مقالة منهجية

بحكم الرحم الصعق الكهربائي وإإكسبلنتس نصف الكرة المجموع: طريقة بسيطة للدراسات التجريبية التنمية القشرية في وقت مبكر

12.6K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/50271

⸱

أبريل 3, 2013

 ,  ,  , 
1Department of Neuroscience and Physiology, SUNY Upstate Medical University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول إجراء يزدرع المحسنة التي ينطوي السابقين الرحم الصعق الكهربائي، وتشريح ثقافة نصفي الكرة المخية بالكامل من الماوس الجنينية. إعداد الدراسات الدوائية ويسهل المقايسات وظيفة الجين خلال التنمية القشرية في وقت مبكر.

الملخص

القشرية التنمية ينطوي على التفاعلات المعقدة بين الخلايا العصبية وغير العصبية العناصر بما في ذلك الخلايا السلائف، والأوعية الدموية، والسحايا المصفوفة خارج الخلية المرتبطة بها. لأنها توفر بيئة مناسبة عضوي النمط، وغالبا ما تستخدم إإكسبلنتس شريحة القشرية للتحقيق في تلك التفاعلات العصبية التي تتحكم التمايز والتنمية. على الرغم من فائدة، لا يمكن للنموذج يزدرع شريحة تعاني من عيوب بما في ذلك التصفيح الخلوية الشاذة والهجرة. نحن هنا نورد ككل يزدرع نصف الكرة المخية نظام لدراسات التنمية في وقت مبكر القشرية التي هي أسهل لإعداد شرائح من القشرية وعروض الهجرة عضوي النمط ثابت والتصفيح. في هذا النظام النموذجي، التصفيح المبكر وأنماط الهجرة بشكل طبيعي لمدة يومين في المختبر، بما في ذلك فترة تقسيم preplate خلالها طبقة قشرية المحتملين ستة أشكال. ونحن بعد ذلك وضعت الصعق الكهربائي الرحم EX (EUEP)النهج الذي يحقق النجاح ~ 80٪ في استهداف التعبير GFP إلى الخلايا العصبية في القشرة النامية الإنسي الظهرية.

ويزدرع نصف الكرة كله يجعل من تطوير نموذج القشرية في وقت مبكر للوصول للتدخل، الصعق الكهربائي الدوائية والنهج التصوير الحية. هذا الأسلوب يتجنب الجراحة المطلوبة من البقاء على قيد الحياة في الرحم الصعق الكهربائي (IUEP) النهج مع تحسين كل من ترنسفكأيشن والمساحي الاتساق الاستهداف. وهذه الطريقة تسهل من الدراسات التجريبية العصبية الهجرة، والانتشار والتمايز.

المقدمة

والثدييات أشكال قشرة الدماغ من خلال الهجرة متضافرة، والانتشار والتمايز للخلايا العصبية ولدت على التوالي. ولادة كل الخلايا العصبية في منطقة البطين (VZ) ويهاجر من VZ إلى منطقة وسيطة (IZ)، وتشكيل لوحة القشرية (CP) 1. لأنها تمر من خلال المجالات المختلفة القشرية، الخلايا العصبية المهاجرة عرض وسائط متعددة من الهجرة 2،3 التي تعتمد على البيئة خارج الخلية والعناصر الخلوية الأخرى (مثل الخلايا الدبقية شعاعي) داخل الأنسجة النامية. الخلايا العصبية القشرية اعتقال ثم الترحيل في الجزء العلوي من لوحة لتشكيل القشرية في عمليات الاعتقال تتزامن الهجرة العصبية و 4 dendritogenesis.

يبدأ التنمية القشرية بين 11-13 يوما الجنينية (E11-13) من 5 إلى إنشاء طبقة ضفيري البدائية 6 أو preplate (PP)، طبقة من الخلايا العصبية التي يعتلي رائدة في VZ. محتملطبقة 6 الخلايا العصبية القشرية (أي الخلايا العصبية القشرية 1 لدت في VZ) ثم توجيه بهم somata في نمط النمطية ويندمج في طبقة متميزة في PP 7. تقسيم هذه الأحداث إلى preplate (طبقة المستقبل القشرية 1) هامشية سطحية وعميقة منطقة، وهذا الأخير يتألف من خلايا subplate (طبقة قشرية عابرة 7). هذه العملية، تسمى تقسيم preplate، هو حدث تأسيسي في النمو المستقبلي للقشرة الدماغ 8.

