مقالة منهجية

التساهمية تجليد BMP-2 على السطوح باستخدام نهج أحادي الطبقة تجميعها الذاتي

DOI:

10.3791/50842

⸱

أغسطس 26, 2013

 ,  , 
1Department of Biophysical Chemistry, Institute for Physical Chemistry, University of Heidelberg, 2Max Planck Institute for Intelligent Systems at Stuttgart

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن تصف طريقة لإنجاز الشلل كفاءة BMP-2 على السطوح. ويستند نهجنا على تشكيل أحادي الطبقة الذاتي تجميعها لتحقيق التساهمية ملزم من BMP-2 عبر مخلفاتها أمين الحرة. هذا الأسلوب هو أداة مفيدة لدراسة الإشارات في غشاء الخلية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتين مخلق العظام 2 (BMP-2) هو عامل النمو جزءا لا يتجزأ من المصفوفة خارج الخلية من الأنسجة والعظام. BMP-2 بمثابة الزناد من تمايز الخلايا الوسيطة في بانيات، وبالتالي تحفيز الشفاء وتكوين العظام نوفو دي. وقد أثار استخدام السريرية البشرية المؤتلف BMP-2 (rhBMP-2) بالتزامن مع السقالات الخلافات الأخيرة، استنادا إلى طريقة العرض وكمية ليتم تسليمها. بروتوكول المعروضة هنا يوفر وسيلة بسيطة وفعالة لتقديم BMP-2 للدراسات في المختبر على خلايا. ونحن تصف كيفية تشكيل أحادي الطبقة الذاتي تجميعها يتكون من رابط heterobifunctional، وتظهر الخطوة اللاحقة ملزمة للحصول على تجميد التساهمية من rhBMP-2. مع هذا النهج فمن الممكن لتحقيق العرض المستمر من BMP-2، مع المحافظة على النشاط البيولوجي من البروتين. في الواقع، فإن تجميد سطح BMP-2 يسمح التحقيقات المستهدفة من خلال منع الإعلانات غير محددةorption، مع تقليل كمية عامل النمو، وعلى الأخص، مما يعوق جامحا من على سطح الأرض. كلا الحدثين الإشارات القصيرة والطويلة الأجل والناجمة عن BMP-2 تجري عندما تتعرض الخلايا على الأسطح تقديم يجمد تساهميا rhBMP-2، مما يجعل هذا النهج مناسب لفي المختبر دراسات عن مدى استجابة الخلية لBMP-2 التحفيز.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عظم بروتين مخلق 2 (BMP-2) هو عضو عامل النمو التحويلي (TGF-β) الأسرة وبمثابة محفز للدي نوفو تكوين العظام وكذلك تنظيم العديد من الأنسجة أثناء التطور الجنيني والكبار التوازن 1-3. كل مونومر من النشطة بيولوجيا homodimeric البروتين BMP-2 يحتوي على "عقدة السيستين" عزر، والتي يتم حفظها للغاية في جميع أفضل الممارسات الإدارية 4. ستة من بقايا السيستين شكل سندات ثاني كبريتيد سبعة داخل الجزيء أن استقرار كل مونومر، في حين تشارك السيستين السابع في dimerization، تشكيل السندات الجزيئات بين اثنين من مونومرات 5،6. يحدد هذا عقدة السيستين حفظا للغاية هيكل ثلاثي الأبعاد للبروتين BMP-2 ويحدد خصائص فريدة من نوعها، مثل مقاومة ضد الحرارة، وdenaturants الحمضية درجة الحموضة 7-9. BMP-2 بربط سيرين / ثريونين كيناز مستقبلات عبر الغشاء، مما يحفز نقل الإشارة 10-12. اعتمادا على طريقة مستقبلات oligomerization، يتم تنشيط مسارات إشارات مختلفة: شلال يشير صماد مستقلة يؤدي إلى الفوسفاتيز القلوية تحريض عبر P38 إشارات، في حين أن المسار التي تعتمد على صماد تفعيلها من خلال النتائج مستقبلات الفسفرة في صماد إزفاء النووية المعقدة وتفعيل النسخ من الجينات المستهدفة محددة، مثل المانع من التمايز (هوية) 12-14.

