Method Article

جهاز الاستشعار البيولوجي للكشف عن المضادات الحيوية البكتيريا العنقودية الذهبية المقاومة لل

DOI:

10.3791/50474

⸱

May 8th, 2013

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anatomy, Physiology and Pharmacology, College of Veterinary Medicine, Auburn University , 2Clinical Research Laboratory, 81st Medical Group, Keesler Air Force Base

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجهزة الاستشعار فج التحللي والخرز الضد قادرون على التمييز بين ميثيسيلين مقاومة (MRSA) وبكتيريا المكورات العنقودية الحساسة. وقد ثبتوا على فاجات بطريقة انجميور-بلودجيت في الصعود إلى سطح الكوارتز الكريستال استشعار توازن دقيق وعملت تحقيقات المكورات نطاق واسع. الخرز الضد الاعتراف MRSA.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A البكتيريا التحللي حولت هيكليا وجود مجموعة واسعة من المضيف سلالات المكورات العنقودية الذهبية وبروتين البنسلين ملزم (PBP 2A) وقد تم استخدام الأجسام المضادة حبات اللاتكس مترافق لإنشاء جهاز الاستشعار البيولوجي المصممة للتمييز من ميثيسيلين مقاومة (MRSA) وحساس (MSSA) S . أنواع المكورات 1،2. وقد تم تحويل فاجات التحللي في الأجسام الشبه الكروية فج عن طريق الاتصال مع واجهة كلوروفورم المياه. تم نقل فج الطبقات الوحيدة كروي على سطح جهاز الاستشعار البيولوجي بواسطة انجميور-بلودجيت (LB) تقنية 3. وقد تم فحص أجهزة الاستشعار التي تم إنشاؤها بواسطة توازن دقيق الكريستال الكوارتز مع تتبع تبديد (QCM-D) لتقييم التفاعلات البكتيريا فج. أدت التفاعلات البكتيريا كروي إلى انخفاض تردد صدى وارتفاع في الطاقة تبديد لكل من هذه الجرثومة وسلالات MSSA. بعد الربط البكتيرية، وقد تم كشف أكثر هذه المجسات إلى الأجسام المضادة بروتين البنسلين ملزم اللاتكس حبةق. استجابت أجهزة الاستشعار تحليلها مع هذه الجرثومة إلى PBP الخرز الضد 2A، على الرغم من أجهزة الاستشعار تفقد مع MSSA أعطى أي رد. هذا التمييز التجريبية يحدد على التمييز بين لا لبس فيها ميثيسيلين مقاومة وS. الحساسة سلالات المكورات. ملزمة على قدم المساواة والبكتيريا غير منضم قمع نمو البكتيريا على الأسطح ومعلقات في المياه. مرة واحدة يتم تغيير فاجات التحللي في الأجسام الشبه الكروية، فإنها تحتفظ نشاطهم التحللي قوية وإظهار عالية القدرة على التقاط البكتيرية. ويمكن استخدام الأجسام الشبه الكروية فج فج وللاختبار وتعقيم من الكائنات الحية الدقيقة المقاومة للمضادات الحيوية. ويمكن أن تشمل التطبيقات الأخرى استخدامها في علاج البكتيريا والأسطح المضادة للميكروبات.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد اقترحت ميثيسيلين سلالات مقاومة المكورات العنقودية الذهبية كعامل أساسي في العدوى وتفشي المستشفيات 4-8. الطرق الشائعة للاعتراف مقاومة المكورات، مثل القرص نشر أوكساسيلين أجار اختبار الشاشة، أو microdilution مرق، تعتمد على الظروف والثقافة مصممة لتعزيز التعبير عن المقاومة. وتشمل التعديلات الاستفادة من أوكساسيلين، الحضانة عند 30 أو 35 درجة مئوية بدلا من 37 درجة مئوية، وإدراج كلوريد الصوديوم إلى متوسطة النمو. وعلاوة على ذلك، للكشف عن الصحيح من خلال هذه الأنواع من التقنيات، وهي فترة حضانة طويلة من 24 ساعة بدلا من 16 إلى 18 ساعة هو مطلوب. تقنيات السريع مع المناسبة مستوى (> 96٪) من حساسية لتحديد مقاومة المكورات تشمل تقنيات microdilution الآلي مثل فيتيك GPS-SA بطاقة، ونظام العنقوديات ATB السريع، ونظام لوحة Microscan السريع التي تنتج النتائج بعد 3-11 ساعة 9-11. كريستال M نظام ID RSA هي طريقة سريعة استنادا إلى الاعتراف نمو S. الذهبية في وجود كلوريد الصوديوم 2٪ و 4 ملغ من أوكساسيلين لكل لتر مع جهاز استشعار حساسة للأكسجين مضان. الحساسيات ادعى تتراوح بين 91-100٪ بعد 4 ساعات من الحضانة 12-14. وهذه الأساليب المظهري محدودة في دقة من خلال تأثير السلالات السائدة التي تعبر عن المقاومة غير المتجانسة. ولذلك، فإن أفضل أساليب مقبولة على نطاق واسع للاعتراف مقاومة المكورات هو PCR أو تهجين الحمض النووي للجين MECA 15. ولكن هذا الأسلوب يتطلب تنقية الحمض النووي وغير حساسة للغاية لالخلطات المختلفة (الشوائب)، والتي تشمل خلية الحطام 16.

