مقالة منهجية

إجراءات لتحديد المعدية البريونات بعد المرور عبر الجهاز الهضمي لأنواع الطيور

DOI:

10.3791/50853

⸱

نوفمبر 6, 2013

 ,  ,  , 
1Animal and Plant Health Inspection Service, Wildlife Services, National Wildlife Research Center, USDA

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الزبالين لديها القدرة على نقل من المعدية التي تنتقل البريونات اعتلال الدماغ الإسفنجي في فضلاتها إلى مناطق خالية من المرض. نحن أساليب التفاصيل المستخدمة لتحديد ما إذا تبقى البريونات سكرابي الماوس تكييفها المعدية بعد مرور الرغم من أن الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، مستهلكا شيوعا من الحيوانات النافقة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ومن المرجح بريون المعدية (بي ار بي الدقة) مادة سبب قاتلة، الاعصاب المعدية اعتلال الدماغ الإسفنجي (TSE) الأمراض 1. انتقال الأمراض بورصة طوكيو، مثل مرض الهزال المزمن (CWD)، يفترض أن يكون من الحيوان الى الحيوان 2،3 وكذلك من المصادر البيئية 4-6. الزبالين والحيوانات آكلة اللحوم لديها القدرة على نقل من مادة بي ار بي الدقة من خلال الاستهلاك وإفراز الملوثة CWD الجيف. وقد وثقت العمل مؤخرا بمرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، زبال أمريكا الشمالية المشتركة 7.

نحن تصف الإجراءات المستخدمة لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة من خلال الغربان الأمريكية. تم gavaged الغربان مع RML سلالة تتكيف مع الماوس سكرابي وتم جمع فضلاتها 4 آخر ساعة تسمين. والبراز الغراب ثم تجميع وحقن الغشاء البريتونى فيC57BL / 6 الفئران. تم رصد الفئران يوميا حتى أعربوا عن علامات سريرية للماوس سكرابي والموت الرحيم كانت بعد ذلك. تم رصد الفئران أعراض حتى 365 يوما بعد التلقيح. أجري تحليل لطخة غربية لتأكيد حالة المرض. وكشفت النتائج أن البريونات المعدية تبقى بعد السفر عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان وموجودة في البراز، مما تسبب المرض في الفئران الاختبار.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاعتلال الدماغي الاسفنجي المعدية (TSE) هي الاضطرابات المعدية القاتلة الاعصاب التي تؤثر على الحياة البرية، والحيوانات الأليفة، والبشر. وكيل المعدية الأمراض بورصة طوكيو يبدو أن تتجمع الأشكال الإسوية أو الممرضة (بي ار بي الدقة) من بروتينات بريون 1. وتشمل الأمراض الحيوانية بورصة طوكيو مرض الهزال المزمن (CWD) في الغزلان بغل (Odocoileus hemionus)، الأيل الأبيض الذيل (Odocoileus virginianus)، الأيائل (Cervus elaphus)، وحيوان الموظ (alces Alces)؛ سكرابي في الأغنام والماعز؛ اعتلال الدماغ الإسفنجي البقري ( مرض جنون البقر) في الأبقار المحلية؛ المعدية التهاب الدماغ المنك المنك في المزارع؛ اعتلال الدماغ الاسفنجي في القطط القطط؛ الغريبة الاعتلال الدماغي الإسفنجي ذوات الحوافر في حديقة الحيوانات الغريبة يجتر من الأبقار الأسرة، واعتلال الدماغ الإسفنجي في الرئيسيات غير البشرية 8. المرض بورصة طوكيو بشرية واحدة، والبديل مرض كروتزفيلد جاكوب، أمر نادر الحدوث ويعتقد أن الحصول عليها عن طريق استهلاك بي ار بي الدقة-كونتامانالغذاء ated 9. وبالمثل، يمكن أن تصيب البشر إذا مرض جنون البقر ويستهلك لحوم البقر الملوثة 10. من جميع الأمراض بورصة طوكيو، سكرابي وCWD هما فقط مع الأوبئة ومصادر للعدوى الاكتفاء الذاتي يفترض أن يكون من الحيوان الى الحيوان 2،3،11 وكذلك من المصادر البيئية 4-6. تشير البحوث إلى أن معظم الأمراض بورصة طوكيو تتطلب فترات حضانة طويلة ملحوظ من الأحداث التعرض للمواد الطبيعية بي ار بي الدقة لمظهر من مظاهر علامات سريرية 2-4،6،8 والحواجز الأنواع الظاهر تقليل، ولكن لا تقضي على إمكانات، انتقال بين الأنواع 12-14 .

