يوفر شبكية العين الفئران حديثي الولادة نموذجا الفسيولوجية تتميز كذلك من الأوعية الدموية، والذي يسمح التحقيقات عن دور الجينات المختلفة أو الأدوية التي تعدل الأوعية الدموية في في الجسم الحي السياق. تلوين مناعي لتصور بدقة الضفيرة الوعائية هي محوريا في نجاح هذه الأنواع من الدراسات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
كله جبل تلوين مناعي للشبكية الفأر حديثي الولادة المعنية بالتحقيق في الأوعية الدموية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأوعية الدموية هي عملية معقدة من جديد تشكيل الأوعية الدموية التي يحددها تنتشر الأوعية الدموية الجديدة من شبكة الأوعية الموجودة من قبل. الأوعية الدموية تلعب دورا رئيسيا ليس فقط في التطور الطبيعي للأعضاء وأنسجة، ولكن أيضا في كثير من الأمراض التي تشكل الأوعية الدموية هو dysregulated، مثل السرطان والعمى والأمراض الدماغية. في حياة الكبار، والأوعية الدموية هي هادئة عموما حتى الأوعية الدموية هو هدف هام لتطوير العقاقير الرواية في محاولة لتنظيم تشكيل السفينة الجديدة وتحديدا في المرض. من أجل فهم أفضل الأوعية الدموية، ووضع استراتيجيات ملائمة لتنظيم ذلك، يطلب من النماذج التي تعكس بدقة الخطوات البيولوجية المختلفة التي ينطوي عليها. يوفر شبكية العين حديثي الولادة الماوس نموذجا ممتازا من الأوعية الدموية بسبب الشرايين والأوردة والشعيرات الدموية تطوير لتشكيل الضفيرة الوعائية خلال الأسبوع الأول بعد الولادة. يحتوي هذا النموذج أيضا الاستفادة من وجود اثنين من ديmensional (2D) هيكل صنع تحليل بسيط مقارنة مع التشريح المعقدة 3D من شبكات الأوعية الدموية الأخرى. من خلال تحليل الشبكية الوعائية الضفيرة في أوقات مختلفة بعد الولادة، فمن الممكن لمراقبة مراحل مختلفة من الأوعية الدموية تحت المجهر. توضح هذه المقالة إجراءات واضحة لتحليل الأوعية الدموية من شبكية العين باستخدام الماوس تلطيخ الفلورسنت مع الأجسام المضادة المحددة isolectin والأوعية الدموية.
المقدمة
الأوعية الدموية هي عملية معقدة التنموية التي حددها تشكيل الأوعية الدموية الجديدة من شبكة الأوعية الموجودة مسبقا ويتم تنظيمها من قبل عدة مسارات الإشارات. وأبرز هذه هو الطريق VEGF. يتم تحريرها من قبل خلايا VEGF الدماغية ويؤدي إلى بدء عائية تنتشر في الأوعية الدموية المجاورة. الخلية البطانية الرائدة من الأوعية الدموية الجديدة تنبت هو 'غيض' الخلية، التي تنتج أرجل كاذبة خيطية التي تصل إلى نحو مصدر VEGF، وتبعتها تكاثر الخلايا البطانية "ساق". في هذه الطريقة، تنشيط الخلايا البطانية وتهاجر تتكاثر نحو المنطقة اوعائية حيث أنها تشكل أنابيب الأوعية الدموية الجديدة. من أجل تحقيق الاستقرار في هذه الأنابيب لدعم تدفق الدم، والخلايا البطانية التفاعل مع pericytes وخلايا العضلات الملساء، التي تحيط الأوعية الدموية الجديدة 1. تكوين الأوعية الدموية ضروري لالأوعية الدموية للجنين والأنسجة المتنامية. ومع ذلك، فإنه يساهم أيضا في العديد من pathologiاضطرابات كال مثل السرطان، في حين ترتبط عيوب في الأوعية الدموية مع الأمراض الدماغية. وبالتالي فإن تطوير علاجات فعالة المخدرات لتنظيم الأوعية الدموية كوسيلة لعلاج المرض هو من مصلحة كبيرة. على سبيل المثال، سوف العوامل المضادة للعائية فعالة لحد من نمو السرطان، في حين استراتيجيات الموالية للعائية يمكن أن تستخدم لعلاج الأمراض الدماغية. وهكذا، ونماذج من الأوعية الدموية ضرورية لفهم أفضل لتنظيم تشكيل سفينة جديدة وتطوير استراتيجيات علاجية جديدة لتعزيز نمو الأوعية الدموية أو نقصان.
