تنفيذ المشبك الحيوي مع المواصلة متشابك والاصطناعية في خلايا الشبكية العقدة ماوس

Summary

يوضح هذا المقال فيديو مجموعة المتابعة، والإجراءات اللازمة لتصحيح أجسام الخلايا وكيفية تنفيذ تسجيلات المشبك الحيوية من خلايا العقدة في جبل لالجامع الماوس للشبكية. هذا الأسلوب يسمح التحقيق في مساهمة الدقيق للمدخلات متشابك مثير والمثبطة، وحجمها النسبي وتوقيت لالتشويك العصبية.

Abstract

خلايا العقدة هي الخلايا العصبية الناتج من شبكية العين ويعكس نشاطهم دمج مدخلات متشابك المتعددة التي تنشأ من الدوائر العصبية المحددة. تقنيات المشبك التصحيح، المشبك في الجهد وتكوينات الشبك الحالية، وتستخدم عادة لدراسة الخصائص الفسيولوجية للخلايا العصبية لتوصيف ومدخلاتها متشابك. على الرغم من أن تطبيق هذه التقنيات هو غنية بالمعلومات، فإنها تشكل القيود المختلفة. على سبيل المثال، فإنه من الصعب تحديد كيفية التفاعل الدقيق للمدخلات مثير والمثبطة تحديد الانتاج استجابة. لمعالجة هذه المسألة، استخدمنا تقنية تعديل الحالي المشبك، المشبك دينامية، وتسمى أيضا تصرف المشبك ^{1، 2، 3} ودرست تأثير المدخلات متشابك مثير والمثبطة على استثارة الخلايا العصبية. هذا الأسلوب يتطلب حقن التيار في الخلية وتعتمد على ردود الفعل في الوقت الحقيقي من غشاء المحتملة لها في ذلك الوقت. وinjecteيتم احتساب د الحالي من المواصلة محددة سلفا متشابك مثير والمثبطة، إمكانات انعكاس وإمكاناتهم الخلية غشاء حظية. ، ويوضح التفاصيل بشأن إجراءات تجريبية التصحيح لقط الخلايا لتحقيق تكوين خلية كاملة وتوظيف تقنية المشبك دينامية في هذه المقالة الفيديو. هنا، نقدم لك مجموعة من الردود من خلايا الشبكية العقدة الماوس لمختلف الطول الموجي تصرف تم الحصول عليها من التجارب الفسيولوجية في ظروف التحكم أو في وجود مخدرات. وعلاوة على ذلك، نقدم لك مجموعة من استخدام المواصلة مثير والمثبطة اصطناعية تم إنشاؤها باستخدام وظائف ألفا للتحقيق في استجابات الخلايا.

Introduction

شبكية العين هي الأنسجة العصبية شبه شفافة بطانة الجزء الخلفي من العين. العديد من الدراسات استخدام شبكية العين كنموذج للتحقيق الخطوات الأولى في المعالجة البصرية وآليات إشارات متشابك. منذ الشبكة الشبكية في إعداد كامل جبل لا يزال سليما بعد تشريح، لأنها تمثل نظام مثالي لدراسة التفاعلات متشابك كما ردودها الفسيولوجية هي مشابهة جدا لفي ظروف فيفو. وهكذا، وذلك باستخدام شبكية العين معزولة يمكن دراسة خصائص الخلايا العصبية وذلك باستخدام تقنيات المشبك التصحيح (على الاستعراضات على هذه التقنية، نرى ^6،9،13). تحديد مساهمة الدقيق للدوائر والناقلات العصبية إلى استجابة الخلايا العقدية المحددة، ومع ذلك، وعادة ما أعاق وكلاء الدوائية تعمل في مواقع مختلفة.