في العظام، BMP-2 الحث على تمايز الخلايا الجذعية الوسيطة في بانيات، وبالتالي تحفيز الشفاء ودي نوفو تشكيل العظام. حاليا، أعرب recombinantly يتم تطبيق BMP-2 سريريا لتعزيز الشفاء من مواقع كسر. استراتيجية مشتركة في هندسة الأنسجة العظام هو استخدام عوامل النمو عن طريق الحقن، والتي هي أقل الغازية مقارنة مع أنظمة التسليم المحلي. ومع ذلك، فقد أظهرت الدراسات المجراة في والتطبيقات السريرية أن قصيرة العمر النصفي البيولوجي، في الموضع غير محددةالتخلف والتهميش والتخليص السريع للالمحلية BMP-2 قد يؤدي إلى العديد من المشاكل المحلية، خارج الرحم والنظامية 15. وبالتالي، للحصول على العرض الفعال، وانحباس أو تجميد BMP-2 داخل أو على مواد ضرورية للتسليم المحلي والمستدام لها في الموقع المستهدف. ويمكن تحقيق استدامة التسليم مع نهج الاستبقاء غير التساهمية، مثل فخ المادية، والامتزاز أو أيون complexation 16. ومع ذلك، فمن المعروف أن الامتزاز غير محدد من البروتينات على الأسطح يجوز النتائج في تمسخ من الجزيئات 17. لالتساهمية ملزم من عوامل النمو، وقد تم تطوير أنواع مختلفة من الدعم على مدى العقد الماضي. استخدام جزيئات ربط bifunctional التي تستهدف الأمينية أو الكربوكسيل مجموعات من البروتين على سبيل المثال، هو نوع واحد من النهج الذي لا يتطلب بالضرورة تعديل البروتين لتحقيق الشلل فيها. في الواقع، في حين أن التعديل البروتين يوفر ميزة السيطرة على التوجه البروتين،مقدمة من المجالات الصناعية، والعلامات وسلاسل الببتيد في مواقع محددة قد يغير النشاط البيولوجي من عوامل النمو 17. وبالتالي، للتحايل تمسخ بسبب التفاعل مع المواد الداعمة، السطوح يمكن بين functionalized مسبقا، على سبيل المثال، مع أحادي الطبقة الذاتي تجميعها (SAM) من جزيء ربط، تليها اقتران عامل المطلوب 18. وقد استخدمنا نهج قائم على SAM-لشل حركة تساهميا BMP-2 على سطح من خلال استهداف مخلفاتها أمين حرة وأظهرت أن بروتين يجمد يحتفظ كلا من النشاط البيولوجي القصيرة والطويلة الأجل و19. يوفر هذا البروتوكول طريقة بسيطة وفعالة لتقديم BMP-2 إلى الخلايا في المختبر لدراسات عن الآليات التي تحدث في غشاء الخلية وتنظيم الإشارات بين الخلايا المكونة للعظم مسؤولة عن إرسال الإشارات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تركيب 11-Mercaptoundecanoyl-N-hydroxysuccinimide استر (MU-NHS)

  1. إضافة قطرة قطرة محلول من 500 ملغم N-hydroxysuccinimide و 30 ملغ 4 - (dimethylamino) البيريدين في 10 مل الأسيتون (السلطة الفلسطينية) إلى 1 ز حامض 11-mercaptoundecanoic في 40 مل ثنائي كلورو ميثان (السلطة الفلسطينية) في درجة حرارة الغرفة (RT).
  2. تهدئة رد الفعل إلى 0 درجة مئوية وإضافة قطرة قطرة 1.1 ز ن، ن 'dicyclohexylcarbodiimide في 10 مل ثنائي كلورو ميثان (تحت جو من النيتروجين). الحفاظ على التفاعل في درجة حرارة منخفضة لمدة 1 ساعة ثم يقلب في RT بين عشية وضحاها.
  3. تحديد راسب وجففه تحت ضغط منخفض. تنقية المنتج من قبل فلاش اللوني مع البنزين البترول وخلات الإيثيل (سنويا) في نسبة 1:1.

