في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخليوي

ملخص

نحن تصف بروتوكول العامة لفي الجسم الحي تتبع الخلية باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي في نموذج الفأر مع السابقين الخلايا المسمى الجسم الحي. يتم تضمين بروتوكول نموذجي لوضع العلامات الخلية، وتجهيز الحصول على الصور والكمي.

الملخص

في الجسم الحي ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي يسمح تتبع الخلية الكمي من دون استخدام الأشعة المؤينة. بل هو أسلوب موسع التي يمكن تطبيقها على البشر. هنا، نحن تصف بروتوكول عام لوضع العلامات الخلية، والتصوير، ومعالجة الصور. تقنية قابلة للتطبيق على مختلف أنواع الخلايا والنماذج الحيوانية، على الرغم من هنا ونحن نركز على نموذج الفأر نموذجية لتتبع الخلايا المناعية الفئران. وصفت أهم القضايا لوضع العلامات الخلية، وهذه هي ذات الصلة لجميع الموديلات. وبالمثل، يتم سرد المعلمات التصوير الأساسية، على الرغم من أن التفاصيل سوف تختلف اعتمادا على نظام التصوير بالرنين المغناطيسي والإعداد الفردية. أخيرا، ونحن تشمل بروتوكول لمعالجة الصور الكمي. الاختلافات لهذا، وأجزاء أخرى من البروتوكول، يتم تقييمها في قسم مناقشة. استنادا إلى إجراءات تفصيلية وصفها هنا، فإن المستخدم بحاجة إلى التكيف مع بروتوكول لكل نوع محدد الخلية، والتسمية الخلية، نموذج حيواني، والإعداد والتصوير. نلاحظ أن عويمكن أيضا أن تتكيف rotocol للاستخدام البشري، طالما تم استيفاء القيود السريرية.

المقدمة

في تتبع الخلايا الحية أمر ضروري لتحسين ورصد العلاجات الخلوية ^1. نظرا لطبيعتها موسع، والتصوير يوفر فرصا ممتازة لمراقبة الخلايا في الجسم الحي. التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) هو مستقل من الإشعاعات المؤينة ويسمح القرار التصوير متفوقة والجوهرية النقيض من الأنسجة اللينة. وقد تم بالفعل استخدام تتبع خلية مقرها MRI-سريريا لمتابعة الخلايا الجذعية في مرضى سرطان الجلد ^2. ويتم التصوير بالرنين المغناطيسي السريرية التقليدية للخروج على ¹ H النواة، موجودة في المياه المتنقلة في الأنسجة. ومن الممكن أيضا لتنفيذ التصوير بالرنين المغناطيسي على نواة نشطة أخرى، مثل C ¹³ و ¹⁹ و ²³ F نا. ومع ذلك، فقد تم تطبيقه فقط ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي بنجاح في الجسم الحي تتبع الخلية، حيث أنها توفر أعلى حساسية بعد ¹ H. غياب التصوير بالرنين المغناطيسي للكشف الذاتية F ¹⁹ في الأنسجة يسمح عالية الانتقائية إشارة لالكشف عن عوامل التباين الخارجية ¹⁹ F ويسمح الكمي لتركيز الفلور مباشرة من بيانات الصورة. للاطلاع على مناقشة مفصلة عن ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي، انظر ^3-5. وثمة مسألة رئيسية مع ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي هو الحاجة إلى تطوير وتحسين مناسبة تسميات الخلية ¹⁹ F، على الرغم من أن وضعت العديد من التسميات، مع وجود اتجاه نحو ⁶ كلاء المتعدد الوسائط.

ويستند البروتوكول وصفنا هنا على الدراسات التي مجموعاتنا ^7-9، بما في ذلك أول المقالات التي وصفت في الجسم الحي الكمية ¹⁹ خلية مقرها MRI-F تتبع ^10،11. وتتلخص الإجراء العام من تتبع الخلية باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي F ¹⁹ في الشكل 1. نحن تصف بروتوكول عام لوضع العلامات والتصوير من الخلايا الجذعية (DCS) باستخدام عامل المشبعة النقيض حسب الطلب ^8. بروتوكول التصوير تنطبق بصورة عامة على مختلف أنواع الخلايا، والعلامات والنماذج الحيوانية. الوينبغي اتخاذ نوع من الخلايا والحيوانات النموذج الموصوف هنا فقط كمثال، وبالتالي فإننا لا توفر تفاصيل عن العزلة الخلية ووضع العلامات، وإنما تركز على البروتوكول التصوير. وسوف يكون من الضروري إدخال تعديلات على كل تسمية، نوع من الخلايا، نموذج حيواني، والإعداد والتصوير، وهذه يمكن أن تكون موجودة في الأدب أو قد تحتاج إلى أن يكون الأمثل من قبل الباحثين. يتم تضمين بعض التعديلات المشتركة في المناقشة.