يمكن تسجيل الاستجابات الفسيولوجية للخلايا العصبية في شبكية العين للضوء، والتحفيز الطبيعي، مع ماصات زجاجية مملوءة السوائل داخل الخلايا. باستخدام معدل التصحيحيمكن تسجيل تقنيات أمبير، والاستجابات العصبية لتحفيز الضوء عن التقلبات المحتملة غشاء (الشبك الحالية) أو كما التيارات (المشبك الجهد). من خلال عقد غشاء المحتملة في مختلف الجهود وتنفيذ تحليل تصرف اللاحق، فمن الممكن لعزل المدخلات متشابك المثبطة ومثير ^5،12. هذا النوع من التجارب يمكن القيام بها في المتوسطة الاستحمام العادي وبحضور وكلاء الدوائية المختلفة لعزل مساهمة الناقلات العصبية والمستقبلات العصبية إلى استجابات مختلفة. هناك ثروة من الدراسات من العديد من المختبرات تتميز اعتماد ارتفاعه الانتاج والمدخلات مثير والمثبطة على خصائص التحفيز مثل حجم، وعلى النقيض، الترددات المكانية والزمانية، والتوجيه، والتوجيه والتحفيز المتغيرات الأخرى. على الرغم من أن هذه المناهج التجريبية تقديم معلومات عن العلاقة بين المخرجات والمدخلات ارتفاع متشابك بوصفها وظيفة من خصائص التحفيز،تفسير مساهمة أنواع معينة من الخلايا ومدخلاتها متشابك إلى استثارة الخلايا ليست واضحة. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن المدخلات عادة كل مثير والمثبطة تختلف مع خصائص التحفيز وبالتالي، فإنه ليس من الممكن تقييم التأثير الدقيق أن التغيرات في أي من هذه المدخلات له على التشويك العصبية هذه.

نهج بديل للتحايل على هذه القيود هو القيام تسجيلات المشبك الحيوية، والتي تسمح اجراء تقييم نقدي للمساهمة مدخلات متشابك الفردية إلى ارتفاعه الإخراج. تقنية المشبك دينامية يسمح الحقن المباشر للتيار في الخلية وكمية حقن الحالية في وقت معين يعتمد على غشاء المحتملة سجلت في ذلك الوقت ^1،2،3 (للمراجعة، انظر ^7،14). بل هو الشبك الحالية المعدلة انشاء حيث في الوقت الحقيقي، والتفاعل ردود فعل سريعة بين الخلية تحت تسجيل والمعدات التي تضم الأجهزة المتخصصة، والبرمجياتويتم التوصل إلى جهاز الكمبيوتر. يتم احتساب مبلغ حقن الحالي في الخلية وفقا لذلك. وبالتالي، فإن ميزة هذا الأسلوب هو أن الخلية يمكن حفز مع مجموعات مختلفة من الطول الموجي تصرف، وسوف ردها تحاكي تنشيط مستقبلات التي تتوسط المدخلات متشابك. على سبيل المثال، مقارنة الاستجابة لحقن المواصلة مثير والمثبطة لبقعة صغيرة مع الاستجابة لحقن تصرف مثير للبقعة صغيرة فقط يوفر معلومات عن تأثير تثبيط على استجابة الخلية. وبالمثل، تركيبات أخرى من المواصلة سجلت الناحية الفسيولوجية يمكن أن يشترك في حقن للكشف عن كيفية التي تعتمد على التحفيز التغييرات في المواصلة مثير و / أو المثبطة تؤثر على انتاج مسمار.

في دراستنا، يتم استخدام تقنية المشبك دينامية للتدليل على أثر السعة وتوقيت مدخلات متشابك على خصائص اطلاق النار من خلايا الشبكية العقدة النسبية. المواصلة مختلفتم الحصول عليها من التجارب الفسيولوجية في ظروف التحكم أو في وجود وكلاء الدوائية كانوا يعملون كمدخلات. وبالإضافة إلى ذلك، استخدمت المواصلة الاصطناعي على أساس وظائف ألفا أيضا من أجل التحقيق في كيفية إدماج المدخلات متشابك من قبل الخلايا العصبية. وبالتالي هذا هو أسلوب متعدد الاستعمالات التي تسمح أنواع مختلفة من تصرف ولدت إما من الناحية الفسيولوجية، ليتم حقنه دوائيا أو حسابيا في نفس الخلايا العقدية، ويمكن إجراء مقارنة ذلك من الاستجابات لهذه المدخلات.