ومن العناصر الأساسية للبحث الأوعية الدموية هو اختيار نموذج الأوعية الدموية المناسبة. وقد تم العديد من نماذج في المختبر يهدف إلى إعادة إنتاج الخطوات الأساسية لتكوين الأوعية الدموية مثل هجرة الخلايا البطانية، وانتشار وبقاء 2،3. A المستخدمة بشكل متكرر في المختبر فحص هو تشكيل شبكة متفرعة من الخلايا البطانية على مصفوفة Matrigel، على الرغم من ربلاده ليست محددة لخلايا بطانة الأوعية الدموية، كما أنها لا تتضمن عادة بدعم من pericytes أو خلايا العضلات الملساء. تقييم تنتشر الأوعية الدموية خارج الجسم باستخدام الماوس ثقافة الجهاز مثل فحص الجسم مضغي الشكل، ومقايسة حلقة الأبهر وفحص مشط القدم الجنين يسمح للتحليل من الأوعية الدموية من الخلايا البطانية في سياق خلايا داعمة إضافية. ومع ذلك، فإن القيود الرئيسية من هذه المقايسات تشمل نقص تدفق الدم والانحدار من السفن على مر الزمن، وإعطاء نافذة محدودة للتحليل. لذلك، لفهم تنظيم الأوعية الدموية على نحو أدق، في النماذج الحية مطلوبة مثل تلك التي وضعت في الماوس باستخدام الإسفنج مزروع تحت الجلد أو المقابس matrigel، وكذلك هند أطرافهم نموذج نقص التروية. ومع ذلك، فإن هذه النماذج تشكل تحديا لتحليل ويرجع ذلك إلى بنية معقدة 3D من neovessels. في المقابل، فقد ثبت أن الجنين الزرد نموذجا ممتازا لتصور الأوعية الدموية في كاملالكائن الحي 4. ومع ذلك، فإن الفأر هو متعلق تطويريا أكثر من ذلك بكثير عن كثب إلى الإنسان من الزرد، مما يجعل الماوس على النموذج المفضل في كثير من الحالات. وبالتالي تكوين الأوعية الدموية في شبكية العين الماوس بعد الولادة يمثل طريقة تتسم جيدا من خيار للأبحاث الأوعية الدموية. لأنه لا يوفر بيئة الفسيولوجية، ولكن أيضا 2D الضفيرة الوعائية التي يمكن تصور بسهولة باستخدام البقع الفلورسنت المناسب. الهندسة المعمارية للشبكة سفينة، وانتشار البطانية، تبرعم، تجنيد خلية حول الأوعية وإعادة عرض السفينة يمكن لجميع يتم التحقيق باستخدام هذه التقنية.
في شبكية العين الماوس حديثي الولادة، وتطوير الأوعية الدموية في شبكية العين يحدث في الأسبوع الأول من الحياة بعد الولادة. الفئران، على عكس البشر، ولدوا مكفوفين وشبكية العين تصبح أوعية دموية فقط بعد الولادة. تنشأ الأوعية الشبكية من وسط إغلاق الشبكية إلى العصب البصري في يوم ما بعد الولادة 0 (P0)، وتطوير من قبل الأوعية الدموية لتشكيل تنظيم للغايةد الضفيرة الوعائية التي تصل إلى محيط الشبكية بنحو P8 5. الأوعية الدموية تطوير بطريقة مميزة مع الضفيرة الشعرية متزايد تدريجيا نحو الخارج من القرص البصري نحو المحيط الخارجي لتوليد نمط بالتناوب العادية من الشرايين والأوردة مع شبكة الشعرية التدخل. يوفر الأوعية الدموية في شبكية العين وهو نموذج مثالي لدراسة الأوعية الدموية والأوعية ويمكن التعرف عليها بسهولة لأنها تنمو في ما هو في الأساس طائرة 2D، مما يجعل من السهل نسبيا لفحص الأوعية الدموية في شبكية العين في الاستعدادات مسطحة جبل 5. وتم الإبلاغ عن طريقة لعزل شبكية العين الولدان الماوس لتحليل استجابات الخلايا البطانية طرف على مدى عدة ساعات خارج الجسم 6. بدلا من ذلك، تحقيقا أكثر تفصيلا من الأوعية الدموية في شبكية العين بأكملها وعلامات الأوعية الدموية المرتبطة بها يتطلب المناعية من العينات الشبكية الثابتة في مراحل مختلفة من التنمية.
