يوصف بروتوكول معين وسريعة للتحقيق في وقت واحد الحق وظيفة القلب، والتهاب الرئة، والاستجابة المناعية ليكون أداة تعليمية. فيديو والشخصيات تصف علم وظائف الأعضاء والتقنيات تسليخ مجهري في نهج فرق التي نظمت قابل للتكيف لاستخدامها في الدراسات الصغيرة وذات الحجم الكبير.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قياسات الضغط البطيني الحق الانقباضي في تركيبة مع حصاد الرئة وعينات الأنسجة المناعية في الفئران
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وظيفة القلب الصحيح هو ضخ الدم عبر الرئتين، وبالتالي ربط الحق علم وظائف الأعضاء علم وظائف الأعضاء والقلب الوعائية الرئوية. هو التهاب معدل المشتركة للقلب وظائف الرئة، عن طريق وضع تسلل الخلوية، وإنتاج السيتوكينات وعوامل النمو، والشروع في عمليات إعادة عرض 1.
بالمقارنة مع البطين الأيسر، البطين الأيمن هو مضخة ذات ضغط منخفض تعمل في منطقة ضيقة نسبيا من تغيرات الضغط. وترتبط زيادة الضغوط الشريان الرئوي مع زيادة الضغط في الأوعية الدموية في الرئة السرير وارتفاع ضغط الدم الرئوي 2. وكثيرا ما يرتبط ارتفاع ضغط الدم الرئوي مع أمراض الرئة التهابات، وعلى سبيل المثال مرض الانسداد الرئوي المزمن، أو أمراض المناعة الذاتية 3. لأن ارتفاع ضغط الدم الرئوي يمنح التكهن سيئة لنوعية الحياة ومتوسط العمر المتوقع، يتم توجيه الكثير من البحث من أجل فهم الآليات التي من طراز ميغHT تكون أهدافا لمدة 4 تدخل الصيدلانية. التحدي الرئيسي لتطوير أدوات الإدارة الفعالة لارتفاع ضغط الدم الرئوي لا تزال تعقد في وقت واحد فهم التغيرات الجزيئية والخلوية في قلب الحق والرئتين والجهاز المناعي.
هنا، نقدم سير العمل الإجرائية لقياس سرعة ودقة من اختلاف الضغط في قلب حق الفئران والحصاد في وقت واحد من عينات من الرئتين والقلب والأنسجة المناعية. وتستند هذه الطريقة على قسطرة المباشر من البطين الأيمن عبر الوريد الوداجي في الصدر بالقرب الفئران، للمرة الأولى في أواخر 1990s كإجراء بديل من الضغوط في الشريان الرئوي 5-13. ونظمت فريق نهج يسهل قسطرة القلب سريعة جدا الحق التقنية. هذا يجعل من الممكن إجراء القياسات في الفئران التي تتنفس هواء الغرفة تلقائيا. تنظيم تدفق العمل في مجالات العمل المتميزةيقلل الوقت وتأخير يفتح إمكانية لإجراء التجارب في وقت واحد وعلم وظائف الأعضاء حصاد الأنسجة المناعية والقلب والرئة.
يمكن تكييفها سير العمل الإجرائية المذكورة هنا لطائفة واسعة من الإعدادات المختبرات والتصاميم الدراسة، من التجارب الصغيرة المستهدفة، والكبيرة المقايسات فحص المخدرات. اكتساب علم وظائف الأعضاء في وقت واحد من البيانات القلب التي يمكن توسيعها لتشمل تخطيط صدى القلب 5،14-17 وحصاد الأنسجة القلب والرئة والجهاز المناعي يقلل من عدد الحيوانات اللازمة للحصول على البيانات التي تحرك أساس المعرفة العلمية إلى الأمام. سير العمل الإجرائية المقدمة هنا كما يقدم قاعدة مثالية لاكتساب المعرفة من الشبكات التي تربط المناعة والرئة وظيفة القلب. يمكن تكييفها نفس المبادئ الموضحة هنا لدراسة الأجهزة الأخرى أو إضافية حسب الحاجة.
البروتوكول
1. إعداد
- إعداد الحلول التالية وأنابيب (الجدول 1) على النحو التالي:
- هانكس الحل، لا الكالسيوم والمغنيسيوم أو مؤشر مع البنسلين (100 U / مل) / الستربتوميسين (100 ملغ / مل).
- الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، 1X، الكالسيوم لا، لا المغنيسيوم.
- الإيثانول و 70٪، وجعل 500 مل.