Protocol

1. تعيين ما يصل العامة وتحضير الأنسجة

1. الحفاظ على الماوس في الظلام لمدة 30 دقيقة (تهدف إلى تقليل مستوى الإجهاد بها). في الوقت الذي تنتظر، وإعداد 1 لتر من حل خارج الخلية. أول حل 1.9 غرام من بيكربونات الصوديوم في نصف لتر من الماء ملي-Q. يتم الحفاظ على درجة الحموضة له عند 7.4 بواسطة محتدما مع 95٪ O ₂ و 5٪ CO _2. بعد خمس دقائق، ويحل 8.8 غرام من أميس متوسطة في 100 مل من الماء ملي-Q، إضافة إلى حل بيكربونات الصوديوم، وأعلى ما يصل إلى 1 L مع الماء ملي-Q وتخلط جيدا. إبقاء هذا الحل carboxygenated لبقية التجربة.
2. خذ 250 مل من carboxygenated أميس متوسطة وإعداد نظام ضخه السوائل في الكهربية انشاء. الحفاظ على حل carboxygenated.
3. بشكل موحد مسحة طبقة رقيقة من الشحوم فراغ على الجزء السفلي من غرفة نضح. ختم ذلك مع انزلاق الغطاء والتأكد من أنها غير محكمة الغلق. تأخذ كمية صغيرة من الشحوم (~ 2 مم في القطر) ووضعه على رأس وينتهي الجزء السفلي من الغرفة. وهذه الكرات عقد الشبكة (الإطار البلاتين موتر مع خيط تنظيف الأسنان) في المكان ومنعها الضغط من الصعب جدا على شبكية العين. إصلاح الدائرة على منصة ومحاذاة كلا فتحات.
4. هذا الحيوان هو أول مخدرة مع isoflurane ولمدة 2 دقيقة، ثم التضحية من قبل خلع عنق الرحم. بسرعة إزالة العيون مع زوج من مقص صغير (ريش المنحني)، ويغسل جيدا مع السائل خارج الخلية carboxygenated في كوب صغير، ثم وضع في طبق بتري مليئة بسائل خارج الخلية carboxygenated.
5. تحت المجهر تشريح، وجعل ثقب الإدراج في القرنية (~ 2 مم من الحافة) باستخدام إبرة قياس 19. تكرار للعين الأخرى. هذه خطوة مهمة يجب أن تكون سريعة لتسمح الأوكسجين في كلا الشبكية. إزالة القرنية واحد مع زوج من مقص القزحية الصغيرة عن طريق خفض مواز لحافته. المقبل، وإزالة القزحية والعدسة مع زوج من ملقط غرامة. تكرار للعين الأخرى. نقل كوب واحد العين في دورق يحتوي علىcarboxygenated حل خارج الخلية.
6. مع شفرة مشرط، وقطع كوب واحد العين في نصف، لتكون قادرة على تسطيح كل جبل والحصول على اثنين من كامل يتصاعد في شبكية العين. فصل بعناية الشبكية من الظهارة الصبغية باستخدام مسبار تشريح حادة أو عن طريق سحب بلطف تشغيله. مرة واحدة منفصلة، ​​وشبكية العين هي شفافة إلى حد ما. ملاحظة سطح محدب هو الجانب مبصرات. سطح مقعر هي خلايا العقدة الجانب وأنه قد عصا لنفسها بسبب وجود النكتة زجاجي مثبت.
7. مع زوج من ملقط غرامة، مع الاستمرار على حافة منفصلة إغلاق أنسجة الشبكية إلى مشرشر ORA والاستيلاء على مشرشر ORA مع زوج آخر من ملقط غرامة، تسحبه نحو مركز شبكية العين. هذه عملية حساسة وقد يستغرق بضعة محاولات. في حال نجاحها، تتم إزالة مشرشر ORA، الجسم الهدبي والفكاهة زجاجي من قبل هذه العملية، ويتم تقليل انحناء شبكية العين (أي تملق).
8. تقليم الحواف، ومن ثم نقلها إلى نصيبغرفة الانصهار مع خلايا العقدة مواجهة. عقد الأنسجة في المكان عن طريق وضع شبكة على الكرات الشحوم. وضع الأنسجة المتبقية مع غيرها من كأس العين للاستخدام في وقت لاحق. يتم وصف إجراءات مماثلة لتشريح الشبكية في ميدلتون وProtti ¹⁶ و Pottek وآخرون ^17.
9. تركيب غرفة تسجيل تحت المجهر تستقيم. على الفور إلى نضح المستمر لشبكية العين مع حل خارج الخلية carboxygenated (35.5 ° C) بمعدل 3-5 مل / دقيقة. تأكد من أن القطب التأريض في مكان.
10. تعلق على المجهر هو كاميرا رقمية مما يسمح التصور من الأنسجة. مجموعة كاملة حتى يجلس فوق جدول الهواء (امتصاص الصدمة) وداخل قفص فاراداي (كتل المجالات الكهربائية خارجي ثابت وغير ثابت).
11. بدوره على مصدر الضوء (الأشعة تحت الحمراء،> 850 نانومتر) ومع الهدف 40X، وجلب تركيزها على الهيئات خلية من الخلايا العقدية. العثور على المنطقة الوسطى من جبل لالجامع لRECORأقرع.
12. تذويب قارورة المجمدة من K ⁺ حل يستند إلى داخل الخلايا (300 ميكرولتر، ودرجة الحموضة = 7.4) التي تحتوي على (مم) K-غلوكونات: 140، حامض HEPES: 10، MgCl _2: 4.6، ATP-نا ^+: 4، GTP نا ⁺ : 0.4 و EGTA: 10. جميع الكواشف التي تم شراؤها من سيغما الدريخ.

