مقالة منهجية

في الطريقة المختبر لمراقبة التفاعلات بوساطة selectin E-البروستاتا بين الخلايا السرطانية المنتشرة المستمدة من المرضى والبطانية الإنسان خلايا

DOI:

10.3791/51468

⸱

مايو 15, 2014

 ,  , 
1Department of Medicine, Weill Cornell Medical College, 2Department of Urology, Weill Cornell Medical College

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف تقريرنا طريقة فريدة لتصور وتحليل التفاعلات CTC / المفوضية الأوروبية في سرطان البروستاتا في ظل ظروف تدفق الفسيولوجية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورم خبيث هو العملية التي الخلايا السرطانية من الورم تسليط intravasate الوعائية الدموية الابتدائي والجهاز الليمفاوي، وبالتالي، الوصول إلى يتسرب وتشكيل مكانة ثانوية. وتسرب الخلايا السرطانية من الدم الأوعية الدموية يمكن دراستها باستخدام الخلايا البطانية (ECS) والخلايا السرطانية التي تم الحصول عليها من خطوط مختلفة من الخلايا. وأجريت الدراسات الأولية باستخدام ظروف ثابتة ولكنها قد تم توثيقه جيدا أن ECS تتصرف بشكل مختلف في ظل ظروف تدفق الفسيولوجية. لذلك، يتم استخدامها حاليا مختلف التجمعات غرفة التدفق لدراسة التفاعلات الخلايا السرطانية مع ECS. المجالس الحالية غرفة التدفق تقديم نتائج قابلة للتكرار سواء باستخدام خطوط مختلفة من الخلايا أو السوائل في مختلف ظروف إجهاد القص. ومع ذلك، لمراقبة ودراسة التفاعلات مع خلايا نادرة مثل الخلايا السرطانية المنتشرة (التدرجي)، يطلب من بعض التغييرات التي ينبغي إدخالها على التجمع التقليدي غرفة التدفق. التدرجيهي السكان الخلية نادرة بين الملايين من خلايا الدم. وبالتالي، فمن الصعب الحصول على السكان نقية من التدرجي. تلوث التدرجي مع أنواع مختلفة من الخلايا التي توجد عادة في التداول أمر لا مفر منه باستخدام تقنيات تخصيب الحاضر أو ​​استنزاف. في هذا التقرير، ونحن تصف طريقة فريدة من نوعها لتسمية تعميم خلايا سرطان البروستاتا fluorescently ودراسة تفاعلاتها مع ECS في نظام غرفة التدفق الذاتي تجميعها. هذه التقنية يمكن تطبيقها كذلك لمراقبة التفاعلات بين التدرجي البروستاتا وأي بروتين من الفائدة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورم خبيث معقد عملية متعددة الخطوات التي لا تزال غير مفهومة تماما. وقد تبين محور يجند E-selectin/selectin للعب دورا هاما في الورم ورم خبيث من خلال تعزيز التفاعلات الأولية لاصقة بين بطانة الأوعية الدموية والخلايا السرطانية 1،2. البطانية (E)-selectin هو بروتين عبر الغشاء الذي أعرب عنه تنشيط الخلايا البطانية، في حين يتم التعبير عن مختلف يجند selectin E (ق) من قبل الخلايا السرطانية 3. وقد استخدمت العديد من النهج بنجاح في المختبر لنموذج التفاعلات يجند E-selectin/selectin بين الخلايا السرطانية والخلايا البطانية (ECS) 1. لدراسة هذه التفاعلات، يجري استخدام أنظمة مختلفة لمحاكاة غرفة تدفق الدم الأوعية الدموية. بين تدفق المجالس الغرفة، ويستخدم بشكل روتيني موازية لوحة غرفة تدفق (PPFC) بالتزامن مع ECS باعتباره محاكاة في المختبر في ظروف إجهاد القص الجسم الحي الطراز. في هذاتزرع الأسلوب، ECS على طبق 35 ملم وبعد تحقيق أحادي الطبقة، هي التي تعلق ECS إلى PPFC ويتم تنفيذ تجارب إجهاد القص القائمة.

