يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات

12.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/50181

⸱

ديسمبر 1, 2013

 , 
1Department of Microbiology & Immunology, Medical University of South Carolina

في هذه المقالة

ملخص

يمكن أن يكون زرع الخلايا السرطانية في العضو الأصلي بمثابة نموذج ما قبل السريري المفيد لتقييم العلاجات الجديدة. يمكن زراعة خلايا سرطان المثانة MB49 داخل المثانة بعد التقطير داخل المثانة. يوضح هذا البروتوكول قسطرة مثانة الفأر لغرض زرع الورم وتوصيل الفيروسات الغدية.

الملخص

سرطان المثانة هو ثاني أكثر أنواع السرطان شيوعا في الجهاز البولي التناسلي وهناك حاجة إلى طرق علاجية جديدة يمكن أن تقلل من التكرار والتقدم. يمكن أن تؤثر البيئة المكروية للورم بشكل كبير على تطور الورم والاستجابة للعلاج. لذلك غالبا ما يكون من المستحسن زراعة الخلايا السرطانية في العضو الذي نشأت منه. يصف هذا البروتوكول نموذجا تقويميا لسرطان المثانة ، حيث يتم غرس خلايا سرطان المثانة الفئرانية MB49 في المثانة عن طريق القسطرة. يتطلب زرع الخلايا السرطانية الناجح في هذا النموذج تعطيل طبقة الجليكوزامينوجليكان الواقية ، والتي يمكن تحقيقها بالوسائل الفيزيائية أو الكيميائية. في بروتوكولنا ، يتم علاج المثانة بالتربسين قبل تقطير الخلايا. يمكن أيضا استخدام قسطرة المثانة لتقديم العلاجات بمجرد إنشاء الأورام. يصف هذا البروتوكول توصيل بنية الفيروسية الغدية التي تعبر عن جين مراسل لوسيفيراز. بينما تم تحسين بروتوكولنا للدراسات قصيرة المدى ويركز على توصيل الجينات ، فإن منهجية قسطرة المثانة الفأرية لها تطبيقات واسعة.

المقدمة

سرطان المثانة هو ثاني أكثر أنواع السرطان شيوعا في الجهاز البولي التناسلي مع ما يقرب من 75,000 حالة جديدة و 15,000 حالة وفاة متوقعة في عام 20121. تتطلب معدلات التكرار العالية متابعة مدى الحياة ، مما يجعل سرطان المثانة أحد أكثر أنواع السرطان تكلفة للعلاج. قد ينتقل سرطان المثانة الذي غزا الطبقة العضلية إلى الكبد أو الرئة أو العظام عبر الجهاز اللمفاوي. ينتج عن العلاج متعدد الوسائط للأورام المتقدمة 20-40٪ فقط من البقاء على قيد الحياة بعد 5 سنوات. لذلك ، هناك حاجة ماسة إلى استراتيجيات العلاج الفعالة التي تهدف إلى الحد من تكرار وتطور سرطان المثانة السطحي بالإضافة إلى تحسين النتائج العلاجية في المرضى الذين يعانون من مرض متقدم.

يتطلب تطوير علاجات جديدة نماذج قبل السريرية لتقييم الفعالية بعد التقييم الأولي في المختبر. يمكن أن تؤثر البيئة المكروية للورم بشكل كبير على تطور السرطان واستجابته ، مما يسلط الضوء على الحاجة إلى نماذج قبل السريرية التي تنشأ فيها الأورام أو يمكن إنشاؤها في العضو الأصلي. يتمثل أحد الأساليب في تطوير نماذج معدلة وراثيا تنشأ فيها الأورام تلقائيا أو يمكن إحداثها بطريقة خاصة بالأعضاء. تم مؤخرا نشر بروتوكول ممتاز لنموذج سرطان المثانة المعدل وراثيا2. عيب النماذج المعدلة وراثيا هو أن الأورام تميل إلى التطور ببطء وبأقل توحيدا مما هو مرغوب فيه. بالإضافة إلى ذلك ، يجب مراعاة تكلفة الحفاظ على مستعمرة التكاثر. بديل للنماذج المعدلة وراثيا هو زرع الخلايا السرطانية لتقويم العظام ، والذي يتميز بالأطر الزمنية القصيرة لإنشاء الورم في الفئران المتاحة تجاريا. في حين أن بعض خطوط خلايا سرطان المثانة البشرية يمكن زراعتها بشكل تقويمي (استخدمنا UM-UC-3 بنجاح) ، فقد يكون من المرغوب فيه إنشاء أورام في الفئران ذات الكفاءة المناعية. خطان من خطوط خلايا سرطان المثانة الفئرانية ، والتي تنمو بشكل تقويمي هما MBT-2 و MB493. نظرا لأن خلايا MBT-2 ملوثة بتكرار الفيروس القهقري من النوعC 4 ، فقد اخترنا خلايا MB49 لدراساتنا. من المهم ملاحظة أن خلايا MB49 تم عزلها من فأر ذكر وأن عمليات زرع تقويم العظام لأسباب تشريحية يتم إجراؤها في إناث الفئران. هذا له فائدة سهولة التعرف على الخلايا المزروعة من خلال علامات كروموسوم Y ، ولكن عدم التطابق بين الجنسين يمكن أن يكون عيبا في الدراسات المناعية.

