ونحن الخطوط العريضة لطرق فعالة وسريعة العزلة / ثقافة الخلايا الدبقية الصغيرة قابلة للحياة من القشرة الدماغية حديثي الولادة والحبل الشوكي الكبار. تشريح والطلاء من الخلايا الدبقية الصغيرة القشرية يمكن إنجازه في غضون 90 دقيقة، مع موسم الحصاد دبقية اللاحقة التي تجري ~ 10 يوما بعد تشريح الأولي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الخلايا الدبقية الصغيرة زراعة من الجهاز العصبي المركزي حديثي الولادة والكبار
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا الدبقية الصغيرة هي المقيم الخلايا الشبيهة بلعم من الجهاز العصبي المركزي (CNS)، وعلى هذا النحو، لهما أدوار بالغة الأهمية في العمليات الفسيولوجية والمرضية مثل CNS نضوج في التنمية، والتصلب المتعدد، وإصابات الحبل الشوكي. ويمكن تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة وتجنيدهم للعمل بسبب الاصابة العصبية أو التحفيز، مثل تلف المحاور ينظر في مرض التصلب العصبي المتعدد أو الصدمة الدماغ الدماغية الناجمة عن السكتة الدماغية. ويعتقد أن هذه الأعضاء مناعيا من الجهاز العصبي المركزي أيضا أن يكون الأدوار في اللدونة متشابك في ظل ظروف غير مرضية. نحن توظيف بروتوكولات لزراعة الخلايا الدبقية الصغيرة من الأنسجة حديثي الولادة والكبار والتي تهدف إلى تحقيق أقصى قدر من أرقام الهواتف المحمولة قابلة للحياة مع التقليل من المتغيرات التباس، مثل وجود CNS الأخرى أنواع الخلايا والحطام خلية ثقافة. نحن نستخدم مكونات الجهاز العصبي المركزي كبير وملحوظ بسهولة (مثل القشرة، شرائح الحبل الشوكي)، مما يجعل العملية برمتها مجدية وقابلة للتكرار. استخدام الخلايا الكبارS هو البديل المناسب لاستخدام الأطفال حديثي الولادة الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ، كما درس العديد من الأمراض تؤثر في الأساس على الحبل الشوكي بعد الولادة. هذه الأنظمة الثقافة هي أيضا مفيدة لاختبار تأثير مباشرة من المركبات التي قد تمنع أو إما تعزيز التنشيط دبقية. منذ تفعيل دبقية صغيرة يمكن أن تشكل نتائج مرض في الجهاز العصبي المركزي الكبار، وهناك حاجة لفي نظم المختبر في الخلايا الدبقية الصغيرة التي حديثي الولادة والكبار يمكن تربيتها ودراستها.
المقدمة
الخلايا الدبقية الصغيرة هي الخلايا المناعية مقيم في الجهاز العصبي المركزي، تشبه بشكل وثيق الضامة الطرفية في البنية والوظيفة 1. وقد ثبت مؤخرا أن الخلايا دبقية بعد الولادة مستمدة من الأسلاف النخاعي بدائية ويتم إنشاؤها قبل اليوم الثامن من مرحلة التطور الجنيني، تقلب فكرة سابقة أن الأسلاف المكونة للدم بعد الولادة هي مصدر الخلايا الدبقية الصغيرة في الدماغ بالغ 2. أنها تلعب دورا رئيسيا في العديد من الأمراض العصبية ويمكن أن تستجيب بسرعة للعدوى أو إصابة عن طريق الإفراج عن السيتوكينات الموالية للالتهابات أو المضادة للالتهابات 3. وهكذا الخلايا الدبقية الصغيرة تشمل وحدة قائمة بذاتها في الجهاز العصبي المركزي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. تشريح (يوم 0)
- لحث على التخدير لP0-2 الجراء الفأر مع انخفاض حرارة الجسم. مسح رؤوس الجراء مع Kimwipe غارقة في الايثانول 70٪ لتطهير الأنسجة.
- إزالة الرؤوس مع زوج من مقص، وذلك باستخدام 4 الجراء في 10 سم لوحة الثقافة. وضع رؤساء في طبق بتري تحتوي العازلة الجليد الباردة هانك.
- ترسيخ رؤساء باستخدام ملقط المنحني من خلال تجويف العين وإزالة بعناية الجلد الذي يغطي الجمجمة مع microforceps مستقيم.
- إزالة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويرد مثال من خلايا دبقية يستريح والمفعلين يمكنهم في الشكل 1. تم تصور والخلايا الدبقية الصغيرة 24 ساعة بعد الطلاء (الشكل 1A) ويحمل متشعبة مورفولوجيا (يستريح). التعرض للكاشف فتيلة، عديد السكاريد الشحمي البكتيرية (LPS) يؤدي إلى إحداث تغييرات في التشكل دبقية كما تصبح الخلايا تفعيلها (1B الشكل).
ويرد مثال من عد الخلايا للتصفيح في الشكل 2. ونظرا .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخلايا الدبقية الصغيرة تعدل CNS السير العادي فضلا عن الاستجابات الالتهابية لمختلف الأمراض. وقد تورط إعادة عرض متشابك وظيفية من قبل الخلايا الدبقية الصغيرة في الحفاظ على التوازن الطبيعي للدماغ 15. خلال تتالي العصبية يشاركون في إزالة الخلايا العصبية السلف من التلفيف المسنن من الحصين 4، 16. وبالتالي، فمن الضروري وضع نظام الثقافة التي لدراسة الخلايا الدبقية الصغيرة حديثي الولادة والكبار، التي سوف تغطي رقعة واسعة من التنمية ومرحلة البلوغ، في جميع أنحاء التي لها و.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
ونود أن نشكر أعضاء المختبر Tsirka لنصائحهم وتعليقات مفيدة. وأيد هذا العمل من قبل R01NS42168 إلى المجموعة، 12PRE12060489 إلى RB، وهو NSF-3MT IGERT وتيرنر أطروحة الزمالة إلى LT، و NSF-3MT IGERT إلى JCN.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| EDTA ، 5 ملم | إنفيتروجين | 15567-028 | |
| ليدوكائين ، 60 ملم | سيجما | L-5647 | |
| تريبان بلو | سيجما | T8154 | |
| تربسين / EDTA | سيلجرو | 25-052-CI | |
| DMEM ، 1X | Cellgro | 10-017 | |
| بيروفات الصوديوم | Cellgro | 25-000-Cl | |
| كبريتات جنتاميسين | Biowittaker | 17-518Z | |
| 35 × 10 مم طبق زراعة الأنسجة | Falcon | 353001 | |
| Poly-D-Lysine ، 100 & جم / مل | مخفف 1:20 | ||
| HBSS ، 1X | Cellgro | 20-023-CV |
المراجع
- Ransohoff, R. M., Perry, V. H. Microglial Physiology: Unique Stimuli, Specialized Responses. Ann. Rev. Immunol. 27, 119-145 (2009).
- Ginhoux, F., Greter, M., Leboeuf, M., Nandi, S., See, P., Gokhan, S., Mehler, M., Conway, S., Ng, L., Stanley, E., Samokhavalov, I., Merad, M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