وعلاوة على ذلك، هذه التقنيات تحتاج وقتا طويلا لتنفيذها. ويمكن استخدام استراتيجيات للاعتراف للمنتج الجين MECA، البروتين PBP 2A، لتحديد المقاومة، وربما تكون أكثر موثوقية مقارنة مع تقنيات اختبار مستوى 17.

ق = "jove_content"> قد أظهرت في وقت سابق أن البكتيريا 12600 يمكن أن تستخدم بمثابة مسبار تقديرا لسلالات المكورات العنقودية الذهبية المقاومة بما فيها الدول التي ميثيسيلين 1،2،18. في هذا العمل اقترحنا تقنية جديدة في الاعتراف محددة والكشف عن الجرثومة، مثل الاعتراف من البكتيريا جنبا إلى جنب مع التشكل من هذه الجرثومة في الوقت الحقيقي. لهذا الغرض محدد S. البكتيريا العنقودية الذهبية مع طائفة واسعة من المضيفين (بما في ذلك سلالات MRSA) جنبا إلى جنب مع الأضداد وحيدة النسيلة ضد بروتين (PBP 2A) وقد استخدمت. PBP 2A هو بروتين جدار الخلية وهذا هو سبب المقاومة للمضادات الحيوية MRSA من. ومع ذلك PBP الضد 2A ليس محددة لS. المكورات منذ بعض أنواع البكتيريا الأخرى لديها البروتينات ملزمة المضادات الحيوية مع تشابه تسلسل إلى PBP 2A 19،20. ونتيجة لذلك في هذا العمل، S. وقد استخدمت البكتيريا العنقودية الذهبية وأجسام مضادة ضد بروتين PBP 2A. لتكون قادرة على وضع جهاز الاستشعار البيولوجي إلى specifiأتوماتيكيا كشف وتحديد MRSA جهاز مع وقد استخدمت إجراء من خطوتين. الخطوة الأولي استخدمت S. المكورات أحادي الطبقة البكتيريا باعتبارها دقق الاستشعار، في حين أن الخطوة الثانية يعمل PBP 2A أجسام مضادة محددة. ولذلك، خطوة واحدة سوف تعترف S. البكتيريا العنقودية الذهبية، وغيرها من واحد سوف تكون حساسة للبروتين مضاد حيوي ملزم. عندما الاشارات الواردة من خطوتين إيجابية، فإنه يشير إلى الكشف محددة من هذه الجرثومة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الأمر الذي يمهد الطريق

