واستخدمت 3.5 كجم لهذا الإجراء - ثلاث إناث الأرانب نيوزيلندا الشهر القديمة وزنها 2.5. تم إجراء الدراسة وفقا للمعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام حيوانات التجارب وبموافقة لجنة رعاية الحيوان في كانتون برن، سويسرا (الموافقة رقم 105/13). أجريت جميع العمليات الجراحية تحت ظروف معقمة في معهد جراحة التجريبية قسم البحوث السريرية في مستشفى جامعة برن في برن، سويسرا. وطبيب التخدير البيطري مراقبة الحيوانات أثناء الجراحة وطوال الانتعاش.
1. إعداد الحيوانية، وتحديد المواقع الترقوة القسطرة الشريان
- لحث على التخدير العام في الأرنب مع الحقن العضلي الكيتامين (30 ملغ / كغ. Ketalar، 50 ملغ / مل) وزيلازين (6 ملغ / كغ. Xylapan 20 ملغ / مل) وعمق سيطرة التخدير عن طريق فحص استجابة الأرنب إلى ضارة تحفيز الجهأيون (مثل قرصة أخمص قدميه). انظر 1.7 في حالة الرد الإيجابي.
- هدم الجفن السفلى من كلتا العينين وتطبيق كمية صغيرة من مرهم على الجفون لمنع جفاف وتهيج المزيد.
- يقثطر الوريد الأذن الجانبي مع 20 Gbutterfly venflon (20 G قسطرة الأوعية الدموية)، وتحديد بشريط لاصق، والاتصال حقيبة الجاذبية التي تحتوي على 0.9٪ كلوريد الصوديوم (500 مل / 24 ساعة) والكيتامين (40 ملغ / كغ / ساعة) / زيلازين (4 ملغم / كغم / ساعة) عن طريق الوريد مستمر (د) التخدير. إدارة المسكنات الإضافي الرابع كل 15 دقيقة (الفنتانيل، 1 ميكروغرام / كغ). ملاحظة: تجنب التخدير الغاز المتقلبة، الذي يرتبط مع انخفاض CPP، وزيادة البرازيلي، وخفض معدل الأيض الدماغي للأوكسجين توفر 11 التخدير في الوريد خصائص أكثر مثالية لبتخدير الأعصاب من خلال الحفاظ على الاتحاد البرازيلي وتضيق الأوعية الدماغية، 12 التي تكتسي أهمية العلوي عند دراسة الشلل. بالتشنج. وبالإضافة إلى ذلك، يتم زيادة على الرغم من وفيات في مذكورة عفوياaneously التنفس الحيوانات، قد تحاكي أفضل للوضع الإنساني من SAH الحاد.
- توفير الأكسجين (1 - 2 لتر / دقيقة) عن طريق قناع التنفس التي تسمح ثاني أكسيد الكربون نهاية المد والجزر (اتكو 2) الرصد.
- تثبيت 3 قناة الكهربائي (ECG). مكان ثلاثة أقطاب تحت الجلد في الترتيب الثلاثي على الجانب البطني للأرنب. على وجه التحديد، وضع قطب كهربائي واحد على المنطقة midthoracic الصحيحة (مع المسافة إلى مجال معقم للحلق الشريان تحت الترقوة القسطرة) وقطبين في أسفل البطن موزعة على كل من أطرافه.
- رصد عمق التخدير كل 15 دقيقة أثناء الجراحة باتباع معدل التنفس ومعدل ضربات القلب (HR) رصدت من إشارة تخطيط القلب، وكرد فعل على التحفيز الضارة.
- في حالة استجابة إيجابية لتحفيز الضارة (قرصة أخمص قدميه)، تكييف عمق التخدير بواسطة الكيتامين بلعة (6 ملغ / كلغ) وزيلازين الرابع بلعة (0.05 ملغ / كلغ) رابعا و / أو البلعة تسكين إضافية مع الفنتانيل (1 مولوديةجم / كجم) د
- إصلاح أرنب في موقف ضعيف على لوحة ظاهرة الاحتباس الجسم، وإمالة الرأس إلى أسفل 20 درجة وتحويله contralaterally قليلا إلى الجانب الذي سوف يتعرض الشريان تحت الترقوة.