هنا نقدموصفا مفصلا لطريقة موثوقة وتقنيا على التوالي إلى الأمام التي نستخدمها لكامل تلطيخ جبل من الفئران الشبكية الوعائية الضفيرة، من قلع الأولي من العين بعد الولادة (انظر أيضا 7) من خلال بروتوكولات تلطيخ إلى التصوير النهائية تحت المجهر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتم تنفيذ جميع الخطوات في درجة حرارة الغرفة، ما لم يرد خلاف ذلك.
1. قلع والتثبيت من العيون بعد الولادة
- ضع مؤشر الفأرة قتل إنسانية الجرو على جانبها، وإزالة الجلد الذي يغطي العين مع مقص.
- استخدام مقص وملقط لاستأصل العين.
- مكان مقص تحت العين منزوعة النواة، وقطع العصب البصري والأنسجة المحيطة بها واخراج العين. نقل إلى لوحة 24 أيضا تحتوي على امتصاص العرق 4٪ (PFA) تتكون في 2X PBS في درجة حرارة الغرفة.
- تسمح كل عين لإصلاح لمدة 10 - 15 دقيقة، ثم نقل إلى 2X الباردة برنامج تلفزيوني على الجليد لمدة 5 - 10 دقيقة. فمن الأفضل لارباك enucleations والتثبيت لاحقة لضمان درجة من التثبيت تساوي لكل عين.
2. تشريح الفئران شبكية العين بعد الولادة
- عيون نقل إلى طبق بتري تحتوي على 2X PBS باستخدام ماصة باستير البلاستيك التي تم قطع لتوسيع الفتحة ومكان تحت ديسيهcting المجهر.
- إزالة أي دهون حول العين باستخدام ملقط ومقص.
- بيرس حافة القرنية مع مقص حاد وقطع حول القرنية والقزحية وتجاهل.
- إدراج ملقط بين شبكية العين والصلبة وإزالة الصلبة مع الحرص على عدم تمزق شبكية العين. ويمكن أيضا أن إزالة طبقة المشيمية، ولكن إذا كان هناك خطر من تلف في الشبكية التي تحدث خلال هذه الخطوة، يمكن أن تترك طبقة المشيمية على ما ينبغي أن لا تؤثر تأثيرا كبيرا على نوعية المناعية.
- إزالة العدسة والنكتة الزجاجي باستخدام ملقط.
- إزالة السفن hyaloids عن طريق جمع بعضهم البعض في وسط العين مع ملقط غرامة ثم سحب بسرعة بعيدا عن مركز الشبكية (بدلا من قص في قاعدة السفن الجسم الزجاجي مع مقص غرامة).
- شطف شبكية العين على شكل كوب مع برنامج تلفزيوني في طبق بيتري نظيفة.
- جعل 4-5 شقوق شعاعي التوصل إلى ما يقرب من 2/3 من دائرة نصف قطرها من شبكية العين باستخدام الربيع scissoRS لإنشاء شكل "البتلة".
- رسم قبالة PBS باستخدام ماصة باستور لشد شبكية العين، ثم قم بإزالة أي برنامج تلفزيوني الزائدة مع قطعة صغيرة من ورقة ماصة.
- ببطء ماصة البارد (-20 ° C) قطرة قطرة الميثانول على سطح شبكية العين حتى تغطيها تماما ثم الفيضانات مع الميثانول إضافية. هذا سوف يساعد على إصلاح شبكية العين وسيسهل permeabilization. سوف تتحول شبكية العين البيضاء.
