أنشأنا القشرية نموذج ورم أرومي دبقي مثلي في الفئران لحيوي داخلي المجهر ثنائي الفوتون الذي يلخص القيود الفيزيائية الحيوية عادة في اللعب أثناء نمو الورم. نافذة الزجاج المزمنة استبدال الجمجمة فوق الورم يمكن متابعة تطور الورم على مر الزمن من قبل اثنين من الفوتون المجهري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ومثلي الأشكال ورم أرومي نموذج الفأر القيود الحفاظ على الدماغ متني البدنية ومناسبة لحيوي داخلي ثنائي الفوتون المجهري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ورم أرومي دبقي الأشكال (GBM) هو الشكل الأكثر عدوانية من أورام الدماغ مع عدم وجود العلاجات العلاجية المتاحة حتى الآن.
نماذج الفئران من هذه الأمراض تعتمد على حقن تعليق الخلايا دبقي في الدماغ حمة التالية من شق الجافية-الأم. في حين أن الخلايا لديها ليتم حقنه سطحيا لتكون في متناول حيوي داخلي اثنين من الفوتون المجهري، فشل الحقن السطحي لألخص الظروف physiopathological. في الواقع، الهروب عن طريق الجهاز الأكثر حقن الخلايا السرطانية تصل إلى الفضاء خارج الجافية حيث التوسع السريع بشكل غير طبيعي في غياب القيود الميكانيكية من لحمة.
تحسينات لدينا تتكون ليس فقط في زرع الوزراء البريطانى كروي دبقي بدلا من حقن الخلايا دبقي تعليق في الطبقات السطحية للقشرة الدماغ ولكن أيضا في انسداد موقع الحقن من قبل عبر ربط هلام ديكستران نصفي حبة التي يتم لصقها على surrounقرع حمة ومختومة إلى الجافية-الأم مع فورية الغراء. تماما هذه التدابير فرض التوسع الفسيولوجية وتسلل الخلايا السرطانية داخل لحمة الدماغ. تم إغلاق حج القحف أخيرا مع نافذة زجاجية رسخ في الجمجمة للسماح التصوير المزمن على مدى أسابيع في غياب التنمية ندبا.
الاستفادة من الحيوانات المعدلة وراثيا الفلورسنت المطعمة مع الخلايا السرطانية الفلورسنت أظهرنا أن ديناميات التفاعلات التي تحدث بين الخلايا دبقي، الخلايا العصبية (مثل Thy1-CFP الفئران) والأوعية الدموية (التي أبرزتها حقنة في الوريد من صبغة الفلورسنت) يمكن تصور من قبل حيوي داخلي المجهر ثنائي الفوتون أثناء تطور المرض.
إمكانية وجود ورم في صورة قرار المجهرية في بيئة الدماغي للخطر الحد الأدنى يمثل تحسنا من النماذج الحالية الحيوان الخليج للحاسبات الآلية التي ينبغي أن تستفيد مجال علم الأورام العصبية واختبار المخدرات.
المقدمة
يظهر ورم أرومي دبقي الأشكال باعتبارها الشكل الأكثر عدوانية من ورم في المخ في البالغين مع بقاء متوسط 12 شهرا و 5 سنوات معدل البقاء على قيد الحياة من 5٪. يعتمد التدبير العلاجي السريري على الجراحة والعلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي غالبا ما تستخدم في تركيبة. ومع ذلك، فإن آثار هذه العلاجات الملطفة تبقى 1-3.
حتى الآن، فإن معظم الدراسات العصبية الأورام تعتمد على التقنيات التي هي الوحيدة القادرة على تقديم وجهة نظر ثابتة والتي أجريت على الأفواج الكبيرة من الورم الحيوانات تحمل التضحية في مختلف نقاط الوقت (انظر على سبيل المثال 4،5). التطورات الأخيرة في طرق المتابعة على أساس intravital التصوير يسمح بدراسة نمو دبقي والتفاعلات بين الخلايا السرطانية والمكروية المرضية في جسم المريض على نفس الحيوان مع مرور الوقت. هذا يفتح الطريق أمام قطعة حصرية من المعلومات التي كانت غير قابلة للتحقيق حتى الان 6. الحيوانات المعدلة وراثيا معربا به نيون في خلايا الفائدة قد يكون استخدامد لدراسة التفاعلات محددة بين الخلايا السرطانية والخلايا العصبية على سبيل المثال في هذه الورقة.