- تطبيق مرهم العين وإعداد المنطقة لعملية جراحية من قبل حلق الشعر على العضلة الصدرية الصحيحة حول الثلث الأوسط من الترقوة، وأكثر من الجمجمة frontal-، parietal- والقفوية، والرقبة، وأكثر من حق الشريان الفخذي المشترك.
- تطهير الجلد لمدة 3 دقائق مع طائفة واسعة مطهر، على سبيل المثال، بوفيدون اليود.
- تغطية الأرنب مع أوراق معقمة. أداء جميع إجراءات أخرى تحت ظروف معقمة وكثيرا تطبيق 4٪ papaverin حمض الهيدروكلوريك وحل المضادات الحيوية (بالنيوميسين سلفات 5 ملغ / مل) موضعيا لمنع بالتشنج الشرياني عن طريق التلاعب السفينة والتهابات المحلية.
- اختراق العضلات الصدرية مع مخدر موضعي (ليدوكائين 1٪ القصوى 6 ملغ / كلغ). وجعل شق الجلد المجاور للقص وإعدادالعضلات الصدرية. باستخدام المجهر، تشريح الشريان تحت الترقوة وتأمين مع الداني والقاصي ضمد (4-0 الغرز polyfilament) حول نهاية المكشوفة. الحفاظ على واحد ربطة قريب من السيطرة القريبة من مكان لتأمين القسطرة وligate السفينة بشكل أقصى.
- إجراء بضع الشريان في جدار الشريان تحت الترقوة من عمل قطع في الشريان مع microscissor منحنية ويقني؛ يدخل القنية الشريان تحت الترقوة retrogradely مع intravasal صغيرة 3 في اتجاه ومحبس. تأمين القسطرة بواسطة ربطة عقدة مزدوجة تجاه ربطة البعيدة من أجل منع التواء الشرايين أو الانحناء من الجزء القريب من الشريان وتجنب الانزلاق أو النزيف الهائل.
2. ضغط الدم الشرياني الدم ورصد الغاز
- ربط 3 في اتجاه وقف الديك إلى i) قنية intravasal للغاز الدم الشرياني (ABG) تحليلات، ودرجة الحموضة، باكو 2، باو 2، بيكربونات، فائض قاعدة، وSO 2، ب) في الدم الشرياني الغازيةجهاز قياس الضغط، والثالث) الجهاز تحويلة.
- جمع عينات الدم للحصول على مركز ABG (باكو 2، باو 2) ورصد مستمر المعلمات القياسية القلب والأوعية الدموية والجهاز التنفسي (ضغط الدم، والموارد البشرية، تخطيط القلب، معدل التنفس ونهاية المد CO 2) ونقل البيانات عبر واجهة الانتاج التناظرية إلى analog- تحويل الرقمي / مسجل بيانات وتخزينها.
ملاحظة: سيتم ركزت الضغوط على مستويات القلب قبل وبعد كل دورة، وسوف يتم معايرة ضغط التناظرية / الرقمية وتحويل نظام تسجيل البيانات مرة واحدة قبل بدء هذه السلسلة.
3. الأساس الرقمية الطرح تصوير الأوعية الدموية
- وضع جهاز التحجيم الخارجي (كرة صغيرة) على كل زوايا الفك السفلي من أجل معايرة وعائية.
ملاحظة: هذا يسمح المقارنة الدقيقة لآخر خاصة قياسات خط الأساس ومتابعة قطر السفينة. - أداء الأوعية الطرح الرقمي (DSA) من الوراء داخل وrterial حقن البلعة من غير الأيونية Iopamidol (0.6 مل / كجم، 5 مل / ثانية لمدة 2 ثانية) من خلال الشريان مقنى وطرد قنية فورا بعد حقن بلعة مع المياه المالحة لمنع انسداد الأخير.
- الحصول على الصور (7 صور في 14 ثانية) من نظام فقري قاعدي باستخدام تصوير الأوعية تسجيل متسلسل السريع في وضع مائل 5 ° الأيسر الأمامي.