- نقل إلى أنبوب مل 2 باستخدام ماصة باستير البلاستيك التي تم قطع لتوسيع الفتحة.
- ترك شبكية العين في الميثانول البارد لمدة 20 دقيقة على الأقل قبل الشروع في المناعية. من الأجسام المضادة المستخدمة هنا، لا يمكن أن تستخدم فقط VE كادهيرين بنجاح على شبكية العين الثابتة الميثانول. في هذه الحالة تحتاج إلى شبكية العين والمضي قدما على التوالي لالمناعية بعد الخطوة 9.
- إذا لزم الأمر، ويمكن تخزين شبكية العين في الميثانول عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى عدة أشهر قبل تلطيخ.
3. المناعية / تلطيخ isolectin من Vascu الشبكيةlature
- إزالة بعناية / صب قبالة الميثانول وشطف بلطف شبكية العين لفترة وجيزة في برنامج تلفزيوني (في هذه المرحلة شبكية العين لا يزال في نفس أنبوب 2 مل من الخطوة 11 أعلاه).
- إزالة برنامج تلفزيوني وتغطية شبكية العين مع 100 ميكرولتر من بيرم / كتلة الحل (PBS + 0.3٪ تريتون + 0.2٪ BSA) + 5٪ من المصل المناسب (انظر الجدول 1) ويهز بلطف لمدة 1 ساعة.
- إزالة بيرم / كتلة واحتضان شبكية العين مع لطيف تهتز بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية المحددة (انظر الجدول 1) و / أو IsolectinB4، جميع عن طريق تمييع في بيرم / كتلة استعداد.
- إزالة الأجسام المضادة / isolectin وغسل شبكية العين 4 × 10 دقيقة في برنامج تلفزيوني + 0.3٪ تريتون (PBSTX).
- في بعض الحالات، على سبيل المثال تلطيخ التالية مع IsolectinB4-Alexa488 أو الأجسام المضادة الأولية مترافق مباشرة، غير مطلوب الأجسام المضادة الثانوية، ويمكن تركيبه شبكية العين مباشرة (الخطوة 7). عندما تم استخدام الأجسام المضادة الأولية اللامقترن في الخطوة 3، ثم 100 ميكرولتر من فلور المناسبةيتم إضافة الأجسام المضادة الثانوية escent (مخفف 1/200 في PBSTX) وتترك لاحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية أو لمدة 4 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
- إزالة الأجسام المضادة الثانوية وغسل شبكية العين 4 × 15 دقيقة في 2 مل PBSTX.
- نقل شبكية العين على الشرائح باستخدام البلاستيك تتحمل واسعة باستور ماصة وإزالة الأنسجة الزائدة مع PBSTX ماصة لل. جبل شبكية العين عن طريق إضافة 50 ميكرولتر من إطالة مرس على ساترة والموقف برفق فوق الشبكية.
- نقل الشرائح إلى الثلاجة بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية، وضمان أن تكون مسطحة ومحمية من الضوء، للسماح للإطالة مرس لتعيين.