على مدى العقد الماضي، حيوي داخلي اثنين من الفوتون المجهري 7 أصبح معيار الذهب في الدراسات العصبية الأورام الأساسية والتجارب قبل السريرية 8،9 لقدرته على أداء الملاحظة حيوي داخلي عميق من مخ الفأر (> 500 ميكرون تحت الجافية-ماتر) مع قرار المكانية المصغر 10. باستخدام حيوي داخلي ثنائي الفوتون المجهري مع النماذج الحيوانية orthotopical مزروع مع نافذة الجمجمة المزمن 11، فمن الممكن لمتابعة تطور الورم على مر الزمن على نفس الماوس 9،12.
واحدة من العوائق الرئيسية من هذه النماذج الحيوانية نشرت سابقا هو بيد أنها لا تحاكي القيود المادية التي تحكم نمو الورم كما هو لا مختومة الجافية-الأم بعد حقن تعليق خلية 9،13،14. الخلايا دبقي قد تسرب فيالفضاء الجافية تحويل نموذج دبقي مثلي في احد منتبذ.
نموذج حيواني المقدمة هنا يتمثل في حقن كروي الخلايا دبقي الفلورسنت في القشرة المخية على عمق 200 ميكرون تليها ختم الجافية-الأم مع ربط عبر ديكستران هلام نصفي حبة والغراء histo متوافقة . ثم يتم تقييد نمو الورم إلى الدماغ حمة التي تحافظ على القيود المادية المرضية في جسم المريض. نافذة الزجاج المزمنة مزروع فوق الورم يسمح الوصول السهل البصرية لحيوي داخلي اثنين من الفوتون المجهري. استخدام الحيوانات المعدلة وراثيا معربا به نيون في خلايا الفائدة فمن الممكن لإجراء متابعة نمو دبقي مع مرور الوقت ودراسة تفاعلها مع المكروية لها (هنا مع الخلايا العصبية والأوعية الدموية مع أبرز dextrans الفلورسنت).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ كافة الإجراءات التجريبية وفقا للتشريعات الفرنسية وامتثالا لتوجيهات مجلس الجماعة الأوروبية من 24 نوفمبر 1986 (86/609/EEC) لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. وأذن البحوث على الحيوانات من قبل اتجاه DÉPARTEMENTALE قصر خدمات بيطريون قصر بوش دو رون (رخصة D-13-055-21) والتي وافقت عليها اللجنة الأخلاقية بروفانس كوت دازور رقم 14 (مشروع 87-04122012) .
1. إعداد الأجسام الشبه الكروية
- إعداد أطباق بتري المغلفة الاغاروز
- مزيج 1 غرام من الاغاروز مع 100 مل من مستنبت الخلية لا تستكمل مع مصل بقري جنيني. استخدام المايكرويف (850 واط لمدة 40 ثانية، ثم 3 × 15 ثانية؛ تحريك الحل في كل دورة بين الميكروويف) لغلي حل وتذوب تماما في الاغاروز. الأوتوكلاف هذا الحل الاغاروز 1٪ لمدة 20 دقيقة على 120 درجة مئوية لضمان STERI. lity ملاحظة: احرص على إذابة تماما قبل الاغاروز بروتوكول الأوتوكلاف. التجانس قد تعرض للخطر تشكيل الأجسام الشبه الكروية.
- مرة واحدة استردادها من الأوتوكلاف، صب 10 مل من محلول 1٪ الاغاروز في 100 × 20 مم أطباق بتري. مغادرة بيتري أطباق 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة للسماح الحل الاغاروز 1٪ ليصلب.