  1. الحصول على نوع السلالة S. المكورات آي تي سي سي 12600، S. المكورات آي تي سي سي 27690 والعصوية الرقيقة آي تي سي سي 6051. سلالات مقاومة للميثيسيلين من S. الذهبية - MRSA1، MRSA 2، MRSA 5، 13 MRSA، MRSA 26، MRSA 34، 45 MRSA، B. الجمرة الخبيثة ستيرن، السالمونيلا التيفية الفأرية LT2، الشيجلا الفلكسنرية، يرسينيا enterocolotica، المتقلبة الرائعة، الكلبسيلة الرئوية 13882؛ فإن الفيروس التحللي 12600.
  2. الحصول على الضد حبات اللاتكس مترافق 2A PBP.
  3. إعداد NZY المتوسطة كما هو موضح 21.
  4. الحصول على الفوسفات مخزنة محلول ملحي (PBS).
  5. تحضير الماء منزوع الأيونات كما subphase لانجميور-بلودجيت (LB) ترسب أحادي الطبقة.

2. الدعوة الجراثيم والمعايرة

  1. احتضان 5 مل من الثقافة بين عشية وضحاها من S. المكورات آي تي سي سي 12600 (3.6 × 10 8 وحدات تشكيل مستعمرة (كفو) / مل) مع 500 ميكرولتر من فج (3 × 10 9 </ sup> في PFU / مل) في 500 مل المتوسطة NZY في 2 L فلاك على شاكر، حاضنة عند 37 درجة مئوية خلال الليل.
  2. أجهزة الطرد المركزي في الثقافة 4،424 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  3. طاف إعادة طرد في 11،325 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  4. تصفية طاف من خلال 0.22 ميكرون ميليبور التصفية.
  5. أجهزة الطرد المركزي في 75395 XG الترشيح مقابل 1.5 ساعة.
  6. حل بيليه في 100 ميكرولتر من الماء المقطر.
  7. تحضير التخفيفات 10 أضعاف من تعليق فج في المتوسط ​​NZY.
  8. لوحة 1 مل من ليلة وضحاها (ON) ثقافة S. المكورات آي تي سي سي 12600 على كل من لوحات 2 مع أجار NZY للتأكد من تغطية جميع السطح. إزالة الزائدة للثقافة والسماح للسطح جاف لمدة 30 دقيقة.
  9. بقعة العينة (10 ميكرولتر) من التخفيف فج المناسبة على سطح اللوحة، واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة.
  10. دراسة تشكيل لويحات وحساب عيار فج. وتقدر التتر الجراثيم (T) على أساس عدد من عlaques (N) التي تشكلت في 10 ميكرولتر حجم (V) من التعليق فج وعامل التخفيف (F). تم حساب عيار بواسطة الصيغة: T = N / (VXF) على سبيل المثال، لعدد من لويحات 75 في التخفيف 10 -7 وحجم 10 ميكرولتر (10 × 10 -3 مل)، وعيار يساوي 75 / (10 × 10 × 10 -3 -7) = 7.5 × 10 10 وحدات تشكيل اللويحات (PFU) لكل مل من التعليق.

3. فج الذهب يجمد

  1. نظيفة قطعة من الكوارتز مطلية بالذهب (60 ملم 2) بواسطة البلازما الحفر في الأرجون لمدة 10 دقيقة ثم تعقيم لمدة 6 ساعة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية في مجلس الوزراء عقيمة.
  2. إضافة 50 ميكرولتر من 1 × 10 9 PFU / مل فج التعليق على سطح الذهب من كل قطعة في طبق بتري معقمة، ثم احتضان بين عشية وضحاها في غرفة رطبة في درجة حرارة الغرفة.
  3. إزالة وعيار تعليق فج المتبقية.
  4. غسل قطعة مع فج منضم 5 مرات مع برنامج تلفزيوني لإزالة غير منضمفج.

4. اختبار مشلول العدوى فج على سطح جاف

  1. انتشر على O / N ثقافة S. الذهبية آي تي سي سي 12600 على لوحة آغار NZY والسماح التجفيف.
  2. ضع قطعة الذهب مع فج يجمد على طبق وجهه لأسفل.
  3. مراقبة منطقة من تحلل بعد 12 ساعة حضانة في 37 ° C تشير إلى العدوى.
  4. استخدام الذهب قطعة مغطاة لا فج في تجارب السيطرة.