تحديد آليات لانتشار بريون المعدية (بي ار بي الدقة) المواد من المهم للغاية للرد على الأسئلة حول كيفية نقل الأمراض بورصة طوكيو عبر المناظر الطبيعية. وأشارت التحقيقات التجريبية التي الحشرات 15،16 والدواجن والخنازير 17، والغربان الأمريكية (غراب براكhyrhynchos) 7،18 ناقلة أو المشتتات السلبي من مادة بي ار بي الدقة. وقد تم مؤخرا توثيق مرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان، مما يدل على الدور الذي قد تلعبه في تشتيت الأمراض بورصة طوكيو 7. هذه النتائج تجعل من المعقول أن الغربان، زبال، يمكن أن تواجهها، تستهلك، ونقل المواد المعدية عن طريق البراز الترسيب، إلى مناطق خالية من المرض.

واستخدمت الإجراءات علينا أن نظهر هنا لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة من خلال نظام الهضم من الغربان وسوف يسهل كثيرا تطبيق هذه الأساليب لزبال الأخرى ونماذج أكلة اللحوم أنواع محددة في البحوث المستقبلية ذات الصلة. في هذه الدراسة تم استخدام الأساليب التقليدية للتحقيق وسيلة غير تقليدية لتهريب المواد بي ار بي الدقة، والتي يمكن أن تسهم في انتشار والعبء الإجمالي للمادة بي ار بي الدقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويتم تكييف بروتوكول لدينا من احد نشرنا سابقا 7. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام وزارة الزراعة في الولايات المتحدة (USDA)، الحيوان ودائرة التفتيش الصحة النباتية (APHIS)، خدمات الحياة البرية (WS)، المركز القومي للبحوث الحياة البرية (NWRC).

1. الغراب Gavaging

  1. تقدير مرور الوقت 'المواد الدماغ الزائفة "من خلال القناة الهضمية من الغربان الأمريكية.
    1. خلط 5 مل من طهي وتدافعت البيض كله مع صبغة زرقاء والتغذية الأنبوبية 1 الغراب باستخدام 2 في التغذية الأنبوبية إبرة (الشكل 1).
    2. تحقق الغراب كل 30 دقيقة حتى أزرق / أخضر البراز الملطخة لم تعد تفرز يجري.
  2. الحصول RML (سلالة تشاندلر) المصابة C57BL / 6 أدمغة فئران مصابة بمرض عضال و.
  3. توليد 20٪ بالوزن / المجلد العادي والمصابة جناسة الماوس في الدماغ في الخالط رصاصة خلاط مع 1Xالفوسفات مخزنة المالحة (PBS) والخرز الزجاجي، ثم الطرد المركزي في 3000 x ج لمدة 1 دقيقة لإزالة الجسيمات الأكبر حجما. إزالة طاف وتمييع مع حجم مساو من برنامج تلفزيوني 1X لتوليد 10٪ بالوزن / المجلد في برنامج تلفزيوني العقيمة. تجميد في -80 درجة مئوية لحين الحاجة إليها.
  4. 17 ساعة قبل إزالة للتسمين الطعام، ولكن ليس الماء، من الأقلام الغراب.
  5. تخصيص عشوائيا الغربان لمجموعات العلاج والتغذية الأنبوبية شفويا كل الغراب مع 5 مل من إما طبيعية أو المصابة جناسة الماوس الدماغ باستخدام إبرة 2 في أنبوب تغذية.
  6. نقل الغربان إلى أقفاص الفردية وجمع وتجميع جميع البراز داخل كل قفص لمدة 4 آخر ساعة التغذية الأنبوبية (الشكل 2).
  7. التجانس البراز المجمعة لكل الغراب في الخالط رصاصة الخلاط مع الخرز الزجاجي حتى يتم التوصل إلى نسيج موحد. * البراز السائل كرو هي في معظمها ويمكن أن تكون مختلطة بسهولة.
  8. لكل الغراب، وتمييع 500 ميكرولتر من جناسة البراز إلى 9.5 مل برنامج تلفزيوني 1X لإجمالي حجم 10 مل.
  9. أجهزة الطرد المركزي في homogena برازيالشركة المصرية للاتصالات لمدة 15 دقيقة في 1،400 x ج واستخراج طاف.
  10. لتقليل خطر حدوث العدوى الميكروبية الثانوية، وعلاج طاف مع 1 ميكرولتر من 100 وحدة / مل البنسلين و 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين (إينفيتروجن، NY) لكل 100 ميكرولتر من جناسة ثم ضع تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة للحد من خطر التلوث الفيروسية والبكتيرية. بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية، وعينات يصوتن في 3000 النائب sonicator إلى وضع 70 لمدة 30 ثانية لعرقلة غشاء من أي الميكروبات المتبقية.

