يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الاستشعار من الجدار الأنسجة تعطيل مع الترانزستور العضوي الكهروكيميائية

11.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51102

⸱

فبراير 10, 2014

 ,  ,  ,  , 
1Department of Bioelectronics, Ecole Nationale Superieure des Mines, 2Research and Exploratory Development Division, Applied Physics Laboratory, Johns Hopkins University

في هذه المقالة

ملخص

تم دمج الترانزستور العضوي الكهروكيميائية مع الخلايا الحية وتستخدم لمراقبة تدفق الأيونات عبر حاجز الظهارية المعوية. في هذه الدراسة، وزيادة في تدفق أيون، تتعلق تعطيل منعطفات ضيقة، الناجم عن وجود EGTA خالب الكالسيوم (جلايكول الإثيلين مكرر (الأثير بيتا aminoethyl)-N، N، N '، الخليك N'رباعي حامض)، ويقاس.

الملخص

الجهاز الهضمي هو مثال على حاجز الأنسجة التي توفر حاجز مادي ضد دخول مسببات الأمراض والسموم، في حين يسمح بمرور الأيونات والجزيئات الضرورية. يمكن أن يكون سبب الاختراق في هذا الحاجز عن طريق انخفاض في تركيز الكالسيوم خارج الخلية. هذا الانخفاض في تركيز الكالسيوم يؤدي إلى تغيير متعلق بتكوين جزئي في البروتينات المشاركة في الختم من الجدار، مما أدى إلى زيادة في تدفق paracellular. لتقليد هذا التأثير الكالسيوم خالب جلايكول الإثيلين مكرر (الأثير بيتا aminoethyl)-N، N، N '، وكان يستخدم حمض الخليك N'رباعي (EGTA) على أحادي الطبقة من الخلايا المعروف أن ممثل الجهاز الهضمي. أساليب مختلفة للكشف عن اختلال النسيج حاجز موجودة بالفعل، مثل المناعي ونفاذية المقايسات. ومع ذلك، وهذه الأساليب هي مضيعة للوقت ومكلفة وغير مناسبة لقياسات الحيوية أو الإنتاجية العالية. الوسائل الإلكترونية لقياس الأنسجة حاجزتوجد أيضا النزاهة لقياس المقاومة بطريق الظهارة (TER)، ولكن هذه غالبا ما تكون مكلفة ومعقدة. هناك حاجة لتطوير طرق سريعة، ورخيصة، وحساسة على وجه السرعة كما على سلامة الأنسجة حاجز معلمة رئيسيا في اكتشاف الأدوية ووسائل التشخيص الممرض / السم. وقد تبين الترانزستور الكهروكيميائية العضوية (OECT) تتكامل مع النسيج حاجز تشكيل خلايا كجهاز جديدة قادرة على رصد حيوي سلامة الأنسجة الحاجز. الجهاز قادر على قياس التغيرات الدقيقة في تدفق الأيونية مع القرار الزماني لم يسبق لها مثيل والحساسية، في الوقت الحقيقي، كمؤشر على سلامة الأنسجة الحاجز. ويستند هذا الأسلوب الجديد على جهاز بسيط يمكن أن تكون متوافقة مع التطبيقات فحص إنتاجية عالية وبتكلفة منخفضة ملفقة.