5. اختبار نشاط التحللي من فج الحرة وملزمة في السائل

  1. أضف ثقافة ON من S. المكورات آي تي سي سي 12600-10 مل من NZY في كل من أربعة قوارير 300 مل أسلحة شخصية (6 × 10 6 خلية / مل في كل قارورة).
  2. إضافة في اثنين من قوارير 2 × 10 6 PFU / مل من فج مجانا.
  3. استخدام الأخريين قوارير والضوابط.
  4. رصد مدار الساعة من S. تحلل الخلايا العنقودية الذهبية ل 570 دقيقة قبل قياس الكثافة الضوئية (OD 600) في 30 دقيقة فترات لجميع القوارير.
  5. أخذ قياس النهائي في 24 ساعة.
  6. كرر الخطوات من 5،1-5،5، ولكن استخدام قطعة الذهب مع فاجات المربوطة بدلا من فاجات الحرة، وقطعة ذهبية مع عدم وجود فج في قوارير السيطرة.

6. فقدان فاجات ملزمة أثناء الحضانة

  1. إضافة 50 ميكرولتر من 1 × 10 9 PFU / مل فج على سطح معقم قطعة ذهبية في طبق بتري التي يتم وضعها في غرفة رطبة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
  2. إزالة التعليق مع فج غير منضم من سطح الذهب وعيار.
  3. غسل قطعة الذهب مع فج منضم 5 مرات مع برنامج تلفزيوني ومكان في 1 مل من محلول NZY في 15 مل أنبوب في شاكر-حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 8 ساعات.
  4. تحديد عيار من فج منفصلة كما هو موضح في 2.

7. فج الأجسام الشبه الكروية التحضير

  1. الجمع بين 400 ميكرولتر من الأسهم فج 12600 تعليق (10 11 PFU / مل) مع حجم مساو من كلوروفورم الصف الطيفي في 1 مل قارورةفي درجة حرارة الغرفة.
  2. دوامة بلطف تعليق فج كلوروفورم 5-6 مرات (5 فترات ثانية) على مدى مدة دقيقة واحدة.
  3. يسمح بتعليق لتحقيق الاستقرار لمدة 30 ثانية ثم ماصة للمرحلة الأعلى التي تحتوي على وpipetted الأجسام الشبه الكروية قبالة لإعداد أحادي الطبقة.
  4. يستغرق بضع ميكرولتر لتعليق الأجسام الشبه الكروية لنقل والمجهر الإلكتروني.
  5. استخدام التعليق كروي المتبقية لتصنيع جهاز الاستشعار البيولوجي.

8. إعداد جهاز الاستشعار البيولوجي

  1. نظيفة أجهزة الاستشعار QCM-D بواسطة البلازما الحفر في الأرجون لمدة 10 دقيقة PDC-32G [هريك] نظافة البلازما.
  2. شطف مع استشعار الهكسان لإزالة أي الشوائب العضوية.
  3. إعداد وتنظيف الحوض من التوازن الفيلم كما هو موضح في 22.
  4. ملء الحوض الصغير LB مع حل subphase وتنظيفه مع حاجز الحوض الصغير وتحقيق الاستقرار في الحوض الصغير في 20 ± 0.1 ° C
  5. انتشار 300 ميكرولتر من فج 12600 في suspensi مائيعلى (10 11 PFU / مل) على subphase LB.
  6. إعداد أحادي الطبقة فج على LB حل subphase بالسماح 300 قسامة ميكرولتر من فج 12600 تعليق مائي (10 11 PFU / مل) لتشغيل أسفل قضيب زجاج قابل للبلل ميلا التي يتم المغمورة جزئيا في subphase 22،23.
  7. استقرار أحادي الطبقة المعدة لمدة 10 دقيقة، ثم ضغط عليه بمعدل 30 ملم / دقيقة (45 سم 2 / دقيقة)، حتى يتحقق الضغط المستمر 19 نيوتن / متر.
  8. إجراء ترسب الفيلم عمودي على وضع عمودي استشعار QCM-D بمعدل 4.5 مم / دقيقة عن طريق غمس تباعا استشعار داخل وخارج أحادي الطبقة سبع مرات. المجهر الإلكتروني المودعة الطبقات الوحيدة فج قبل أظهر التعرض لعينات بكتيرية أن طبقات كانت مستمرة، متجانسة، وموحدة (لا تظهر البيانات).
  9. كرر الخطوات من 4،5-4،8 مع تعليق كروي فج التي يتم إعدادها في 3.
  10. استخدام أجهزة الاستشعار فج ملفقة لكشف الجرثومة، والإلكترونالمجهري، وellipsometry.

