مقالة منهجية

التفريق الأدوار الوظيفية في التعبير الجيني من الخلايا المناعية وغير المناعية في التهاب القولون الماوس عن طريق زرع نخاع العظم

DOI:

10.3791/4208

⸱

أكتوبر 1, 2012

 ,  ,  ,  , 
1Center for Inflammatory Bowel Diseases, Division of Digestive Diseases, David Geffen School of Medicine, The University of California Los Angeles, Los Angeles

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

زرع نخاع العظام يوفر وسيلة لتغيير التركيب الوراثي للخلايا نخاع العظام المستمدة. إذا يعبر عن الجينات ذات الأهمية في كل من خلايا نخاع العظام والخلايا المشتقة نخاع العظم غير المشتقة، يمكن زرع نخاع العظام تغيير خلايا نخاع العظام المستمدة إلى التركيب الوراثي مختلفة دون تغيير التركيب الوراثي غير العظام نخاع الخلية مشتقة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لفهم دور الجينات في تطوير التهاب القولون، قارنا ردود البرية من نوع الفئران والجينات في المصالح الفئران خروج المغلوب لنقص التهاب القولون. إذا يعبر عن الجينات في المصالح في كل من خلايا نخاع العظام والخلايا المشتقة نخاع العظام المستمدة غير للمضيف، ولكن من الممكن التفريق بين دور الجينات في المصالح في خلايا نخاع العظام ونخاع المستمدة غير العظام مشتقة من خلايا نخاع العظام تقنية الزرع. لتغيير التركيب الوراثي نخاع العظام المستمدة من الفئران الخلية، تم تدمير النخاع العظمي الأصلي من الفئران المتلقية من قبل التشعيع وبعد ذلك استبدال نخاع العظام المانحة الجديدة من النمط الجيني مختلفة. عندما تم زرع العظام من النوع البري المانحة الفئران الفئران خروج المغلوب لنخاع، يمكن أن تولد الفئران خروج المغلوب مع التعبير الجيني من النوع البري في خلايا نخاع العظام المستمدة. بدلا من ذلك، تم زرعها عند الفئران خروج المغلوب المانحة نخاع العظم للفئران المستفيدة من النوع البري والبرية من نوع الفئران دون الجينات في المصالح معربا عنمن نخاع العظم تم إنتاج الخلايا المشتقة. ومع ذلك، قد زرع نخاع العظم لا يكون 100٪ كاملة. ولذلك، تستخدم مجموعة من الجزيئات نحن (CD) التمايز (CD45.1 وCD45.2) كعلامات من الخلايا المانحة والمتلقية لتتبع نسبة من الخلايا المانحة نخاع العظام في الفئران المستمدة المستفيدة ونجاح زرع نخاع العظام. واستخدمت البرية من نوع الفئران مع الفئران خروج المغلوب وراثى CD45.1 مع CD45.2 الوراثي. بعد التشعيع من الفئران المتلقية، وغرست في خلايا نخاع العظام من المانحين الأنماط الوراثية في الفئران المتلقية. وعندما نخاع العظام الجديدة المجددة للاستيلاء على حصانتها، تحدى الفئران عن طريق وكيل الكيميائية (ديكستران كبريتات الصوديوم، 5٪ DSS) للحث على التهاب القولون. نحن هنا كما أظهرت طريقة للحث على التهاب القولون في الفئران وتقييم دور الجينات في المصالح وأعرب عن خلايا نقي العظم المشتقة. إذا كان الجين في المصالح من خلايا العظام المستمدة تلعب دورا هاما في تطور هذا المرض (مثل القولونيةTIS)، يمكن النمط الظاهري من الفئران المتلقية مع زرع نخاع العظام غيرت بشكل كبير. في نهاية التجارب التهاب القولون، ونخاع العظام المستمدة وصفت الخلايا في الدم ونخاع العظام مع الأجسام المضادة ضد CD45.1 وCD45.2، ويمكن استخدامها على نسبة الكمية من وجودها لتقييم نجاح زرع نخاع العظام بواسطة التدفق الخلوي. يجب ناجحة زرع نخاع العظام تظهر الغالبية العظمى من النمط الجيني المانحة (في فترة من علامة جزيء CD) على النمط الجيني المستلم في كل من نخاع العظام والدم من الفئران المتلقية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. قبل بدء أنت بين الاعتبارات الفنية