المقدمة

ظهارة المعوية هو مثال على حاجز الأنسجة التي تسيطر على مرور الجزيئات بين مقصورات مختلفة من الجسم. يتكون من خلايا ظهارة عمودية ممدود انضم معا عن طريق المجمعات من البروتينات التي توفر حاجزا ضد مسببات الأمراض الجسدية 1 والسموم، في حين يسمح بمرور الماء والمواد الغذائية اللازمة للحفاظ على الجسم. ويرجع ذلك إلى الاستقطاب من الخلايا الظهارية، مما يخلق اثنين من المجالات المختلفة غشاء هذه الانتقائية: الجانب قمية من الخلايا المعرضة لمعة والجانب القاعدية من الخلايا ترتكز على الأنسجة الكامنة 2،3. منعطفات ضيقة (TJ) هي المجمعات من البروتينات الموجودة في الجزء القمي من الخلايا الظهارية والتي هي جزء من مجمع أكبر يعرف باسم مفترق القمي 4. تدفق أيون عبر حاجز الأنسجة قد تذهب إما عن طريق العابر للخلايا (من خلال الخلية) أو عن طريق paracellular (بين اثنين من الخلايا المجاورة) مسار. مجموعالنقل سواء من خلال مسارات يعرف باسم المقاومة بطريق الظهارة. تقاطع القمي هو المسؤول عن تنظيم الأيونات وجزيئات تمر عبر حاجز 5،6 عبر فتحة محددة وظيفة الإغلاق. وغالبا ما ترتبط خلل أو تعطل هذه المجمعات البروتين لمرض 7-11. بالإضافة إلى ذلك، لا يعرف العديد من مسببات الأمراض المعوية / السموم خصيصا لاستهداف هذا المجمع، وبالتالي تدخل الجسم ويؤدي إلى الإسهال، وعلى الأرجح نتيجة التقلبات الهائلة من تدفق أيون / المياه عبر الحاجز 12-14. ويمكن أيضا أن يتم تعديل الحاجز الأنسجة عن طريق تغيير المكروية خارج الخلية. كادهيرين هو بروتين حاسم لالتصاق خلية خلية، وتشارك في تشكيل تقاطع القمي. مطلوب الكالسيوم عن التشكل الهيكلي الصحيح من كادهيرين، ولقد ثبت انخفاضا في خارج الخلية الكالسيوم أن يؤدي إلى تدمير تقاطع خلية خلية وافتتاح اللاحقة للمسار paracellular بين خلايا 15. في هذه الدراسة، EGTA (الإيثيلين جليكول مكرر (بيتا aminoethyl الأثير)-N، N، N '، وحامض الخليك N'رباعي)، وخالب الكالسيوم محددة، وكان يستخدم للحث على خرق الحاجز في الأنسجة، كما أن لديها وقد تبين أن يكون لها تأثير سريع وجذري على paracellular أيون تدفق 16،17. وقد استخدم هذا خالب الكالسيوم على متكدسة وأحادي الطبقة متباينة من خط الخلية كاتشو-2. مثقف في إدراج خلية ثقافة، ويعرف هذا الخط الخلية لتطوير خصائص الجهاز الهضمي، ويستخدم على نطاق واسع من جانب الصناعة الصيدلانية لاختبار امتصاص الأدوية 18،19.

أساليب لمراقبة سلامة الأنسجة الحاجز وفيرة. هذه الأساليب هي في كثير من الأحيان البصرية، والاعتماد على تلطيخ المناعي للبروتينات خاصة من المعروف أن عند تقاطع قمي 20، أو الاعتماد على القياس الكمي للجزيء التتبع الفلورسنت التي عادة غير منفذ للأنسجة حاجز21،22. ومع ذلك، وأساليب خالية من التسمية (أي بدون fluorophore / حامل اللون) هي الأفضل مثل استخدام تسمية يمكن أن تحمل الأعمال الفنية، وغالبا ما يزيد من تكلفة الفحص والوقت. وقد برزت، ورصد تسمية خالية من الأنسجة الكهربائية حاجز مؤخرا كوسيلة من وسائل الرصد الحيوي 23. على سبيل المثال سمحت التطورات التكنولوجية الحديثة في مقاومة الكهربائية الطيفي تطوير جهاز المسح الضوئي المتوفرة تجاريا 24،25 التي يمكن قياس المقاومة بطريق الظهارة (TER)، وهو قياس تصرف أيون عبر طبقة الخلايا.