ومع ذلك، PPFC وغيرها من النظم الحالية تقديم الكثير من القيود لدراسة التفاعلات لاصقة بين الخلايا السرطانية المنتشرة (التدرجي) المستمدة من المرضى وECS، في المقام الأول، لأن التدرجي هي نادرة السكان من الخلايا، تسلط من الورم الرئيسي، تعميم بين الملايين من خلايا الدم (1 CTC في 10 9 خلايا الدم) 4. وبالتالي، على عكس العرض غير محدود من خطوط الخلايا المستزرعة، التهم CTC منخفضة تؤدي إلى عدد قليل جدا ونادرة التفاعلات CTC / EC، تتطلب المناسبة عرض القناة تدفق لتسجيل لتحليل التفاعلات التشغيل. بالإضافة إلى ذلك، منذ المريض التدرجي المستمدة من السكان نجس، لذلك لا بد من وضع علامة تحديد لتتبع التدرجي بشكل خاص. لحل هذه المشكلة، قمنا بتطوير طريقة جديدة لتحديد سرطان البروستاتا (PCA) CTخدمات العملاء من خلال الاستفادة من حقيقة أن جميع هذه التدرجي التعبير عن مستضد البروستات محددة غشاء (PSMA) على سطح الخلية الخاصة بهم 5،6. في هذا التقرير، استخدمنا خط الخلايا السرطانية في البروستاتا، MDA PCa2b (MDA)، للتدليل على فائدة محتملة من النظام الجديد لدينا لدراسة البروستاتا CTC التفاعل مع ECS، في نهاية المطاف إلى فهم آلية الانبثاث.

منهجيتنا يمكن تطبيقها على مختلف التجارب القائمة على محاكاة القص في نظام الأوعية الدموية فيفو 7-9. بالإضافة إلى دراسة التفاعلات PCA CTC / EC، ونظام غرفة التدفق الحالي يمكن تكييفها بسهولة لتحليل خلايا الدم المحيطية أو تفاعلات الخلايا السرطانية 'مع ECS. سهولة تفكيك وإعادة تجميع للغرفة التدفق، وهي شريحة مجهرية الثالث (0.1) (ويشار إليه فيما بعد ب شريحة مجهرية)، ويسمح زراعة ECS تحت نضح وتحفيز ECS مع السيتوكينات المختلفة للحث على العلاقات العامةotein التعبير. الى جانب ذلك، مثقف ECS، البروتينات المؤتلف مثل E-وف selectin يمكن أن تطلى على شريحة مجهرية والتفاعل مع الخلايا السرطانية يمكن ملاحظتها تحت ظروف تدفق الصفحي 10.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. التثقيف HUVECs على Microslides لرصد التفاعلات CTC-البطانية

  1. تحت غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة، وشطف أول شريحة مجهرية، عرض قناة من 1 ملم مع برنامج تلفزيوني. بلطف معطف شريحة مجهرية مع 200 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل فبرونيكتين (المنحلة في برنامج تلفزيوني) باستخدام حقنة 1 مل يور للانغلاق.
  2. تغطية شريحة مجهرية مع غطاء والحفاظ عليه داخل غطاء الثقافة الأنسجة لمدة 30 دقيقة. الاستغناء بطء السائل في شريحة مجهرية يمنع تشكيل فقاعة في القناة.
  3. يروي 200 ميكرولتر من الحارة (37 درجة مئوية) HUVEC النمو المتوسطة (M199 وسائل الإعلام، 1M HEPES، 20٪ FBS، 5 ملغ / مل الهيبارين، وعامل نمو الخلايا البطانية 100 ميكروغرام / مل، والجلوتامين L-) على شريحة مجهرية واحتضان ل 20 دقيقة في RT. خلال نضح، وإعداد تعليق خلية HUVEC.
  4. شطف HUVECs مع برنامج تلفزيوني وإضافة 0.05٪ التربسين EDTA-لمدة 1-2 دقيقة في RT. أجهزة الطرد المركزي في 2 HUVECs المتوسطة النمو مل في 180 x ج لمدة 5 دقائق.
  5. قياس تركيز الخلية باستخدام neubaعدادة الكريات اتحاد الاذاعات الأوروبية وإعداد 10 7 HUVEC cells/100 ميكرولتر النمو المتوسط. ثم، وإزالة بعناية متوسطة من مدخل لشريحة مجهرية باستخدام ماصة غيض 200 ميكرولتر.
  6. جلب شريحة مجهرية لمستوى العين واستخدام 1 مل حقنة ليور للانغلاق، يروي بلطف 200 ميكرولتر من تركيز استعداد للHUVECs في القناة. الحذر مطلوب في هذه الخطوة لمنع تشكيل فقاعة. إذا ظهرت فقاعات، والحفاظ على perfusing لفترة أطول قليلا حتى فقاعات دخول قناة منفذ.
  7. وضع حجم مساو (~ 80 ميكرولتر) من وسائل الإعلام HUVEC في كل من مدخل ومخرج للشريحة مجهرية. هذا يمنع تدفق الخلايا في أي من الاتجاهين.
  8. تغطية شريحة وابقائه في الحاضنة (37 درجة مئوية) لمدة 1.5 ساعة.