- إضافة 10 مل من برنامج تلفزيوني فوق الاغاروز للحفاظ على الرطوبة. ختم غطاء أطباق بتري المغلفة الاغاروز بواسطة التفاف عليها مع parafilm لتجنب التبخر. ويمكن تخزين أطباق بتري لمدة تصل إلى 2 أشهر في 4 درجات مئوية إذا مرطب بشكل صحيح من قبل طبقة برنامج تلفزيوني.
- ثقافة كروي
- في 75 سم 2 قارورة والثقافة الخلايا دبقي في المتوسط على النحو الموصى به من أحادي الطبقة.
- استبدال برنامج تلفزيوني من واحدة من 1٪ المغلفة الاغاروز طبق بتري بنسبة 1.5 مل من "متوسطة شروطا مسبقة" التي تم جمعها من القارورة التي تحتوي على أحادي الطبقة من الخلايا دبقي 2Dق.
- إزالة المتوسطة من القارورة التي تحتوي على أحادي الطبقة من الخلايا دبقي 2D.
- شطف بلطف أحادي الطبقة مع 10 مل من برنامج تلفزيوني.
- إضافة 2 مل من 0.05٪ من حل التربسين / EDTA واحتضان دقيقة قارورة 4 عند 37 درجة مئوية. ملاحظة: قد تختلف فترة حضانة وفقا لخط الخلية المستخدمة.
- إضافة 8 مل من مستنبت لوقف عمل التربسين، طرد بلطف تعليق الخلية ملاحظة: الحرص على عدم طرد الهواء في تعليق خلية لأنها تزيد موت الخلية.
- وضع 6 مل من تعليق خلية في قارورة معقمة.
- أجهزة الطرد المركزي القارورة 4 دقائق عند 800 دورة في الدقيقة.
- إزالة طاف وبلطف تعليق الرواسب خلية في 3 مل من مستنبت.
- البذور تعليق خلية في مغلف الاغاروز استعداد طبق بيتري.
- وضع طبق بتري عند 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 الغلاف الجوي لمدة 2 إلى 3 أيام حتى يتم تشكيل الأجسام الشبه الكروية من القطر المطلوب.
- إعداد نظام حقن
- الشعيرات الدموية زجاجي نظيف (1 مليمتر في القطر) بواسطة sonicating في الايثانول 70٪ لمدة 10 دقيقة. شطف مرتين مع وضع قبل المياه داخل حاضنة حتى تجف.
- سحب العديد من الشعيرات الدموية الزجاج تنظيفها مع مجتذب ماصة من أجل إعداد الأسهم الصغيرة.
- كسر غيض من الشعرية سحبت من قبل الخدش أقصى على قطعة من المناديل الورقية للحصول على أقصى مشطوف من الحجم المطلوب: عادة ما يكون قطرها الخارجي من 300-350 ميكرون وقطرها الداخلي من 250-300 ميكرون. أثناء هذه العملية تشكيل، والسيطرة على قطر الشعيرات الدموية باستخدام macroscope الذين مجهزة ميرا تخرج العين.
- ربط الطرف غير مشطوف من شعري لمشعب 3 طريقة باستخدام قطعة من الأنابيب البلاستيكية الذي يناسب القطر الخارجي للالشعرية القطر الداخلي.
- باستخدام توبين البلاستيكز، ربط اثنين من الطرق الأخرى لمشعب ل 25 ميكرولتر ميكروليتر حقنة وحقنة 1 مل محملة-histo متوافق الزيوت المعدنية.
- ضبط محدد متعددة لإنشاء ممر بين حقنة ميكروليتر وحقنة 1ML. نزع المكبس من المحاقن وحقن ميكروليتر الزيوت المعدنية الى الوراء في حقنة ميكروليتر حتى تتسرب عن طريق دفع المكبس من المحاقن 1ML. استبدال المكبس من المحاقن ميكروليتر مع الحرص على عدم ترك فقاعات الهواء في الأنبوب.