2. إعداد طبقات متجانسة الذهب

  1. coverslips الزجاج نظيفة مع مناديل الدقة ويصوتن لهم لمدة 5 دقائق في محلول يحتوي على 1:1 خليط من خلات الإيثيل (السلطة الفلسطينية) والميثانول (السلطة الفلسطينية). Rinsركائز الإلكترونية مع الميثانول ويجف حالا في ظل تدفق النيتروجين.
  2. وضع ركائز نظيفة في الجهاز تفل الطلاء. إخلاء القاعة. إزالة طبقة أكسيد الكروم العلوي من الكروم الهدف الاخرق من قبل لمدة 60 ثانية. وضع العينات تحت شعاع المعادن ومعطف لهم مع طبقة الكروم 10 نانومتر، تلتها طلاء بطبقة من الذهب 40 نانومتر.

3. تجميد سطح BMP-2

  1. حل MU-NHS في N، N-dimethlyformamide (DMF) إلى تركيز النهائي من حوالي 1 ملم واحتضان ركائز الذهب في حل MU-NHS في RT لمدة 4 ساعة تحت جو النيتروجين.
  2. السطوح يصوتن في DMF لمدة 2 دقيقة، وشطف مع DMF وMeOH وتجف حالا في ظل تدفق النيتروجين.
  3. إعداد محلول المخزون من rhBMP-2 في العقيمة 4 ملم حمض الهيدروكلوريك بتركيز 100 ميكروغرام / مل (مأخوذة تخزينها في -80 درجة مئوية). لالتخفيفات العمل (3.5 ميكروغرام / مل)، وتمييع الحل الأسهم في برنامج تلفزيوني / كلوريد الصوديوم (PBS تحتوي على 1 M كلوريد الصوديوم) وdjust لدرجة الحموضة 8.5 مباشرة قبل الاستعمال.
  4. احتضان السطوح بين functionalized MU-NHS في حل العاملة rhBMP-2 في 4 درجات مئوية خلال الليل. إزالة طاف الحضانة. السطوح يصوتن في برنامج تلفزيوني / كلوريد الصوديوم لمدة 2 دقيقة ويغسل 3X مع برنامج تلفزيوني العقيمة / كلوريد الصوديوم.

4. توصيف السطح

  1. لمنع امتصاص غير محدد من الأجسام المضادة، واحتضان الأسطح مع BSA 5٪ (ث / ت) في حل برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة على RT، تليها الحضانة مع الأضداد المضادة للBMP-2 (1:100 في 1٪ (ث / ت ) حل BSA / PBS) لمدة 1 ساعة على RT. غسل الأسطح مرتين مع برنامج تلفزيوني ويصوتن لمدة 30 ثانية.
  2. احتضان ركائز مع الضد HRP، مترافق الثانوية (1:1،000 في 1٪ (ث / ت) حل BSA / PBS) لمدة 30 دقيقة في RT، ثم يغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني.
  3. استخدام Ampliflu الأحمر فحص لقياس HRP النشاط الأنزيمي في 570 نانومتر مع قارئ لوحة.

