في نماذج الحشرات وراثية أو فسيولوجية، بما في ذلك ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا ^{6، 7،} الزاعجة المصرية البعوض وأنوفيليس غامبياي ^{8 و 9} وhornworm التبغ، ماندوكا سيكستا ^{10 و 11.} ومع ذلك، توجد معلومات قليلة حول التنوع حاليا، والتصنيف، ومورفولوجيا وظيفة hemocytes في أنواع الحشرات غير نموذج، وخصوصا تلك التي تم جمعها من البرية ال ^12.

نحن هنا وصف بروتوكول بسيطة وفعالة لاستخراج hemocytes من اليسروع البرية. ونحن نستخدم ما قبل الأخيرة الطور Lithacodes المتورقة (أصفر الكتف فراشة سبيكة) (الشكل 1) وEuclea delphinii (البلوط شائك سبيكة) اليسروع (قشريات الجناح: Limacodidae) وتبين أن كميات كافية من الدملمف (الدم الحشرات)يمكن أن تكون معزولة وأرقام كرية دموية عد من اليرقات الفردية. ويمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة كفاءة أنواع كرية دموية في هذه الأنواع وكذلك في غيرها من اليسروع lepidopteran ذات صلة تحصد من الميدان، أو يمكن أن الجمع بين المقايسات المناعية بسهولة مع مصممة للتحقيق وظيفة كرية دموية بعد العدوى الميكروبية أو الكائنات مع الطفيلي ^13.

Protocol

1. تحضير المواد

1. إعداد الإبر (1-2 و 3-4 ميكرون تلميح تفتق مم) باستخدام أنابيب زجاجية البورسليكات الشعرية ومجتذب micropipette. ضبط الصك: منحدر: 561؛ السرعة: 20؛ الحرارة: 560؛ التأخير: 1؛ سحب: 100؛ الضغط: 500.
2. إعداد الحل ال: 60٪ من متوسط ​​غريس (GM) تستكمل مع 10٪ من مصل بقري جنيني (FBS) و 20٪ من الاحتياطي تخثر (98 ملي مول هيدروكسيد الصوديوم، 186 مم كلوريد الصوديوم، 1.7 ملي مول EDTA و 41 حمض الستريك ملي، ودرجة الحموضة 4.5 ). ويتم إعداد الحل أعلاه الطازجة تحت ظروف معقمة ويحرص على الجليد في جميع....

Results

بروتوكول الموصوفة هنا يسمح للجمع وحدة تخزين الحد الأدنى من 10-20 ميكرولتر من الدملمف الحشرات من اليسروع الفردية. Hemocytes جمعها باستخدام هذه الطريقة خالية من التثاقل الخلية، وعيوب التصبغ، والحطام الأنسجة أو غيرها من الملوثات. بالتالي يمكن بسهولة ملاحظة hemocytes وعدها تحت المجهر، ويمكن ملاحظة العديد من الحشرات داخل هوسور قليلة. لاحظنا أن أغلبية hemocytes في عينات لدينا يتألف من plasmatocytes ³ ​​(hemocytes نشر غير متماثلة) (الشكل 4). نحن حاليا تميز الأ.......

Discussion

سبق طرق لاستخراج hemocytes من الحشرات الهامة طبيا والحشرات نموذج lepidopteran ذكرت ^{9 و 14.} يتم تكييفها طرق استخراج كرية دموية وفقا لأنواع الحشرات، والمرحلة التنموية للحشرة ومميزاته المورفولوجية. على سبيل المثال، يمكن عزل اليرقات من الدملمف ماندوكا يقوم بسهولة من قبل القص القرن المنحني قرب نهاية البطن ^15. لأن اليسروع سبيكة (Limacodidae) تفتقر هذه البنية في البطن، وقد وضعنا بروتوكولا متميزة لاستخراج الدملمف من اليرقات الصغيرة الحجم التي تم جمعها ميداني.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم كاشف	شركة	كتالوج رقم	تعليقات
Micropipette مجتذب	سوتر الآلات	P-1000
أنابيب زجاجية البورسليكات	سوتر الآلات	B100-50-10	OD: 1.0، ID: 0.50 مم
غريس متوسطة	سيجما	G8142
المصل البقري الجنين	الحرارية فيشر العلمية	SH3007102	الحرارة المعطل
دومون # 5 ملقط	أدوات العلوم الجميلة	11252-40
عدادة الكريات نويباور	Hausser العلمية	3200
البلاستيك TUBIنانوغرام	ثلاثي التقنية	TT-3-32OD	OD: 3/32''، ID: 1/32 '
الزجاج حقنة طبية	فورتونا اوبتيما	D-97877	حجم 50 مل
إبرة حادة نهاية	قطع صغيرة	NE-162PL-25	16 مقياس س 1 "طول