2. إعداد تدفق الجمعية غرفة ليلة وضحاها HUVEC الثقافة على شريحة مجهرية

  1. وضع حقنة معقمة 20 مل، وموصلات يور الإناث والذكور، وأنابيب، وضخ حقنة في الحاضنة لمدة 15 ميلن.
  2. الحد الأدنى من حجم القتلى، واستخدام أنابيب مع قطرها الداخلي 0.04 بوصة. أصغر قطرها أنابيب يمنع تشكيل فقاعة.
  3. ملء حقنة 20 مل مع دافئ (37 درجة مئوية) HUVEC وسائل الإعلام (12 مل). إرفاق أنابيب مع موصلات على حقنة. إزالة الفقاعات. ربط هذا التجمع إلى شريحة مجهرية.
  4. ملء تماما مدخل لشريحة مجهرية مع وسائل الإعلام HUVEC. جلب شغل حقنة 20 مل تعلق على موصل بجانب شريحة مجهرية. نعلق بلطف موصل إلى شريحة مجهرية.
  5. جلب مجموعة المتابعة في الحاضنة وتوصيله إلى ضخ حقنة، الغروب في 10 ميكرولتر / دقيقة معدل القص. ترك الخلايا O / N في الحاضنة عند 37 درجة مئوية.
  6. اليوم التالي، تفكيك مجموعة المتابعة عن طريق إزالة موصل تعلق على مدخل لشريحة مجهرية.
  7. لupregulate-E selectin التعبير على ECS، وإعداد متوسطة النمو الطازجة التي تحتوي على IL-1β في 10 نانوغرام / مل 4 مل في وسائل الإعلام. نضح في وسائل الإعلام حقنة 10 مل. إزالة روقال انه وسائل الاعلام من مدخل لشريحة مجهرية وتوصيل حقنة إلى الشريحة.
  8. تعيين ضخ حقنة في 10 ميكرولتر / دقيقة معدل القص لمدة 4 ساعة في الحاضنة.

3. إعداد مكافحة PSMA (J591-488) إعتبر خلايا سرطان البروستاتا

  1. خلال IL-1β حضانة HUVECs، وإعداد مكافحة PSMA J591-alexa488 صفت الخلايا محكمة التحكيم الدائمة. إضافة 0.05٪ التربسين EDTA-MDA إلى الخلايا لمدة 1 دقيقة. لا تعرض الخلايا إلى التربسين لمرات أطول لأنها يمكن أن تؤثر على glycopeptides موجودة على سطح الخلية. ويمكن أيضا انزيم تفارق الخلية الحرة كاشف أن تستخدم بدلا من التربسين. أجهزة الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 5 دقائق.
  2. في resuspend MDA بيليه خلية في 1 مل H / H العازلة (هانكس الملح متوازن solution/0.1٪ HSA/10 ملي HEPES / 1 مم CaCl 2). إضافة مضادة للPSMA-J591 alexa488 الأجسام المضادة في 20 ميكروغرام / مل لمدة 30 دقيقة في RT في مكان مظلم. resuspend الخلايا أثناء الحضانة.
  3. بعد 30 دقيقة، وأجهزة الطرد المركزي حل الخلية في 800 x ج لمدة 5 دقائق. ASPIمعدل و resuspend بيليه في 1 مل H / H العازلة. عد الخلايا MDA وصفت وجعل تركيز النهائي لالخلايا 1x10 6 / مل. ملء حقنة 5 مل مع J591-488 الخلايا MDA وصفت وإزالة الفقاعات.