البروتوكول

ملاحظة: يجب أن تتم جميع التجارب والإجراءات التي تنطوي على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية ذات الصلة وتتوافق مع رعاية الحيوان القياسية والمتطلبات الإنسانية.

1. وسم الخلية (بروتوكول قياسي مع Coincubation)

1. إضافة ¹⁹ F التسمية ⁸ إلى البلدان النامية غير ناضجة بتركيز 4 mg/10 ⁶ خلايا (في 2 مل متوسطة). دوامة برفق لمزج.
2. احتضان الخلايا مع التسمية لمدة 3 أيام قبل النضج وحصاد البلدان النامية.
3. جمع البلدان النامية وإزالة الزائد عن طريق التسمية غسل 3X على الأقل في برنامج تلفزيوني. عد الخلايا.
4. resuspend في حجم صغير من برنامج تلفزيوني للحقن أو إجراء مزيد من التجارب.

ملاحظة: هذا البروتوكول هو ذات الصلة لهذه البلدان النامية وتسمية معينة. تم تحسين الإجراء في منشور آخر ⁸ وشملت هنا ليست سوى خطوات لإعداد نموذج لصورة، لأن التركيز من هذا البروتوكول هو على التصوير. Hسينعقد، فإن بروتوكول للعزلة، والثقافة، ووضع العلامات من نوع خلية معينة تحتاج إما أن تكون موجودة في الأدب أو الأمثل من قبل الباحث. ويرد موجز لجميع ¹⁹ F التسميات الأخرى التي استخدمت في الأدب أماكن أخرى ^6.

2. تحديد ¹⁹ F / خلية عن طريق ¹⁹ F NMR

1. وضع عدد معروف من الخلايا المسمى (عادة أكثر من 0.5 × 10 ^6، أو الرقم الذي ينتج إشارة كافية) في أنبوب NMR.
2. إضافة 10 ميكرولتر من حمض trifluoroacetic 5٪ (TFA). إذا كان تردد صدى TFA غير مناسب وذلك بسبب التداخل مع التسمية، استخدم مركب قابل للذوبان البديلة، ويفضل مع واحد ¹⁹ F الرنين.
3. وضع العينة في مطياف الرنين المغناطيسي النووي والحصول على الطيف ¹⁹ F. تأكد من أن عرض النطاق الترددي كافية لكل من TFA (المرجعية) وكيل.

ملاحظة: يجب أن تكون طويلة بما فيه الكفاية لTR وULL الاسترخاء من المرجعية والعينة يدور (حوالي 5 مرات خميس الساعة ₁ الاسترخاء من أطول T ₁ عنصر في الأنبوب، وعادة TR ~ 5-8 ثانية). بعض الطيف تتطلب D ₂ O للإشارة قفل تردد. وهناك معيار ¹⁹ F الطيف كافية. وسوف تكون هناك حاجة في المتوسط ​​أو أعلى أرقام الخلية واسعة إذا امتصاص الخلية التسمية رديئة أو إذا أرقام الخلية منخفضة. وينبغي أن تركز الطيف بين المرجعية وقمم التسمية ذات الصلة، ما لم يتم إجراء التصحيحات لحساب الإثارة جزئية.

4. حساب المناطق النسبي تحت قمم المرجعية والعينة (أو ذروة الرئيسي من العينة)، ثم حساب متوسط ​​عدد ¹⁹ F ل / خلية في العينة.