  1. نوصي باستخدام كل C57/BL6 البرية من نوع الفئران والفئران خروج المغلوب للتجربة لأنه يمكن شراؤها الفئران مع جزيئات CD المقابلة من الباعة الماوس كبيرة.
  2. لأنه من الصعب تتبع الفئران البرية من نوع الفئران خروج المغلوب وتستمد الخلايا المانحة بعد زرع نخاع العظام، فمن الضروري استخدام CD45.1 الفئران لتمثيل البرية من نوع الفئران. (WT CD45.1 الفئران C57/SJL الأسهم المختبرات جاكسون # 002014).
  3. معظم المستعمرات الماوس هي CD45.2. الفئران خروج المغلوب لدينا تنتمي إلى التركيب الوراثي CD45.2 (بدلا من ذلك CD45.2 الفئران WT المصدر: جاكسون المختبرات الأسهم # 000664). لا يمكن أن يؤديها تحديد النمط الجيني CD45.1 أو CD45.2 باستخدام التدفق الخلوي من نخاع العظم والدم المحيطي على النحو المذكور في المادة 7 في هذا البروتوكول.
  4. لقد خطر الفئران بعد التشعيع الحصانة. الحفاظ على الفئران في منشأة خالية من مسببات الأمراض.
  5. يتطلب تشغيل irradiator الأمن الخاصة clearancه والتدريب. لتوفير الوقت في عمليات التدريب والموافقة، فمن الأفضل أن يتعاون مع مختبر مع فني مؤهل قادر على تشغيل irradiator.
  6. العديد من المؤسسات لديها مختبرات قياس التدفق الخلوي مع الفنيين من ذوي الخبرة. للحد من مشاكل مع عملية التدفق الخلوي، فمن الأفضل لمناقشة تجربة الخلوي الخاص بك خطة التدفق مع فني من ذوي الخبرة قبل البدء.
  7. تم تعيين الفئران بهذه الطريقة (10 الفئران في كل مجموعة):
مجموعة متبرع بنخاع العظام إلى المتلقي علاج
A BM تبادل CD45.1 WT CD45.2 إلى KO DSS التهاب القولون
B التحكم في المياه العادية
C BM تبادل CD45.2 KO لWT CD45.1 DSS التهاب القولون
D التحكم في المياه العادية
E زيف CD45.1 WT CD45.1 إلى WT DSS التهاب القولون
F التحكم في المياه العادية
G زيف KO KO CD45.2 لCD45.2 DSS التهاب القولون
H التحكم في المياه العادية

يظهر الرسم التوضيحي A * موجز لبروتوكول تجريبي في الشكل 1.

2. المتلقي الفئران تشعيع

  1. هي ولدت الفئران ويحتفظ بها في الممرض خالية المرفق. مكان الفئران في فطيرة تشعيع تعقيمها مع فلتر. مكان واحد الماوس في كل فتحة من فطيرة التشعيع. وضع الكعكة في irradiator وتأكد من أن القرص الدوار وفطيرة يتجهون.
  2. بدوره على مضخة الهواءللتهوية. إغلاق باب irradiator وقفله.
  3. أشرق على الفئران مع 1،000 راد (أي ما يعادل 10 غراي) حوالي 10 دقيقة (اعتمادا على مصدر الإشعاع ونصف الحياة). من هذه النقطة الزمنية، هي الفئران المشععة المناعية للخطر ويكون ضعف جهازهم المناعي ضد العدوى. بعد التشعيع، واتخاذ فطيرة من معلومات ووضعه في وعاء معقم لنقل إلى مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية في منشأة للحيوانات. تجنب تعريض الفئران لبيئة خارجية لتقليل فرصة الإصابة بالمرض.
  4. في مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية، نقل الفئران في أقفاص الماوس تعقيمها مع الفراش تعقيمها (4 الفئران في قفص إضافة الماء المعقم جديدة مع التعليق sulfatrim - 3،12 مل لكل 100 مل من الماء).
  5. التفاف زجاجة مياه مع رقائق الألومنيوم والمضادات الحيوية هي الحساسة للضوء. يهز لخلط الزجاجة جيدا قبل حل sulfatrim التحميل إلى القفص.