وقد خلق الالكترونيات العضوية فرصة فريدة للتواصل في عالم الالكترونيات وعلم الأحياء 26،27 28،29 باستخدام إجراء البوليمرات التي يمكن إجراء كل من الناقلين الالكترونية والأيونية. تم استحداث تقنية جديدة للكشف عن المخالفات في الأنسجة حاجز باستخدام OECT 30-32 مؤخرا. والتحقق من صحة هذا الجهاز ضد التقنيات القائمة بناإد لتقييم سلامة حاجز الأنسجة، بما في ذلك المناعي، فحوصات النفاذية باستخدام وسيفر الصفراء، ومقاومة التحليل الطيفي باستخدام Cellzscope. في حالة جميع المركبات السامة اختبارها، تم العثور على OECT للعمل مع حساسية مساوية أو أفضل، مع زيادة والقرار الزماني، بالمقارنة مع التقنيات المذكورة أعلاه. في هذا الجهاز، PEDOT: جهاز الأمن الوقائي، وإجراء البوليمر التي قد تظهر لتكون مستقرة وحيويا 33،34، ويستخدم كمادة نشطة في القناة الترانزستور. يتكون OECT هجرة ومصدر أقطاب كهربائية على جانبي قناة البوليمر التوصيلي. ثم يتم وضع هذا في اتصال مع المنحل بالكهرباء، والتي تشكل جزءا لا يتجزأ من الجهاز. هي مغمورة A القطب البوابة في الكهارل (الشكل 1)، وعندما يتم تطبيق الجهد بوابة إيجابية عند البوابة، يضطر الكاتيونات من بالكهرباء في القناة، وبالتالي dedoping البوليمر وإجراء يؤدي إلى تغيير في مصدر استنزاف الحالية. دevice بالتالي حساسة للغاية لتغييرات في اللحظة في تدفق الأيونية بسبب التضخيم من الترانزستور. وضعت طبقة الخلايا نمت على إدراج ثقافة الخلية بين القطب البوابة والقناة الموصلة البوليمر. وجود طبقة الخلايا سليمة بمثابة حاجز للالكاتيونات الدخول في البوليمر إجراء، وبالتالي، في وجود أحادي الطبقة سليمة، والانخفاضات الحالية هجرة (الشكل 2: الانتقال من المنطقة لب). في وجود مركب سام، فإن الأنسجة حاجز تفقد تدريجيا سلامتها، والسماح للالكاتيونات دخول في فيلم البوليمر وزيادة استنزاف الحالية (الشكل 2: المنطقة ج). مع هذا الأسلوب، يعتبر خرق في الأنسجة حاجز من التشكيل الحالي للهجرة، الموافق للتعديل للتدفق عبر أحادي الطبقة. هذا الجهاز قادر على قياس التغيرات الدقيقة في تدفق الأيونية مع القرار الزماني غير مسبوقة وحساسية في الزمن الحقيقي. هذا فيل التكنولوجيال تكون ذات فائدة في مجال علم السموم لاختبار المخدرات، وتشخيص الأمراض أو البحوث الأساسية كنموذج حاجز يمكن تكييفها بسهولة. وهذا الأسلوب يساعد أيضا على الحد من التجارب على الحيوانات، كما أنه يتيح التحقق من صحة نماذج في المختبر ليحل محل اختبار في الجسم الحي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. PEDOT: PSS إعداد الحل

  1. إلى 50 مل من PEDOT: جهاز الأمن الوقائي، إضافة جلايكول الإيثيلين (يزيد الموصلية) في نسبة حجم 1:4 (جلايكول الإثيلين لPEDOT: PSS)، و 0.5 ميكرولتر / مل من حمض Dodecylbenzenesulfonic (DBSA) كما السطحي، و 10 ملغ / مل 3 glycidoxypropyltrimethoxysilane (GOPS) باعتبارها رابط عبر لتعزيز التصاق البوليمر إجراء لشريحة زجاجية.

2. OECT التصنيع (الشكل 3)

  1. تحديد تبخرت حراريا الاتصالات ومصدر استنزاف الذهب عن طريق رفع قبالة الطباعة الحجرية:
    1. تدور معطف مقاوم الضوء على شريحة زجاجية نظيفة العادي في 3،000 دورة في الدقيقة لمدة 30 ثانية. أبعاد الزجاج هي 3 × 1 في فيه.
    2. تحديد أنماط بواسطة ضوئيه. يجوز تغيير أبعاد، ومع ذلك عرضت أبعاد المدرجة هنا أن تؤدي إلى حساسية الأمثل. ثم استخدام المطور.
    3. تتبخر 5 نانومتر و 100 نانومتر من الكروم والذهب، على التوالي.
    4. رفع قبالة مقاومة للضوء في ميلانحمام ايتون لمدة 1 ساعة، وترك الركيزة مع مصدر واستنزاف منطقة الاتحاد الافريقي الاتصالات فقط.
  2. الطول المطلوب من PEDOT: قناة PSS هو 1 مم. ويتحقق ذلك من خلال الزخرفة باستخدام parylene-C (PA-C) تقشر التقنية:
    1. تحميل 3.5 غرام من باسكال-C في الإعداد الطلاء. موحد تتبخر 2 ميكرون من parylene-C على رأس الركيزة مع جهات الاتصال الاتحاد الافريقي.
    2. نمط القناة التي كتبها ضوئيه:
      1. تدور معطف مقاوم الضوء على 3،000 دورة في الدقيقة لمدة 30 ثانية.
      2. استخدام قناع لتسليط الضوء على قناة اتصال والذهب و 20 ثانية للأشعة فوق البنفسجية، ومقاومة للضوء يتعرض تصبح قابلة للذوبان في المطور.
      3. استخدام المطور لفتح منطقة القناة على مقاومة للضوء.
    3. حفر باسكال-C في منطقة القناة من خلال خطوة البلازما 15 دقيقة (O 2 (50 SCCM) وCHF 4 (3 SCCM) في البلازما 160 W) من أجل فتح قناة اتصال والذهب.
  3. إيداع PEDOT: PSS حل الخليط بواسطة طلاء تدور في500 دورة في الدقيقة لمدة 45 ثانية. تخبز لمدة 30 ثانية في 110 درجة مئوية.
  4. قشر قبالة باسكال-C للكشف عن PEDOT: PSS قناة الركيزة تحتها. هذه القناة يجب أن تتداخل قليلا مع اتصالات الاتحاد الافريقي المحرز في البروتوكول 1.
  5. عينات خبز لمدة 1 ساعة في 140 درجة مئوية في ظل ظروف الغلاف الجوي.