2. الماوس التلقيح

  1. عشوائيا تخصيص الفئران إلى مجموعات العلاج التالي (الجدول 1):
    1. مجموعة 1 - الفئران المعالجة الإيجابية تلقيح الغشاء البريتونى (IP) مع 1 مل من البراز جناسة من الغربان gavaged شفويا مع 5ML أدمغة فئران مصابة.
    2. مجموعة 2 - السلبية الفئران المعالجة تلقيح IP مع 1 مل من البراز جناسة من الغربان gavaged شفويا مع 5ML أدمغة الفأر العادي.
    3. تمييع بالعدوىد وطبيعية جناسة الماوس الدماغ للمجموعات 3 و 4 إلى 1:100 ث / ت في برنامج تلفزيوني 1X.
    4. المجموعة 3 - السيطرة على الفئران الملقحة إيجابي IP مع 1 مل من المصابة جناسة الماوس في الدماغ.
    5. مجموعة 4 - السلبية السيطرة على الفئران الملقحة IP مع 1 مل من الطبيعي جناسة الماوس في الدماغ.
المجموعة المعاملة عدد من الحيوانات
مجموعة 1 سكرابي + كرو البراز 100
مجموعة 2 سكرابي - كرو البراز 25
مجموعة 3 سكرابي + ماوس الدماغ 10
مجموعة 4 سكرابي - ماوس الدماغ 5

. الجدول 1 حالة سكرابي من اللقاح (+ إيجابية أو سلبية -) وعدد من الحيوانات المستخدمة 7.

  1. الغشاء البريتونى تطعيم الماوس:
    1. القفا الماوس عن طريق الظهرية الفراء الرقبة مع الإبهام والسبابة وبلطف تدوير لفضح الجانب البطني.
    2. رفع نهاية الخلفي من الماوس حتى الرأس هو أقل قليلا.
    3. إدراج 25 G الإبرة من خلال الجلد 1 سم، 1 سم الوحشي من خط الوسط، و 1-2 سم الأمامي إلى المفصل العجزي الحرقفي باستخدام حقنة تأمين إبرة.
    4. 1 مل حقن تطعيم ببطء في الجسم تجويف الفأرة.

3. رصد الماوس

  1. رصد الفئران يوميا حتى أنها تعبير عن علامات سريرية للماوس سكرابي. ويمكن أن تشمل العلامات السريرية: حداب، وترنح، وذيل شديدة، وعدم الاستمالة، والهزال، والخمول.
  2. يسجل الفئران لكل من العلامات السريرية 6 عندما علامات واضحة جلية، حيث 0 = لا شيء مرئي، 1 = معتدلة، و 2 = شديد.
  3. الموت ببطء الفئران عندما مجموع الدرجات يوميا لتصل إلى كل علامة ≥ 8 ل1 يوم، 6 ≥ مستمر لمدة 3 أيام، أو على 365 يوما بعد التلقيح (نقطة في البوصة).
  4. أدمغة الحصاد euthan التالية مباشرةآسيا وتخزينها في -70 درجة مئوية.
  5. لتأكيد تشخيص سكرابي، هضم عينات الدماغ مع 3 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل من بروتين-K الحل (PK) المخفف على النحو التالي: 3.1. ميكرولتر PK، 12.5 ميكرولتر من 500 ملي EDTA، ودرجة الحموضة 8، 109.39 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني 1X لمدة 30 دقيقة عند 45 درجة مئوية، ثم إبطال نشاط PK بإضافة 8 ميكرولتر العازلة التحميل واحتضان العينات في 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. عينات الحمل على 12٪ هلام SDS-PAGE، electrophorese ونقل إلى Immobilon PVDF غشاء وكتلة مع 5٪ الحليب الخالي في 0.2٪ توين 20 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ثم بحث مع Bar224 المضادة للبي ار بي الأضداد وحيدة النسيلة مترافق إلى البيروكسيديز الفجل، مخففة في Superblock، لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. شطف الغشاء لمدة 1 ساعة مع PBS-0.2٪ توين 20. لتصور، واحتضان الغربية وصمة عار 5 دقائق مع الركيزة chemiluminescent وصورة على G-مربع نظام التوثيق هلام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