2. الترقيع الهيئات خلية من خلايا الشبكية العقدة

1. النار أولا البولندية نهايات البورسليكات الشعرية أنابيب الزجاج، ثم سحب لهم مسرى مكروي بولير الزجاج مع اثنين من الخطوات التدفئة (مقاومة: 5-8 MΩ).
2. إضافة 3 ميكرولتر من صفراء لوسيفر (تركيز النهائي 0.2٪) إلى حل داخل الخلايا، وتخلط جيدا، وأجهزة الطرد المركزي عليه. المقبل، ونقل أفضل 85٪ من الحل في حقنة 1 مل، توصيله إلى 0.22 ميكرون و وحدة التر، ثم إلى 30 G إبرة تحت الجلد قابلة لإعادة الاستخدام. بردت.
3. إصلاح ماصة الزجاج، من حجم غيض مماثلة لتلك المستخدمة للتسجيلات، على حامله وتحريكه تحت المجهر باستخدام micromanipulaتور. تحت الهدف 40X، ببطء خفض ماصة حتى يجعل نقرة صغيرة على سطح الغشاء الداخلي يحد. بعناية دفع ماصة للأمام حتى أدرك كمية صغيرة من الأنسجة، ومن ثم نقله إلى أعلى و / أو جانبية المسيل للدموع ثقب صغير لفضح الهيئات خلية من الخلايا العقدية. أصغر ثقب، وارتفاع يتم الحفاظ على درجة من سلامة الشبكة الشبكية. إذا رغبت في ذلك، sulforhodamine 101 (SR101؛ 0،5-1 ميكرومتر) ويمكن أن يضاف إلى المتوسطة خارج الخلية لتسمية الخلايا العصبية التالفة باستخدام المجهر مضان ^15.
4. تملأ ماصة نظيفة مع 8-10 ميكرولتر من الحل داخل الخلايا. أدخله في حامل يعلق في مرحلة رئيس مكبر للصوت، وتأكد من أن تغمر المكلورة الفضة القطب كلوريد. إذا تجاهل الأوساخ و / أو فقاعات الهواء هو / هي الحاضر.
5. بدوره على جميع المعدات. استخدمنا EPC 8 التصحيح مكبر للصوت المشبك تسيطر عليها PatchMaster لتحقيق تسجيلات خلية كاملة في الجهد يخدع المشبكالتشكيل. لاحظ أن مكبرات الصوت الأخرى التي تسمح التسجيلات المشبك الحالية في وضع السرعة التي يمكن أن تستخدم أيضا. تطبيق والحفاظ على ضغط إيجابي في حل ماصة. حدد خلية مع جسم خلية كبيرة وذلك على الأرجح هو الخلايا العقدية بدلا من خلية عديم الاستطالات المشردين أو خلية الدبقية. انخفاض ببطء غيض ماصة لذلك هو جعل نقرة صغيرة على سطح الغشاء، ووقف، والافراج عن الضغط. على الفور إلى انخفاض احتمال عقد ل- 60 بالسيارات. حالما يتم التوصل إلى gigaseal (GΩ) بينهما، وتمتص بلطف لكسر الغشاء لتحقيق خلية كاملة التكوين المشبك التصحيح. هذا الإجراء هو خطوة حساسة، إذا تم تطبيق الكثير من الضغوط السلبية، ثم يصبح اتصال راشح، وإذا كان قليلا جدا، لا يزال الغشاء سليمة.
