Method Article

جمع وعزل، وتحليل تدفق Cytometric العينات باطن عنق الرحم الإنسان

DOI:

10.3791/51906

⸱

July 6th, 2014

 ,  ,  , 
1Department of Medical Microbiology, University of Manitoba, 2Department of Community Health Sciences, University of Manitoba

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد استخدام أخذ عينات الفرشاة الخلوية لجمع الخلايا الليمفاوية والخلايا الوحيدة من باطن عنق الرحم تقنية طفيفة التوغل توفر عينات لتحليل مناعة الجهاز التناسلي الأنثوي. في هذا البروتوكول ، نصف جمع عينات الفرشاة الخلوية وعزل الخلايا المناعية لمقايسات قياس التدفق الخلوي.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من أهمية الصحة العامة لمسببات الأمراض المخاطية (بما في ذلك فيروس نقص المناعة البشرية) ، لا يعرف سوى القليل نسبيا عن المناعة المخاطية ، خاصة في الجهاز التناسلي الأنثوي (FGT). نظرا لأن انتقال العدوى بين الجنسين يمثل الآن الآلية المهيمنة لانتقال فيروس نقص المناعة البشرية ، وبالنظر إلى الانتشار المستمر للأمراض المنقولة جنسيا (STIs) ، فمن الأهمية بمكان فهم التفاعل بين المضيف والممرض في الغشاء المخاطي للأعضاء التناسلية. ترجع الفجوات الكبيرة في المعرفة حول مناعة FGT جزئيا إلى صعوبة جمع عينات الغشاء المخاطي ومعالجتها بنجاح. من أجل تسهيل الدراسات ذات حجم العينة الكافي ، يجب أن تكون تقنيات التجميع طفيفة التوغل وفعالة. تحقيقا لهذه الغاية ، تم تحسين بروتوكول لجمع عينات الفرشاة الخلوية لعنق الرحم والعزل اللاحق لخلايا عنق الرحم أحادية النواة (CMC). باستخدام التنميط المناعي القائم على قياس التدفق الخلوي خارج الجسم الحي ، من الممكن تحديد ترددات الخلايا الليمفاوية / الخلايا الوحيدة CMC وأنماطا ظاهرية بدقة وموثوقية. يمكن أن تقترن هذه التقنية بمجموعة غسل عنق الرحم المهبلي (CVL) ، والتي تحتوي على وسطاء مناعي قابل للذوبان بما في ذلك السيتوكينات والكيموكينات ومضادات البروتياز ، وكلها يمكن استخدامها لتحديد البيئة المضادة للالتهابات أو المؤيدة للالتهابات في المهبل.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

غالبية الإصابات الجديدة بفيروس نقص المناعة البشرية في جميع أنحاء العالم من خلال نقل تنشأ الغيرية، وتمثل النساء 47٪ من الإصابات الجديدة في عام 2011 (برنامج الأمم المتحدة المشترك 1). فهم المسالك التناسلية للإناث (FGT)، واحدة من بوابات الدخول الرئيسية لفيروس نقص المناعة البشرية وغيره من مسببات الأمراض التي تنتقل بالاتصال الجنسي، له أهمية كبيرة على طريق إيجاد استراتيجيات فعالة لمنع العدوى. الاستجابات المناعية في الغشاء المخاطي التناسلية بشكل واضح فريدة من نوعها وتختلف عن تلك التي قيست في الدم المحيطي 2. ومع ذلك، والمعرفة الحالية لديناميات المناعة في FGT يقتصر في أحسن الأحوال. حتى الآن، ركزت دراسات البيئة المنا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاق: أخلاقيات البحوث لوحات كل من جامعة مانيتوبا ومستشفى كينياتا الوطني / جامعة نيروبي وافقت على هذه الدراسة وتم الحصول على الموافقة المسبقة الخطية من جميع المشاركين في الدراسة.