ملاحظة: يجب تكرار العملية برمتها، وبلغ متوسط ​​على نطاق واسع بما فيه الكفاية للوصول إلى دلالة إحصائية. ويمكن أيضا أن يتم ذلك باستخدام التحليل الطيفي مباشرة في الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي. However، لاحظ أن هذا الإجراء يكشف فقط من متوسط ^​​19 F التحميل لعدد كبير من الخلايا، وليس التباين بين الخلايا. التحقق من التوحيد امتصاص الخلية يتطلب وجود عنصر الفلورسنت في ¹⁹ وكيل F، بحيث يمكن تحليلها أن امتصاص الخلايا باستخدام المجهر أو التدفق الخلوي.

3. اعتبارات لتصميم التجارب - حقن الخلايا

نظرا لحساسية فقيرة نسبيا من ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخلية، نموذج حيواني حيث الخلايا وتوطين أعداد كبيرة من الضروري لنجاح التصوير في الجسم الحي. وتتراوح قيم حساسية نموذجية من 1،000-100،000 cells/voxel/1 ساعة وقت تفحص ^6، مع تحميل خلية في نطاق من 10 ¹¹ -10 ¹³ ذرات الفلور.

يجب أن يخطط لها عدد وتواتر دورات التصوير بعناية، لأن هذا يؤثر على اختيار مخدر. لاحظ أنه قد لا يكون isoflurane وsuitablه لمدة ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي إذا كان تردد ¹⁹ F صدى isoflurane وعلى مقربة من هذا المجمع التسمية المستخدمة. isoflurane وربما لا يزال مناسبة إذا كانت جلسات التصوير هي قصيرة بما فيه الكفاية لمنع تراكم كبير. وقد استخدمت العديد من التخدير البديلة في الأدب ^10،11؛ يتم تضمين مثال في البروتوكول التصوير. قد تحتاج إلى التخدير يكون الأمثل لسلالات الفئران مختلفة ونماذج المرض.

4. تصميم خارجي ¹⁹ F المرجعي

1. استخدام مرجع خارجي يحتوي على كمية معروفة من ¹⁹ F إشارة لتقدير ^12. اختيار كثافة إشارة من المرجع أن يكون مقاربا لذلك يتوقع من هذا الموضوع.

ملاحظة: عموما، فمن أبسط إذا كان مركب المرجعية هو نفس التسمية الخلية، لتتناسب مع المعلمات الاسترخاء. إذا تم استخدام تسلسل الطيفية أو متواليات دون توطين المكاني، ثم ميلانompound مع تحول كيميائية مختلفة قد تكون ضرورية.

2. تعديل وضع وحجم وشكل الإشارة عند الاقتضاء، تعتمد على المنطقة ذات الاهتمام (ROI). ملاحظة: ومن المسلم به عموما أسهل للاستخدام مع أنابيب موحدة المقطع العرضي للمرجعية.