وقد تم تحديد العديد من الطفرات الوراثية التي تعطل مختلف جوانب التنمية القشرية 9. ويمكن أيضا أن تتأثر التنمية القشرية سلبا التعرض للسموم بلعها مثل الكوكايين 10 و الكحول 11. لأن التشوهات القشرية التي تنشأ خلال التنمية هي من المساهمين المحتمل أن الاضطرابات العصبية (مثل التوحد وانفصام الشخصية)، والتحقيقات التجريبية للاضطرابات في التنمية القشرية متأصلةالمهم لي. ولذلك من الأهمية بمكان وضع نهج لدراسة التنمية القشرية التي تسمح المقايسات السريع للآثار السمية الوراثية أو التي تحفظ ولكن أيضا التفاعلات الممكنة بين الخلايا العصبية التمييز، وغيرها من أنواع الخلايا المصفوفة خارج الخلية (ECM) خلال هذه الفترة المبكرة من نمو الدماغ 12 .

وقد وفرت إإكسبلنتس شريحة 13 مثل هذا النظام واستخدمت على نطاق واسع في التنمية فحص الخلايا العصبية القشرية 14-16. ومع ذلك، يمكن المقايسات شريحة تعاني من عيب أن الهجرة العصبية ويمكن أن يكون غير طبيعي التصفيح 17 ربما بسبب الضرر الذي يلحق الخلايا السحائي التي تحيط الدماغ النامية ومرساة وشعاعي الدبقية سقالة. كما قد الدبقية الألياف الشعاعية هي الركيزة الهامة لتعطيل الخلايا العصبية القشرية 18 الهجرة من الصفيحة القاعدية عن طريق تشريح تعطيل محليا العمارة الدبقية شعاعي وتؤدي إلى الهجرة القشرية تغييرها. وبالإضافة إلى ذلك سليدائرة الهندسة المدنية من السطوح إإكسبلنتس يوفر المنطقة من الخلايا الميتة التي قد تغير من تركيبة طبيعية من ECM في هذه المجالات.

وقد ركزت المناهج الأكثر حداثة تحليلهم على خلايا تقع في عمق شريحة التي تحيط بها أنواع الخلايا المناسبة صحية وECM. ومع ذلك، في بعض الحالات يمكن لهذه المناهج الجديدة تتطلب أن شريحة المثقفين الأصلي سميكة يكون البرد مقطوع مقطوع أو البارافين، بعد التثبيت بحيث يتم الداخلية عادية نسبيا من شريحة المتاحة للتحليل 19-21. كل من vibratome الأصلي تقطيع لإعداد شرائح حية للثقافة وكذلك cryosectioning اللاحقة من شرائح محددة للتحليل تتطلب الرعاية والجهد لهذه المقايسات للعمل.

لتوفير بسيطة، نهج تكميلية لدراسات التنمية القشرية في وقت مبكر، وقمنا بتعديل النهج القائمة شريحة 13 إلى تسهيل الدراسات القشرية للتنمية في وقت مبكر. وقد وضعنا WHأوله نموذج يزدرع نصف الكرة مماثلة لنموذج موجود E14 نصف الكرة بأكملها التي تشارك الثقافات تهز في 65 دورات في الدقيقة والنمو عضوي النمط يسمح ل16-18 ساعة 22،23. في نهجنا، يتم وضع إإكسبلنتس نصف الكرة كله على غشاء شبه منفذ 13 مع الأكسجين في جو الثقافة العالية 21،24 تمديد نمو عضوي النمط القشرية لمدة 48 ساعة. هذا النهج يسمح أيضا الصعق الكهربائي ثابت من الخلايا العصبية النامية القشرية. تتم إزالة الأجنة من الرحم وelectroporated DNA البلازميد لإدخال ويتم تشريح الدماغ الانتهائي ثم. يتم عزل كل نصف الكرة ووضعها أسفل على الجانب الإنسي مرشح الكولاجين المغلفة. ويستزرع ثم ​​يزدرع لمدة 48 ساعة، وهي الفترة التي تشمل تقسيم preplate 8. خلال الفترة الثقافة، L6 الخلايا العصبية من تطوير الخلايا العصبية مقدمة لتمييز 25، صحيح داخل لوحة القشرية. طوال هذه الفترة الناميةوتحيط الخلايا العصبية من قبل ECM المناسبة والتي من شأنها أن أنواع الخلايا مواجهة الخلية المقابلة في الجسم الحي. وقد أثبت هذا النظام بالفعل قيمة في فك رموز أحداث الخلوية التي تكمن وراء سمية الإيثانول 26، وتشكيل طبقة 6 preplate تقسيم 7،25.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. Electroporations الرحم السابق مع الأخضر التعبير بروتين فلوري البلازميد

