يصف تقريرنا طريقة فريدة لتصور وتحليل التفاعلات CTC / المفوضية الأوروبية في سرطان البروستاتا في ظل ظروف تدفق الفسيولوجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في الطريقة المختبر لمراقبة التفاعلات بوساطة selectin E-البروستاتا بين الخلايا السرطانية المنتشرة المستمدة من المرضى والبطانية الإنسان خلايا
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ورم خبيث هو العملية التي الخلايا السرطانية من الورم تسليط intravasate الوعائية الدموية الابتدائي والجهاز الليمفاوي، وبالتالي، الوصول إلى يتسرب وتشكيل مكانة ثانوية. وتسرب الخلايا السرطانية من الدم الأوعية الدموية يمكن دراستها باستخدام الخلايا البطانية (ECS) والخلايا السرطانية التي تم الحصول عليها من خطوط مختلفة من الخلايا. وأجريت الدراسات الأولية باستخدام ظروف ثابتة ولكنها قد تم توثيقه جيدا أن ECS تتصرف بشكل مختلف في ظل ظروف تدفق الفسيولوجية. لذلك، يتم استخدامها حاليا مختلف التجمعات غرفة التدفق لدراسة التفاعلات الخلايا السرطانية مع ECS. المجالس الحالية غرفة التدفق تقديم نتائج قابلة للتكرار سواء باستخدام خطوط مختلفة من الخلايا أو السوائل في مختلف ظروف إجهاد القص. ومع ذلك، لمراقبة ودراسة التفاعلات مع خلايا نادرة مثل الخلايا السرطانية المنتشرة (التدرجي)، يطلب من بعض التغييرات التي ينبغي إدخالها على التجمع التقليدي غرفة التدفق. التدرجيهي السكان الخلية نادرة بين الملايين من خلايا الدم. وبالتالي، فمن الصعب الحصول على السكان نقية من التدرجي. تلوث التدرجي مع أنواع مختلفة من الخلايا التي توجد عادة في التداول أمر لا مفر منه باستخدام تقنيات تخصيب الحاضر أو استنزاف. في هذا التقرير، ونحن تصف طريقة فريدة من نوعها لتسمية تعميم خلايا سرطان البروستاتا fluorescently ودراسة تفاعلاتها مع ECS في نظام غرفة التدفق الذاتي تجميعها. هذه التقنية يمكن تطبيقها كذلك لمراقبة التفاعلات بين التدرجي البروستاتا وأي بروتين من الفائدة.
المقدمة
ورم خبيث معقد عملية متعددة الخطوات التي لا تزال غير مفهومة تماما. وقد تبين محور يجند E-selectin/selectin للعب دورا هاما في الورم ورم خبيث من خلال تعزيز التفاعلات الأولية لاصقة بين بطانة الأوعية الدموية والخلايا السرطانية 1،2. البطانية (E)-selectin هو بروتين عبر الغشاء الذي أعرب عنه تنشيط الخلايا البطانية، في حين يتم التعبير عن مختلف يجند selectin E (ق) من قبل الخلايا السرطانية 3. وقد استخدمت العديد من النهج بنجاح في المختبر لنموذج التفاعلات يجند E-selectin/selectin بين الخلايا السرطانية والخلايا البطانية (ECS) 1. لدراسة هذه التفاعلات، يجري استخدام أنظمة مختلفة لمحاكاة غرفة تدفق الدم الأ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. التثقيف HUVECs على Microslides لرصد التفاعلات CTC-البطانية
- تحت غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة، وشطف أول شريحة مجهرية، عرض قناة من 1 ملم مع برنامج تلفزيوني. بلطف معطف شريحة مجهرية مع 200 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل فبرونيكتين (المنحلة في برنامج تلفزيوني) باستخدام حقنة 1 مل يور للانغلاق.
- تغطية شريحة مجهرية مع غطاء والحفاظ عليه داخل غطاء الثقافة الأنسجة لمدة 30 دقيقة. الاستغناء بطء السائل في شريحة مجهرية يمنع تشكيل فقاعة في القناة.