4. إعداد مكافحة PSMA (J591-488) وصفت التدرجي المخصب من PCA المرضى

  1. جمع 7.5 ملليتر دم من مرضى سرطان البروستاتا في أنبوب الغطاء الأزرق (التي تحتوي على سترات الصوديوم). تمييع الدم برفق 01:01 في 0.1٪ BSA / 1 ملم EDTA / PBS.
  2. إضافة 5.3 مل Ficoll-paque زائد في أنبوب مخروطي 50 مل. طبقة مخففة الدم على رأس ficoll-paque. أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 30 دقيقة.
  3. ما قبل معطف جميع الأنابيب أو نصائح القادمة في اتصال مع التدرجي مع 2٪ FBS/RPMI-1640 / 1 مم CaCl 2/4 ملم MgCl 2 (R / S العازلة) لمنع غير محددة وملزمة من التدرجي إلى السطوح. 4 الحفاظ على درجة حرارة ° C وسائل الإعلام ومخازن القادمة في اتصال مع التدرجي.
  4. جمع المحيطية وحيدات النوى الدم الخلية (PBMCs) جزءتحتوي التدرجي من واجهة في أنبوب مخروطي 50 مل تحتوي على 30 مل أخرى R / S العازلة. أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 8 دقائق.
  5. resuspend الكرية ويغسل مرة أخرى في R / S عازلة في 400 x ج لمدة 8 دقائق. بعد الطرد المركزي، resuspend وبيليه في H / H العازلة. إضافة مضادة للPSMA J591-488 الضد في 20 ميكروغرام / مل لمدة 30 دقيقة في RT في مكان مظلم.
  6. بعد 30 دقيقة، وأجهزة الطرد المركزي والتي تحتوي على PBMCs J591-488 التدرجي وصفت في 800 x ج لمدة 5 دقائق. resuspend في H / H العازلة. ملء حقنة 1 مل (المغلفة مسبقا مع R / S العازلة) مع العينة.

5. إعداد المجهر، مضخة المحاقن وتدفق الجمعية غرفة

  1. بدوره على مجهر مقلوب وتعيين الإضاءة كولر في 10X الهدف. جلب ضخ حقنة في نفس مستوى المرحلة عينة من المجهر وضعه في 1 داين / سم 2 إجهاد القص (~ 10 ميكرولتر / دقيقة).
  2. افتح البرنامج زايس Axiovision. تحديد الهدف على شاشة الكمبيوتر. إنشاء لجنة جديدةمجلد تحت خيار الأدوات في البرنامج.
  3. فتح الخيار التجارب الذكية في Axiovision وضبط الإعدادات لتسجيل مقاطع الفيديو القصيرة 30 ثانية لمدة 30 دقيقة.
  4. للفيديو الفلورسنت الحية، وتعيين الخيارات-12 صورة ميللي ثانية التعرض، 2 × 2 بن، 5 صعود. هذه المعايير يساعد في تحقيق أشرطة الفيديو على مقربة من معدل إطار الفيديو (~ 23 لقطة في الثانية) مع الكاميرا زايس MRM.
  5. لتصور العرض الكامل للقناة تدفق في 10 X الهدف على شاشة الكمبيوتر، واستخدام محول C-جبل (0.63 ملم واجهة xf/60).
  6. التبديل على مصباح الزئبق.
  7. وضع حقنة والموصل التي تحتوي على الخلايا على ضخ حقنة.
  8. جلب IL-1β حفز HUVECs من الحاضنة. إرفاق موصل إلى مدخل قناة شغل من شريحة مجهرية تحتوي على HUVECs.
  9. ربط قناة منفذ مع موصل تعلق على الأنابيب. وضع أنابيب في طبق أو 15 مل أنبوب مخروطي لجمع تدفق من خلال.
  10. بدء infusiعلى طريق شريحة مجهرية في 10 ميكرولتر / دقيقة. مراقبة التفاعلات بين الخلايا البطانية وخلايا MDA المسمى أو المسمى التدرجي المستمدة من المرضى تحت التصفية 488 نانومتر على المجهر epifluorescence.
  11. بدء تسجيل التجربة إلى 30 ثانية أشرطة الفيديو القصيرة. خلال تحليل التشغيل، وقياس سرعة المتداول. يتم قياس سرعة المتداول عن طريق قسمة المسافة التي تقطعها الخلايا مع مرور الوقت.