3. الجمعية الجهاز

  1. جعل PDMS عن طريق خلط اثنين من الحلول (عادة الموردة معا في عدة) في 1:10 نسبة علاج الحل في الحل القاعدة. خبز لمدة 1 ساعة في 120 درجة مئوية.
  2. تصميم جيدا باستخدام لكمة ثقب وقطع مربع حول المنطقة المطلوبة.
  3. الغراء PDMS جيدا على قمة القناة، لينتج في منطقة القناة من حوالي 6 مم 2. ضمان أن الاتصالات ومصدر استنزاف لا تغطيها.
  4. جعل الدعم البلاستيك مع وجود ثقب في ذلك (يمكن استخدام حامل لإدراج ثقافة الخلية) ثم الغراء على أعلى PDMS. السماح لها بين عشية وضحاها الجافة.
  5. اختبار البئر عن تسريب من قبل بريفيللينغ مع واتإيه.
  6. لحام الأسلاك الكهربائية على اتصال ومصدر استنزاف مع القصدير.

4. الثقافة الخلية

  1. إعداد الخلايا سائل الإعلام والثقافة على النحو التالي:
    1. في DMEM، إضافة 1٪ الجلوتامين، و 10٪ مصل بقري جنيني، 0.5٪ البنسلين الستربتوميسين، و 0.1٪ جنتاميسين.
    2. تعقيم وسائل الإعلام ثقافة الخلية باستخدام جهاز تصفية العقيمة.
  2. الحفاظ على كاتشو-2 خلايا مرور بين 49 و 68 عند 37 درجة مئوية في جو مرطب من 5٪ CO 2، في الخلية سائل الإعلام والثقافة.
  3. تقسيم الخلايا مرة واحدة في الأسبوع باستخدام التربسين والبذور في 1.5 × 10 4 خلية / إدراج.
  4. تغيير الخلية سائل الإعلام والثقافة مرتين في الأسبوع على مدى 3 أسابيع.

5. القياسات مع OECT

  1. توصيل الأسلاك حج / أجكل إلى sourcemeter للاستخدام كبوابة القطب. تزج طرف في وسائل الإعلام ثقافة الخلية، والذي يستخدم مثل بالكهرباء، كما هو موضح في الشكل 1A.
  2. ربط الأسلاك من مصدر واستنزاف لرانه sourcemeter (الإعداد قناة مزدوجة).
  3. تطبيق نبضة الجهد التربيعي الموجب (V ع) بين البوابة والمصدر (تستخدم الإلكترود المرجعي: الأرض). يتم تطبيق الجهد المستمر سلبية بين هجرة ومصدر (V DS) ويتم قياس المناظرة الحالية (I DS).
  4. استخدام جمع البيانات برنامج PC التوالي. يجب المعلمات OECT دخلت في برنامج اكتساب مخصصة على النحو التالي: V = -0.2 V DS، V = 0.3 V GS، GS V في الوقت المحدد = 2 ثانية، من الوقت = 28 ثانية.
  5. تلا مصدر استنزاف الحالي (I DS) والبوابة الحالية (I GS). تنفيذ القياس لعدة دقائق لضمان إشارة خط الأساس مستقرة.