6. بمرور الوقت، سوف وسيفر صفراء ملء الخلية، مما يسمح التصور من التشكل الخلية. إذا مستقرة، وهذا ينبغي أن مجموعة المتابعة تستمر 30 دقيقة أو أكثر.

3. تسجيلات من خلايا العقدة عن طريق Dynamiج المشبك

1. الأول، وهو اختبار الجهد الحالي (من - 75 إلى + 35 بالسيارات كل 10 بالسيارات) يتم تنفيذه باستخدام PatchMaster. الشروع في الاختبارات في وقت لاحق إلا إذا كان نا كبيرة ⁺ الحالي (> 1 نا) موجود. لاحظ أنه في مناسبة نادرة حيث يتم مصححة خلية عديم الاستطالات المشردين، في هذه الحالة، لن تستجيب مع القطارات من إمكانات العمل لحقن الحالية اللاحقة.
2. فتح ابفيف وتنفيذ برنامج مخصص Neuroakuma مكتوبة، ثم تحميل مختلف الطول الموجي تصرف. تعيين عدد تكرار إلى 8 (6-8 لأغراض الإحصائية). تعيين إمكانات عكس المواصلة مثير والمثبطة في 0 و - 75 على التوالي بالسيارات. حدد زوج واحد من المواصلة مطابقة مثير والمثبطة للاختبار. وسوف تتبع تصرف مثير (باللون الأخضر) وتتبع تصرف المثبطة (باللون الأحمر) تظهر في اللوحة السفلى.
3. العودة إلى PatchMaster، اختر وضع الشبك الحالية، والتبديل على الفور إلى وضع مكبر للصوت الشبك الحالية 'CC + بالاتصالات FAST'. هذا الوضع يسمح لجنة التنسيق الإداريةurately متابعة التغيرات السريعة في غشاء المحتملة. إذا تم الحفاظ على ختم جيدة بين الغشاء وماصة، والقليل / ليس هناك حاجة إلى التعويض، وإلا سوف لن تستمر طويلا تسجيل. في Neuroakuma، اضغط على الزر "السجل". سوف استجابة الخلوية (عادة مع انفجار طوري من إمكانات العمل، الشكل 1A) تظهر على اللوحة العليا. حقن الحالي في الخلية مع زيادة انخفاض المواصلة الأولى، إذا كان قليلا / لوحظ أي رد، زيادة بزيادات صغيرة حتى أنها تنتج رد فعل قوي. الحقن الحالية المفرطة يمكن أن تقتل الخلية. يتم الانتهاء من الاختبارات مرة واحدة، حدد زوج جديد من الطول الموجي تصرف، كرر ما سبق لجميع أزواج من المواصلة الفسيولوجية والاصطناعية. وتستند التيارات الفسيولوجية (I) حقن في الوقت الحقيقي على:
   I (ر) = G _{غير شامل} (ر) × (V _م (ر) - V _{مريض بالحب)} + G _INH (ر) × (V _م (ر) - V _INH)