< p class = "jove_content">ظهارة المثانة مبطنة بطبقة جليكوزامينوجليكان (GAG) ، والتي تعمل كحاجز للعدوى بالكائنات الحية الدقيقة. يمكن أن يتداخل هذا الحاجز أيضا مع زرع الخلايا السرطانية وقد تم تطوير عدة طرق للتغلب على هذه الصعوبة (الجدول 1). تم استخدام الكي الكهربائي على نطاق واسع كوسيلة فيزيائية لتعطيل طبقة GAG 5-13 وتم مؤخرا نشر بروتوكول يوضح الكي الكهربائي في JoVE14. ومع ذلك ، في حالة عدم توفر وحدة الكي الكهربائي ، يمكن أيضا استخدام الوسائل الكيميائية لتدمير طبقة GAG مثل نترات الفضة أو بولي إل ليسين15-24. يتم إنشاء الأورام بشكل فعال من خلال التعرض لفترة وجيزة للمثانة لحجم صغير من نترات الفضة (5-10 ميكرولتر ، 0.15-1.0 م ، ~ 10 ثوان) أو ملامسة أطول مع بولي إل ليسين (100 < span style = "حجم الخط: 14 بكسل ؛ ارتفاع الخط: 28 بكسل ؛ "> ميكرولتر من 0.1 مجم / مل لمدة 20 دقيقة) (الجدول 1). نصف هنا طريقة تستخدم التربسين لتسهيل زرع خلايا MB49.

< p class = "jove_content" > في محاولة لتحسين الأساليب العلاجية لسرطان المثانة ، حظي العلاج الجيني باهتمام كبير. من وجهة نظر سريرية ، يعد سرطان المثانة هدفا مثاليا للعلاج الجيني نظرا لسهولة الوصول إلى العضو والقدرة على توصيل الحمولة محليا. تشمل النواقل الفيروسية التي تم استكشافها للعلاج الجيني لسرطان المثانة فيروس الهربس البسيطالورمي 25 ، والفيروسالقهقري 26 ، وفيروس الجدريالكناري 27 ، وفيروس اللقاح ، و AAV ، والفيروسالغدي 28. في الجزء الثاني من بروتوكولنا ، نصف طريقة لإيصال الفيروس مطابقة تقريبا لتقطير الخلايا السرطانية. من المثير للاهتمام في مختبرنا تطوير مناهج جديدة لتوصيل الجينات ، والتي نقوم بتقييمها عن طريق التلألؤ البيولوجي باستخدام ناقل فيروسي غدي يعبر عن جين متحول لوسيفيراز. ومع ذلك ، يمكن استخدام منهجية قسطرة المثانة لتوصيل عوامل مختلفة وبالتالي لها قابلية تطبيق واسعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه في جامعة ساوث كارولينا الطبية. تمت الموافقة على البروتوكول تحت الفئة D من وزارة الزراعة الأمريكية للألم.