5. تحليل النشاط الحيوي

  1. البذور 1 × 10 5 الماوس myoblasts C2C12 لكل بئر في 6 جيدا ررآتش في النمو المتوسط، وتتألف من DMEM الجلوكوز المرتفعة التي تحتوي على البيروفات تستكمل مع FBS 10٪، 1٪ البنسلين / الستربتوميسين واحتضان لهم لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية / 5٪ CO 2.
  2. تجويع الخلايا في المصل خالية DMEM لمدة 3-5 ساعة قبل البذر على أسطح مزينة يجمد BMP-2.
  3. للتحقيق في المدى القصير يشير الاستقراء، استبدال المتوسطة بنسبة 200 ميكرولتر الطازجة DMEM المصل خالية ووضع يجمد BMP-2 فوق أسطح الخلايا. وينبغي التعامل مع السطح مع ملاقط غيض غرامة لتجنب خدش.
  4. إزالة بلطف الأسطح ونضح المتوسطة مع ماصة، وغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني. الشروع في تحليل استجابات الخلايا.
  5. لتحليل النشاط البيولوجي على المدى الطويل، وخلايا لوحة على السطوح والثقافة لهم عند 37 درجة مئوية / 5٪ CO 2 في ظروف المصل منخفضة (2٪ FBS) لمدة ستة أيام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الإعداد لدينا، وقد تم اختيار الذهب وسواغ لأنه يوفر نظام غير محددة بيولوجيا ولكن الانضباطي كيميائيا. وعلاوة على ذلك، فإن تطبيق الطبقات الوحيدة الذاتي تجميع يستلزم العديد من الفوائد: صواريخ سام كثف بعفوية عبر بهم "وجها لمجموعات" على المعادن والطبقات الوحيدة شكل مع عدد قليل من العيوب، في حين وظيفية الجماعات نهايتهم يمكن تعديلها أخرى. وبالتالي فإنها توفر منبرا لتفصيل خصائص واجهة بطريقة قابلة للتكيف للغاية بعد سيطرة 20.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا البروتوكول وصفنا إعداد الأسطح النشطة بيولوجيا بين functionalized مع rhBMP-2. ويتألف هذا النهج خطوتين: 1) التشكيل الأولي للأحادي الطبقة الذاتي تجميع (SAM) من رابط bifunctional على سطح الذهب، 2) تجميد التساهمية من البروتين rhBMP-2. في الأعمال السابقة، ونحن التحقق من صحة الربط الفعال للرابط bifunctional وعامل النمو، وأثبتت أن يجمد سطح rhBMP-2 يحافظ على النشاط البيولوجي في 19. وقد تبين أيضا أن النشاط الحيوي من عوامل النمو التي قدمت في شكل يجمد في دراسات أخرى، مشيرا إ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر الأستاذ JP شباتز (قسم كيمياء البيوفيزيائية في جامعة هايدلبرغ وإدارة المواد الجديدة والنظم البيولوجية، ومعهد ماكس بلانك للأنظمة الذكية، ومقرها شتوتغارت) لدعمه النوع. كما اعترف الدعم المالي من ماكس بلانك غزلشافت وجمعية الألمانية للبحوث (DFG SFB/TR79 لEAC-A.) إلى حد كبير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
N-hydroxysuccinimideSigma-Aldrich130672 
4- (ثنائي ميثيل أمينو) بيريدينسيجما ألدريتش522805  ؛
AcetoneAppliChemA2282 
11-حمض ميركابتونديكانويكسيجما ألدريتش674427 
ثنائي كلورميثانميرك106050 
N,N'-dicyclohexylcarbodiimideSigma-AldrichD80002 
البنزين البتروليMerck 
أغطية زجاجيةCarl RothM 875  ؛
إيثيل أسيتاتAppliChemA3550  ؛
الميثانولكارل روث4627 
N,N-dimethylformamideCarl RothT921 
rhBMP-2R & D Systems355-BMCarrier-free; معبرا عنها في E.coli
PBSPAAH15-002 
كلوريد الصوديومكارل روثHN00.2 
بولي (ثنائي ميثيل سيلوكسان) (PDMS) داوكورنينج  ؛
المطاط الصناعي سيليكون Sylgard 184Dow Corning 
المضادة rhBMP-2سيجماB9553  ؛
الماعز المضادة للفأر IgG-HRPسانتا كروزsc-2005الجسم المضاد الثانوي
Ampliflu Red AssaySigma90101 
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (1x) ، سائلGibco41966مصل بقري جنين عالي الجلوكوز
(FBS)SigmaF7524مفلتر معقم ، تم اختبار زراعة الخلايا
Pen / StrepGibco15140& nbsp ؛
التربسين 0.05٪ (1x) مع EDTA 4NaGibco25300 
جلايسين (0.1 م) ريدلدي ها & أومل ؛ n33226 
IGEPAL CA-630 (1٪)SigmaI8896Lysis Buffer (ALP assay) 19< / sup>
كلوريد المغنيسيوم (MgCl2< / sub>) (1 ملليمتر) كارلروثHNO3.2& nbsp ؛
كلوريد الزنك (ZnCl2) (1 ملم)كارل روث3533.1 
p-nitrophenylphosphate (pNPP)SigmaS0942ركيزة الفوسفاتيز
السلسلة الثقيلة المضادة للميسين (MHC)الدراسات التنموية بنك الورم الهجين ، جامعة أيواMF20الجسم المضاد أحادي النسيلة
Alexa Fluor 488 الماعز المضاد للفأر IgGInvitrogenA11001  ؛