تصرف (G في NS) يمكن أن يكون SYnaptic أو اصطناعية. تم جمع مثير والمثبطة الطول الموجي تصرف متشابك من التجارب السابقة التي يؤديها Protti، دي ماركو، وهوانغ، Vonhoff، نجوين وسليمان (نتائج غير منشورة) في استجابة للمؤثرات بصرية مختلفة في ظروف السيطرة وبحضور سم الأسماك الرباعية الأسنان (TTX، 1 ميكرومتر) . وعلى غرار الطول الموجي تصرف الاصطناعي باستخدام وظيفة ألفا. V _م (في السيارات) هو غشاء المحتملة المسجلة. G _{مريض بالحب} وG _INH تمثل المواصلة مثير والمثبطة على التوالي في حين V _{مريض بالحب} وV _INH تمثل إمكانات عكس المواصلة مثير والمثبطة على التوالي. الوقت هو ر في مرض التصلب العصبي المتعدد. معدل أخذ العينات هو 40 كيلو هرتز.
I _S = I ₀ (T / α) ^E-αt

المعادلة المذكورة أعلاه هي وظيفة ألفا (I = ₀ الحد الأقصى الحالي؛ 1 / α = وقت الذروة إلى (ثانية ^-1) للتيار). الوقت الارتفاع والوقت اضمحلال متشابكتمليه الحالية α ^4. كان تصرف مثير دون تغيير في حين أن الكمون للتصرف المثبطة تعديل، والحد من التأخير النسبي لبداية الإثارة (الشكل 2D).

4. بعد التسجيل، وسحب بعناية ماصة وبالتالي فإن خلايا الجسم يبقى سليما. إصلاح فورا الأنسجة في بارافورمالدهيد 4٪ لمدة 30 دقيقة، تليها ثلاث غسلات 10 دقيقة مع 0.1 M من العازلة الفوسفات. بردت وأداء الأجسام المضادة تلطيخ اليوم أو خلال الأسبوع التالي.

4. تلوين الأجسام المضادة ضد لوسيفر الأصفر شغل خلايا الشبكية العقدة

1. تلوين الأجسام المضادة ضد لوسيفر صفراء خلايا العقدة شغلها في درجة حرارة الغرفة (الابتدائي المضادة للوسيفر صفراء أرنب مفتش (التخفيف = 1:10،000) لمدة خمسة أيام؛ في اليوم السادس، وتلطيخ بين عشية وضحاها مع الثانوية الماعز المضادة للأرنب مفتش (= التخفيف 1:500 )). الرطب تركيب شبكية العين في نيون وسائل الإعلام المحافظة. زلة تغطية وختم مع مسمار عolish.
2. التقاط صور مبائر من مورفولوجية الخلية باستخدام لايكا المواصفات-II متحد البؤر المجهر (الشكل 1B). وجود اكسون يسمح للتأكيد من الخلايا العقدية.