- شبكية العين صورة باستخدام مجهر متحد البؤر المجهر أو epifluorescence.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بعد تشريح الشبكية يجب أن تبدو وكأنها زهرة شقة (الشكل 1). باستخدام بروتوكول، المشار إليها أعلاه، يمكن اعتبار الخلايا البطانية باستخدام isolectin تلطيخ B4-Alexa488 ودعم خلايا العضلات الوعائية هي تصور استخدام الألغام المضادة للأكتين العضلات الملساء ألفا (الشكل 2). وجهة النظر الطاقة المنخفضة باستخدام الهدف 5X في الشكل 2 يسمح لمحة عامة عن المنظمة الأوعية الدموية في شبكية العين. أيضا، باستخدام مجموعة مختلفة من الأجسام المضادة الواردة في...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الطريقة المعروضة هنا يوفر وسيلة بسيطة وفعالة للحصول على صور من التحضيرات الملون جبل بأكمله من شبكية العين الماوس حديثي الولادة، مما يجعلها نموذجا للقياس الكمي بسهولة وذات الصلة من الناحية الفسيولوجية من الأوعية الدموية. في البداية، يمكن للعين الماوس يكون من الصعب جدا لتشريح نظرا لصغر حجم وشكل العالم، لذلك هناك حاجة لبعض الممارسات وأدوات تشريح جيد للنتائج موثوقة. تشريح عيون أعدت في تركيز 2X من برنامج تلفزيوني مهم لأن هذا يؤدي إلى كمية صغيرة من فقدان الماء من العين ويقلل من الضغط دا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل ويلكوم ترست ومؤسسة القلب البريطانية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم
الشركة
رقم فهرسي
التعليقات
أدوات العين < td colspan = "4" ><قوي>الأجسام المضادة الأولية< / قوي> البطانية
| <قوي>المواد< / قوية> | |||
| ماصات بلاستيكية 3 مل | مستلزمات المختبرات | العلمية PIP4210 | قم بإزالة الطرف بالمقص لإنشاء ألواح |
|---|---|---|---|
| BD Falcon ذات 24 بئرا ذات التجويف العريض مستلزمات | المختبرات العلمية | 353226 | |
| أطباق بتري مختارة تلفزيون 90 مم | مستلزمات المختبرات العلمية | SLS2002 | |
| شرائح الطباعة | VWR | 631-0624 | |
| أغطية 22 × 22 مم | VWR | 631-1336 | |
| ملاقط دومون # 5 | أدوات الدقة العالمية | 14095 | |
| مقص زنبركي بطول 10.5 سم ، بشفرات مستقيمة 8 مم | دقيقة | عالمية 501235 | تستخدم للاستئصال |
| مقص Vannas بطول 8.5 سم ، مع شفرات مستقيمة 7 مم ، وأطراف فائقة الدقة 0.025 × 0.015 مم | أدوات الدقة العالمية | 500086 | تستخدم لتشريح شبكية |
| مقص فاناس فائق النعومة بطول 8 سم مع شفرات مستقيمة 3 مم ، و 0.015 × 0.015 مم أطراف فائقة الدقة | 501778 | تستخدم لتشريح شبكية العين | |
| الشفافة الكريستالية &# 8217; أنابيب 2 مل | Starlab | E1420-2000 | |
| Recodes< / strong> | |||
| فوسفات الصوديوم كاشف ثنائي القاعدة | Sigma | S0876 | PBS كاشف |
| فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة | Sigma | P5655 | PBS كاشف |
| كلوريد الصوديوم | Sigma | S9625 | PBS كاشف |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | المكياج في 2x PBS وتخزينه في -20 & # 176 ؛ C |
| BSA | Sigma | A7638 | |
| Triton X-100 | Sigma | T9284 | |
| مصل الحمار | Sigma | D9663 | |
| مصل الماعز | ناقلات | S-1000 | |
| إطالة كاشف الذهب المضاد للبهتان | Invitrogen | P36930 | كاشف تصاعد |
| Isolectin GS-IB4-alexa 594 | Invitrogen | I21413 | استخدم في 1: 200 تخفيف |
| Isolectin GS-IB4-alexa 488 | Invitrogen | I21411 | استخدم عند 1: 200 تخفيف |
| مضاد ل NG2 (أرنب متعدد النسيحة) | Millipore | AB5320 | يكتشف الخلايا المحيطية |
| المضادة ل GFAP (استنساخ GA5 ، أحادي النسيلة الفأر) | Millipore | MAB360 | يكتشف الخلايا النجمية |
| المضادة للدسمين (استنساخ Y66 ، أرنب أحادي النسيلة ( | Millipore | 04-585 | يكتشف الخلايا المحيطية |
| المضادة للكولاجين IV (الأرانب متعددة النسيلة ) | Chemicon | AB756P | يكتشف الغشاء القاعدي الوعائي |
| المضاد لألفا العضلات الملساء أكتين-Cy3 (استنساخ 1A4 ، فأر أحادي النسيل) | سيجما | C6198 | يكتشف خلايا العضلات الملساء الوعائية. |