DAPISigmaD9542 
Equipment< / strong>
Ultrsonic (Sonorex Super RK 102H) ، التردد 35 كيلو هرتزBANDELIN electronic GmbH Co. KG  ؛
MED 020 نظام الطلاءبال تيك AGظروف الطلاء
Cr: 120 مللي أمبير ، 1.3 × 10 -2< / sup> ملي بار ، 30 ثانية
Au: 60 مللي أمبير ، 5.0 × 10 < سوب > -2 < / سوب> ملي بار ، 45 ثانية
قارئ لوحة Tecan Infinite M200Tecan  ؛
مجموعة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Helm, G., Andersson, D., et al. Summary statement: Bone morphogenetic proteins: Basic science. Spine. 27 (16S), S9(2002).
  2. Hogan, B. Bone morphogenetic proteins: multifunctional regulators of vertebrate development. Genes Dev. 10 (13), 1580-1594 (1996).
  3. Reddi, A. BMPs: from bone morphogenetic proteins to body morphogenetic proteins. Cytokine Growth Factor Rev. 16, 249-250 (2005).
  4. Rengachary, S. Bone morphogenetic proteins: basic concepts. Neurosurg Focus. 13 (6), 1-6 (2002).
  5. Schlunegger, M., Grütter, M. An unusual feature revealed by the crystal structure at 2.2 Å; resolution of human transforming growth factor-β2. Nature. 358, 430-434 (1992).
  6. Scheufler, C., Sebald, W., Hülsmeyer, M. Crystal structure of human bone morphogenetic protein-2 at 2.7 Å resolution. J. Mol. Biol. 287 (1), 103-115 (1999).
  7. Nimni, M. Polypeptide growth factors: targeted delivery systems. Biomaterials. 18 (18), 1201-1225 (1997).
  8. Wozney, J., Rosen, V. Bone morphogenetic protein and bone morphogenetic protein gene family in bone formation and repair. Clin. Orthop. Related Res. 346, 26(1998).
  9. Rosen, V. BMP and BMP inhibitors in bone. Annals of the New York Academy of Sciences. 1068, 19-25 (2006).
  10. Kirsch, T., Sebald, W., Dreyer, M. K. Crystal structure of the BMP-2-BRIA ectodomain complex. Nat. Struct. Biol. 7 (6), 492-496 (2000).
  11. Keller, S., Nickel, J., et al. Molecular recognition of BMP-2 and BMP receptor IA. Nat. Struct. Mol. Biol. 11 (5), 481-488 (2004).
  12. Miyazono, K., Maeda, S., Imamura, T. BMP receptor signaling: transcriptional targets, regulation of signals, and signaling cross-talk. Cytokine Growth Factor Rev. 16 (3), 251-263 (2005).
  13. Nohe, A., Hassel, S., et al. The mode of bone morphogenetic protein (BMP) receptor oligomerization determines different BMP-2 signaling pathways. J. Biol. Chem. 277 (7), 5330-5338 (2002).
  14. Sieber, C., Kopf, J., et al. Recent advances in BMP receptor signaling. Cytokine Growth Factor Rev. 20 (5-6), 343-355 (2009).
  15. Carragee, E. J., Hurwitz, E. L., Weiner, B. K. A critical review of recombinant human bone morphogenetic protein-2 trials in spinal surgery: emerging safety concerns and lessons learned. Spine J. 11, 471-491 (2011).
  16. Luginbuehl, V., Meinel, L., et al. Localized delivery of growth factors for bone repair. Eur. J. Pharm. Biopharm. 58 (2), 197-208 (2004).
  17. Nakaji-Hirabayashi, T., Kato, K., et al. Oriented immobilization of epidermal growth factor onto culture substrates for the selective expansion of neural stem cells. Biomaterials. 28 (24), 3517-3529 (2007).
  18. Gonçalves, R., Martins, M., et al. Bioactivity of immobilized EGF on self-assembled monolayers: Optimization of the immobilization process. J. Biomed. Mater. Res. Part A. 94A. 2 (2), 576-585 (2010).
  19. Pohl, T. L. M., Boergermann, J. H., et al. Surface immobilization of bone morphogenetic protein 2 via a self-assembled monolayer formation induces cell differentiation. Acta Biomater. 8 (2), 772-780 (2012).
  20. Love, J., Estroff, L., et al. Self-assembled monolayers of thiolates on metals as a form of nanotechnology. Chem. Rev. 105 (4), 1103-1169 (2005).
