Method Article

الوليد الصعق الكهربائي المنطقة Subventricular

DOI:

10.3791/50197

⸱

February 11th, 2013

 ,  , 
1Department of Neurosurgery and Cellular & Molecular Physiology, Yale University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن يبرهن على وجود تقنية مينيملي ويشار إلى الولدان الصعق الكهربائي منطقة subventricular. تقنية حقن الحمض النووي يتكون من البلازميد إلى البطينين الوحشي للالجراء حديثي الولادة وتطبيق التيار الكهربائي لتقديم والتلاعب وراثيا الخلايا الجذعية العصبية

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) خط البطينين الوحشي بعد الولادة وتؤدي إلى أنواع خلايا متعددة والتي تشمل الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، وخلايا البطانة العصبية 1. فهم المسارات الجزيئية المسؤولة عن التزام مجلس الأمن القومي، التجديد الذاتي، والتمايز هو أمر حاسم لتسخير إمكاناتها الفريدة لإصلاح الدماغ وفهم أفضل اضطرابات الجهاز العصبي المركزي. مطلوب الأساليب السابقة للتلاعب من نظم الثدييات المسعى تستغرق وقتا طويلا ومكلفة للهندسة الوراثية على مستوى الحيوان كله 2. وهكذا، واستكشفت الغالبية العظمى من الدراسات وظائف الجزيئات NSC في المختبر أو في اللافقاريات.

هنا، علينا أن نبرهن على تقنية بسيطة وسريعة لمعالجة المواليد الشخصيات التي يشار اليها على انها حديثي الولادة الصعق الكهربائي subventricular (SVZ) المنطقة. تم تطوير تقنيات مماثلة قبل عقد من الزمن لدراسة NSCs الجنينية ولقد ساعد على دراسات corticaL 3،4 التنمية. وفي الآونة الأخيرة تم تطبيق هذه لدراسة الدماغ الأمامي القوارض بعد الولادة 5-7. هذه التقنية نتائج قوية في وضع العلامات من NSCs SVZ وذريتها. وهكذا، بعد الولادة SVZ الصعق الكهربائي و يوفر التكلفة والوقت البديل الفعال للهندسة الوراثية NSC الثدييات.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الإجراء هو وفقا لمتطلبات IACUC ييل. هل يجوز للعلماء التأكد من أن تتم الموافقة على المبادئ التوجيهية IACUC وتابع وفقا لاحتياجاتها المؤسسية.

1. القسم 1. إعداد الماصات DNA، والحلول، والزجاج

  1. توليد عالية النقاء (OD 260/280> 1.80) التركيز العالي (ميكروغرام / ميكرولتر> 2.5) سم داخلي المنشأ خالية من الحمض النووي.
  2. إعداد محلول ملحي 0.9٪ وتصفية العقيمة من خلال مرشح ميكرون 22.
  3. مكا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الوليد الصعق الكهربائي منطقة subventricular النتائج في وسم الخلايا الدبقية تقريبا كل شعاعي متجاورة مع، الظهرية الظهرية منطقة subventricular الجانبية، والجانبية بعد حركة "الكاسح" من القطب منتاش (الشكل 1E). ومع ذلك، يمكن أن تكون مصممة الصعق الكهربائي لمتطلبات التجربة ولكن ليس كل تجتاح الكهربائي واستخدام المكان المحدد والتوجه كما هو مفصل في الفيديو. على سبيل المثال، منذ الدبقية شعاعي المترجمة ظهريا تختلف عن تلك البطانة القسم الجانبي من البطين، يمكن للمرء أن اختار ele.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن هنا التفاصيل أسلوب الصعق الكهربائي SVZ حديثي الولادة، وهي تقنية لبسرعة وبقوة تسمية الخلايا الجذعية والتلاعب SVZ وذريتها. هناك العديد من المزايا التي الصعق الكهربائي وبالمقارنة مع غيرها من التقنيات. أولا، نظرا للوضع العلامات التنسيق من الخلايا، واحد قادر على تمييز الخلايا آثار مستقلة وغير مستقلة الخلية. الثانية، والتلاعب الجيني باستخدام نظم محرض يسمح احد لمقارنة آثار قبل أو بعد الاندماج متشابك. وعلاوة على ذلك، يمكن للمرء تجاوز استخدام البلازميدات متعددة من الفئران electroporati.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم لجعل الكشف.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من وزارة الدفاع (فكرة الجائزة التنمية، W81XWH-10-1-0041، AB)، CT الجذعية منحة الخلية (AB)، والمعهد الوطني للصحة NRSA 10668225 (DMF). ويستند المواد موجودة على العمل المدعوم جزئيا من ولاية كونيتيكت تحت الخلايا الجذعية كونيتيكت برنامج المنح البحثية. كان شركة والممولين محتوياته هي الجهة الوحيدة المسؤولة عن أصحابها ولا تعبر بالضرورة عن وجهات النظر الرسمية للدولة من ولاية كونيتيكت، وزارة الصحة العامة في ولاية كونيتيكت أو الابتكارات CT، أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة كتالوج رقم التعليقات (اختياري)
الأنابيب الثقيلة البورسليكات ملمع سوتر الصك BF150-110-10
زجاج مزدوج المرحلة Micropipette بولير Narishige PC-10H
سريع الأخضر فيشر العلمية 0521192205
ECM 830 ساحة مولد موجة النبض جهاز هارفارد 45-0052
Tweezertrodes جهاز هارفارد 45-0488
الألياف البصرية ضوء المصدر فيشر العلمية 12-562-36
التنغستن هالوجينمصباح اوشيو أمريكا، وشركة 1002247
Picospritzer II باركر الصكوك 052-0312-900

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. The glial nature of embryonic and adult neural stem cells. Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).
  2. Imayoshi, I., Sakamoto, M., Kageyama, R. Genetic methods to identify and manipulate newly born neurons in....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neonatal SVZ ElectroporationSubventricular ZoneNeural Stem CellsElectroporation TechniqueDNA InjectionImmunohistochemistryMicroscopy AnalysisElectrophysiology MethodsCell Fate AnalysisPup Anesthesia

Related Articles