9. اختبار جهاز الاستشعار البيولوجي والتمييز من ميثيسيلين مقاومة البكتيريا العنقودية وحساس

  1. في هذا البروتوكول، يتم إعداد أجهزة الاستشعار مع فج غير معدلة وتعديلها والأجسام الشبه الكروية فج. ويستخدم توازن دقيق الكريستال الكوارتز مع أربع غرف تدفق الاستشعار لرصد ملزم من البكتيريا إلى فج ثبتوا على سطح QCM الاستشعار. وتستخدم PBP 2A الضد حبات اللاتكس مترافق على التمييز بين ميثيسيلين مقاومة (MRSA) وبكتيريا المكورات العنقودية الحساسة. ويتم إجراء جميع القياسات في نمط التدفق (50 ميكرولتر / دقيقة) في 5 ميغاهرتز.
  2. إنشاء خط تردد صدى قاعدة من أجهزة الاستشعار QCM في الماء (~ 30 دقيقة).
  3. رسم تعليق حية المكورات العنقودية الذهبية الحساسة الخلايا البكتيرية في المياه (10 9 وت م / مل) من خلال خلية الاختبار.
  4. ترصد باستمرار التغيرات في تردد صدى أجهزة الاستشعار وتبديد الطاقة لليغلب الأول، USIنانوغرام برنامج Q-لينة.
  5. عندما وصلت التغييرات في تردد صدى أجهزة الاستشعار وتبديد مستويات التشبع، إضافة تعليق الضد حبات اللاتكس مترافق PBP (6.77 X10 10 حبات / مل) إلى تدفق خلال الرصد المستمر لتردد وتبديد.
  6. كرر الخطوات من 9،2-9،5 عن المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للخلايا البكتيرية (MRSA).
  7. تعريف تيرة التغيير من خلال كتلة التغيير بسبب البكتيريا ملزمة من قبل سوربري المعادلة 24،25 Δf =-Δm XN / C، حيث C هو حساسية كتلة ثابتة (C = 17.7 نانوغرام X سم X -2 هرتز -1 في 5 ميغاهرتز )، M هي الكتلة و n هو عدد يغلب (ن = 1).
  8. تعريف التغيير تبديد الطاقة (Δ D) من تسجيل اضمحلال الأسي من التذبذب (التردد والسعة الملطف، مما سمح الكمي من الطاقة تبدد وتخزينها خلال فترة واحدة من التذبذب،E تبدد وE المخزنة، على التوالي: Δ D = E تبدد / 2 πE المخزنة. يتم قياس Δ D في وحدات تبديد (DU)، واحدة DU = 10 -6 وحدات النسبية).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أظهرت فج النشاط التحللي ضد جميع السلالات المختبرة من S. العنقودية الذهبية، بما في ذلك سلالات MRSA، كما يتبين من اختبار بقعة فج. وتراوحت أحجام البلاك عموما 5-15 ملم. ولم يتم العثور على النشاط ضد غيرها من الثقافات اختبار (الجدول 1).