3. استخراج المانحة نقي العظم

  1. التضحية الفئران مع ثاني أكسيد الكربون أو isoflurتعصب وتزج في حل ثم اللايسول 1:200. رش الفئران مع الايثانول 70٪ إلى الجلد الرطب وتشريح العظام مفتوحة.
  2. نقع في الصكوك تشريح الايثانول 70٪ للتعقيم.
  3. أداء تشريح في خزانة السلامة الأحيائية. استخدام أدوات معقمة لفضح تشريح العضد، عظم الفخذ، الساق وعظام الشظية، وخالية من ربط العضلات والأربطة.
  4. خفض فتح طرفي العظام لإظهار نخاع العظام الأحمر. عقد العظام مع ملقط. مسح نخاع العظام الأحمر خارجا مع PBS الباردة مع حقنة مل 3 و الإبر 25G إلى طبق بيتري. طرد من كلا طرفي العظام لانتاج خلايا نخاع العظام أكثر.
  5. استخدام 6 مل المحاقن والإبر 18G1 / 2 لكسر الأحمر المقابس نخاع العظام بواسطة طموح المتكررة وطرد. نقل نخاع العظام مع 50 مل أنابيب الصقر.
  6. تدور نخاع العظم عليها في 1،800 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. تجاهل طاف، إعادة تعليق بيليه من قبل vortexing لثانية 5-10.
  7. تمييع 10X العازلة تحلل RBC مع الماء المعقم. إعلاند تحلل RBC 1X العازلة (5 مل لكل الماوس المانحة)، ومرة ​​أخرى لمدة 5 دوامة ثانية والحفاظ 3 دقائق بالضبط في درجة حرارة الغرفة.
  8. بعد 3 دقائق، وملء الأنابيب مع 20 مل PBS الباردة لوقف تحلل والمزيج. صب المحتوى من خلال مصفاة الخلية 40 ميكرون مباشرة إلى 50 عضوا جديدا أنبوب فالكون مل.
  9. شطف الأنابيب الأصلي مع 5 مل من برنامج تلفزيوني ونقلها إلى مصفاة الخلية أيضا. أعلى ما يصل الى 50 مل PBS مع والمزيج.

4. عد خلايا العظام متبرع بنخاع

  1. إضافة 100 ميكرولتر من اللون الأزرق التريبان إلى أنبوب إيبندورف و 100 ميكرولتر من التعليق نخاع العظم لأنبوب إيبندورف والمزيج. ماصة الخليط الملون الخلية إلى عدادة الكريات.
  2. يتم احتساب مبلغ إجمالي عدد الخلايا عن طريق خلايا نخاع العظام الذين يعيشون في أنابيب فالكون = عدد الخلايا غير ملوثين في 16 المربعات X 2 (بسبب تخفيف الأزرق التريبان) × 10000 × 50 مل
  3. تدور أسفل خلايا نخاع العظام في 50 مل أنابيب الصقر في 2،000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية.
  4. إزالة طاف. تستندعلى إجمالي عدد الخلايا، وإعادة تعليق بيليه مع PBS ل1 × 8 10 خلايا لكل مل

5. التسريب على الفئران المتلقي

  1. تدفئة الفئران المتلقية على وسادة الحرارة وتحت مصباح الاحترار. وضع المتلقي في الفئران restrainer. حقن 1 × 10 7 خلية لكل ميكرولتر 100-200 الماوس في الوريد.
  2. ويجب أن يتم حقن نخاع العظام بين 4-24 ساعة المانحة بعد التشعيع.
  3. الحفاظ على ما يصل إلى 4 حقن الفئران في قفص. الحفاظ على الفئران المتلقية حقن في أقفاص تعقيمها بالماء المضادات الحيوية لمعاملة لأول 4 أسابيع في منشأة الممرض الحيوانية مجانا والسماح للفئران استعادة الحصانة. أقفاص التغيير، والمضادات الحيوية المعاملة الماء والغذاء كل 4 أيام للحفاظ على النظافة.