- ضبط محدد متعددة لإنشاء ممر بين الشعرية وحقنة 1 مل. ملء الشعرية مع الزيوت المعدنية حتى تتسرب من غيض مع الحرص على عدم ترك فقاعات الهواء في الأنبوب.
- ضبط محدد متعددة لتأسيس اتصال بين حقنة ميكروليتر والشعرية. طرد حوالي 10 ميكرولتر من الزيوت المعدنية.
- تراجع غيض الشعرية في حل PBSوباستخدام مقياس من حقنة ميكروليتر، وتمتص في 5μl من برنامج تلفزيوني في شعري. لاحظ أن الغضروف المفصلي بين النفط وPBS هي واضحة للعيان.
- إصلاح الشعرية على micromanipulator 3 محور المناسب تحت macroscope الجراحة. سيتم استخدام هذا النظام لاستهداف الشعرية إلى موقع الحقن تحت المراقبة البصرية.
- زرع كروي
- بخفة رزين الماوس عن طريق استنشاق isoflurane وفي غرفة الاستقراء (1.5٪ في الهواء أثناء 1-1،5 دقيقة).
- تخدير الحيوان مع حقن داخل الصفاق من مزيج من الكيتامين / زيلازين (120 ملغ / كغ و 12 ملغم / كغم). نلاحظ أن التخدير غالبا ما يقلل من درجة حرارة جسم الحيوان. فمن المستحسن المضي قدما في عملية جراحية في غرفة في 26 ° C وللحفاظ على الحارة الحيوان مع الكامنة thermocontrolled سادة التدفئة.
- تطبيق مرهم العين لتجنب جفاف العينين.
- يحلق فروة الرأس من الحيوان.
- مكانالحيوان في إطار المجسم باستخدام قضبان الأذن والمعبرة.
- تنظيف البشرة مع اليود البوفيدون (الصابون 3٪، ثم حل 10٪).
- إجراء شق طولي 1 سم طويلة في منتصف فروة الرأس مع مشرط. باستخدام مقص قطع وإزالة الجلد فوق العظام الجداري.
- بشفرة مشرط وإزالة بلطف والسمحاق فوق الجمجمة. تنطبق بسخاء فورية الغراء على الجزء العلوي من عظم لتوليد سطح خشن لتمسك الأسمنت في وقت لاحق.
- حفر العظم الجداري تحت macroscope الجراحية لتوليد حج القحف من 4 مم. إضافة بسخاء الجليد الباردة PBS تحتوي على Pencillin (1،000 U / مل) وStreptomicin (1 ملغ / مل) أثناء الإجراء بأكمله لمنع التدفئة. إزالة شظايا العظام الصغيرة مع ملقط وشاش معقم الرطب. رعاية لحفر ما لا يقل عن 1MM بعيدا عن الجداري الجمجمة الغرز لتجنب النزيف.
- رقيقة العظم في حدود حج القحف حيث سيتم اغلاق نافذة زجاجية. الهدف من ذلك هو البريدnsure في وقت لاحق لتحديد المواقع مستو من نافذة زجاجية مع سطح الاتصال القصوى بين الدماغ والزجاج. إزالة ببطء العظام باستخدام ملقط وتنظيف يتعرض الجافية-الأم مع الحل برنامج تلفزيوني.
- تأخذ 5 مم الجولة الزجاج ساترة، تنظيفه مع الكحول وجففها مع المناديل الورقية. محاولة استخدام ساترة بمثابة غطاء لحج القحف وتأكيد أن سطح مستو كبير من الدماغ يحصل في اتصال مع الزجاج. إذا لزم الأمر إزالة ساترة لمزيد رقيقة العظام الجانب. المضي قدما حتى الدماغ يمكن الحصول على تقلص مسطح إذا تطبيق الضغط بلطف على ساترة مرة واحدة في المكان.