A النمو الطبيعي للS. المكورات آي تي سي سي 12600 في المتوسط ​​NZY على شاكر، حاضنة عند 37 درجة مئوية هو مبين في الشكل 1A (منحنى صفت من ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ومن المعروف جيدا أن فاجات يمكن استخدامها في تحقيقات جهاز الاستشعار البيولوجي لمسببات الأمراض البكتيرية 28. ويتجلى ذلك في هذا العمل الذي فج جنبا إلى جنب مع الأجسام المضادة 2A PBP يمكن استخدامها لحل مشكلة قديمة: تمييز سلالات مقاومة للمضادات الحيوية والحساسة السريع.

ومع ذلك فقد وجد هؤلاء فاجات المكورات العنقودية الغير معدلة العادية ليست مناسبة للكشف عن البكتيريا مع الأجهزة QCM، على الرغم من أنها تربط البك...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد العمل ذكرت هنا من المنح المقدمة من جامعة أوبورن AUDFS والسلاح الجوي الأميركي CRADA 07-277-60MDG-01. الآراء الواردة في هذا المقال هي آراء المؤلفين، ولا تعكس السياسة الرسمية أو موقف من القوات الجوية للولايات المتحدة، وزارة الدفاع، أو الحكومة الأمريكية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments المركزي

<قوي > كواشف < / قوي >
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوريP4417
كلوروفورم القياس الطيفي سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري154733(99.8٪ ACS)
Hexane-Inhydrous Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري29609-0(95٪)
Ethyl Alcohol Pharmco products Inc. Brookfield، CT64-17-5190 Proof
Equipment< / strong>
PBP 2a حبات اللاتكس المترافقة بالأجسام المضادةDenka Seiken Co.، Ltd ، طوكيو ، الياباناختبار
MRSA-ScreenS. aureus< / em> ATCC 12600 ، S. aureus< / em> ATCC 27690 و Bacillus subtilis< / em> ATCC 6051 من مجموعة ثقافة النوع الأمريكي (ماناساس ، فيرجينيا) ؛
MRSA1 ، MRSA 2 ، MRSA 5 ، MRSA 13 ، MRSA 26 ، MRSA 34 ، MRSA 45 ، B. anthracis < em > Sterne ، Salmonella typhimurium < / em > LT2 ، Shigella flexneri ، Yersinia enterocolotica ، Proteus mirabilis ، Klebsiella pneumoniae < / em > 13882 ؛ العاثية اللايتية 12600 مجموعة ثقافة جامعة أوبورن ، أوبورن ، AL
أجهزة الطرد المركزي بيكمان كولترأوبتيما L-90K أجهزة الطرد
الترا KSV 2200 رطل توازن الفيلمKSV Chemicals ، فنلندا
النظام البصري المجهر الخفيف CitoViva Technology Inc. ، أوبورن ، AL
QCM-DQ-Sense AB ، V & # 228 ؛ stra Fr &# 246; لوندا ، السويدE4
المجهر الإلكتروني الماسح (SEM)JEOL USA Inc. ، Peabody ، MAJEOL-7000F SEM
الفحص المجهري الإلكتروني الناقل (TEM)JEOL USA Inc. ، Peabody ، MAJEOL ، JEM 2010
Stericup ، شركة Millipore المعقمةمسبقا ، Billerica ، MASCGPU05RE0.22 & mu ؛ م ، طبق الفحص الحيوي الغشائي GP Express PLUS
NUNC A / S ، الدنمارك240835الأبعاد (مم) ، 245 × 245 × 25
ماصاتجيلسون ، بيبيتمان ، فرنساP100 ، P200 ، P1000
C24 حاضنة شاكرنيو برونزويك العلمية ، CTClassic C24
قطع الكوارتز المطلية بالذهبجامعة أوبورن ، أطباق
بتري محلية الصنعفيشر براند ، الولايات المتحدة الأمريكية0875713100 مم × 15 مم
SterilGard III AdvanceThe Baker Company، MESG403
Culture Growing FlasksCorning Incorporated، NY4995PYREX 250 ml قوارير Erlenmeyer
مطياف بصريGenesys 20. ثيرمو سبيكترونيك ، الولايات المتحدة الأمريكية.4001
منظف البلازماهاريك بلازما ، الولايات المتحدة الأمريكيةPDC-32G
نظام تنقية المياهMilliporeDirect-Q
Imaging EllipssometerAccurion ، الولايات المتحدة الأمريكيةnanofilm_ep3< / sup>se
برنامج Q-Sense AB ، السويدQSoft ، QTools