6. دمج الخلايا مع OECT للقياس

ملاحظة: قبل التجربة، وسلامة طبقة الخلايا يمكن التحقق من خلال قياس TER مع جهاز المعاوقة التحليل الطيفي. TER كل 3 أسابيع من العمر كاتشو-2 INSE الخليةغ يجب أن يكون فوق 400 Ω. سم 2.

  1. خلال إجازة القياس OECT: إزالة القطب من بوابة بالكهرباء، إدراج إدراج خلية ثقافة، واستبدال البوابة الكهربائي داخل الخلية إدراج الثقافة.
  2. إجراء قياس خط الأساس مع الخلايا لعدة دقائق لضمان إشارة مستقرة. سيتم استخدام هذا خط الأساس بالنسبة لحساب قيمة تطبيع المقابلة لأحادي الطبقة سليمة (0).

7. إعداد ومقدمة من مجمع السامة

  1. إعداد 1 M حل EGTA في الماء DI، وتعديل لأول مرة الرقم الهيدروجيني من الحل إلى 7.4 مع قاعدة تريس،
  2. إضافة حل EGTA في حجم مناسب للحصول على التركيز المطلوب (على سبيل المثال بين 5 ملم و 100 ملم) مع الأخذ بعين الاعتبار وحدة التخزين. ينبغي إضافة EGTA في غرفة القاعدية خلال إجازة.
  3. قياس مستمر لمدة 90 دقيقة كما في البروتوكول 5. إذا كان القياس هو بايقامت نانوغرام في درجة حرارة الغرفة، فإن استقرار الخلايا لا تظل ثابتة بعد 90 دقائق.
  4. في نهاية المدى، خدش طبقة الخلايا أن يؤدي إلى التدمير الكامل للطبقة الحاجز والتدبير لمدة 15 دقيقة، ويمكن أن يتم هذه النقطة عن طريق إزالة الفلتر وتخبط القطب البوابة في وسائل الإعلام. سيتم استخدام هذا خط الأساس بالنسبة لاحتساب القيمة المقابلة لتطبيع أحادي الطبقة تدميرها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

خلال الخطوة الأولى من القياس، واستنزاف الحالي قد تختلف إلى حد ما، ولكن في معظم الحالات، ينبغي أن تظل مستقرة (الشكل 2، القسم). إذا كانت إشارة غير مستقرة، يجب التخلص من الترانزستور واستبدالها. يضمن هذا الاختيار الاستقرار أيضا أن أي خسائر الأولي في التوصيل من الجهاز لا يؤثر على القياس اللاحق. بعد عدة دقائق من القياس، يتم وضع إدراج مع خلايا الأنسجة تشكيل حاجز على الجزء العلوي من القناة. استنزاف الحالية يجب أن تنخفض فورا (الشكل 2، القسم ب). إذا لا تقلل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوفر هذا الأسلوب طريقة جديدة لدمج الترانزستور الكهروكيميائية العضوية مع الخلايا الحية لقياس سلامة الأنسجة الحاجز. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي سرعة وحساسية، ولكن أيضا انخفاض تكلفة الجهاز لرصد دينامية من الأنسجة الحاجز.

كما يستخدم هذا الأسلوب الخلايا الحية، وهي النقطة الحرجة هي أن تتأكد من أن استخدام أحادي الطبقة، وهو ما يمثل طبقة الحاجز سليمة. يجب أن يتم تعريف المعلمات من الجدار خلال توصيف خط الخلية. ولذا فمن...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويدعم هذا المشروع من قبل FP7-الشعبية-2009-RG، مشروع ماري كوري رقم 256367 (CELLTOX) واقتراح مجلس البحوث الأوروبي ERC-2010-258966 جنيها استرلينيا لا (IONOSENSE)، فضلا عن منحة مشتركة من CONSEIL الإقليمي دي بروفانس ألب كوت دازور وCDL فارما للST. نشكر جورج Malliaras لإجراء مناقشات مفيدة تتعلق تصميم OECT وظيفة.