5. التصوير وإعداد ماوس

1. تمييع المتاحة تجاريا الكيتامين وزيلازين 01:10 ت / ت مع المالحة الفسيولوجية لانتاج الحلول الأسهم من 10 ملغ الكيتامين / مل و 2 ملغ / مل زيلازين.
2. تشغيل نظام التدفئة في الماسح الضوئي (الهواء الحار عادة) لضمان ان تتحمل أن تكون دافئة قبل تصويرها الماوس.
3. حقن 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 مغ / كغ زيلازين داخل الصفاق لبدء التخدير. ملاحظة: لقد تم اختبار هذه الجرعات لCD1 (ICR) وNU-Foxn1 ^نو 8 أسابيع الفئران الذكور القديمة. سلالات أخرى قد تحتاج جرعات مختلفة قليلا، والذي ينبغي أن يكون الأمثل في تجربة منفصلة. وهذه الجرعة حفاظ على الماوس تخدير لنوبة 45 دقيقة. ملاحظة: عمق التخدير هو عادة كافية إذا يظهر أي رد فعل الحيوان لقرصة القدم.
4. مرة واحدة تخدير، ضع الحيوان في مهد الحيوانية وشل لمنع الحركة أثناء التصوير بالرنين المغناطيسي. إذا لزم الأمر، ضع مرجع خارجي بجانب الحيوان. يجب أن يكون كل من المراجع والعائد على الاستثمار (الموقع المتوقع للحقن الخلايا) في وسط لفائف. يجب أن تكون متصلا الحيوان لدرجة الحرارة والتحكم في التنفس لرصد الفسيولوجية أثناء المسح.
5. تغطية عيون الماوس مع مرهم العين عقيمة لمنع الجفاف خلال جلسات التصوير الطويلة.
6. إذا كان وقت التصوير يتجاوز 40 دقيقة، وإعداد القسطرة إضافية للحقن إضافية من الكيتامين / زيلازين قبل الحيوان قد استيقظ. موقف اثنين القسطرة تحت الجلد منفصلة مع حلول العمل من الكيتامين وزيلازين. استخدام هذا قسطرة لإعطاء الماوس على 2.5 ملغ إضافية من الكيتامين كل 20 دقيقة بعد أول دقيقة 40. إذا لزم الأمر، كذلك إطالة التخدير عن طريق الحقن من زيلازين إضافية 0.5 ملغ من خلال القسطرة، و 100 دقيقة بعد الحقن الأولي. في جميع الحالات، ينبغي ألا يتجاوز الوقت التجريبية 3 ساعة، باستثناء ربما تحت التخدير الطرفي.
7. التأكد من أن درجة حرارة الماوس مباشرة بعد الحقن الأولى والإبقاء على 37 درجة مئوية درجة حرارة الجسم. مع هذا البروتوكول، <تم الكشف عن 80٪ الأوكسجين في الدم تحت جو التنفس الهواء. لمنع الآثار الجانبية من الأوكسجين في الدم خفضت، استخدام 100٪ من الأكسجين (0.3 لتر / دقيقة). يجب السيطرة على درجة حرارة الجسم والتنفس في كافة مراحل التجربة برمتها وحتى الشفاء التام من الحيوان. نلاحظ أن معدل التنفس التلقائي تحت الكيتامين / زيلازين عالية جدا (200-250/min). مخالفات في نمط التنفس، بدلا من معدل التنفس، ويمكن أن تشير إلى أن جرعة أعلى من الضروري للحفاظ على حالة مناسبة من التخدير. سوف توقظ الماوس بشكل عفوي في غضون 20-30 دقيقة بعد عملية الشراءص آخر جرعة من مخدر.

ملاحظة: للحصول على تتبع الخلية، فمن الضروري لصورة نفس الحيوان أكثر من مرة. في هذه الحالة، ينبغي تحديد مواعيد جلسات التصوير مع مراعاة الوقت اللازم لإزالة التخدير من النظام والحيوان المبادئ التوجيهية استخدام المعهد.

6. التصوير

¹ H التعديلات والتصوير

1. وضع الحيوان داخل الماسح الضوئي بحيث العائد على الاستثمار هو في مركز التساوي باستخدام منخفضة الدقة، مسح التشريحية مع توجهات شريحة مختلفة (أ كالايزر).
2. استخدام بروتوكول الملئ العادية في ¹ H، مثل الرقائق العالمية على وحدة التخزين بأكملها داخل الملف.
3. ضبط مكاسب نبض المرجعية (RG)، أي قوة الارسال تقاس في ديسيبل ل1 ميللي ثانية هيرميت 90 ° RF نبض، وذلك باستخدام الفحص التعديل المقدمة من قبل البائع.

ملاحظة: هذا التعديلتختلف مع نوع من لفائف الترددات اللاسلكية، كما أنها ضرورية لمدة ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي منذ إشارة على ¹⁹ F التردد هو عادة منخفضة جدا لإجراء تعديلات مباشرة. نتيجة لذلك، تقديرا لRG يجب أن تكون مصنوعة من القياسات على ¹ H الإشارة. لنقل RF مع لفائف السطح، ينبغي تعديل H ¹ RG للطائرة وبالتوازي مع لفائف من خلال جزء من الفائدة، لفائف حجم متجانسة مع B ₁ البيانات الشخصية، والضبط الدقيق للتسوية هي أقل أهمية.