  1. يتم إعداد البلازميد الحمض النووي مع حلول حقن CAG-DNA 27 EGFP المخفف لتركيز العمل النهائية قدره 0.33 ملغ / مل في DDH 2 O. وتستخدم QIAGEN إندو خالية من ماكسي إستعداد لتنقية البلازميد من البكتيريا المتحولة. يضاف صبغ الأخضر بسرعة 0.02٪ في ~ (W / V النهائي) في حل DNA باعتباره التتبع الحقن.
  2. لإعداد منطقة العمليات الجراحية، رش أعلى إلى أسفل مقاعد البدلاء وتشريح مرحلة المجهر مع حل الإيثانول 70٪ وجففي. رش مقص وملقط جراحي مع الايثانول 70٪ قبل تشريح وجففي.
  3. وضحى توقيت الحوامل السويسري / ويبستر السدود على E13 عن طريق التحويل إلى غرفة مليئة CO 2 من اسطوانة مضغوطة ويتم رصد السد حتى عن توقف الحركة لمدة لا تقل 1 دقيقة. بعد التضحية عن طريق الاستنشاق 2 CO تتم إزالة الأجنة من الرحم ووضعها فيمن 10 سم طبق بتري تحتوي على الجليد الباردة محلول ملحي متوازن هانكس (HBSS).
  4. تشريح الجنين بعناية كل من الأغشية المحيطة من خارج الجنين والحفاظ على الجليد الباردة في HBSS.
  5. نقل كل جنين على حدة لثانية 10 سم طبق بتري تحتوي على HBSS الباردة. استخدام حقنة لحقن هاميلتون 2-3 ميكرولتر من خليط DNA الخضراء بسرعة إلى البطين من نصف الكرة المخية الأيسر، مع الحرص على حقن في منطقة منفصلة مكانيا القشرية من المنطقة القشرية للتحليل في المستقبل.
  6. لelectroporate، اضغط بلطف الجنين بالملقط ووضع برفق مجداف إيجابية من القطب منتاش على خط الوسط الظهرية من الرأس ووضع برفق مجداف السلبية تحت الذقن الجنين. يتم تحقيق Electroporations مع electroporator BTX830 مبرمجة لتقديم 5 30 نبضة V لمدة ميللي ثانية 50، مفصولة فترات ميللي ثانية 950. هذه الإعدادات لنموذج BTX830. ويمكن استخدام أنظمة أخرى وفقا لinstructio الشركة المصنعةNS.

2. كامل نصف الكرة إعداد يزدرع

  1. بعد الصعق الكهربائي و توضع الأجنة مرة أخرى إلى الجليد الباردة HBSS. تتم إزالة الدماغ باستخدام ملقط صائغ 2 # 5 لإزالة الجلد والجمجمة الغضروفية من الرأس الجنين. وبعد ذلك تراجع forcep تحت المخ لإزالة المخ من الجمجمة سليمة. ثم يتم تشريح نصف الكرة electroporated (يسار) بعيدا عن الدماغ وتتم إزالة المرفقة منتصف الدماغ الأنسجة. في جميع أنحاء تشريح الرعاية الإجراء المتخذة للا ضرر السحايا المغطي نصف الكرة المخية الأيسر القشرية.
  2. تشريح مرة يتم نقل كل جنين في HBSS باستخدام pipettor مع خفض تلميح ماصة 1 مل. وطرد نصف الكرة برفق على إدراج ثقافة الكولاجين المغلفة. يتم ترتيب ما يصل إلى نصف الكرة إإكسبلنتس 6 الجانب الإنسي لأسفل على كل إدراج 24 ملم. تتم إزالة ترتيب مرة واحدة، HBSS الزائدة من إدراج ويتم وضعها بعد ذلك في واحدة إدراج 35 مم جيدا طبق 6 أيضا. يحتوي البئر إكساءctly 2،7 مل من وسائل الإعلام: وسائل الإعلام F12-DMEM تحتوي على Glutamax وتستكمل مع 2٪ B-27، 1٪ و 1٪ G5-البنسلين بكتيريا. يمكن pipetted بضع قطرات من وسائل الإعلام من البئر على رأس كل يزدرع، ولكن لا تقم بإضافة وسائل الإعلام الزائد عن 2،7 مل لكل بئر الأصلي.
  3. مرة واحدة وقد تم وضع إإكسبلنتس على مرشحات الكولاجين يتم وضع صحن يحتوي على 6 جيدا إإكسبلنتس في غرفة بيلوبس (BR) روتنبرج (يحتوي أيضا على طبق الرطوبة من الماء). هي التي غرست A 95٪ / 5٪ أكسجين / CO خليط الغاز 2 في غرفة لمدة لا تقل 1 دقيقة قبل اغلاق اغلاق الدائرة وفصل 95٪ / 5٪ أكسجين / CO إمدادات الغاز 2 أنبوب. ثم يتم وضع الدائرة BR إلى 37 درجة مئوية زراعة الأنسجة حاضنة للفترة المتبقية من الفترة الثقافة، 1-2 DIV.