Results

وتتجلى مساهمة مصادر مختلفة من المدخلات المثبطة لاستجابات الخلايا العقدية من خلال تطبيق مختلف الطول الموجي تصرف. وقد تم الحصول على هذه الموجات مع المثيرات من الإنارة مختلفة في الظروف العادية وبحضور TTX، وهو الجهد بوابات نا ⁺ قناة مانع يمنع عمل جيل محتمل فقط في مجموعة فرعية من interneurons الشبكية المثبطة. الشكل 2A يدل على الاستجابة ممثل لحقن سجلت مثير والمثبطة الطول الموجي تصرف ردا على التحفيز مع بقعة سوداء صغيرة على خلفية رمادية في الظروف العادية. عندما...

Discussion

هنا نقدم لك مجموعة من استخدام المشبك دينامية لتقييم تأثير هذه النسبة، وتوقيت قريب من الإثارة وتثبيط على الشبكية الناتج الخلايا العقدية. المشبك دينامية يجعل من استخدام المحاكاة الحاسوبية لإدخال المواصلة متشابك المسجلة من الناحية الفسيولوجية أو اصطناعية في الخلايا العصبية الحية. توفر هذه المنهجية أداة تفاعلية التي المواصلة يمكن تعديل وحقنها في الخلايا العصبية لحساب تأثيرها على الاستجابات العصبية. الطول الموجي تصرف يمكن الحصول عليها من التجارب التي تستخدم مؤثرات بصرية لتنشيط خلايا مس...

Materials

reagent< / strong>
Isoflurane استنشاق التخدير	Pharmachem
Ames Medium مع L-Glutamate (مسحوق)	Sigma-Aldrich
Potassium Gluconate ، ملح	الصوديوم Sigma-Aldrich
	Sigma-Aldrich
محلول كلوريد المغنيسيوم ( 4.9 مول / لتر)	سيجما ألدريتش
أدينوزين 5'-ثلاثي الفوسفات (ATP) هيدرات ملح ثنائي الصوديوم	سيجما ألدريتش
جوانوزين 5'-ثلاثي فوسفات ملح الصوديوم هيدرات	سيجما ألدريتش
إيثيلين جلايكول بيس (2-أمين &# 8211 ؛ ثيليثير) - <م > N ، N ، N ، N < / EM > - حمض التتراأسيتيك	مسحوق سيجما ألدريتش
بارافورمالدهيد ، 95٪	سيجما ألدريتش
مضاد لوسيفر أصفر ، جزء IgG للأرانب (3 مجم / مل)	إنفيتروجين
أليكسا فلور 594 الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) 2 مجم / مل	Invitrogen
الفلورسنت الحافظ على وسائل	الإعلام BioFX شركة المختبرات
<قوي> المعدات < / قوي >
زجاجية شعرية بنهايات مصقولة باللهب (OD = 1.50 مم ، المعرف = 0.86 مم ، الطول = 15 سم) Warner	Instruments	64-0794
زجاج أحادي المرحلة Micr & # 8211 ؛ lectrode مجتذب	Narishinge اليابان	نموذج PP-830
Minipuls 2	Gilson
Millex-GV 0.22 & m F< / em>ilter Unit	Millipore Corporation	SLGV004SL
Luer Lock إبرة تحت الجلد قابلة لإعادة الاستخدام: 30 G	Smith Nephew (أستراليا)
سخان حل مضمن واحد	Warner Instruments	نموذج SH-27B
جهاز تحكم في درجة الحرارة الأوتوماتيكي	المزدوج Warner Instruments	TC-344B
أوليمبوس مجهر مجسم SZ61	أوليمبوس شركة
أوليمبوس المجهر BX50WI: مع هدف 40X	شركة أوليمبوس
0-30 فولت 2.5 أمبير تيار مستمر امدادات الطاقة	ديك سميث للإلكترونيات	Q1770
كاميرا مجهرية رقمية ProgResMF بارد	Jenoptik
Micromanipulator MP-225	Sutter Instrument Company
Patch Clamp مكبر للصوت EPC 8	الحصول على البيانات HEKA Elektronik
InstruTECH LIH 8 + 8	HEKA Elektronik
الكمبيوتر: DELL	Dell Corporation