< p class = "jove_title" >1. زرع الخلايا

  1. قبل يومين من تنفيذ الإجراء ، قم بوضع 1 × 106 خلايا ميجابايت 49 في قوارير T-25. استخدم DMEM عالي الجلوكوز المكمل بنسبة 10٪ FBS (والمضادات الحيوية ، إذا رغبت في ذلك). قارورة واحدة تكفي لكل مجموعة تصل إلى خمسة فئران سيتم تخديرها وزرعها بالتوازي.
  2. في يوم الإجراء ، قم بإعداد التربسين للتقطير عن طريق تخفيف التربسين المعقم بنسبة 0.25٪ من درجة زراعة الأنسجة إلى 0.125٪ مع وسط قاعدة DMEM معقم (تخفيف 1: 2). 1.2 مل يكفي ل 10 فئران. ضعها في حمام مائي 37 درجة مئوية للتوازن.
  3. قم بتسخين وسادة التدفئة مسبقا وضعها تحت مخاريط الأنف لنظام التخدير الذي سيتم استخدامه لتوصيل الأيزوفلوران. ضع وسادة ماصة نظيفة فوق وسادة التدفئة.
  4. ضع الفئران في غرفة الحث في نظام التخدير وقم بالتخدير بنسبة 3٪ من الأيزوفلوران. عندما تفقد الفئران وعيها ، والذي يتم التحقق منه عن طريق فقدان منعكس قرصة إصبع القدم ، انقلها إلى أقماع الأنف. تأكد من أن كل في وضع ضعيف ووضعه بشكل صحيح على وسادة التدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم.
  5. قلل تركيز الأيزوفلوران إلى 2٪ للحفاظ على التخدير.
  6. ضع مرهم العين على كلتا العينين لمنع الجفاف.
  7. خطوة اختيارية: إزالة شعر البطن. يجب إزالة الشعر الموجود في أسفل البطن إذا تم إجراء التصوير الحيوي في الجسم الحي.
    1. ضعي طبقة سخية من كريم إزالة الشعر ، مثل Veet ، على أدنى 1 بوصة مربعة من الفراء على البطن ، مع الحرص على عدم ملامسة الأعضاء التناسلية الخارجية. انتظر 3 دقائق.
    2. قم بإزالة الشعر عن طريق فرك المنطقة بإسفنجة جافة ، ثم استخدم إسفنجة رطبة لتنظيف البشرة. كرر مرة واحدة ، إذا لزم الأمر.
  8. قسطرة المثانة
    1. قم بتليين قسطرة وريدية جديدة معقمة للأطفال 24 جم باستخدام جل ترحيم غير مهيج مثل K-Y. قم بإزالة الإبرة والتخلص منها. إذا كان تسرب السوائل حول القسطرة مشكلة شائعة ، أي. يحدث بشكل متكرر أكثر من واحد من عشرة فئران ، يمكن استخدام قسطرة أكبر (20 جم). قد يكون هذا اعتبارا مهما في الفئران التي يزيد عمرها عن 8 أسابيع.
    2. أمسك محور القسطرة ، استخدم الإبهام والسبابة في يدك المعاكسة لنشر الأرجل الخلفيتين للفأر وفضح صماخ مجرى البول. أدخل القسطرة برفق في مجرى البول بزاوية 45 درجة ، مع تغيير الزاوية إلى واحدة موازية للمقعد لإدخالها بالكامل.
    3. بعد الإدخال الكامل ، ارفع القسطرة برفق ، مع إبقائها موازية للمقعد ، وتأكد بصريا من وضعها في مجرى البول وليس المهبل الموجود تحتها. إذا تم وضعها بشكل صحيح ، فسيكون من الممكن إدخال القسطرة بالكامل لأن المهبل أقصر من مجرى البول.
    4. تقليل تركيز الأيزوفلوران إلى 1٪.