6. تحريض التهاب القولون التهاب القولون وتقييم

  1. 4 أسابيع بعد زرع نخاع العظام وأشعة، والتحول إلى المياه العادية دون المضادات الحيوية والحفاظ على الفئران لمدة 2 أسابيع أخرى لاستعادة وضعها الطبيعيالقناة الهضمية الدقيقة.
  2. 6 أسابيع بعد الحقن نخاع العظم، وقياس وزن الجسم الأولي. يتم إعطاء بعض الفئران 5٪ كبريتات ديكستران في مياه الشرب libitum الإعلانية للحث على التهاب القولون. يتم إعطاء بعض الفئران العادية مياه الشرب فقط مجموعات المراقبة العادية.
  3. 5 أيام في وقت لاحق، سحب الدم المحيطي، ونقل إلى أنابيب مغلفة الهيبارين (Vacutainer) ونضع في الجليد. تجمع الدم في الفترة من 4 إلى 1 أنبوب الفئران. الجمع بين 300 ميكرولتر من الدم مع 300 ميكرولتر من العازلة تلطيخ الخلايا = 600 ميكرولتر. تقسيم الدم إلى أنابيب إيبندورف 5، مع 100 ميكرولتر لكل.
  4. التضحية الفئران مع ثاني أكسيد الكربون أو isoflurane. تقييم الضرر عشرات العيانية (يرجى الرجوع إلى منشور آخر للحصول على تفاصيل الفيديو [جوف] 1). قياس الجسم تغير الوزن. قياس طول الأمعاء وسمك مع الفرجار الرقمية. مراقبة الملمس البراز (من الصعب، لينة أو دموية). تحديد الدم في البراز غامض مع Hemooccult. تشريح الأنسجة القولون وإصلاح في الفورمالين لH & E تلطيخ.
  5. تشريح عظم الفخذ 1 بوشمال شرق في الماوس، استخراج نخاع العظام ونخاع العظام مسح مع PBS الباردة عن طريق إبرة 25G و 1 مل حقنة. نخاع العظام سباحة 4 إلى 1 المقابس أنبوب ونضع في الجليد.
  6. صب نخاع العظم لطبق بتري، والقص المكونات نخاع العظم إبرة 18G مع و5 مرات عدة حقنة مل المكونات حتى لا نخاع العظم موجودا.
  7. تدور إلى أسفل مع 1،500 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق في C. ° 4 إزالة طاف و resuspend مع 600 ميكرولتر العازلة الخلية تلطيخ. تقسيم نخاع العظم معلق لأنابيب إيبندورف 5، مع 100 ميكرولتر لكل.

7. فحص الجودة من زرع نخاع العظام بواسطة قياس التدفق الخلوي

  1. تسمية كل أنابيب عينة من الدم أو نخاع العظم # 1-5:
  2. إعداد خليط الأجسام المضادة لكل منهما أنبوب في الظلام.