شرح الإجراءات المستخدمة أن الجهاز الهضمي من الغربان لا يلغي بي ار بي الدقة العدوى 4 ساعة بعد بالتزقيم عن طريق الفم من جناسة سكرابي الدماغ 7. كل عشرين الغربان التي تم gavaged مع المواد بي ار بي الدقة تنتقل لاحقا مادة بي ار بي الدقة عبر البراز إلى الفئران. وقد تم تحديد الفئران المريضة التي كتبها مظهر من مظاهر علامات الفأر سكرابي السريرية واكتمل تأكيد المرض عن طريق تحليل لطخة غربية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن يبرهن على وجود إجراءات لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان. استخدمنا الطرق التقليدية لتحديد ما إذا الغربان لديها القدرة على نقل من مادة بي ار بي الدقة إلى مناطق جغرافية خالية من الأمراض. وقد قيمت الآخرين مقاومة بي ار بي الدقة لالمجترة 19-21 والقوارض 22،23 سوائل الجهاز الهضمي، وكلاهما فشل في القضاء عليه. ينبغي أن تطبق تطبيقها في المستقبل من هذه التقنيات إلى الحيوانات آكلة اللحوم الأخرى 24...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر S. فيرنر لتوفير الغربان المستخدمة في هذه الدراسة وزارة الزراعة الأميركية، APHIS، WS، NWRC موظفي الرعاية الحيوانية لرعاية الحيوان والرصد. أذكر أو استخدام منتج لا يعني تأييد وزارة الزراعة الأميركية. تم توفير التمويل لهذه الدراسة من قبل وزارة الزراعة الأميركية، APHIS، الخدمات البيطرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
RML تشاندلر سلالة الفأر المتكيفة مع سكرابيمختبرات
RC57BL / 6 فئرانHilltop Lab الغربان
الأمريكيةالبرية التي تم التقاطها
القلم / البكتيريا العقديةInvitrogen15140-122
الفوسفات المخزن الملحيInvitrogen70011-044
SonicatorMisonix
Proteinase-K solutionRoche3115887001
تحميل العازلةInvitrogenNP0007 و 0009
Bis-tris SDS PAGE 12٪ هلامInvitrogenNP0342
Immobilon PVDF غشاءMillipore1SEQ00010
Tween 20Sigma AldrichP2287
Bullet خلاط الخالطBraintree ScientificBBX24B
2.3 مم الزركونيا / حبات السيليكاBioSpec المنتجات11079125Z
Bar224 المضادة ل PrP الجسم المضاد أحادي النسيلةكايمانالكيميائية 10009035
SuperblockThermo Scientific37517
الركيزة الكيميائيةMilliporeWBKLS0500
G-box نظام توثيق هلامSyngene
روكي ماونتن

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Prusiner, S. B. Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie. Science. 216 (4542), 136-144 (1982).
  2. Miller, M. W., Williams, E. S., et al. Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming. Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).
  3. Miller, M. W., Williams, E. S. Horizontal prion transmission in mule deer. Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).
  4. Sigurdson, C. J., Adriano, A. Chronic Wasting Disease. Biochimica et Biophysica Acta. 1772 (6), 610-618 (2007).
  5. Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. Environmental sources of prion transmission in mule deer. Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).
  6. Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure. PLoS ONE. 4 (6), e5916(2009).
  7. VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos). PLoS ONE. 7 (10), e45774(2012).
  8. Imran, M., Mahmood, S. An overview of animal prion diseases. Virology Journal. 8 (493), (2011).
  9. Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. The expanding universe of prion disease. PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26(2006).
  10. Bruce, M. E., et al. Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent. Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).
  11. Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy. Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).
  12. Collinge, J. The risk of prion zoonoses. Science. 335 (6067), 411-413 (2012).
  13. Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. Prion agent diversity and species barrier. Veterinary Research. 39 (47), (2008).
  14. Harrington, R. D., Baszler, T., et al. A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison). The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).
  15. Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. Mites as vectors for scrapie. Lancet. 347 (9008), 1114(1996).
  16. Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. Fly larvae and pupae as vectors for scrapie. Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).
  17. Matthews, D., Cooke, B. C. The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish. Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).
  18. Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease. Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).
  19. Scherbel, C., Pichner, R., et al. Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle. Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).
  20. Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep. Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).
  21. Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels. Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).
  22. Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models. Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).
  23. Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie. Veterinary Research. 40 (1), 4(2009).
  24. Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease. Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).
  25. Bjorndal, K. A. Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate. Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).
  26. Clark, R. G., Gentle, G. C. Estimates of grain passage time in captive mallards. Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).
  27. Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity. Primates. 33 (3), 399-405 (1992).
  28. Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer. Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).
  29. Pulford, B., Spraker, T. A., et al. Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification. Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).
  30. Hicks, R. E. Guano deposition in an Oklahoma crow roost. Condor. 81 (3), 247-250 (1979).
  31. Aldous, S. E. Winter habits of crows in Oklahoma. Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

PrPRes K

مقالات ذات صلة