  9. قم بتوصيل طرف بماصة P200 وإزالة البول من المثانة عن طريق تطبيق الشفط على الطرف الخارجي للقسطرة. قم بإزالة أي بول متبقي من محور القسطرة. تخلص من البول واترك القسطرة في مكانها.
  10. ضع ماصة 80 ميكرولتر بعناية من محلول التربسين 0.125٪ في محور القسطرة، مع تجنب فقاعات الهواء. قم بتوصيل حقنة مملوءة بالهواء سعة 1 مل بمحور القسطرة واضغط ببطء على المكبس 0.1-0.2 مل لتوصيل التربسين إلى المثانة.
  11. اترك مجموعة المحقنة والقسطرة في مكانها لمدة 15 دقيقة. كرر الخطوات 1.8-1.11 لأي من الفئران المخدرة المتبقية (حتى 4). انتقل إلى الخطوة التالية خلال فترة الانتظار. تلميح: في البداية قد يكون من المفيد أن يقوم شخص آخر بإعداد الخلايا (الخطوة 1.12).
  12. تحضير خلايا MB49 للزرع. تم طلاء الخلايا بمعدل 1 × 106 لكل قارورة T-25 قبل 48 ساعة من الزرع (الخطوة 1.1).
    1. قم بإزالة الوسائط وأضف 500 ميكرولتر من 0.25٪ تريبسين إلى القارورة. عند فصل الخلايا ، أضف 5 مل من DMEM الكامل لإعادة تعليق الخلايا. قم بإزالة 50 ميكرولتر من الكمية للعد ، وقم بالطرد المركزي للباقي عند 1,000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. وخلال خطوة الطرد المركزي، استمر في الخطوتين 1-12-2 و1-12-3.
    2. عد الخلايا باستخدام مقياس كثافة الدم. احسب الخلايا / مل. ثم احسب الحجم اللازم لرفع حبيبات الخلية إلى 4 × 106 خلايا / مل (2 × 105 خلايا لكل 50 ميكرولتر).
    3. اسكب المادة الطافية من الخلايا ذات الطرد المركزي وأعد تعليق الحبيبات في وسط قاعدة DMEM باستخدام الحجم المطلوب لتعليق الخلايا إلى 4 × 106 خلايا / مل (كما هو محسوب في الخطوة 1.12.2). احتفظ بالخلايا في درجة حرارة الغرفة.
  13. عند الوصول إلى النقطة الزمنية البالغة 15 دقيقة لعلاج التربسين للمثانة ، افصل المحقنة المملوءة بالهواء عن القسطرة تاركة القسطرة في مكانها. عادة ما يتدفق التربسين المستهلك مرة أخرى عبر القسطرة. قم بإزالة أي تربسين متبقي من المثانة عن طريق الشفط باستخدام ماصة P200 كما في الخطوة 1.9 أعلاه وتخلص منها.
  14. قم بإدخال 50 ميكرولتر من معلق الخلايا MB49 على الفور في محور القسطرة. قم بتوصيل المحقنة المملوءة بالهواء سعة 1 مل بمحور القسطرة وتوصيل الخلايا إلى المثانة عن طريق الضغط ببطء على المكبس 0.1-0.2 مل. كرر هذه الخطوة حتى أربع مرات إضافية لزرع الفئران الخمسة جميعها. تجاهل أي خلايا غير مستخدمة.
  15. عند ترك مجموعة القسطرة والحقنة في مكانها ، اسمح للخلايا بالبقاء في المثانة لمدة 50 دقيقة.
  16. اسحب مجموعة حقنة القسطرة برفق من مجرى البول. اقلب تركيز الأيزوفلوران إلى الصفر وحرك كل فأر بوصة أو اثنتين بعيدا عن مخروط الأنف للتعافي على وسادة التسخين.
  17. عندما يستعيد الفأر منعكس الصحيح ، أعده إلى قفصه.
< ص الفئة = "jove_title">2. التوصيل داخل المثانة للفيروس الغدي (بعد 8 أيام من زرع الخلايا)