- تنظيف مرة أخرى ساترة مع الكحول، وجففه مع المناديل الورقية، وحفظه بعيدا.
- مع إبرة قياس 26 جعل ثقب في الجافيه المحيط في مركز حج القحف بعد تجنب الأوعية الدموية الرئيسية. تأكد من عدم تلف الدماغ حمة حيث إن الغرض من هذه الخطوة هو مجرد لفتح الجافية-الأم.
- بلطف تنظيف واي الجافيه المحيطال PBS الحل لإزالة النزفية الدم. تغطية مع قطعة من المناديل الورقية أثناء إعداد حقن كروي.
- مع نظام حقن كروي أعدت في الخطوة 2.1، تمتص كروي الجولة المناسب القطر الداخلي الشعرية (حوالي 200-250 ميكرون) من طبق بيتري أعدت في الخطوة 1.2. كروي يجب أن تأتي جنبا إلى جنب مع ما يقرب من 5 ميكرولتر مستنبت. يجب أن تسقط لغيض من الشعرية تحت ثقلها.
- إزالة المناديل الورقية الرطبة تستخدم لتغطية حج القحف ووضع الحيوان تحت نظام حقن.
- خفض ماصة الحقن حتى يلمس ثقب المحرز في الجافيه المحيط. ثم، وانخفاض مرة أخرى بنسبة 250 ميكرون. انتظر 30 ثانية.
- حقن ببطء كروي باستخدام المكبس من المحاقن ميكروليتر (2-3 ميكرولتر)، في حين ضخ السائل الزائد مع قطعة رقيقة من المناديل الورقية. انتظر 30 ثانية ثم رفع بلطف ماصة الحقن بنسبة 50 ميكرون نحو السطح. الانتظار مرة أخرى 30 ثانية وrepeaر الإجراء رفع بخطوات من 50 ميكرون حتى السطح. فترات الانتظار يتجنب استخراج كروي التي من شأنها أن التمسك ماصة.
- تأكيد وجود كروي في الدماغ باستخدام macroscope مضان.
- مزيج 100-300 ميكرون قطر عبر ربط هلام حبات ديكستران مع حل PBS في طبق بتري. الانتظار 1min الأسماك وبعض حبات رطب. وضعها على العظام المجاورة للحج القحف.
- تحت السيطرة العيانية، واختيار حبة واحدة يبلغ قطرها مماثل لحجم الفتحة الجافيه المحيط. قطع عبر ربط ديكستران هلام حبة إلى نصفين باستخدام ملقط.
- بلطف وضعت عبر ربط هلام ديكستران نصفي حبة في حفرة حقن الوجه مع محدب نحو كروي. والحرص على عدم إزالة كروي واضغط برفق نحو الانخفاض حتى الحدود من مقعر الحصول على اتصال مع الجافية المحيطة-الأم.
- وضع قطرة من الغراء cyanoacrylate على شريحة زجاجية؛ تراجع غيض من المسواك في دروp لتأخذ كمية صغيرة من الغراء. ختم بسرعة حواف عبر ربط هلام ديكستران نصفي حبة لالمتاخمة الجافيه المحيط بواسطة الغراء ختم حولها. الحرص على أداء حركات سريعة ودقيقة من أجل تجنب الإلتصاق عبر ربط هلام ديكستران نصفي حبة إلى مسواك. تجنب الزائد من الغراء التي يمكن أن تنتشر وتعرقل إن لم يكن منع التصوير مرة واحدة المجففة. الانتظار 2 دقيقة للالغراء لتجف ومن ثم تنظيف حج القحف والعظام المحيطة بها مع الحل برنامج تلفزيوني.
- نافذة زرع
- وضع 5 مم الجولة ساترة فوق حج القحف (انظر 2.2.12). يجب أن تكون حواف ساترة على الجمجمة ضعيفة في الجزء الخارجي من حج القحف. يجب أن تكون ساترة في اتصال مع الجافية-الأم والعظام ضعيفة على الحواف. من المهم جدا أن يكون الاتصال المباشر بين الأم الجافية، وساترة الزجاج وإلا ندبا قد تعيق تطوير وضوح بصري.