3. تثبيت من الأنسجة يزدرع لعلم الأنسجة

  1. في غطاء الدخان إعداد الحل تثبيت باجانو من جانب أول مجموعة ال 8 solubilizing من بارافورمالدهيد في 100 مل من مسخن (دي & ~ 80ز؛ C) DDH 2 O. إضافة قطرات 1-3 تتركز هيدروكسيد الصوديوم لتعزيز الانحلالية ويحرك المزيج بلطف. solubilized مرة واحدة مزيج الحل بارافورمالدهيد 8٪ 1:1 مع الحل الذي هو 500 ملم السكروز، HEPES 100 ملم، درجة الحموضة 7.4، 50 ملم MgCl 2 و 5 مم للبوكل تركيز النهائي من بارافورمالدهيد 4٪ في 250 ملي HEPES السكروز 50 مم ، 25 ملم MgCl 2، 2.5 ملي بوكل، ودرجة الحموضة 7.4.
  2. لإصلاح إإكسبلنتس الحارة الحل الإصلاح باجانو إلى 37 ° C. إزالة بسرعة معظم وسائل الإعلام من كل ثقافة DMEM/F12 جيدا وإضافة 5 مل من إصلاح باجانو إلى كل بئر من إإكسبلنتس. تأكد من تغطية كل يزدرع تماما في الإصلاح. إصلاح 1 ساعة في RT. لا تقم بإزالة إإكسبلنتس من مرشح قبل 1 ساعة من التثبيت.
  3. بعد تثبيت الإصلاح إزالة الحل باجانو واستبدال الحل باجانو دون الإصلاح (250 ملي ملي HEPES السكروز 50، 25 ملم MgCl 2، 2.5 ملي بوكل، ودرجة الحموضة 7.4). إضافة بضع قطرات من أزيد الصوديوم 10٪ وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى تضمين.