CAUTION: يستخدم هذا الجزء من البروتوكول الفيروس الغدي ، وهو عامل معدي ويجب التعامل معه وفقا لإرشادات BSL2 الصارمة (http://oma.od.nih.gov/manualchapters/intramural/3035/).

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي يتم إجراؤها باستخدام العوامل المعدية من قبل لجنة السلامة البيولوجية المؤسسية بجامعة ساوث كارولينا الطبية.

  1. بعد ثمانية أيام من زرع الفئران بخلايا MB49 ، تحقق من وجود بيلة دموية. التقط الحيوانات الفردية فوق قطعة بيضاء من الورق الماص واضغط برفق على البطن لمسح قطرات البول على الورق. يشير البول الوردي إلى الأحمر إلى البيلة الدموية وهو علامة على ظهور الأورام. معدل أخذ الورم لا يقل عن 80٪ وبتقنية ممتازة يمكن أن يصل إلى 100٪.
  2. قم بإذابة مخزون الفيروسات الغدية على الجليد وتخفيفه إلى 109 PFU / 50 ميكرولتر (2 × 1010 PFU / مل) في PBS معقم بدرجة حرارة الغرفة.
  3. تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوات 1.3-1.6 أعلاه.
  4. قسطرة الفئران كما هو موضح في الخطوة 1.8 وإزالة البول كما في الخطوة 1.9
  5. بعد إزالة البول ، قم على الفور بوضع 50 ميكرولتر من تعليق الفيروس في محور القسطرة. قم بتوصيل المحقنة المملوءة بالهواء سعة 1 مل بمحور القسطرة وتوصيل الفيروس إلى المثانة عن طريق الضغط ببطء على المكبس 0.1-0.2 مل.
  6. ترك مجموعة القسطرة والحقنة في مكانها ، اترك الفيروس يسكن في المثانة لمدة 40 دقيقة.
  7. اسحب مجموعة حقنة القسطرة برفق من مجرى البول ، وتخلص منها في محلول مبيض بنسبة 10٪ لتعطيل أي فيروس متبقي.
  8. اقلب تركيز الأيزوفلوران إلى الصفر وحرك كل فأر بوصة أو اثنتين بعيدا عن مخروط الأنف للتعافي على وسادة التسخين.
  9. عندما يستعيد الفأر منعكس الصحيح ، أعده إلى قفصه.
  10. ضع علامة على الأقفاص للإشارة إلى أن الفئران قد غرست بالفيروسات الغدية. سيتم إلقاء الفيروس في فراش القفص لعدة أيام ويجب التعامل مع جميع الأقفاص والفراش وتطهيرها بشكل مناسب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يُلاحظ وجود بيلة دموية في جميع الفئران تقريبًا خلال 8 أيام بعد زراعة 200,000 خلية من نوع MB49. وكما هو موضح في الشكل 1، يتضاعف وزن المثانة بأكثر من مرتين من 34.7±3.3 mg (المدى 31-37 mg، n=4) في الفئران غير الحاملة للأورام إلى 87.5±19.2 mg (المدى 77-120 mg، n=10) في الفئران التي زُرعت فيها خلايا MB49. وفيما يتعلق بنقل الجينات، وجدنا أن تصوير الفئران بعد 24 ساعة من التقطير الفيروسي يعطي إشارة أقوى مما يعطيه بعد 48 ساعة (الشكل 2). يتفاوت النقل الفيروسي الغدي بشكل كبير بين الحيوانات، وهو أمر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

المنهجية الأساسية الموضحة في هذا البروتوكول هي قسطرة مثانة الفأر ، والتي لها تطبيقات واسعة لتقطير الخلايا أو أي عامل مخصص للتوصيل الموضعي إلى ظهارة المثانة. تم تحسين البروتوكول المحدد الموضح أعلاه للدراسات قصيرة الأجل (~ 10 أيام). يعد زرع العدد الدقيق للخلايا أمرا بالغ الأهمية ، لأن عدد الخلايا الأعلى سيؤدي إلى نمو أسرع للورم وربما فقدان بسبب عبء الورم الكبير. قد يتطلب استخدام 200,000 خلية MB49 للتقطير القتل الرحيم لما يصل إلى 25٪ من بحلول اليوم 14 بسبب عبء الورم المفرط. في تجربتنا ، لا تتأثر الفئران سلبا بحمل الورم في غ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل NIH R21 CA143505 إلى كريستينا فولكل جونسون.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
< ص>اسم الكاشف < / ص > الشركة< ص > رقم الكتالوج < / ص > < ص > التعليقات < / ص >
< ص>6-8 أسابيع من العمر فئران < / ص > مختبرات جاكسون< ص > اسم السلالة: C57BL / 6J < / p > < p > رقم السهم: 000664< / ص > < ص >< / ص
> < ص > التربسين * < / ص > MediaTech< p>MT25-053-CI< / p>