- بمنديل، واستيعاب برنامج تلفزيوني على الحواف البريد ساترة بحيث الحل لا يغطي تماما حج القحف عند تطبيق ضغط صغيرة في وسط ساترة. وسوف يضمن هذا العظم والزجاج والدماغ يتم لصقها معا على جانب المنطقة من الفائدة.
- الحفاظ على ضغط صغيرة في وسط ساترة مع ملقط أثناء تطبيق بلطف فورية الغراء على الحدود بين العظام وساترة. سوف تنتشر الغراء عفويا حتى واجهة مع الحل برنامج تلفزيوني. والحل يكون بمثابة حاجز نظرا لللا مائية من الغراء. يجب أن يكون الختم فعالة في أقل من دقيقة ولكن اتخاذ الحذر الشديد بعدم نقل ساترة حتى يتم إصلاح ذلك. هذا من شأنه أن يؤدي خلاف ذلك في تسرب فورية الغراء على الجافيه المحيط وبالتالي يؤدي إلى فشل الجراحة.
- في حالة الغراء قد انتشر على رأس من الزجاج، إزالته باستخدام شفرة مشرط الصغيرة عن طريق القيام الحركات دوامة كما أنها قد تقلل خلاف ذلك الوضوح البصري. احترس لا لكسر الزجاج ساترة الزيتوز الإجراء بسبب الضغط المفرط.
- توطيد تثبيت الزجاج عن طريق تطبيق الاسمنت الأسنان على حواف ساترة نحو الجمجمة المجاورة. تأكد لتغطية الجمجمة يتعرض كله حتى فروة الرأس. باستخدام الاسمنت إضافية، وبناء الجدران الجانبية حول ساترة لخلق تجمع اللازمة لغمر الهدف. سوف الاسمنت الأسنان علاج في أقل من 10 دقيقة.
- الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية
- إزالة الماوس من إطار المجسم، وضخ Dexamethazon (0.2 ملغ / كلغ) وRimadyl (5 ملغ / كلغ) الشوري فوق منطقة الحوض ووضع لها في قفص مع دافئة الأنسجة العش.
- مراقبة الحيوان حتى اختفت آثار التخدير. بصفة عامة 2-3 ساعة بعد الجراحة، والفئران هي النقالة بشكل كامل. تأكد من أن الحيوانات لديها سهولة الوصول إلى الغذاء والماء. توفر الحيوان مع الاغاروز التي تحتوي على الجلوكوز (الاغاروز3٪، الجلوكوز 3٪).
- مراقبة وزن الحيوان كل يوم وحقن Dexamethazon (0.2 ملغ / كلغ) وRimadyl (5 ملغ / كلغ) الشوري لأول 10D بعد الجراحة. لاعتبارات أخلاقية، الموت ببطء الفئران عندما يتجاوز خسارة 15٪ من وزنه الأصلي. يزيد الضغط داخل القحف مع حجم الورم مما يؤدي إلى ضعف المحرك للحيوان. هذا هو الورم خط الخلية التابعة ويحدث في مختلف التأخير بعد الجراحة. وينبغي إيلاء عناية خاصة لتوصيف نقطة نهاية التجربة مع خط الخلية المستخدمة.
- التحضير للتصوير
- بخفة رزين الماوس عن طريق استنشاق isoflurane وفي غرفة الاستقراء (1.5٪ في الهواء لمدة 1-1،5 دقيقة).
- تخدير الحيوان مع حقن داخل الصفاق من مزيج من الكيتامين / زيلازين (100 ملغ / كغ و 10 ملغم / كغم). مثل هذا التخدير يسمح عادة 45 دقيقة من المراقبة. لتنفيذ جلسات التصوير لفترة أطول، يتم وضع الماوس تحت الاستنشاق المستمر للisoflurane وفيالهواء (0،25-0،75٪).