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guntupalli, R., Sorokulova, I., Krumnow, A., Pustovyy, O., Olsen, E., Vodyanoy, V. Real-time optical detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus using lytic phage probes. Biosens. Bioelectron. 24, 151-154 (2008).
  2. Guntupalli, R., Sorokulova, I., et al. Detection and identification of methicillin resistant and sensitive strains of Staphylococcus aureus using tandem measurements. J. Microbiol. Methods. 90, 182-191 (2012).
  3. Guntupalli, R., Sorokulova, I., Long, R., Olsen, E., Neely, W., Vodyanoy, V. Phage Langmuir monolayers and Langmuir-Blodgett films. Colloids and Surfaces, B: Biointerfaces. 82, 182-189 (2011).
  4. Barie, P. S. Antibiotic-resistant gram-positive cocci: implications for surgical practice. World. J. Surg. 22, 118-126 (1998).
  5. Byun, D. E., Kim, S. H., Shin, J. H., Suh, S. P., Ryang, D. W. Molecular epidemiologic analysis of Staphylococcus aureus isolated from clinical specimens. J. Korean Med. Sci. 12, 190-198 (1997).
  6. Duan, L., Lei, H., Huang, E., Yi, G., Fan, W. Drug resistance of Staphylococcus aureus from lower respiratory tract. Zhonghua Yiyuanganranxue Zazhi. 21, 1667-1668 (2011).
  7. Giamarellou, H., Papapetropoulou, M., Daikos, G. K. Methicillin resistant' Staphylococcus aureus infections during 1978-79: clinical and bacteriologic observations. J. Antimicrob. Chemother. 7, 649-655 (1981).
  8. Knopf, H. J. Nosocomial infections caused by multiresistant pathogens. Clinical management exemplified by multiresistant Staphylococcus aureus. Urologe A. 36, 248-254 (1997).
  9. Knapp, C. C., Ludwig, M. D., Washington, J. A. Evaluation of differential inoculum disk diffusion method and Vitek GPS-SA card for detection of oxacillin-resistant staphylococci. J. Clin. Microbiol. 32, 433-436 (1994).
  10. Struelens, M. J., Nonhoff, C., Van, D. A., Philippe Mertens, R., Serruys, E. Evaluation of rapid ATB Staph for 5-hour antimicrobial susceptibility testing of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 33, 2395-2399 (1995).
  11. Woods, G. L., LaTemple, D., Cruz, C. Evaluation of MicroScan rapid gram-positive panels for detection of oxacillin-resistant staphylococci. J. Clin. Microbiol. 32, 1058-1059 (1994).
  12. Knapp, C. C., Ludwig, M. D., Washington, J. A. Evaluation of BBL crystal MRSA ID system. J. Clin. Microbiol. 32, 2588-2589 (1994).
  13. Qadri, S. M., Ueno, Y., Imambaccus, H., Almodovar, E. Rapid detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by Crystal MRSA ID System. J. Clin. Microbiol. 32, 1830-1832 (1994).
  14. Zambardi, G., Fleurette, J., et al. European multicentre evaluation of a commercial system for identification of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 15, 747-749 (1996).
  15. Chambers, H. F. Methicillin resistance in staphylococci: molecular and biochemical basis and clinical implications. Clin. Microbiol. Rev. 10, 781-791 (1997).
  16. Brown, D. F. J., Edwards, D. I., et al. Guidelines for the laboratory diagnosis and susceptibility testing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). J. Antimicrob. Chemother. 56, 1000-1018 (2005).
  17. Gerberding, J. L., Miick, C., Liu, H. H., Chambers, H. F. Comparison of conventional susceptibility tests with direct detection of penicillin-binding protein 2a in borderline oxacillin-resistant strains of Staphylococcus aureus. Antimicrobial Agents & Chemotherapy. 35, 2574-2579 (1991).