4. بروتوكول التالية من ¹⁹ F إشارة النبض ضبط الربح تعمل إلا إذا تم تنفيذ كل من H ¹ و ¹⁹ انتقال F RF بها مع نفسه (واحد أو ضبطها المزدوج) لفائف الترددات اللاسلكية. لمثل هذا الإعداد والتصوير، ويجب الشخصى لفائف (B ₁ حقل الإرسال) في ¹ H يكون متناسبا مع البيانات الشخصية لفائف ¹⁹ F، عندما يتم تطبيق RG ثابتة، أي ب _{1،1 H} = C * B _{1،19 F} مع دعامةortionality المستمر C.
   1. للتأكد من أن ملامح فائف متناسبة لإعداد محددة، الحصول على ¹ H ^و19 F الوجه خريطة زاوية (انظر القسم التالي على تصحيح B ₁₎ على انبوب مع تتركز بشكل كبير ¹⁹ F، مثل TFA في الماء (01:01 ت / ت) باستخدام الحقول متطابقة من رأي (FOVs)، سلفا (الشكل 3).
   2. باستخدام نفس RG، والتحقق من أن كلا من الخرائط متطابقة باستثناء عامل C. العالمية
   3. مرة واحدة يتم تحديد H ¹ RG، لاحظ هذا الرقم إلى أسفل.
5. تنفيذ التقليدية ¹ H التصوير بالرنين المغناطيسي كمرجع التشريحية للتصوير ¹⁹ F. ضبط النظام إلى ¹⁹ F تردد من علامة الخلية وإجراء مسح ¹⁹ F MR. مثالي الفحص بالرنين المغناطيسي ¹⁹ F سيكون لها نفس الحقل من رأي واختيار شريحة مثل ¹ H التصوير بالرنين المغناطيسي، على الرغم من أن عادة مع انخفاض القرار. يمكن إحياؤها الحيوان بمجرد imagiنانوغرام كاملة. ويمكن بعد ذلك أن يتم معالجة الصور من دون اتصال.
6. تحديد ¹⁹ F RG عبر العلاقة ديسيبل _19F = ديسيبل -20 _1H * تسجيل ₁₀ (C). تقدير تردد كيل ¹⁹ F في تجربة منفصلة في المختبر.

ملاحظة: في الجسم الحي، ويمكن تكرار بالضبط تختلف قليلا من تجربة إلى تجربة بسبب ظروف الملئ مختلفة. لمنع القطع الأثرية التحول الكيميائي ولذا ينبغي أن تحدد بالضبط تردد في كل تجربة بنسبة ¹⁹ F MRS، إذا كان ذلك ممكنا. ومن شأن مسح نموذجي للمنخفض جدا ¹⁹ F إشارة تكون عالمية (نبض اكتساب) التحليل الطيفي (TR = 200 ميللي ثانية، NEX = 3،000، TA = 10 دقيقة، BW = 50 كيلو هرتز). NEX، مما TA، ويمكن تخفيض بشكل كبير لارتفاع ¹⁹ F إشارة. يتم تحديد ¹⁹ F تردد وكيل من الطيف فورييه بعد التحول والتصحيح المرحلة. NEX يشير إلى عدد من الإثارات، TA هو اكتساب الوقت وBW هوعرض النطاق الترددي.

ملاحظة: معلمات التصوير نموذجي ⁹ على 11.7T/16 سم مخصص الماسح الضوئي الحيوانية هي: والتشريحية مسح ¹ H التصوير باستخدام توربو تدور الصدى (TSE) التسلسل مع TR / صدى الوقت الفعلي (TE _EFF) = 2،200 msec/42.8 ميللي ثانية، 8 أصداء في الإثارة، NEX = 2، 10 على التوالي، 1 ملم شرائح سميكة، فوف = 1.92 X 1.92 سم ^2، 128 ​​× 128 مصفوفة، أي قرار من 150 × 150 × 1،000 ميكرون ^3، TA = 1 دقيقة، BW = 50 كيلو هرتز ونظام ترميز المرحلة الخطية، بينما حصل ¹⁹ F الصور مع نفس تسلسل والهندسة مطابقة، ولكن في دقة أقل في الطائرة، وانخفاض BW (NEX = 256، 48 × 48 المصفوفة، أي القرار 400 س 400 س 1،000 ميكرون ^3، TA = 57 دقيقة، BW = 10 كيلو هرتز).