- تطبيق مرهم العين لتجنب جفاف العينين.
- وضع الحيوان على إطار المجسم ومنع الجمجمة مع earbars.
- لتصور الأوعية الدموية، صبغة الفلورسنت يمكن حقنه عن طريق الوريد.
- إذا يظهر إطار القذرة، ويمكن تنظيفها عن طريق إزالة بلطف الحطام بشفرة رقيقة وركن من الأنسجة. لا تستخدم الكحول لتنظيف النافذة كما أنها ليست دائما متوافقة مع الاسمنت الأسنان ويمكن أن يبرد الدماغ تحت النافذة.
2. كروي ونافذة زرع
3. العناية والتحضير لمرحلة ما بعد التصوير المنطوق
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
مرة واحدة يتم تنفيذ البروتوكول الجراحية (الشكل 1)، والحيوانات يمكن ملاحظتها من خلال المجهر الفلورسنت أكثر من أسابيع حتى التضحية. ويمكن ملاحظة تفاعل التهابي بعد الجراحة التي يختفي في غضون أسبوع أو أسبوعين. ويمكن ملاحظة نمو الورم عن طريق تقنيات مختلفة بما في ذلك الفحص المجهري الفحص العياني الفلورسنت واثنين من الفوتون المجهري (الشكل 2). تحققت مثل الصور صورت هنا على macroscope مضان المجهر واثنين من الفوتون إلى جانب الفيمتو ثانية ليزر الأشعة تحت الحمرا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا النهج يتيح استخدام أساليب التصوير الضوئي لرصد خلال الأيام والأسابيع نمو دبقي وهو مزروع orthotopically. في وقت لاحق يمكن أن تخضع لنفس الحيوان تقريبا أي طريقة تصوير الدماغ خلال علم الأمراض؛ بعد إعداد محددة اثنين من الفوتون المجهري يوفر فرصة فريدة لتحقيق قرار التحت خلوية داخل الدماغ من الحيوانات الحية. يقدم بروتوكول لدينا ميزة لفرض نمو الورم الدماغي في لحمة وليس خارج durally كما يحدث إذا الخلايا دبقي يمكن أن تترك الجهاز العصبي المركزي من خلال الجافية التالفة. في غياب القيود الجسد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
شكر وتقدير
المؤلفين أشكر بحرارة الدكتور KK Fenrich الدكتور MC. أمووريوإكس، P. ويبر وA. JAOUEN لإجراء مناقشات مفيدة؛ M. حسين، C. منير، M. متولي، S. Bensemmane، J. Bonnardel، وموظفي مرفق الحيوانية في IBDML وموظفي منصة التصوير PicSIL في IBDML للدعم التقني. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعهد الوطني للسرطان (إنكا-DGOS-INSERM6038) إلى GR، الوكالة الوطنية دي لا بحوث (ANR JCJC PathoVisu3Dyn)، الاتحاد من أجل لا بحوث سور لو Cerveau (FRC) لFD، من خلال المنح الدراسية من الاتحاد دي لا بحوث ميديكال وCancéropole PACA إلى CR.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Drill | Dremel (ألمانيا) | 398 | أي مثقاب عظام جراحي عالي الجودة يكفي |
| لدغ الحفر (# 1/4 كربيد دائري لدغ) | World Precision Instruments (الولايات المتحدة الأمريكية) | 501860 (# 1/4) | تباع أيضا بواسطة Harvard Apparatus |
| Tissue Scissors | World Precision Instruments (الولايات المتحدة الأمريكية) | 14395 | |
| Dumont tweezers M5S | World Precision Instruments (الولايات المتحدة الأمريكية) | 501764 | |
| أسمنت الأسنان | GACD (الولايات المتحدة الأمريكية) | 12-565 & 12-568 | |
| Cyanoacrylate | Eleco-EFD (فرنسا) | Cyanolit 201 | |
| الشعيرات الدموية الزجاجية بدون خيوط | كلارك للأدوات الطبية الكهروبية (المملكة المتحدة) | GC100-15 | |
| حقنة ميكرولتر (25 & micro; ل) | هاميلتون (الولايات المتحدة الأمريكية) | 702 | |
| أداة | عالمية للأجهزة الدقيقة (الولايات المتحدة الأمريكية) | اشتقاق Kite-R | |
| T (محبس ثلاثي الاتجاهات - قفل لور) | World Precision Instruments (الولايات المتحدة الأمريكية) | 14035-10 | |