1. إعداد وسائل الإعلام وأنابيب جمع CMC

  1. إعداد الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) حل (137.93 ملي مول كلوريد الصوديوم، 2.67 ملي بوكل، 8.1 ملي نا 2 هبو 4، 1.47 ملي KH 2 PO 4). الأوتوكلاف للعقم. هذا ويمكن تخزينها في 4 درجة مئوية لمدة عدة أشهر.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التدفق الخلوي Multiparameter هو أداة قوية لتشريح الظواهر وظائف فرعية الخلايا في الأنسجة uncharacterized سابقا. تحليل عينات CMC يمكن أن تسفر عن معلومات عن كل من اللمفاويات والوحيدات السكان مع استراتيجيات النابضة المناسبة.

ممثل استراتيجية النابضة CMC، مقارنة الشخصي PBMC المتطابقة، هو مبين في الشكل 2. وFSC-A مقابل FSC-H مؤامرة يسمح لاستبعاد الحلل الخلية، والتي تنتشر بشدة في عينات CMC مقارنة PBMC، حت.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نظرا للفجوات كبيرة في المعرفة فيما يتعلق بالحصانة في المسالك التناسلية للإناث (FGT)، ويمكن تحليل المظهري من المجالس البلدية للأطفال توفر مجموعة واسعة من نظرة ثاقبة السكان اللمفاويات متعددة في عنق الرحم. إلى جانب تحليل البروتين والقياسات الحمل الفيروسي في غسل عنق الرحم، والحصانة للإصابة بالأمراض المنقولة جنسيا (STI) ق ومسببات الأمراض الأخرى يمكن تشريح في مختلف السكان.

الاعتبارات التقنية - المجالس البلدية ل.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يود المؤلفون أن يشكروا جوشوا كيماني ، المدير السريري لبرنامج الأبحاث في جامعة نيروبي ، على مساعدته في دراسات المناعة المخاطية المتعلقة بهذا البروتوكول. يود المؤلفون الإقرار بالتمويل من منحة CHVI MOP 86721.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
100 مو ؛ مصفاة خلية m لأنبوب فالكون 50مل BD352360CMC معالجة
RPMI 1640معالجة HycloneSH30027.01CMC
مصل الأبقار الجنينيتقنية الحياة16000044معالجة CMC
تقنية FungizoneLife15290-018معالجة
CMC معالجة البنسلين / الستربتومايسينSigmaP4333-20mlCMC
50 مل أنبوب الصقرفيشر14-959-49ACMC معالجة
بنك الدم ماصة نقل يمكن التخلصمنها فيشر13-711-6MCMC معالجة
الفرشاة الخلوية بالإضافة إلىCooper الجراحيةC0121CMC
العينات مكشطة عنق الرحم التي يمكن التخلص منهاالطبيةالسريعة 2183CMC
أخذ العينات 15 مل أنبوب الصقرفيشر14-959-70cمعالجة CVL
1.5 مل أنبوب EppendorfFisher05-402-18تخزين CVL
LIVE / DEAD Fixable Cell StainKit Invitrogenكاشف قياس التدفقالخلوي
المختلف المخزن المؤقت للتثبيت (4٪ PFA)BD554655قياس التدفق الخلوي regeant
ماوس IgG ماوسSigmaI8765مقياس التدفق الخلوي regeant
أخذ

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. UNAIDS. Global Report 2013. http://www.unaids.org/en/media/unaids/contentassets/documents/epidemiology/2013/gr2013/UNAIDS_Global_Report_2013_en.pdf. , (2013).
  2. Rodriguez-Garcia, M., Patel, M. V., Wira, C. R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cervical Mononuclear CellsFlow Cytometry AnalysisCytobrush Sample CollectionCervical Vaginal LavageCell Isolation ProtocolImmunophenotyping TechniqueLymphocyte Monocyte PopulationsHIV Susceptibility ResearchFemale Genital TractPeripheral Blood Controls

Related Articles