7. B ₁ التصحيح
   باستخدام لفائف RF غير متجانسة مع البيانات الشخصية ب _1، مثل لفائف السطح، يمكن أن تعوق الكمي للبيانات ¹⁹ F منذ إشارة يعتمدليس فقط على ¹⁹ F تركيز ولكن أيضا على مسافة واحدة من لفائف. الحصول على خريطة B ₁ على ¹ H القناة من أجل ¹⁹ F البيانات الصحيحة بأثر رجعي. هذا يتطلب أن ¹ H و ¹⁹ F ملامح لفائف متطابقة، باستثناء عامل التناسب C، وشريطة أن كافية ¹ H إشارة الخلفية في مناطق ¹⁹ F. ويرد بروتوكول سبيل المثال لتصحيح من ¹⁹ F تدور تسلسل صدى، وذلك باستخدام تكساس / آر إكس فائف سطح الانضباطي واحد ضبطها لكلا H ¹ F و ¹⁹ ومع النسبي B ₁ لمحات ^13.
   1. الحصول على خريطة ¹ H الوجه زاوية مع اثنين من طريقة زاوية الوجه ^14. الحصول على التدرج صدى المسح الضوئي مع طويلة جدا TR (> 3 مرات ¹ HT ₁₎ مع زاوية الوجه المقدرة فقط أقل من 90 درجة. إغلاق لفائف. الحصول على التدرج الثاني صدى المسح الضوئي مع RG = ديسيبل _1H -6، أي ضعف الوجهزاوية من مسح الأول.
   2. حساب ¹ H زاوية الوجه، α، في فوكسل (س، ص، ض) عن طريق شدة إشارة (SI) من الأولى والثانية بمسح التدرج الصدى: α (س، ص، ض) = اركوس (SI _{GE، 1} ( س، ص، ض) / 2SI _{GE، 2} (س، ص، ض)) ^14. زاوية الوجه ¹⁹ F مماثلة (باستثناء عامل 1 / C) نظرا ليتناسب B ₁ الملامح. وفقا لمبدأ فاراداي المعاملة بالمثل ^15، والتوهين من ¹⁹ F كثافة إشارة من زيادة ونقصان صدى التسلسل (α زاوية الإثارة الوجه، إعادة تركيز الوجه زاوية 2α) خلال استقبال إشارة تى تى _{آر إكس} (X، Y، Z) ~ α (س، ص ، ض) توهين بسبب الإثارة الكمال هو توري _تكساس (س، ص، ض) ~ الخطيئة ³ (α (س، ص، ض)) ^16. يتم كتابة توهين الشاملة كما توري = attRx * attTx = α * الخطيئة ³ (α) / 90 درجة. لاحظ أنه تطبيع إلى 1 في حالة مثالية زاوية 90 درجة / 180 درجة الإثارة / إعادة تركيز الوجه. ب ₁ تصحيحيتم احتساب 19 F صورة شدة إشارة SI _{19F، 19F نيوس} عبر _{SI، المراسل} (س، ص، ض) = SI _19F (س، ص، ض) / توري (س، ص، ض).
   3. من أجل مقارنة شدة إشارة من التجارب المختلفة، ووضع أنبوب مرجعية محددة مع تركيز ¹⁹ F في مجال الرؤية، وتطبيع SI _{19F، المراسل} إلى إشارة يعني في المرجع.

ملاحظة: ¹ HB أساليب أخرى ₁ / الوجه رسم الخرائط زاوية يمكن استخدامها ومختلفة تسلسل نبض ¹⁹ F تتطلب تعديلات توري _{تكساس، 19F.} فإن أي نوع من مخطط التصحيح B1 إدخال خطأ إضافية في الإجراء الكمي الخلية. إذا دقيقة الكمي الخلية هو المنطلق الرئيسي، لفائف RF مع متجانسة الشخصي B1 يمكن استخدامها للتحايل على هذا الجزء من البروتوكول.