6. المناعية للشريحة مجهرية

  1. إزالة وسائل الإعلام من مدخل ومخرج للشريحة مجهرية بعد perfusing الخلايا MDA على IL-حفز 1β HUVECs لمدة 10 دقيقة.
  2. باستخدام تلميح 200 ميكرولتر، وطرح دافئ (37 درجة مئوية) برنامج تلفزيوني يحتوي على الكالسيوم والمغنيسيوم في مدخل لشريحة مجهرية لمدة 5 دقائق. إمالة شريحة مجهرية باستخدام غطاء لها كدعامة على مقاعد البدلاء. الحفاظ على شريحة مجهرية في موقف يميل لجميع حضانات خلال المناعية.
  3. إصلاح HUVECs بواسطة perfusing الحارة 2٪ الفورمالديهايد في مدخل
    4. احتضان لمدة 20 دقيقة في RT. شطف مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  4. إضافة تريتون X-100 (0.1٪) في 5٪ BSA في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة في RT.
  5. شطف مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما. منع مع 5٪ BSA في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة.
  6. احتضان مع الأجسام المضادة الأولية الماعز المضادة للVE كادهيرين (1:100) في 2.5٪ BSA O / N عند 4 درجة مئوية.
  7. اليوم التالي، وغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما. إضافة حمار الثانوية المضادة للماعز 647 الضد لمدة 45 دقيقة. يغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  8. احتضان عند RT-J591 مع أنسنة alexa488 الضد مترافق لمدة 1 ساعة.
  9. يغسل مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق لكل منهما. إضافة دابي لمدة 5 دقائق. يغسل بالماء المقطر لمدة 5 دقائق.
  10. إضافة برنامج تلفزيوني (أو mowiol للتخزين طويل الأجل). تصور شريحة مجهرية تحت المجهر متحد البؤر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويبين الشكل 1 ثقافة O / N من أحادي الطبقة من ECS على شريحة مجهرية. وقشور على الشكل 1A تبين أن 100٪ من شريحة مجهرية غير مرئية باستخدام الهدف 5X بينما 70٪ غير مرئية باستخدام الهدف 10X (الشكل 1B). لE-selectin بوساطة التفاعلات، لا تعتبر خلايا المتداول عند الحواف مما يجعل أكثر من 70٪ من شريحة مجهرية المتاحة لتسجيل الفيديو والتحليل التشغيل. في تجربتنا، في البداية هذه الجمعية انشاء يحتاج إلى بعض الممارسات للثقافة أحادي الطبقة من ECS تحت ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرجع ذلك إلى انخفاض عدد خلايا الدم بين التدرجي، فمن الصعب عزل التدرجي كما يبلغ عدد سكانها نقية من الخلايا. من أجل دراسة التفاعلات CTC / EC، السكان النادرة ونجس من التدرجي يطرح تحديين رئيسيين: أ) تحديد التدرجي بين خلايا الدم؛ ب) مراقبة التفاعلات CTC / EC.