4. التضمين وSectioning لعلم الأنسجة

  1. إعداد الجلد العجل حل الجيلاتين 10٪ من solubilizing 10 غرام من العجل الجلد الجيلاتين في 100 مل من الماء الدافئ (55-60 ° C). وضع حل الجيلاتين على طبق ساخن لتعيين 60 ° C وعباب دوري حتى solubilized.
  2. صب حوالي 10 مل من محلول الجيلاتين 10٪ في الجزء السفلي من طبق بتري الطول 10 و 30 دقيقة تسمح لترسيخ. وهذه الصورة "لوحة" لتضمين إإكسبلنتس. يمكن لهذه أن تكون منصات معدة مسبقا أيام وتخزينها في C. ° 4 استخدام مسطرة لرسم الشبكة على الجزء السفلي من طبق بتري ونقل إإكسبلنتس الفردية في كل مربع من الشبكة. إزالة المتبقية باجانو الحل واستخدام pipettor، مع تغطية كل يزدرع حل الجيلاتين الدافئ 10٪ والسماح لترسيخ. بالإضافة إلى ذلك بطء استئناف حل الجيلاتين حتى يتم محاطة بالكامل من قبل كل يزدرع الجيلاتين، مع الحرص على عدم ذوبان لوحة بإضافة الكثير جدا الحارة الجيلاتين في آن واحد. السماح لتتصلب الجيلاتين لللساعة 1 ~. وبمجرد أن تصلب individويمكن خفض إإكسبلنتس يو ايه ال في كتل صغيرة من الجيلاتين. ثم يتم إضافة لبنات ثابتة في باجانو إصلاح ساعة لمدة 24-48 قبل تقطيع مع vibratome.
  3. يتم وضع إإكسبلنتس الجيلاتين في كتل البصلة الشمية ويصل مقطوع في الطائرة الاكليلية في سمك ميكرومتر 100. يتم جمع المقاطع وتخزينها في PBS + أزيد الصوديوم 0.1٪ في 4 درجات مئوية حتى تجهيز المناعى.
  4. يتم تنفيذ الكشف المناعى عن طريق تحويل الأقسام إلى لوحة بئر 24 (2-3 أقسام لكل بئر). أول كتلة غير محددة الأجسام المضادة ملزمة بإضافة 0.5 مل + B PBST (PBS + 0.5٪ تريتون X 100 و 2٪ BSA) إلى كل بئر، 1 ساعة احتضان مع اهتزاز لطيف. ثم يتم تخفيف الأجسام المضادة المناسبة الابتدائية في PBST + B وبنسبة 0.4 مل لكل بئر لالحضانة بين عشية وضحاها في RT. يغتسل بها مع 3X الأولية PBS يغسل ما لا يقل عن 10 دقيقة لكل منهما. الجسم المضاد الثانوي و 2 ميكروغرام / مل هويشت 33342 مخففة ثم وصمة عار في PBST النووية + B ويتم تحضين العينات لمدة 2 ساعة في RTمع اهتزاز لطيف. يتم تنفيذ ثلاثة يغسل PBS (10 دقيقة لكل منهما) ومن ثم يتم تحميل المقاطع على الشرائح باستخدام 90٪ 50 ملي تريس الجلسرين، pH7.4، ووسائل الإعلام في تصاعد مستمر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

والجنينية القشرة القوارض يسلك الانحدار العصبية الوراثية عرضية خلال الفترة الإنمائية، مثل القشرة المخية الحديثة أن ما يقرب من 1 الوحشي اليوم أكثر نضجا من القشرة المخية الحديثة الإنسي الظهرية 28. وبالتالي يتم إنشاء الجزء الأكبر من طبقة 6 الخلايا العصبية (أي يحمل النهائية من المرحلة S-) على E12 في القشرة الجانبية (وتسمى أيضا الميدانية 40 5) وفي E13 في القشرة الظهرية وسطي (وتسمى أيضا حقل 1 5). تقسيم Preplate يبدأ اليوم حوالي 1 طبقة الخلايا الع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد قمنا بتحسين وتقييم نموذج تجريبي - إإكسبلنتس نصف الكرة كله - لدراسة التنمية القشرية في وقت مبكر (E13 E15-). أثبت نموذجا مفيدا لتحليل الهجرة وتمايز الخلايا العصبية من نسب مثير تشكل طبقة 6 من قشرة الدماغ 25،37. مزايا مبدأ النظام هي 1) النمو عضوي النمط لمدة 2 DIV، 2) إعداد بساطة، و3) الوصول إلى الخلايا العصبية التجريبية للتلاعب، الصعق الكهربائي الدوائية والتصوير خلال هذه الفترة، الأولى الحرجة من نمو المخ. لقد استخدمنا نظام لتوثيق الفروق الدقيقة في التشكل، والتوجه، والنم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة المالية.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من المنح NINDS (NS066071) وNIAAA و. (P50AA017823) لECO. الكتاب أشكر الدكتور روبرت كوين والموظفين في وزارة الثروة الحيوانية مختبر لرعاية الحيوانات. نشكر جودسون بلمونت حصول على الدعم الفني، نيكول Belletier للمساعدة على أنه باحث الصيفية الجامعية (SURF). نشكر أيضا الدكتور ديفيد كاميرون للتعليق عليها وتعديلات على إصدار سابق من المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > كواشف < / قوي >
DMEM / F12 + GlutaMAXGIBCO10565
G5 مكمل غذائي 100XInvitrogen17503-012
B27 بدون مصل 50XInvitrogen1504-044
سائل قلم / استربيلية 100XInvitrogen15140-122
HBSS 500 ملGIBCO14025
إدراج ثقافة الكولاجين المغلفة كوستار3492
جيلاتين جلد البقر سيجماG9382
H&# 8211; chst 33342InvitrogenH1399
ألبومين مصل الأبقارSigma7906
EndoFree Plasmid Maxi KitQiagen12362
Equipment< / strong>
BTX 830 Electroporatorهارفارد450052
أقطاب كهربائية 10 ممهارفارد جهاز450166
حاضنةبيلوبس روتنبرغMIC-101
حقنة هاميلتون (5 دول)هاميلتون87930
إبرة حقنة هاميلتونهاميلتون7803-04حدد 1 بوصة والنمط 4
دومون # 5 ملقطFST11251-10
مقص ناعم مقص صعب 9 سمFST14058-09
جهاز