- يروي ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويبين الشكل 1 ثقافة O / N من أحادي الطبقة من ECS على شريحة مجهرية. وقشور على الشكل 1A تبين أن 100٪ من شريحة مجهرية غير مرئية باستخدام الهدف 5X بينما 70٪ غير مرئية باستخدام الهدف 10X (الشكل 1B). لE-selectin بوساطة التفاعلات، لا تعتبر خلايا المتداول عند الحواف مما يجعل أكثر من 70٪ من شريحة مجهرية المتاحة لتسجيل الفيديو والتحليل التشغيل. في تجربتنا، في البداية هذه الجمعية انشاء يحتاج إلى بعض الممارسات للثقافة أحادي الطبقة من ECS تحت .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويرجع ذلك إلى انخفاض عدد خلايا الدم بين التدرجي، فمن الصعب عزل التدرجي كما يبلغ عدد سكانها نقية من الخلايا. من أجل دراسة التفاعلات CTC / EC، السكان النادرة ونجس من التدرجي يطرح تحديين رئيسيين: أ) تحديد التدرجي بين خلايا الدم؛ ب) مراقبة التفاعلات CTC / EC.
للتغلب على القيد الأول لتحديد التدرجي البروستاتا بين خلايا الدم، اتخذنا الاستفادة من حقيقة أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الدكتور بندر هو مخترع على براءات الاختراع التي تم تعيينها لمؤسسة أبحاث كورنيل ("CRF") للأجسام المضادة J591 المستخدمة في هذه المقالة. الدكتور بندر هو مستشار لوتملك الأسهم في BZL الحيوية، وهي الشركة التي تم ترخيص براءات الاختراع التي كتبها CRF لمزيد من البحث والتطوير.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من خلال تمويل من وزارة الدفاع-البروستاتا برنامج أبحاث السرطان (W81XWH-12-1-0124)، U54CA143876 من المعهد الوطني للسرطان، وصندوق روبرت McCooey التناسلي الأورام البحوث. نود أن نشكر الدكتور Annarita لورنزو (قسم علم الأمراض) لتوفير الأجسام المضادة VE كادهيرين، والدكتور ماركو Seandel (قسم الجراحة) لتوفير HUVECs.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Microslide | Ibidi | 80331 | |
| Fibronectin | Millipore | FC010 | |
| أنابيب بلاستيكية | Cole Parmer | EW-96115-08 | |
| ذكر محول لور | GlycoTech | 31-001 | |
| أنثى محول لور | GlycoTech | 31-001 | |
| مضخة حقنة | Chemyx Inc | Fusion 100 | |
| حقنة Luer-lock | BD Biosciences | 309628 | |
| M199 المتوسطة | Sigma | M7653 | |
| Endothelial Mitogen | Biomedical Technologies | BT-203 | |
| HBSS | Sigma | H9269 | |
| Anti-PSMA J591-488 | Weill Cornell Medical College - مختبر أورام | ||
| Interleukin-1 beta | Peprotech | 200-01B | |
| Trypsin | Millipore | SM-2002-C | |
| Heparin | Sigma | H-3149 | |
| HUVECs Weill | Cornell Medical College-Department of Surgery | مقدمة من Marco Seandel | |
| VE-Cadherin | Santa Cruz | sc-5648 | |
| 10x الهدف | Zeiss Plan Neofluar | ||
| كاشف تفكك الخلايا الخالي من الإنزيم | Millipore | S-004-C | |
| RPMI-1640 | Lonza | 12-702-F | |
| Ficoll-paque بالإضافة إلى | GE الرعاية الصحية | 17-1440-02 |
المراجع
- Dimitroff, C. J., Lechpammer, M., Long-Woodward, D., Kutok, J. L. Rolling of human bone-metastatic prostate tumor cells on human bone marrow endothelium under shear flow is mediated by E-selectin. Cancer Res. 64, 5261-5269 (2004).
- Barthel, S. R., Gavino, J. D., Descheny, L., Dimitroff, C. J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