- مخزنة الفورمالديهايد، 7-10....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتم تحقيق النتيجة الأولية للحصول على حق منحنيات ضغط القلب من قبل الموضع الصحيح للقسطرة القلب الصحيح. شكل منحنيات ضغط الوقت أمر بالغ الأهمية لأن الموضع الصحيح من داخل القسطرة من البطين الأيمن سوف يؤدي إلى الضغط الهضاب (الشكل 4). منحنيات شائك، بدلا من ذلك، تشير إلى وجود القسطرة التي يتم نقل من التنفس أو القلب نبض الحركة ضد جدار البطين الأيمن. للكشف عن المشاكل المحتملة مع مرحلة البقاء على قيد الحياة من الحيوانات، والانحراف المعياري للΔP، ومعدل ضربات القلب يجب أن تحسب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تدفق التجريبية المذكورة هنا يسمح لقياس السريع والمتزامن لالبطين الأيمن الضغط الانقباضي وحصاد عينات للتحليل الردود في القلب والرئتين والجهاز المناعي لدى الفئران. الإجراء يجمع بين قياسات فسيولوجية القلب، والصغرى تشريح الأنسجة الحصاد اللاحقة للدراسات الخلية الحية، والتحليل النسيجي، أو omics تحليل للأنسجة. الإجراء كاملة تستغرق أقل من 20 دقيقة في الماوس. بسبب سير العمل في منطقة عمل التنظيم، يمكن درس 2-3 الحيوانات في وقت واحد. ولذلك، فإن الإجراء هو مناسبة للتجارب، صغيرة مستهدفة 12<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة 1R21HL092370-01 (GG)، 1R01 HL095764-01 (GG)؛ R01HL082694 (JW)؛ جمعية القلب الأمريكية، المؤسسين التابعة لها (0855943D، GG)؛ ستوني القفر - هربرت الصندوق، نيويورك (SHP).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم | شركة | كتالوج رقم | التعليقات (اختياري) |
| الكواشف | |||
| 2-الميثيل-2-بيوتانول | سيغما الدريخ | 152463 | |
| 2،2،2-ثلاثي بروم إيثانول | سيغما الدريخ | T48402 | |
| صابون مطهر (TB تغطية الرذاذ بالإضافة إلى STERIS) | فيشر العلمية | 1629-1608 | |
| الكحول الإيثيلي، 200 إثبات،، اللامائى المطلق ACS / USP الصف | PHARMCO-AAPER | 111000200 | تمييع إلى 70٪ مع الماء المقطر |
| الفورمالديهايد الحل | سيغما الدريخ | F1635-500ML | تمييع إلى 7-10٪ المبدئيةتركيز ldehyde بتركيز PBS 1X من استخدام الأسهم PBS الحل والمياه |
| هانكس الحل، لا الكالسيوم والمغنيسيوم | فيشر العلمية | 21-022-CV | |
| أكتوبر | الأنسجة تيك | 4583 | |
| البنسلين (10،000 U / مل) / الستربتوميسين (10،000 ملغ / مل) الحل | الحرارية العلمية | SV30010 | |
| الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، أي الكالسيوم، المغنيسيوم لا، والحلول 1X و 10x | فيشر العلمية | ||
| بنتوباربيتال الصوديوم 26٪ | فورت دودج الصحة الحيوانية | NDC 0856-0471-01 | |
| المختبرات الطبية | |||
| لوحات 12، 24، 96 جيد | صقر | ||
| نقل الماصة | فيشر العلمية | 13-711-9BM | |
| أنبوب، EDTA المغلفة | Sarstedt | 2013-08 | |
| أنابيب 0،65 مل و 1.7 مل الطرد المركزي الصغيرة | VWR | ||
| أنابيب البولي بروبلين 12 × 75 مم | فيشر العلمية | 14-956-1D | |
| أنابيب والأحجام المختلفة، والبولي بروبيلين | فيشر العلمية | ||
| الصكوك | |||
| ملقط، Dumon رقم 5 الجميلة | أدوات العلوم الجميلة | 11254-20 | |
| ملقط، من خارج غرامة غريف-0.5mm نصائح منحني | أدوات العلوم الجميلة | 11152-10 | |
| ملقط، فاي إضافيةشمال شرق غريف-0.5mm نصائح مباشرة | أدوات العلوم الجميلة | 11150-10 | |
| قنية 18ga، 19 GA | BD | الدقة إبر الإنزلاق | rasped قطع لطول الأمثل، وقلل من الخارج لإنشاء سطح خشن خارج |
| مقص، مقص مشرح ضئيلة شفرات 9cm تقرير اخبارى | أدوات العلوم الجميلة | 14081-09 | |
| خياطة لBAL، مضفر خياطة الحرير بنتيجة 4-0 | أدوات العلوم الجميلة | SP116 | |
| خياطة لقسطرة القلب الحق، مضفر خياطة الحرير، 6-0 | Teleflex الطبية | 18020-60 | |
| حقنة، 1 مل | BD | 309659 | |
| معدات | |||
| مكبر للصوت، PowerLab 4/30 | ADInstrument | نموذج ML866 | |
| القسطرة والضغط F1.4 | ميلر الآلات، وشركة | 840-6719 | |
| تشريح مجهر | Variscope | ||
| ملقط، مقص الربيع Vannas-2mm وشفرات | أدوات العلوم الجميلة | 15000-00 | |
| الهالوجين مضيئة المكبر مكتب | فيشر العلمية | 11-990-56 | |
| جهاز كمبيوتر محمول | ASUS | معالج نموذج A52F عدد I5؛ 15 بوصة | |
| ضوء المصدر | Amscope | HL-250-A | |
| السيطرة على ضغط الوحدة | ميلر الآلات، وشركة | PCU-2000 | |
| البرمجيات، Labchart برو V.7 | وفي ADstruments |
المراجع
- Price, L. C., et al. Inflammation in pulmonary arterial hypertension. Chest. 141, 210-221 (2012).
- Olschewski, H., et al. Cellular pathophysiology and therapy of pulmonary hypertension. J. Lab. Clin. Med. 138, 367-377 (2001).
- Hassoun, P. M., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