المراجع

  1. Rakic, P. Principles of neural cell migration. Experientia. 46, 882-891 (1990).
  2. Tabata, H., Nakajima, K. Multipolar migration: the third mode of radial neuronal migration in the developing cerebral cortex. J. Neurosci. 23, 9996-10001 (2003).
  3. Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases. Nat. Neurosci. , (2004).
  4. Olson, E. C., Kim, S., Walsh, C. A. Impaired neuronal positioning and dendritogenesis in the neocortex after cell-autonomous Dab1 suppression. J. Neurosci. 26, 1767-1775 (2006).
  5. Takahashi, T., Goto, T., Miyama, S., Nowakowski, R. S., Caviness, V. S. Sequence of neuron origin and neocortical laminar fate: relation to cell cycle of origin in the developing murine cerebral wall. J. Neurosci. 19, 10357-10371 (1999).
  6. Marin-Padilla, M. Early prenatal ontogenesis of the cerebral cortex (neocortex) of the cat (Felis domestica). A Golgi study. I. The primordial neocortical organization. Z. Anat. Entwicklungsgesch. 134, 117-145 (1971).
  7. Nichols, A. J., Olson, E. C. Reelin promotes neuronal orientation and dendritogenesis during preplate splitting. Cerebral Cortex. 20, 2213-2223 (2010).
  8. Sheppard, A. M., Pearlman, A. L. Abnormal reorganization of preplate neurons and their associated extracellular matrix: an early manifestation of altered neocortical development in the reeler mutant mouse. J. Comp. Neurol. 378, 173-179 (1997).
  9. Manzini, M. C., Walsh, C. A. What disorders of cortical development tell us about the cortex: one plus one does not always make two. Current Opinion in Genetics & Development. 21, 333-339 (2011).
  10. Jones, L., Fischer, I., Levitt, P. Nonuniform alteration of dendritic development in the cerebral cortex following prenatal cocaine exposure. Cereb. Cortex. 6, 431-445 (1996).
  11. Olney, J. W. Fetal alcohol syndrome at the cellular level. Addict. Biol. 9, 137-149 (2004).
  12. Levitt, P., Reinoso, B., Jones, L. The critical impact of early cellular environment on neuronal development. Prev. Med. 27, 180-183 (1998).
  13. Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).
  14. O'Rourke, N. A., Dailey, M. E., Smith, S. J., McConnell, S. K. Diverse migratory pathways in the developing cerebral cortex. Science. 258, 299-302 (1992).
  15. Elias, L. A., Wang, D. D., Kriegstein, A. R. Gap junction adhesion is necessary for radial migration in the neocortex. Nature. 448, 901-907 (2007).
  16. Franco, S. J., Martinez-Garay, I., Gil-Sanz, C., Harkins-Perry, S. R., Muller, U. Reelin regulates cadherin function via Dab1/Rap1 to control neuronal migration and lamination in the neocortex. Neuron. 69, 482-497 (2011).
  17. Gotz, M., Bolz, J. Formation and preservation of cortical layers in slice cultures. J. Neurobiol. 23, 783-802 (1992).
  18. Cameron, R. S., Rakic, P. Identification of membrane proteins that comprise the plasmalemmal junction between migrating neurons and radial glial cells. J Neurosci. 14, 3139-3155 (1994).
  19. Lizarraga, S. B., Coser, K. R., Sabbagh, M., Morrow, E. M. Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex. J. Vis. Exp. (63), e3621(2012).
  20. Jossin, Y., Goffinet, A. M. Reelin signals through phosphatidylinositol 3-kinase and Akt to control cortical development and through mTor to regulate dendritic growth. Mol. Cell Biol. 27, 7113-7124 (2007).
  21. Jossin, Y., Ogawa, M., Metin, C., Tissir, F., Goffinet, A. M. Inhibition of SRC family kinases and non-classical protein kinases C induce a reeler-like malformation of cortical plate development. J. Neurosci. 23, 9953-9959 (2003).
  22. Kingsbury, M. A., Rehen, S. K., Contos, J. J., Higgins, C. M., Chun, J. Non-proliferative effects of lysophosphatidic acid enhance cortical growth and folding. Nat. Neurosci. 6, 1292-1299 (2003).
