$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
الأعضاء الداخلية مثل القلب والمخ والقناة الهضمية وتطوير اليسار واليمين (LR) عدم التماثل التي تعتبر بالغة الأهمية لمهامهم العادية 1. ويشارك في تأسيس أهداب متحركة LR التباين في الأجنة الفقارية، بما في ذلك الماوس، الضفدع، والزرد 2-6. هذه 'أهداب LR' غير المتماثلة توليد تدفق السوائل ما هو ضروري لاشعال الحفظ غير المتماثلة العقدية (TGF-β الفصيلة) يشير شلال في الأديم المتوسط الجانبي الأيسر لوحة، والتي يعتقد على توفير المعلومات LR الزخرفة لتطوير أجهزة 7. وبالتالي، لفهم الآليات الكامنة وLR الزخرفة، لا بد من تحديد الجينات التي تنظم تنظيم خلايا مهدبة LR، والحركة وطول أهداب LR وقدرتها على توليد التدفق غير المتماثلة قوية.
في الجنين الزرد، وتقع في الحويصلة LR أهداب كوبفر (KV) 2،4،5. وتتألف من KV طبقة واحدة من الخلايا الطلائية monociliatedأن أرفق التجويف مملوءة بسائل. وقد أظهرت الخرائط التي مشتق مصير KV من مجموعة من الخلايا المعروفة باسم 20-30 ~ رائد الخلايا الظهرية (DFCs) التي تهاجر في الهامش الأريمة الظهرية خلال مراحل اكتفار 8،9. خلال المراحل المبكرة الجسيدة، DFCs العنقودية وتفرق في الخلايا الظهارية مهدبة لتشكيل KV في tailbud الجنين 10،11. القدرة على تحديد وتعقب DFCs في تركيبة مع الشفافية البصرية والتطور السريع في الزرد الجنين، جعل الزرد KV نظام نموذجا ممتازا لدراسة الخلايا المهدبة LR.
ومن المثير للاهتمام، من سلالة الأسلاف الخلية DFC / KV الاحتفاظ الجسور بين الخلية السيتوبلازمية صفار تصل إلى 4 ساعة بعد الإخصاب (HPF)، في حين الجسور حشوية بين الخلية والخلايا الجنينية صفار أخرى قريبة بعد 2 HPF 8. الاستفادة من هذه الجسور حشوية، وضعنا استراتيجية حقن المرحلة الخاصة لتقديم morpholino oligonucleotides (MO) حصريا لDFCs وضربة قاضية وظيفة الجين المستهدف في هذه الخلايا 12. هذه التقنية تخلق أجنة خيالية التي طرقت ظيفة الجين عليها في النسب DFC / KV النامية في سياق الجنين من النوع البري. غير المتماثلة لتحليل تدفق السوائل في KV، ونحن حقن microbeads الفلورسنت في التجويف KV وسجل الحركة باستخدام حبة videomicroscopy 2. هو تصور تدفق السوائل بسهولة ويمكن كميا من خلال تتبع التشريد حبة مع مرور الوقت.
هنا، وذلك باستخدام مرحلة محددة ضربة قاضية الجينات DFC التي تستهدف تقنية وحقن microbeads الفلورسنت في KV لتصور تدفق سنتطرق لبروتوكول يوفر نهجا فعالا لتوصيف دور جينات معينة أثناء نمو KV وظيفة.