تم الحصول عليها من خلال Fisher< / p>

DMEM * < / p>

MediaTech

MT10-017-CV< / p>

تم الحصول عليها من خلال Fisher< / p>

FBS< / p>

Hyclone

SH30071.03< / p>

Heat-inactivated< / p>

T25 قوارير*< / p>

Corning Costar< ص>رقم كورنينج: 3056< / ص > < ص > فيشر: 07-200-63 < / ص > < ص > تم الحصول عليها من خلال خلايا فيشر < / ص >
< ص > ميغابايت 49 خلايا< / ص > N / A< p > N / A < p > < p > تم الحصول عليها من الدكتور بوهلي (انظر المرجع 11 < / sup>) < / p>
< p>Puralube Vet Ointment * < / p > Pharmaderm< ص>شركة هنري شاين< / ص> < ب> رقم: 036090-6050059 < / ص > < ص > فيشر: NC9676869< / ص > < ص>تم الحصول عليها من خلال فيشر < / ص
> < > كريم مزيل الشعر: Veet < / p > صيدليةمحلية < ص >< / ص > < ص >< / ص >
< ص>زيوت التشحيم: < / ص > < ص > كي واي جيلي < / ص > الصيدلية المحلية< ص >< / ص > < ص >< / ص >
< ص > القسطرة * < / ص > إكسل الدولية< ص > إكسل الدولية < ص > < ص > رقم : 26751 ؛ < / ص > < ص > فيشر: 14-841-21 < / ص > < ص > تم الحصول عليها من خلال فيشر < / ص >
< ص > إيزوفلوران < / ص > تيريل< ص > NDC 66794-011-25 < / ص > < ص > تم الحصول عليها من خلال صيدلية المستشفى < / ص >
< ص > 1 مل محاقن السل < / ص > بكتون ديكنسون< ص >BD309659< / ص > < ص > فيشر: 14-823-434 < / ص> < ص >< / ص >
< ص > د-لوسيفيرين < / ص > جولد بيوتكنولوجيز< ص > L-123-1 < / ص > < ص >< / ص >
< ص > Ad-CMV-Luc < / ص > VectorBiolabs< ص > 1000 ؛ طلب تضخيم واسع النطاق وتنقية CsCl ل in vivo< em> use

Infectious Factor الذي يتطلب احتواء BSL2< / p>

Steady-Glo  نظام فحص لوسيفيراز < / ص >

Promega< p > E2510 (10 مل) ، E2520 (100 مل) ، أو E2550 (10 × 100 مل) < / ص > < p >< / p >
< p > * متاح من خلال بائعين متعددين < / p >
< p> نظام التخدير < / p > أنظمة EZ ، التخدير Euthanex Corporation

: جهاز إعادة تنفس الماوس EZ7000< / p>

5 منافذ: EZ109< / p>

تم الحصول عليها من خلال Fisher< / p>

Xenogen IVIS 200< / p>

Caliper Life Sciences

http://www.caliperls.com/products/preclinical-imaging/ivis-imaging-system-200-series.htm< / p>

< / p>

FLUOstar Optima< / p>

بي إم جي لابتك< ب>http://www.bmglabtech.com/products/microplate-reader/instruments.cfm?product_id=2< ص> <ص>
< td colspan = "4" >< p> EQUIPMENT< / p > نظام

