نحن تصف بروتوكول العامة لفي الجسم الحي تتبع الخلية باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي في نموذج الفأر مع السابقين الخلايا المسمى الجسم الحي. يتم تضمين بروتوكول نموذجي لوضع العلامات الخلية، وتجهيز الحصول على الصور والكمي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخليوي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي يسمح تتبع الخلية الكمي من دون استخدام الأشعة المؤينة. بل هو أسلوب موسع التي يمكن تطبيقها على البشر. هنا، نحن تصف بروتوكول عام لوضع العلامات الخلية، والتصوير، ومعالجة الصور. تقنية قابلة للتطبيق على مختلف أنواع الخلايا والنماذج الحيوانية، على الرغم من هنا ونحن نركز على نموذج الفأر نموذجية لتتبع الخلايا المناعية الفئران. وصفت أهم القضايا لوضع العلامات الخلية، وهذه هي ذات الصلة لجميع الموديلات. وبالمثل، يتم سرد المعلمات التصوير الأساسية، على الرغم من أن التفاصيل سوف تختلف اعتمادا على نظام التصوير بالرنين المغناطيسي والإعداد الفردية. أخيرا، ونحن تشمل بروتوكول لمعالجة الصور الكمي. الاختلافات لهذا، وأجزاء أخرى من البروتوكول، يتم تقييمها في قسم مناقشة. استنادا إلى إجراءات تفصيلية وصفها هنا، فإن المستخدم بحاجة إلى التكيف مع بروتوكول لكل نوع محدد الخلية، والتسمية الخلية، نموذج حيواني، والإعداد والتصوير. نلاحظ أن عويمكن أيضا أن تتكيف rotocol للاستخدام البشري، طالما تم استيفاء القيود السريرية.
المقدمة
في تتبع الخلايا الحية أمر ضروري لتحسين ورصد العلاجات الخلوية 1. نظرا لطبيعتها موسع، والتصوير يوفر فرصا ممتازة لمراقبة الخلايا في الجسم الحي. التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) هو مستقل من الإشعاعات المؤينة ويسمح القرار التصوير متفوقة والجوهرية النقيض من الأنسجة اللينة. وقد تم بالفعل استخدام تتبع خلية مقرها MRI-سريريا لمتابعة الخلايا الجذعية في مرضى سرطان الجلد 2. ويتم التصوير بالرنين المغناطيسي السريرية التقليدية للخروج على 1 H النواة، موجودة في المياه المتنقلة في الأنسجة. ومن الممكن أيضا لتنفيذ التصوير بالرنين المغناطيسي على نواة نشطة أخرى، مثل C 13 و 19....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: يجب أن تتم جميع التجارب والإجراءات التي تنطوي على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية ذات الصلة وتتوافق مع رعاية الحيوان القياسية والمتطلبات الإنسانية.
1. وسم الخلية (بروتوكول قياسي مع Coincubation)
- إضافة 19 F التسمية 8 إلى البلدان النامية غير ناضجة بتركيز 4 mg/10 6 خلايا (في 2 مل متوسطة). دوامة برفق لمزج.
- احتضان الخلايا مع التسمية لمدة 3 أيام قبل النضج وحصاد البلدان النامية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
نحن هنا تظهر نتائج نموذجية للبروتوكول التي تنطوي على نقل 19 F الخلايا المسمى صاروخ موجه إلى العقدة الليمفاوية استنزاف. ويبين الشكل 2 طيف 19 F NMR من 10 6 الخلايا المسمى باستخدام مرجع TFA. تم تنفيذ الإعداد التصوير خارج كما هو موضح في البروتوكول (الشكل 3). لفي الجسم الحي التصوير، وكنا إشارة تتكون من اسطوانة مختومة من نفس التسمية المستخدمة للخلايا وضعت بين القدمين من الفأرة. وأظهرت صورة معالجتها ممثل في
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بروتوكول المذكورة هنا يصف الإجراء العام لفي الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي تتبع الخلية. على الرغم من الأسلوب شارك في الحضانة وصفها، هناك عدة بروتوكولات مختلفة لوصفها الخلايا مع 19 وكيل F. ومع ذلك، غالبا ما يتم استخدام المشاركين في الحضانة، ويمكن كذلك أن يكون الأمثل على سبيل المثال عن طريق إضافة وكلاء ترنسفكأيشن 6. سوف بروتوكول وضع العلامات الخلية الفعلية تعتمد على نوع من الخلايا. يتم وصف خطوات فقط وضع العلامات الرئيسية.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
والكتاب ليس لديهم تضارب المصالح في الكشف عنها.
شكر وتقدير
نود أن نعترف نادين هين وأرند Heerschap على مساعدتهم القيمة. وأيد هذا العمل من قبل المعهد الهولندي للطب التجديدي (NIRM، FES0908)، وبرنامج الاتحاد الأوروبي FP7 ENCITE (HEALTH-F5-2008-201842) وTargetBraIn (HEALTH-F2-2012-279017)، منحة من مؤسسة فولكس واجن ( I/83 443)، والمنظمة الهولندية للبحوث العلمية (VENI 700.10.409 وفيدي 917.76.363)، ERC (المنحة المتقدم 269019)، ومركز جامعة رادبود نيميجن الطبية (AGIKO 2008-2-4).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم
الشركة
رقم فهرسي
التعليقات
| RECODES< / strong> | |||
| PBS | Sigma-Aldrich | MFCD00131855 | |
|---|---|---|---|
| TFA | Sigma-Aldrich | 76-05-1 | |
| كيتامين (Ketavet) | Pfizer | 778-551 | |
| Xylazine (Rompun) Bayer | QN05 cm92 | ||
| Ophtosan | Produlab Pharma | 2702 | مرهم العين |
| <قوي>اسم المادة< / قوي> | |||
| ماسح التصوير بالرنين المغناطيسي | Bruker Biospec | ||
| مطياف الرنين المغناطيسي | النووي Bruker Biospec | ||
المراجع
- Srinivas, M., et al. Imaging of cellular therapies. Adv. Drug Deliv. Rev. 62, 1080-1093 (2010).
- de Vries, I. J., et al. Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy. Nat. Biotechnol.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