  21. Katagiri, T., Yamaguchi, A., et al. Bone morphogenetic protein-2 converts the differentiation pathway of C2C12 myoblasts into the osteoblast lineage. J. Cell Biol. 127 (6), 1755-1766 (1994).
  22. Whitaker, M. J., Quirk, R. A., et al. Growth factor release from tissue engineering scaffolds. J. Pharm. Pharmacol. 53 (11), 1427-1437 (2001).
  23. Uludag, H., D'Augusta, D., et al. Implantation of recombinant human bone morphogenetic proteins with biomaterial carriers: a correlation between protein pharmacokinetics and osteoinduction in the rat ectopic model. J. Biomed. Mater. Res. 50 (2), 227-238 (2000).
  24. Kashiwagi, K., Tsuji, T., et al. Directional BMP-2 for functionalization of titanium surfaces. Biomaterials. 30 (6), 1166-1175 (2008).
  25. Karageorgiou, V., Meinel, V. L., et al. Bone morphogenetic protein-2 decorated silk fibroin films induce osteogenic differentiation of human bone marrow stromal cells. J. Biomed. Mater. Res. 71 (3), 528-573 (2004).
  26. Rose, F. R. A. J., Hou, Q., et al. Delivery systems for bone growth factors - the new players in skeletal regeneration. J. Pharm. Pharmacol. 56 (4), 415-427 (2004).
  27. Masters, K. S. Covalent growth factor immobilization strategies for tissue repair and regeneration. Macromol. Biosci. 11 (9), 1149-1163 (2011).
  28. Crouzier, T., Fourel, L., et al. Presentation of BMP-2 from a soft biopolymeric film unveils its activity on cell adhesion and migration. Adv. Mater. 23 (12), H111-H118 (2011).
  29. Ruppert, R., Hoffmann, E., et al. Human bone morphogenetic protein 2 contains a heparin-binding site which modifies its biological activity. European Journal of Biochemistry. 237 (1), 295-302 (1996).
  30. Love, J., Estroff, L., et al. Self-assembled monolayers of thiolates on metals as a form of nanotechnology. Chem. Rev. 105 (4), 1103-1169 (2005).
  31. Kato, K., Sato, H., Iwata, H. Immobilization of histidine-tagged recombinant proteins onto micropatterned surfaces for cell-based functional assays. Langmuir. 21 (16), 7071-7075 (2005).
  32. Martins, M., Curtin, S., et al. Molecularly designed surfaces for blood deheparinization using an immobilized heparin-binding peptide. J. Biomed. Mater. Res. 88 (1), 162-173 (2009).
  33. Limbut, W., Kanatharana, P., et al. A comparative study of capacitive immunosensors based on self-assembled monolayers formed from thiourea, thioctic acid, and 3- mercaptopropionic acid. Biosens. Bioelectron. 22 (2), 233-240 (2006).
  34. Patel, N., Davies, M., et al. Immobilization of protein molecules onto homogeneous and mixed carboxylate-terminated self-assembled monolayers. Langmuir. 13 (24), 6485-6490 (1997).
  35. Hu, J., Duppatla, V., et al. Site-specific PEGylation of bone morphogenetic protein-2 cysteine analogues. Bioconjug. Chem. 21 (10), 1762-1772 (2010).
  36. Hersel, U., Dahmen, C., Kessler, H. RGD modified polymers: biomaterials for stimulated cell adhesion and beyond. Biomaterials. 24 (24), 4385-4415 (2003).
  37. Cao, T., Wang, A., et al. Investigation of spacer length effect on immobilized Escherichia coli pili-antibody molecular recognition by AFM. Biotechnol. Bioeng. 98 (6), 1109-1122 (2007).
  38. Puleo, D., Kissling, R., Sheu, M. A technique to immobilize bioactive proteins, including bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), on titanium alloy. Biomaterials. 23 (9), 2079-2087 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

BMP 2 Covalent BindingSelf assembled MonolayerGold Substrate PreparationM U N H S LinkerBMP 2 ImmobilizationAntibody Binding AssaySMAD 1 5 8 PhosphorylationAlkaline Phosphatase ActivityMyosin Heavy Chain StainingFluorescence Microscopy

مقالات ذات صلة