المراجع

  1. Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics, 2012. CA Cancer. J. Clin. 62 (1), 10-29 (2012).
  2. Seager, C. M., Puzio-Kuter, A. M., et al. Intravesical delivery of rapamycin suppresses tumorigenesis in a mouse model of progressive bladder cancer. Cancer Prev. Res. 2 (12), 1008-1014 (2009).
  3. Chodak, G. W., Shing, Y., Borge, M., Judge, S. M., Klagsbrun, M. Presence of heparin binding growth factor in mouse bladder tumors and urine from mice with bladder cancer. Cancer Res. 46 (11), 5507-5510 (1986).
  4. De Boer, E. C., Teppema, J. S., Steerenberg, P. A., De Jong, W. H. Retrovirus type C in the mouse bladder carcinoma cell line MBT-2. J. Urol. 163 (6), 1999-2001 (2000).
  5. Lodillinsky, C., Rodriguez, V., et al. Novel invasive orthotopic bladder cancer model with high cathepsin B activity resembling human bladder cancer. J. Urol. 182 (2), 749-755 (2009).
  6. Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model. BJU Int. 101 (1), 120-124 (2008).
  7. Brocks, C. P., Buttner, H., Bohle, A. Inhibition of tumor implantation by intravesical gemcitabine in a murine model of superficial bladder cancer. J. Urol. 174 (3), 1115-1118 (2005).
  8. Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter. Clin. Cancer Res. 10 (20), 6977-6984 (2004).
  9. Wu, Q., Mahendran, R., Esuvaranathan, K. Nonviral cytokine gene therapy on an orthotopic bladder cancer model. Clin. Cancer Res. 9 (12), 4522-4528 (2003).
  10. Bonfil, R. D., Russo, D. M., Binda, M. M., Delgado, F. M., Vincenti, M. Higher antitumor activity of vinflunine than vinorelbine against an orthotopic murine model of transitional cell carcinoma of the bladder. Urol. Oncol. 7 (4), 159-166 (2002).
  11. Bohle, A., Jurczok, A., et al. Inhibition of bladder carcinoma cell adhesion by oligopeptide combinations in vitro and in. 167 (1), 357-363 (2002).
  12. Gunther, J. H., Jurczok, A., et al. Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49). Cancer Res. 59 (12), 2834-2837 (1999).
  13. Gunther, J. H., Frambach, M., et al. Effects of acetylic salicylic acid and pentoxifylline on the efficacy of intravesical BCG therapy in orthotopic murine bladder cancer (MB49). J. Urol. 161 (5), 1702-1706 (1999).
  14. Dobek, G. L., Godbey, W. T. An orthotopic model of murine bladder cancer. J Vis Exp. (48), (2011).
  15. Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. Tumor and microenvironment modification during progression of murine orthotopic bladder cancer. Clin. Dev. Immunol. 2011, 865684(2011).
  16. Seow, S. W., Cai, S., et al. Lactobacillus rhamnosus GG induces tumor regression in mice bearing orthotopic bladder tumors. Cancer Sci. 101 (3), 751-758 (2009).
  17. Mangsbo, S. M., Ninalga, C., Essand, M., Loskog, A., Totterman, T. H. CpG therapy is superior to BCG in an orthotopic bladder cancer model and generates CD4+ T-cell immunity. J. Immunother. 31 (1), 34-42 (2008).
  18. Loskog, A. S., Fransson, M. E., Totterman, T. T. AdCD40L gene therapy counteracts T regulatory cells and cures aggressive tumors in an orthotopic bladder cancer model. Clin. Cancer Res. 11 (24 Pt 1), 8816-8821 (2005).
  19. Loskog, A., Ninalga, C., et al. Optimization of the MB49 mouse bladder cancer model for adenoviral gene therapy. Lab Anim. 39 (4), 384-393 (2005).
  20. Bockholt, N. A., Knudson, M. J., et al. Anti-Interleukin-10R1 Monoclonal Antibody Enhances Bacillus Calmette-Guerin Induced T-Helper Type 1 Immune Responses and Antitumor Immunity in a Mouse Orthotopic Model of Bladder Cancer. J. Urol. 187 (6), 2228-2235 (2012).
  21. Watanabe, F. T., Chade, D. C., et al. Curcumin, but not Prima-1, decreased tumor cell proliferation in the syngeneic murine orthotopic bladder tumor model. Clinics. 66 (12), 2121-2124 (2011).
  22. Chade, D. C., Andrade, P. M., et al. Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model. Int. Braz. J. Urol. 34 (2), 220-226 (2008).
  23. Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model. J. Urol. 172, 2414-2420 (2004).
  24. Zhang, Z., Xu, X., et al. The therapeutic potential of SA-sCD40L in the orthotopic model of superficial bladder cancer. Acta Oncol. 50 (7), 1111-1118 (2011).
  25. Kohno, S., Luo, C., et al. Herpes simplex virus type 1 mutant HF10 oncolytic viral therapy for bladder cancer. Urology. 66 (5), 1116-1121 (2005).
  26. Kikuchi, E., Menendez, S., et al. Highly efficient gene delivery for bladder cancers by intravesically administered replication-competent retroviral vectors. Clin. Cancer Res. 13 (15 Pt 1), 4511-4518 (2007).
  27. Siemens, D. R., Austin, J. C., See, W. A., Tartaglia, J., Ratliff, T. L. Evaluation of gene transfer efficiency by viral vectors to murine bladder epithelium. J. Urol. 165 (2), 667-671 (2001).
  28. Siemens, D. R., Crist, S., Austin, J. C., Tartaglia, J., Ratliff, T. L. Comparison of viral vectors: gene transfer efficiency and tissue specificity in a bladder cancer model. J. Urol. 170 (3), 979-984 (2003).
  29. Black, P. C., Shetty, A., et al. Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis. BJU Int. 106 (11), 1799-1804 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

زراعة الورم في الموقع الأصليقسطرة مثانة الفأرإيصال الجينات عبر الفيروسات الغديةمقايسة لوسيفيريز المراسلةمعالجة المثانة بالتريبسينغرس خلايا MB49الكشف عن البيلة الدمويةتصوير الحيوانات الصغيرةالتعبير الجيني الفيروسي
وسرطان المثانة نموذج مثلي للدراسات توصيل الجينات
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.