  23. Rehen, S. K., et al. A new method of embryonic culture for assessing global changes in brain organization. J. Neurosci. Methods. 158, 100-108 (2006).
  24. Jossin, Y., et al. The central fragment of Reelin, generated by proteolytic processing in vivo, is critical to its function during cortical plate development. J. Neurosci. 24, 514-521 (2004).
  25. O'Dell, R. S., et al. Layer 6 cortical neurons require Reelin-Dab1 signaling for cellular orientation, Golgi deployment, and directed neurite growth into the marginal zone. Neural. Dev. 7, 25(2012).
  26. Powrozek, T. A., Olson, E. C. Ethanol-induced disruption of Golgi apparatus morphology, primary neurite number and cellular orientation in developing cortical neurons. Alcohol. , (2012).
  27. Matsuda, T., Cepko, C. L. Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 16-22 (2004).
  28. Suter, B., Nowakowski, R. S., Bhide, P. G., Caviness, V. S. Navigating neocortical neurogenesis and neuronal specification: a positional information system encoded by neurogenetic gradients. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of The Society for Neuroscience. 27, 10777-10784 (2007).
  29. Englund, C., et al. and Tbr1 are expressed sequentially by radial glia, intermediate progenitor cells, and postmitotic neurons in developing neocortex. J. Neurosci. 25, 247-251 (2005).
  30. Kwon, G. S., Hadjantonakis, A. K. Eomes::GFP-a tool for live imaging cells of the trophoblast, primitive streak, and telencephalon in the mouse embryo. Genesis. 45, 208-217 (2007).
  31. Pearlman, A. L., Sheppard, A. M. Extracellular matrix in early cortical development. Prog. Brain Res. 108, 117-134 (1996).
  32. Milev, P., et al. Differential regulation of expression of hyaluronan-binding proteoglycans in developing brain: aggrecan, versican, neurocan, and brevican. Biochemical and Biophysical Research Communications. 247, 207-212 (1998).
  33. Kwan, K. Y., et al. SOX5 postmitotically regulates migration, postmigratory differentiation, and projections of subplate and deep-layer neocortical neurons. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 16021-16026 (2008).
  34. McKenna, W. L., et al. Tbr1 and Fezf2 regulate alternate corticofugal neuronal identities during neocortical development. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 31, 549-564 (2011).
  35. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103, 865-872 (2001).
  36. Stancik, E. K., Navarro-Quiroga, I., Sellke, R., Haydar, T. F. Heterogeneity in ventricular zone neural precursors contributes to neuronal fate diversity in the postnatal neocortex. J. Neurosci. 30, 7028-7036 (2010).
  37. Powrozek, T. A., Zhou, F. C. Effects of prenatal alcohol exposure on the development of the vibrissal somatosensory cortical barrel network. Brain Res. Dev. Brain Res. 155, 135-146 (2005).
  38. O'Dell, R., et al. Society for Neuroscience. , Washington D.C. (2011).
  39. Tombol, T., Hajdu, F., Somogyi, G. Identification of the Golgi picture of the layer VI cortic-geniculate projection neurons. Experimental Brain Research. Experimentelle Hirnforschung. Experimentation Cerebrale. 24, 107-110 (1975).
  40. Brumberg, J. C., Hamzei-Sichani, F., Yuste, R. Morphological and physiological characterization of layer VI corticofugal neurons of mouse primary visual cortex. Journal of Neurophysiology. 89, 2854-2867 (2003).
  41. Jones, E. G. Synchrony in the interconnected circuitry of the thalamus and cerebral cortex. Annals of the New York Academy of Sciences. 1157, 10-23 (2009).
  42. Kowalczyk, T., et al. Intermediate Neuronal Progenitors (Basal Progenitors) Produce Pyramidal-Projection Neurons for All Layers of Cerebral Cortex. Cereb. Cortex. , (2009).
  43. Konig, N., Roch, G., Marty, R. The onset of synaptogenesis in rat temporal cortex. Anatomy and Embryology. 148, 73-87 (1975).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GFP

مقالات ذات صلة