شكر وتقدير

واضعو هذه الدراسة لم يكن لديك أي مصالح مالية المتنافسة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Clevios درجة الحموضة 1000Heraus Clevios
AZ9260 الراتنجCipec Specialties
حمض Dodecylbenzenesulfonic (DBSA) AcrosOrganic
3-Glycidoxypropyltrimethoxysilane (GOPS)Sigma Aldrich
24-well علقت الخلية إدراج ثقافة Millicell   PET 0.4 & م ميليبوردومينيك دوتشر51705
لوحة زراعة الخلايا ذات 24 بئر BD FalconDominique Dutscher51705
Stericup-GPT PES 0.22 & mu ؛ MDominique Dutscher51246
Advanced DMEM Marque GIBCOFisher ScientificE3434T
FBS Heat Inact.فيشر ساينتفيكE3387M
البنسلين ستربتومايسينفيشر ScientificE3470C
جلوتاماكسفيشر ScientificE3524T
التربسين 0.05٪ EDTAفيشر ScientificE3513N
EGTA (إيثيلين جلايكول مكرر (2-أمينوإيثيل إيثر) -N ، N ، N & رئيس ؛ N & حمض رباعي الأسيتيك)سيجما ألدريتشE4378
جلايكول الإيثيلين ، اللامائي ، 99.8٪ ،Sigma Aldrich
Caco-2ATCC
PDMSDow CorningSYLGARD 184 سيليكون مطاط للطعام
Au (99.99٪) NEYCOAU3X6
الكروم (99.95٪)
Parylene C
Ag / AgCl سلكهارفارد جهاز
مقاوم للضوءتخصصات
خلايا أنظمة الطلاء المتخصصة NEYCO Cipec

