دليل الصرف من البطينين الدماغ الجنينية اسماك الزرد

ملخص

نقدم طريقة لجمع السائل النخاعي (CSF) وخلق نظام الذي يفتقر CSF داخل منظومة البطين الزرد الجنينية الدماغ. وهذا يسمح لمزيد من الدراسة من تكوين CSF ومتطلباتها خلال نمو المخ الجنينية.

الملخص

السائل النخاعي (CSF) هو السائل الغنية بالبروتين الواردة في البطينين الدماغ. كان موجودا خلال التنمية في وقت مبكر واستمرت الفقاريات الجنينية في جميع مراحل الحياة. ويعتقد الكبار CSF للتخفيف من الدماغ، وإزالة النفايات، وتحمل جزيئات يفرز ^1،2. في الجنين الكبار وكبار السن، ويتم إجراء معظم CSF من قبل الضفيرة المشيمية، سلسلة من المناطق عالية إفرازية أوعية دموية تقع بالقرب من الدماغ البطينين ^3-5. في الزرد، ويتكون بشكل كامل الضفيرة المشيمية صلت إلى 144 التسميد آخر ساعة (HPF) ^6. وقبل ذلك، في كل من الفقاريات الأجنة الزرد وغيرها بما في ذلك الماوس، وكمية كبيرة من CSF الجنينية (eCSF) موجود. هذه البيانات والدراسات في فرخ تشير إلى أن الظهارة العصبية الإفرازية هو في وقت مبكر من التنمية، وقد تكون المصدر الرئيسي للeCSF قبل التنمية الضفيرة المشيمية ^7.

eCSF يحتوي على حوالي ثلاث مرات أكثر بروتين تيهان الكبار CSF، مما يشير إلى أنه قد يكون لها دور هام أثناء تطوير ^8،9. دراسات في الفرخ والفأر تثبت أن العوامل يفرز في eCSF، ضغط السائل، أو مزيج من هذه، مهمة لبقاء الخلايا العصبية التعبير الجيني، تكاثر الخلايا، والخلية، في الظهارة العصبية ^10-20. وقد حددت التحليلات البروتين من الفئران والبشرية، والماوس، وeCSF فرخ العديد من البروتينات التي قد تكون ضرورية لوظيفة CSF. وتشمل هذه المكونات المصفوفة خارج الخلية، apolipoproteins والبروتينات التي تنظم الضغط التناضحي، والبروتينات المشاركة في موت الخلايا وانتشار ^21-24. ومع ذلك، فإن الوظائف المعقدة للeCSF غير معروفة إلى حد كبير.

وقد وضعنا طريقة لإزالة eCSF من البطينين الدماغ الزرد، مما يسمح لتحديد مكونات وeCSF لتحليل متطلبات eCSF خلال التنمية. رغم أنه يمكن جمع أكثر من غيرها eCSF ث نظم الفقارياتإيث أكبر الأجنة، يمكن جمعها eCSF منذ المراحل الأولى للتنمية الزرد، وتحت ظروف جينية أو بيئية غير طبيعية التي تؤدي إلى الدماغ حجم البطين أو شكلها. إزالة وجمع eCSF يسمح لكتلة الطيفي التحقيق، وتحليل وظيفة eCSF، وإعادة تحديد العوامل إلى البطينين لفحص وظيفتها. وبالتالي الوصول إلى الجنين في وقت مبكر يسمح للالزرد تحليل مفصل وظيفة eCSF خلال التنمية.

البروتوكول

1. إعداد إبر حقن مكروي والترام الخليوي

1. ملء إيبندورف CellTram جهاز microinjector النفط مع الزيوت المعدنية وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
2. إعداد الإبر حقن مكروي عن طريق سحب الأنابيب الشعرية باستخدام إبرة سوتر مجتذب الصكوك.
3. تحميل الإبرة على مياداة مجهرية متصلة CellTram إيبندورف.
4. كسر بعناية غيض من إبرة. تلميح لحجم موحد، مع قياس ميكرون، أو مقارنة لإبرة المرجعية.

النتائج

ويرد مثال على الدماغ البطين ينضب في الشكل 1B-C. وانهارت البطينين الدماغ كما أنها تفتقر eCSF (الشكل 1B مقابل C). كما رأينا في الصور الظهرية (الشكل 1B-C، والشكل 2A-D). والظهارة العصبية الدماغ المؤخر لا تحتفظ التشكل المميز له، ويبدو أن تكون مفتوحة على الرغم من عدم eCSF على الأرجح بسبب قوة نقاط المفصلي ومع ذلك، إطلالة جانبية (الشكل 2A'-D ') تثبت أنها قد استنزفت البطين الدماغ المؤخر، بما يتفق مع وجود سقف مرن رق.......

المناقشة

سوف تستخدم هذه التقنية لاستنزاف يدويا eCSF من البطينين الدماغ الزرد أن تكون مفيدة لتحديد متطلبات eCSF خلال التنمية. وبالإضافة إلى ذلك، سوف تسمح هذه التقنية وصف الملف البروتين eCSF على مدى التطور الجنيني. وتحديد البروتينات المختلفة خلال هذا الوقت تمكن إجراء مزيد من التحقيق في وظيفة CSF ودورها المحتمل خلال نمو المخ. في amniotes، بعض العوامل التي تم تحديدها في eCSF (IGF2، FGF2، حمض الريتينويك، وapolipoproteins) لها دور تظاهروا في انتشار الخلايا الظهارية العصبية والبقاء وتكوين الخلايا.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اسم الكاشف	شركة	كتالوج رقم
إيبندورف CellTram النفط	إيبندورف	516 000.025
النفط المعدنية	سيجما	M8410
Tricaine مسحوق	سيجما	A5040
أنابيب الشعرية	شركة FHC	30-30-1