  18. Balasubramanian, S., Sorokulova, I. B., Vodyanoy, V. J., Simonian, A. L. Lytic phage as a specific and selective probe for detection of Staphylococcus aureus-A surface plasmon resonance spectroscopic study. Biosens. Bioelectron. 22, 948-955 (2007).
  19. Popham, D. L., Young, K. D. Role of penicillin-binding proteins in bacterial cell morphogenesis. Current Opinion in Microbiology. 6, 594-599 (2003).
  20. Wei, Y., Havasy, T., McPherson, D. C., Popham, D. L. Rod shape determination by the Bacillus subtilis class B penicillin-binding proteins encoded by pbpA and pbpH. J. Bacteriol. 185, 4717-4726 (2003).
  21. Grieco, S. H. H., Lee, S., Dunbar, W. S., MacGillivray, R. T. A., Curtis, S. B. Maximizing filamentous phage yield during computer-controlled fermentation. Bioprocess and Biosystems Engineering. 32, 773-779 (2009).
  22. Olsen, E. V., Pathirana, S. T., Samoylov, A. M., Barbaree, J. M., Chin, B. A., Neely, W. C., Vodyanoy, V. Specific and selective biosensor for Salmonella and its detection in the environment. J. Microbiol. Methods. 53, 273-285 (2003).
  23. Pathirana, S. T., Barbaree, J., Chin, B. A., Hartell, M. G., Neely, W. C., Vodyanoy, V. Rapid and sensitive biosensor for Salmonella. Biosens. Bioelectron. 15, 135-141 (2000).
  24. Sauerbrey, G. The use of quartz oscillators for weighing thin layers and for microweighing. Z. Phys. 155, 206-222 (1959).
  25. Hook, F., Rodahl, M., Brzezinski, P., Kasemo, B. Energy Dissipation Kinetics for Protein and Antibody-Antigen Adsorption under Shear Oscillation on a Quartz Crystal Microbalance. Langmuir. 14, 729-734 (1998).
  26. Griffith, J., Manning, M., Dunn, K. Filamentous bacteriophage contract into hollow spherical particles upon exposure to a chloroform-water interface. Cell. 23, 747-753 (1981).
  27. Hosseinidoust, Z., Van de Ven, T. G. M., Tufenkji, N. Bacterial Capture Efficiency and Antimicrobial Activity of Phage-Functionalized Model Surfaces. Langmuir. 27, 5472-5480 (2011).
  28. Schofield, D. A., Molineux, I. J., Westwater, C. Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens. J. Vis. Exp. (53), e2740(2011).
  29. Voinova, M. V., Jonson, M., Kasemo, B. Missing mass" effect in biosensor's QCM applications. Biosens. Bioelectron. 17, 835-841 (2002).
  30. Gervals, L., Gel, M., et al. Immobilization of biotinylated bacteriophages on biosensor surfaces. Sensors and Actuators. 125, 615-621 (2007).
  31. Nanduri, V., Sorokulova, I. B., Samoylov, A. M., Simonian, A. L., Petrenko, V. A., Vodyanoy, V. Phage as a molecular recognition element in biosensors immobilized by physical adsorption. Biosens. Bioelectron. 22, 986-992 (2007).
  32. Sorokulova, I., Watt, J., et al. Natural biopolymer for preservation of microorganisms during sampling and storage. J. Microbiol. Methods. 88, 140-146 (2012).
  33. Sanders, E. R. Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods. J. Vis. Exp. (63), e3064(2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

BiosensorMRSA DetectionPhage SpheroidQCM D AnalysisLangmuir Blodgett TechniquePBP 2a AntibodyStaphylococcus AureusAntibiotic ResistanceBacterial CaptureElectron Microscopy

Related Articles