المراجع

  1. Farquhar, M. G., Palade, G. E. Junctional complexes in various epithelia. J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).
  2. Gaillard, J. L., Finlay, B. B. Effect of cell polarization and differentiation on entry of Listeria monocytogenes into the enterocyte-like Caco-2 cell line. Infect. Immun. 64, 1299-1308 (1996).
  3. Anderson, J. M., Balda, M. S., Fanning, A. S. The structure and regulation of tight junctions. Curr. Opin. Cell Biol. 5, 772-778 (1993).
  4. Guttman, J. A., Finlay, B. B. Tight junctions as targets of infectious agents. Biochim. Biophys. Acta. 1788, 832-841 (2009).
  5. Anderson, J. M. Molecular structure of tight junctions and their role in epithelial transport. News. Physiol. Sci. 16, 126-130 (2001).
  6. Anderson, J. M., Van Itallie, C. M. Tight junctions: Closing in on the seal. Curr. Biol. 9, (1999).
  7. Ma, T. Y., Boivin, M. A., Ye, D., Pedram, A., Said, H. M. Mechanism of TNF-{alpha} modulation of Caco-2 intestinal epithelial tight junction barrier: role of myosin light-chain kinase protein expression. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 288, 422-430 (2005).
  8. Schulzke, J. D., et al. Epithelial tight junctions in intestinal inflammation. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1165, 294-300 (2009).
  9. Fisher, S. J., Swaan, P. W., Eddington, N. D. The ethanol metabolite acetaldehyde increases paracellular drug permeability in vitro and oral bioavailability in vivo. The J. Pharmacol. Exp. Therap. 332, 326-333 (2010).
  10. Ma, T. Y., Nguyen, D., Bui, V., Nguyen, H., Hoa, N. Ethanol modulation of intestinal epithelial tight junction barrier. Am. J. Physiol. 276, 965-974 (1999).
  11. Nemeth, E., Halasz, A., Barath, A., Domokos, M., Galfi, P. Effect of hydrogen peroxide on interleukin-8 synthesis and death of Caco-2 cells. Immunopharmacol. Immunotoxicol. 29, 297-310 (2007).
  12. Vogelmann, R., Amieva, M. R., Falkow, S., Nelson, W. J. Breaking into the epithelial apical-junctional complex--news from pathogen hackers. Curr. Opin. Cell Biol. 16, 86-93 (2004).
  13. Nusrat, A., et al. Clostridium difficile toxins disrupt epithelial barrier function by altering membrane microdomain localization of tight junction proteins. Infect. Immun. 69, 1329-1336 (2001).
  14. Obert, G., Peiffer, I., Servin, A. L. Rotavirus-induced structural and functional alterations in tight junctions of polarized intestinal Caco-2 cell monolayers. J. Virol. 74, 4645-4651 (2000).
  15. Nagar, B., Overduin, M., Ikura, M., Rini, J. M. Structural basis of calcium-induced E-cadherin rigidification and dimerization. Nature. 380, 360-364 (1996).
  16. Boulenc, X., et al. Importance of the paracellular pathway for the transport of a new bisphosphonate using the human Caco-2 monolayers model. Biochem. Pharmacol. 46, 1591-1600 (1993).
  17. Artursson, P., Magnusson, C. Epithelial transport of drugs in cell culture. II: Effect of extracellular calcium concentration on the paracellular transport of drugs of different lipophilicities across monolayers of intestinal epithelial (Caco-2) cells. J. Pharm. Sci. 79, 595-600 (1990).
  18. Artursson, P. Epithelial transport of drugs in cell culture. I: A model for studying the passive diffusion of drugs over intestinal absorptive (Caco-2) cells. J. Pharm. Sci. 79, 476-482 (1990).
  19. Artursson, P., Karlsson, J. Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 175, 880-885 (1991).
  20. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. J. Cell Biol. 134, 1031-1049 (1996).
  21. Hubatsch, I., Ragnarsson, E. G. E., Artursson, P. Determination of drug permeability and prediction of drug absorption in Caco-2 monolayers. Nat. Protoc. 2, 2111-2119 (2007).
  22. Uchida, M., Fukazawa, T., Yamazaki, Y., Hashimoto, H., Miyamoto, Y. A modified fast (4 day) 96-well plate Caco-2 permeability assay. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 59, 39-43 (2008).
  23. Krug, S. M., Fromm, M., Gunzel, D. Two-Path Impedance Spectroscopy for Measuring Paracellular and Transcellular Epithelial Resistance. Biophys. J. 97, 2202-2211 (2009).
  24. Wegener, J., Abrams, D., Willenbrink, W., Galla, H. J., Janshoff, A. Automated multi-well device to measure transepithelial electrical resistances under physiological conditions. BioTechniques. 37, 592-594 (2004).
  25. Weber, C. R., Shen, L., Wu, L., Wang, Y., Turner, J. R. Occludin is Required for Tumor Necrosis Factor (TNF)-Mediated Regulation of Tight Junction (TJ) Barrier Function. Gastroenterology. 140, (2011).
  26. Owens, R. M., Malliaras, G. G. Organic electronics at the interface with biology. MRS Bull. , (2010).
  27. Lin, P., Yan, F., Yu, J. J., Chan, H. L. W., Yang, M. The Application of Organic Electrochemical Transistors in Cell-Based Biosensors. Adv. Mater. 22, 3655-3660 (2010).
  28. White, H. S., Kittlesen, G. P., Wrighton, M. S. Chemical Derivatization of an Array of 3 Gold Microelectrodes with Polypyrrole - Fabrication of a Molecule-Based Transistor. J. Am. Chem. Soc. 106, 5375-5377 (1984).
  29. Bernards, D. A., Malliaras, G. G. Steady-state and transient behavior of organic electrochemical transistors. Adv. Funct. Mater. 17, 3538-3544 (2007).
  30. Jimison, L. H., et al. Measurement of Barrier Tissue Integrity with an Organic Electrochemical Transistor. Adv. Mater. 24, 5919-5923 (2012).
  31. Tria, S., Jimison, L. H., Hama, A., Bongo, M., Owens, R. M. Sensing of EGTA Mediated Barrier Tissue Disruption with an Organic Transistor. Biosensors. 3, 44-57 (2013).
  32. Tria, S. A., Jimison, L. H., Hama, A., Bongo, M., Owens, R. M. Validation of the organic electrochemical transistor for in vitro toxicology. Biochim. Biophys. Acta. 1830, 4381-4390 (2013).
  33. Zhu, Z. T., et al. A simple poly(3,4-ethylene dioxythiophene)/poly(styrene sulfonic acid) transistor for glucose sensing at neutral pH. Chem. Commun. , 1556-1557 (2004).
  34. Lin, P., Yan, F., Yu, J., Chan, H. L., Yang, M. The application of organic electrochemical transistors in cell-based biosensors. Adv. Mater. 22, 3655-3660 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

سلامة الأنسجة الحاجزةمراقبة التدفق الأيونيالمعالجة بـ EGTAخلايا Caco-2المقاومة عبر الظهاريةالتصنيع بالطباعة الحجرية الضوئيةقناة Pdot PSSتيار المصدر والمصرفالفرز عالي الإنتاجية
الاستشعار من الجدار الأنسجة تعطيل مع الترانزستور العضوي الكهروكيميائية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.