رقم 1 لم الأجسام المضادة
# 2 30 ميكرولتر نمط إسوي FITC السيطرة + 30 ميكرولتر PE نمط إسوي السيطرة + 15 ميكرولتر CD16/32 حظر
# 3 30 ميكرولتر FITC CD45.1 أب + 15 ميكرولتر CD16/32 حظر
# 4 30 ميكرولتر PECD45.2 أب + 15 ميكرولتر CD16/32 حظر
# 5 30 ميكرولتر FITC CD45.1 أب + 30 ميكرولتر PE CD45.2 أب + 15 ميكرولتر CD16/32 حظر

تضيف شيئا إلى الدم أو عينة نخاع العظم # 1
إضافة 5 ميكرولتر من خليط الأجسام المضادة رقم 2 لكل الدم أو عينة نخاع العظم # 2
إضافة 3 ميكرولتر من خليط الأجسام المضادة رقم 3 لكل الدم أو عينة نخاع العظم # 3
إضافة 3 ميكرولتر من خليط الأجسام المضادة رقم 4 إلى كل دم أو عينة نخاع العظام # 4
إضافة 5 ميكرولتر من خليط الأجسام المضادة رقم 5 لكل الدم أو عينة نخاع العظم # 5
  1. نضع في الظلام في الثلج لمدة 30 دقيقة.
  2. إضافة 2 مل العازلة تحلل RBC 1X إلى كل أنبوب. نضع في الظلام على الجليد لمدة 15 دقيقة.
  3. تدور أسفل الخلايا في 1،500 دورة في الدقيقة، 5 دقائق في 4 درجات مئوية. (GH 3.8 الدوار، 1،500 دورة في الدقيقة = 350 XG) إزالة طاف. إعادة تعليق بيليه مع 500 ميكرولتر العازلة الخلية تلطيخ في فترة وجيزة، ثم دوامة مظلمة.
  4. تحقق من CD45.1 (تمثل WT) وCD45.2 (تمثل KO) في الدم وعينات immunostained نخاع العظام بواسطة التدفق الخلوي. حدد FITC لتمثيل WT CD45.1 وPE لتمثيل KO CD45.2.
  5. تحليل نتائج التدفق الخلوي بواسطة برنامج FlowJo. حساب نسبة FITC: PE PE أو نسبة: نسبة FITC لتحديد ما إذا الوراثي هو التركيب الوراثي السائد المانحة في الدم ونخاع العظام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يجب إذا كان الجين في المصالح تلعب دورا هاما في الخلايا المناعية خلال تطوير التهاب القولون، والفئران تلقي نخاع العظم من النمط الجيني المختلفة من خلال زرع نخاع العظم (WT إلى KO KO أو لWT) لديها تغيير في الاستجابة للالتهاب القولون DSS. واحدة من أهم المعايير لتحديد شدة التهاب القولون هو تلطيخ H & E من أنسجة القولون. يمكن القولون التغييرات بنية الأنسجة وعلامات التهاب تقييم كميا بواسطة H & E نظام التسجيل الأنسجة. يمكن للمعايير H & E الأنسجة نموذج التسجيل لالتهاب القولون وجدت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا زرع نخاع العظم نهج مناسبة للبحوث المناعة التهاب القولون، والعدوى، والسرطان، والسمنة وأمراض أخرى. هناك حاجة لذلك زرع نخاع العظم عند تجربة أعرب عن الجينات في المصالح في كل من نخاع العظم والخلايا المشتقة نخاع العظام المستمدة غير ويشتبه الجين في المصالح للتوسط المرض عن طريق الخلايا إما من السكان. على سبيل المثال، يظهر مضادات الميكروبات الببتيد cathelicidin التهاب القولون الحاد لتعديل. ولكن يتم التعبير عن ذلك في كل من الخلايا الظهارية وخلايا المناعة (مثل الضامة). ثم استخدمنا زرع ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل الطيار والجدوى منحة دراسة من جامعة كاليفورنيا-CURE سنتر، والتهاب القولون كرون ومؤسسة جائزة الوظيفي أمريكا التنمية (# 2691) والمعهد الوطني للصحة NIDDK K01 (DK084256) لتمويل هون واي KOON.