للتغلب على القيد الأول لتحديد التدرجي البروستاتا بين خلايا الدم، اتخذنا الاستفادة من حقيقة أ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الدكتور بندر هو مخترع على براءات الاختراع التي تم تعيينها لمؤسسة أبحاث كورنيل ("CRF") للأجسام المضادة J591 المستخدمة في هذه المقالة. الدكتور بندر هو مستشار لوتملك الأسهم في BZL الحيوية، وهي الشركة التي تم ترخيص براءات الاختراع التي كتبها CRF لمزيد من البحث والتطوير.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من خلال تمويل من وزارة الدفاع-البروستاتا برنامج أبحاث السرطان (W81XWH-12-1-0124)، U54CA143876 من المعهد الوطني للسرطان، وصندوق روبرت McCooey التناسلي الأورام البحوث. نود أن نشكر الدكتور Annarita لورنزو (قسم علم الأمراض) لتوفير الأجسام المضادة VE كادهيرين، والدكتور ماركو Seandel (قسم الجراحة) لتوفير HUVECs.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
MicroslideIbidi80331
FibronectinMilliporeFC010
أنابيب بلاستيكيةCole ParmerEW-96115-08
ذكر محول لورGlycoTech31-001
أنثى محول لورGlycoTech31-001
مضخة حقنةChemyx IncFusion 100
حقنة Luer-lockBD Biosciences309628
M199 المتوسطةSigmaM7653
Endothelial MitogenBiomedical TechnologiesBT-203
HBSSSigmaH9269
Anti-PSMA J591-488Weill Cornell Medical College - مختبر أورام
Interleukin-1 betaPeprotech200-01B
TrypsinMilliporeSM-2002-C
HeparinSigmaH-3149
HUVECs WeillCornell Medical College-Department of Surgeryمقدمة من Marco Seandel
VE-CadherinSanta Cruzsc-5648
10x الهدفZeiss Plan Neofluar
كاشف تفكك الخلايا الخالي من الإنزيمMilliporeS-004-C
RPMI-1640Lonza12-702-F
Ficoll-paque بالإضافة إلىGE الرعاية الصحية17-1440-02
المسالك البولية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dimitroff, C. J., Lechpammer, M., Long-Woodward, D., Kutok, J. L. Rolling of human bone-metastatic prostate tumor cells on human bone marrow endothelium under shear flow is mediated by E-selectin. Cancer Res. 64, 5261-5269 (2004).
  2. Barthel, S. R., Gavino, J. D., Descheny, L., Dimitroff, C. J. Targeting selectins and selectin ligands in inflammation and cancer. Expert Opin. Ther. Targets. 11, 1473-1491 (2007).
  3. Konstantopoulos, K., Thomas, S. N. Cancer cells in transit: the vascular interactions of tumor cells. Annu. Rev. Biomed. Eng. 11, 177-202 (2009).
  4. Nagrath, S., Sequist, L. V., Maheswaran, S., Bell, D. W., Irimia, D., Ulkus, L., et al. Isolation of rare circulating tumour cells in cancer patients by microchip technology. Nature. 450 (7173), 1235-1239 (2007).
  5. Mannweiler, S., Amersdorfer, P., Trajanoski, S., Terrett, J. A., King, D., Mehes, G. Heterogeneity of prostate-specific membrane antigen (PSMA) expression in prostate carcinoma with distant metastasis. Pathol. Oncol. Res. 15 (2), 167-172 (2009).
  6. Tagawa, S. T., Milowsky, M. I., Morris, M. J., Vallabhajosula, S., Christos, P. J., Akhtar, N. H., et al. Phase II study of lutetium-177 labeled anti-prostate-specific membrane antigen (PSMA) monoclonal antibody J591 for metastatic castration-resistant prostate cancer. Cancer Res. , (2013).
  7. Ganguly, A., Zhang, H., Sharma, R., Parsons, S., Patel, K. D. Isolation of human umbilical vein endothelial cells and their use in the study of neutrophil transmigration under flow conditions. J. Vis. Exp. (66), 10-3791 (2012).
  8. Moss, M. A., Zimmer, S., Anderson, K. W. Role of metastatic potential in the adhesion of human breast cancer cells to endothelial monolayers. Anticancer Res. 20, 1425-1433 (2000).
  9. Wiese, G., Barthel, S. R., Dimitroff, C. J. Analysis of physiologic E-selectin-mediated leukocyte rolling on microvascular endothelium. J Vis Exp. 24, (2009).
  10. Gebauer, F., Wicklein, D., Stubke, K., Nehmann, N., Schmidt, A., Salamon, J., et al. Selectin binding is essential for peritoneal carcinomatosis in a xenograft model of human pancreatic adenocarcinoma in pfp--/rag2-- mice. Gut. 62 (5), 741-750 (2013).
  11. Giavazzi, R., Foppolo, M., Dossi, R., Remuzzi, A. Rolling and adhesion of human tumor cells on vascular endothelium under physiological flow conditions. J. Clin. Invest. 92 (6), 3038-3044 (1993).
  12. Remuzzi, A., Giavazzi, R. Adhesion of tumor cells under flow. Adhesion Protein Protocols. Dejana, E., Corada, M. 96, Humana Press. 153-157 (1999).
  13. Liu, H., Moy, P., Kim, S., Xia, Y., Rajasekaran, A., Navarro, V., et al. Monoclonal antibodies to the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen also react with tumor vascular endothelium. Cancer Res. 57 (17), 3629-3634 (1997).
  14. Jung, B., Obinata, H., Galvani, S., Mendelson, K., Ding, B. S., Skoura, A., et al. Flow-regulated endothelial S1P receptor-1 signaling sustains vascular development. Dev. Cell. 23 (3), 600-610 (2012).
  15. Yin, X., Rana, K., Ponmudi, V., King, M. R. Knockdown of fucosyltransferase III disrupts the adhesion of circulating cancer cells to E-selectin without affecting hematopoietic cell adhesion. Carbohydr. Res. 345 (16), 2334-2342 (2010).
  16. Carman, C. V., Springer, T. A. A transmigratory cup in leukocyte diapedesis both through individual vascular endothelial cells and between them. J Cell Bio. 167 (2), 377-388 (2004).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Prostate Circulating Tumor CellsE selectin ExpressionFlow Chamber AssemblyEndothelial Cell CulturePSMA Antibody LabelingVideo Microscopy AnalysisRolling Velocity MeasurementShear Stress ConditionsInterleukin One BetaFibronectin Coating

مقالات ذات صلة