7. معالجة الصور

1. جعل H ¹ و ¹⁹ F تراكب الصور
   1. تصدير بيانات الصورةللنهائي ¹ H و ¹⁹ F حجم الصور من الماسح الضوئي.
   2. فتح الملفات في برنامج معالجة الصور، مثل يماغيج (مجانية، NIH).
   3. تنفيذ التعديلات صورة عند الضرورة (المحاصيل، والسطوع والتباين) الحفاظ على نفس التعديلات لجميع الصور. سوف تحتاج إلى ¹⁹ F الصور عادة أن نشرا إلى دقة أعلى لمطابقة الموافق ¹ H الصور.
   4. تقديم ¹⁹ F الصور في اللون كاذبة (تحديد جدول نظرة متابعة مختلفة، ضمن القائمة "صورة" في صورة J) ثم تراكب على المقابلة ¹ H الصور من أجل توطين الإشارة.
2. ¹⁹ F الكمي
   1. تحديد ¹⁹ F الصورة (صورة الحجم) مع الخلايا ذات الصلة ومرجعية واضحة.
   2. في برنامج مثل صورة J، رسم رويس على الخلايا ذات الصلة، ومرجعية والمنطقة خارج الموضوع (الضوضاء).
   3. استخدام الأمر تحليلومن ثم قياس (أو ببساطة على Ctrl + M) لحساب متوسط ​​كثافة بكسل داخل هذه المناطق، ومنطقتهم. دعونا S (الخلايا) الرجوع إلى كثافة بكسل متوسط ​​العائد على الاستثمار في أكثر من الخلايا. تتضاعف أنه بحلول حجم (= منطقة خ شريحة سمك) لحساب إشارة المجموع.
   4. حساب SNR، على سبيل المثال باستخدام SNR الصيغة = 0.65 س S (خلايا) / σ، حيث σ هو الانحراف المعياري لكثافة بكسل في العائد على الاستثمار خارج العينة التي هي خالية من أي قطعة أثرية التحول الكيميائي (عادة في الهواء الخلفية) ^17. إذا كان SNR هو أقل من 5، تصحيحا للإشارة بسبب الضوضاء قد تكون ضرورية ويمكن القيام بها في أي مكان آخر كما هو موضح ^{11 10.}
   5. خلاف ذلك، وحساب المبلغ الإجمالي ^لل19 F مسؤولة عن إشارة في العائد على الاستثمار خلال الإشارة بضرب مجال الإشارة في شريحة من قبل شريحة سمك (لحساب حجم) من خلال تركيز ¹⁹ F في المرجع،والذي يعرف ويفترض أن تكون متجانسة.
   6. تتضاعف هذه القيمة عن طريق إشارة الكلي في العائد على الاستثمار أكثر من الخلايا، مقسوما على مجموع أكثر من إشارة مرجعية لحساب مبلغ ¹⁹ F في الخلايا.
   7. حساب عدد الخلايا بقسمة هذا العدد من القيمة لمدة ¹⁹ F / الخلية، والتي تم حسابها في القسم 2.

النتائج

نحن هنا تظهر نتائج نموذجية للبروتوكول التي تنطوي على نقل ¹⁹ F الخلايا المسمى صاروخ موجه إلى العقدة الليمفاوية استنزاف. ويبين الشكل 2 طيف ¹⁹ F NMR من 10 ⁶ الخلايا المسمى باستخدام مرجع TFA. تم تنفيذ الإعداد التصوير خارج كما هو موضح في البروتوكول (الشكل 3). لفي الجسم الحي التصوير، وكنا إشارة تتكون من اسطوانة مختومة من نفس التسمية المستخدمة للخلايا وضعت بين القدمين من الفأرة. وأظهرت صورة معالجتها ممثل في

المناقشة

بروتوكول المذكورة هنا يصف الإجراء العام لفي الجسم الحي ¹⁹ F التصوير بالرنين المغناطيسي تتبع الخلية. على الرغم من الأسلوب شارك في الحضانة وصفها، هناك عدة بروتوكولات مختلفة لوصفها الخلايا مع ¹⁹ وكيل F. ومع ذلك، غالبا ما يتم استخدام المشاركين في الحضانة، ويمكن كذلك أن يكون الأمثل على سبيل المثال عن طريق إضافة وكلاء ترنسفكأيشن ^6. سوف بروتوكول وضع العلامات الخلية الفعلية تعتمد على نوع من الخلايا. يتم وصف خطوات فقط وضع العلامات الرئيسية...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات

RECODES< / strong>
PBS	Sigma-Aldrich	MFCD00131855
TFA	Sigma-Aldrich	76-05-1
كيتامين (Ketavet)	Pfizer	778-551
Xylazine (Rompun) Bayer		QN05 cm92
Ophtosan	Produlab Pharma	2702	مرهم العين
<قوي>اسم المادة< / قوي>
ماسح التصوير بالرنين المغناطيسي	Bruker Biospec
مطياف الرنين المغناطيسي	النووي Bruker Biospec