وساعد عملية التشعيع نخاع العظام من ليفين وبرنار سكوت مطبخ مركز UCLA للبحوث الإيدز ماوس / مرفق الإنسان الأساسية الوهم. وساعد تدفق الخلوي بواسطة عملية منشأة UCLA الأساسية المتجهات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

النائب Biomedicals

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
اسم كاشف شركة كتالوج رقم
خلية تلطيخ العازلة Biolegend # 420201
10X العازلة تحلل RBC Biolegend # 420301
FITC الماوس نمط إسوي السيطرة Biolegend # 400207
PE الماوس نمط إسوي السيطرة Biolegend # 400211
PE مكافحة الماوس CD45.2 Biolegend # 109807
FITC مكافحة الماوس CD45.1 Biolegend # 110705
مكافحة الماوس CD16/32 حظر Biolegend # 101301
40 ميكرومتر مصفاة الخلية Fisherbrand # 22363547
PBS 1X # 1860454
الهيبارين Fisherbrand # BP2425
Sulfatrim (SMZ) Qualitest NC9242720 (فيشر)
اللايسول IC Andwin العلمية NC9745686 (فيشر)
Vaccutainer BD # 8000813
الماوس restrainer برينتري العلمية # TV-150
Irradiator JL الراعي والمنتسبين بمناسبة I 68A
تدفق عداد الكريات BD BD FACSCanto II
أنبوب تدفق عداد الكريات اختبار صقر # 352052
الفرجار الرقمية Fisherbrand 14-648-17
Hemoccult تكنولوجيا المعلومات والاتصالات بيكمان كولتر G0328QW

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. J. Vis. Exp. (60), e3678(2012).
  2. Ungaro, R. A novel Toll-like receptor 4 antagonist antibody ameliorates inflammation but impairs mucosal healing in murine colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296, 1167-1179 (2009).
  3. Castagliuolo, I. Protective effects of neurokinin-1 receptor during colitis in mice: role of the epidermal growth factor receptor. Br. J. Pharmacol. 136, 271-279 (2002).
  4. Koon, H. W. Cathelicidin signaling via the Toll-like receptor protects against colitis in mice. Gastroenterology. 141, 1852-1863 (2011).
  5. Lee, C. Y. marrow cells in murine colitis: multi-signal analysis confirms pericryptal myofibroblast engraftment without epithelial involvement. PLoS One. 6, e11(2011).
  6. Deng, X. New cell therapy using bone marrow-derived stem cells/endothelial progenitor cells to accelerate neovascularization in healing of experimental ulcerative colitis. Curr. Pharm. Des. 17, 1643-1651 (2011).
  7. Valcz, G. Lymphoid aggregates may contribute to the migration and epithelial commitment of bone marrow-derived cells in colonic mucosa. J. Clin. Pathol. 64, 771-775 (2011).
  8. Takaba, J., Mishima, Y., Hatake, K., Kasahara, T. Role of bone marrow-derived monocytes/macrophages in the repair of mucosal damage caused by irradiation and/or anticancer drugs in colitis model. Mediators Inflamm. 2010, 634145(2010).
  9. Bakhautdin, B. Protective role of macrophage-derived ceruloplasmin in inflammatory bowel disease. Gut. , (2012).
  10. Seta, N., Kuwana, M. Derivation of multipotent progenitors from human circulating CD14+ monocytes. Exp. Hematol. 38, 557-563 (2010).
  11. Crain, B. J., Tran, S. D., Mezey, E. Transplanted human bone marrow cells generate new brain cells. J. Neurol. Sci. 233, 121-123 (2005).
  12. Finnberg, N. K. High-resolution imaging and antitumor effects of GFP(+) bone marrow-derived cells homing to syngeneic mouse colon tumors. Am. J. Pathol. 179, 2169-2176 (2011).
  13. Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. J. Am. Assoc. Lab Anim. Sci. 48, 11-22 (2009).
  14. Chen, B. J., Cui, X., Sempowski, G. D., Domen, J., Chao, N. J. Hematopoietic stem cell dose correlates with the speed of immune reconstitution after stem cell transplantation. Blood. 103, 4344-4352 (2004).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Bone Marrow TransplantationFlow CytometryColitis InductionDextran SulfateCD45 1 CD45 2 MarkersWild Type MiceKnockout MiceBone Marrow IsolationHistology AnalysisCell Staining

مقالات ذات صلة