| إطار تجسيمي (محول الماوس) | World Precision Instruments (الولايات المتحدة الأمريكية) | 502063 | |
| أغطية زجاجية | Warner Instruments (الولايات المتحدة الأمريكية) | CS-5R (64-0700) | |
| جل ديكستران متقاطع (Sephadex) G50 خشن 100-300 & micro; م الخرز | متوفر من مختلف الموردين بما في ذلك سيجما (ألمانيا) | ||
| مرهم العين | TVM (فرنسا) | Ocry-gel | |
| Fluorescence macroscope | Leica MZFLIII (ألمانيا) | تباع أيضا من قبل شركات أخرى | |
| مجهر ثنائي الفوتون | Zeiss LSM 7MP (ألمانيا) | تباع أيضا من قبل شركات أخرى (نيكون ، …) | |
| ليزر فيمتو ثانية قابل للضبط بالأشعة تحت الحمراء (Ma & iuml ؛ -Ta ï ؛) | Spectra Physics (الولايات المتحدة الأمريكية) | تباع أيضا من قبل شركات أخرى |
المراجع
- DeAngelis, L. M. Brain tumors. N Engl J Med. 344, 114-123 (2001).
- Ricard, D., et al. Primary brain tumours in adults. Lancet. 379, 1984-1996 (2012).
- Prados, M. D., et al. Phase III randomized study of radiotherapy plus procarbazine, lomustine, and vincristine with or without BUdR for treatment of anaplastic astrocytoma: final report of RTOG 9404. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 58, 1147-1152 (2004).
- Piao, Y., et al. Glioblastoma resistance to anti-VEGF therapy is associated with myeloid cell infiltration, stem cell accumulation, and a mesenchymal phenotype. Neuro Oncol. 14, 1379-1392 (2012).
- Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. Microglia/macrophages promote glioma progression. Glia. 59, 472-485 (2011).
- Studwell, A. J., Kotton, D. N. A shift from cell cultures to creatures: in vivo imaging of small animals in experimental regenerative medicine. Mol Ther. 19, 1933-1941 (2011).
- Ustione, A., Piston, D. W. A simple introduction to multiphoton microscopy. J Microsc. 243, 221-226 (2011).
- Ricard, C., et al. Short-term effects of synchrotron irradiation on vasculature and tissue in healthy mouse brain. J Synchrotron Radiat. 16, 477-483 (2009).
- von Baumgarten, L., et al. Bevacizumab has differential and dose-dependent effects on glioma blood vessels and tumor cells. Clin Cancer Res. 17, 6192-6205 (2011).
- Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nat Methods. 2, 932-940 (2005).
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J Vis Exp. , 680(2008).
- Lathia, J. D., et al. Direct in vivo evidence for tumor propagation by glioblastoma cancer stem cells. PLoS One. 6, (2011).
- Madden, K. S., Zettel, M. L., Majewska, A. K., Brown, E. B. Brain tumor imaging: live imaging of glioma by two-photon microscopy. Cold Spring Harb Protoc. 2013, (2013).
- Winkler, F., et al. Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis. Glia. 57, 1306-1315 (2009).
- Van Meir, E. G. Ch. 12. CNS Cancer, Cancer Drug Discovery and Development. , Humana Press. 227-241 (2009).
- Ulrich, T. A., de Juan Pardo, E. M., Kumar, S. The mechanical rigidity of the extracellular matrix regulates the structure, motility, and proliferation of glioma cells. Cancer Res. 69, 4167-4174 (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