| مضاد للإنجلولين (استنساخ MJ7 / 18 ، فئران أحادية النسيرة) | BD Pharmingen | 550546 | يكتشف الخلايا البطانية |
| Anti-CD31 (استنساخ MEC13.3 ، فئران أحادية النسيرة) BD | Pharmingen | 553370 | يكتشف الخلايا البطانية |
| المضادة للفير العنيف كاديرين (استنساخ 11D4.1 ، فئران أحادية النسيل) | BD Pharmingen | 550548 | يكتشف تقاطعات الخلايا البطانية |
| Anti-Alk1 (متعدد النسيلة الماعز) | R & D Systems | AF770 | يكتشف الخلايا |
| <قوي>الأجسام المضادة الثانوية< / قوي> | |||
| الماعز المضاد للأرانب Alexa594 | Invitrogen | A11012 | يتم اقتباس جميع الأجسام المضادة الثانوية فور وصولها وتخزينها في -20 & # 176 ؛ درجة مئوية. |
| الماعز المضاد للفئران-Alexa488 | Invitrogen | A11006 | يتم نقل جميع الأجسام المضادة الثانوية فور وصولها وتخزينها في -20 &# 176 ؛ درجة مئوية. |
| الماعز المضاد للفئران-Alexa594 | Invitrogen | A11007 | يتم اقتباس جميع الأجسام المضادة الثانوية فور وصولها وتخزينها في -20 &# 176 ؛ C. |
| الماعز المضاد للفأر-Alexa488 | Invitrogen | A11029 | يتم نقل جميع الأجسام المضادة الثانوية فور وصولها وتخزينها في -20 &# 176 ؛ C. |
| الحمار المضاد للماعز Alexa594 | Invitrogen | A11058 | يتم نقل جميع الأجسام المضادة الثانوية فور وصولها وتخزينها في -20 &# 176 ؛ درجة مئوية. |
| <قوي>مجاهر < / قوي > | |||
| تشريح مجهر | Zeiss | Stemi SV6 | |
| كاميرا | Zeiss | Axiocam HRc | لتشريح المجهر |
| epifluorescent مجهر | Zeiss | Axioimager مع كاميرا Apotome | |
| كاميرا Zeiss | Axiocam HRm | للمجهر متحد البؤر Axioimager | |
| نيكون | A1R | ||
المراجع
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473 (7347), 298-307 (2011).
- Staton, C. A., et al. Current methods for assaying angiogenesis in vitro and in vivo. Int J. Exp. Pathol. 85 (5), 233-248 (2004).
- Goodwin, A. M. In vitro assays of angiogenesis for assessment of angiogenic and anti-angiogenic agents. Microvasc. Res. 74 (2-3), 172-183 (2007).
- Lawson, N. D., Weinstein, B. M. In vivo imaging of embryonic vascular development using transgenic zebrafish. Dev. Biol. 248 (2), 307-318 (2002).
- Fruttiger, M. Development of the retinal vasculature. Angiogenesis. 10 (2), 77-88 (2007).
- Sawamiphak, S., Ritter, M., Acker-Palmer, A. Preparation of retinal explant cultures to study ex vivo tip endothelial cell responses. Nat. Protoc. 5 (10), 1659-1665 (1038).
- Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping. J. Vis. Exp. (57), e3184(2011).
- Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice. Nat. Protoc. 5 (9), 1518-1534 (2010).
- Allinson, K. R., Lee, H. S., Fruttiger, M., McCarty, J., Arthur, H. M. Endothelial expression of TGFbeta type II receptor is required to maintain vascular integrity during postnatal development of the central nervous system. PLoS One. 7 (9), e39336(2012).
- Mahmoud, M., et al. Pathogenesis of arteriovenous malformations in the absence of endoglin. Circ. Res. 106 (8), 1425-1433 (2010).
- Lebrin, F., et al. Thalidomide stimulates vessel maturation and reduces epistaxis in individuals with hereditary hemorrhagic telangiectasia. Nat. Med. 16 (4), 420-428 (2010).
- Pi, L., et al. Role of connective tissue growth factor in the retinal vasculature during development and ischemia. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52 (12), 8701-8710 (2011).
- Powner, M. B., et al. Visualization of gene expression in whole mouse retina by in situ hybridization. Nat. Protoc. 7 (6), 1086-1096 (2012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