- اختراق المنطقة حول الحق في الشريان الفخذي مشترك مع مخدر موضعي (ليدوكائين 1٪، القصوى 6 ملغ / كلغ). جعل صغير الإربي شق الجلد. باستخدام المجهر لتصور، تشريح الشريان الفخذي المشترك وتأمين مع الداني والقاصي ضمد (4-0 الغرز polyfilament) حول نهاية المكشوفة.
- بعد بضع الشريان، يقني؛ يدخل القنية الشريان الفخذي مع غمد 5-F. مسح الميناء جانب من غمد مع المياه المالحة.
- دفع القسطرة 5-F في الشريان العضدي الرأسي من خلال غمد تحت التنظير. وضع خريطة طريق، ثم دفع سلك دليل إلى النظام البريد فقري قاعدي. حقن البلعة من غير الأيونية Iopamidol (0.6 مل / كجم، 5 مل / ثانية في 2 ثانية) لDSA كما هو موضح في الخطوة 3.2.
4. تناوب على موقف المعرضة
- التالية DSA الأساسي، إعادة الأرنب من مستلق لموقف المعرضة. يجب الحرص على عدم التلاعب أو تغيير موقف القسطرة داخل الشرايين.
- وضع الرأس في صاحب الرأس في زاوية 30 درجة، الموجهة الرأس إلى أسفل.
5. صهريج ماجنا البزل
- تطهير الجلد على الرأس والرقبة مع بوفيدون 3 مرات لمدة 1 دقيقة لكل منهما، وتغطية المنطقة الجراحية مع أوراق معقمة.
- إدراج 22 × 40 مم G الأطفال الوصول الشوكي إبرة transcutaneously في صهريج ماجنا دون أي شق الجلد مسبق أو النزوح العضلات.
- تأكد من أن الحيوان هو تخدير كامل من خلال ضمان عدم وجود استجابة أخمص القدمين قرصة قبل انزلاق الإبرة أسفل على طول نتوء عظمي القذالي الخارجيحتى يتم الكشف عن وجود فجوة. لا تدفع الإبرة إلى أبعد من ذلك.
- تأكيد الموضع الصحيح للإبرة من خلال مراقبة نازف عفوية من السائل النخاعي مع رئيس الأرنب يميل إلى أسفل في زاوية 20 درجة لمدة دقائق قليلة.
6. تركيب الضغط داخل الجمجمة ومراقبة تدفق الدم الدماغي
- بعد الجلد خط الوسط شق والخوذة، إدراج ضام الجراحية الصغيرة.
- جعل ثلاثة خزوعات عظمية جولة (2 مم) باستخدام microdrill عالية السرعة في الجزء الأمامي من الجمجمة وفقا لمعالم الجمجمة الخارجي (الشكل 1) 9، أي أكثر من البصلة الشمية وأمامي ثنائي لوضع جهاز neuromonitoring إذا لزم الأمر. استخدام مسطرة مقياس ملليمتر لتحديد الإحداثيات للدغ حفرة التنسيب على النحو التالي: الضغط داخل الجمجمة (ICP) مراقبة في خط midpupillary، 1-2 مم من خط سهمي ناصف. intraparenchymal تحقيقات الليزر دوبلر4-5 ملم الأمامي والجانبي إلى bregma (الشكل 1).
- تصور الجافية، وأداء الإرقاء الدقيق: استخدام الشمع العظام لالإرقاء العظام بحكم العمل دكاك وأداء الإرقاء المحلي باستخدام التخثر بين القطبين من الجافية.
- وضع intraparenchymal الضغط داخل الجمجمة (ICP) رصد معلومات سرية إلى البصلة الشمية الصحيحة على عمق 2 ملم ومن ثم معايرة.
- وضع تحقيقات إبرة رفيعة وهما الليزر دوبلر flowmetry باستخدام نظام المشبك الخارجي وإدراجها في الثقوب لدغ المقابلة في كل من نصفي الكرة اليمين واليسار الأمامي الوحشي للنظام البطيني، أي في خط الوسط لتفادي أي تشويش مع السائل المخي الشوكي. وضع تحقيقات إبرة إلى عمق 2.5 ملم.
- بعد وضع تحقيقات neuromonitoring، وختم جميع الثقوب لدغ مع المكونات سميكة من الشمع العظام من اجل الحفاظ على الجمجمة السائل محكم.
- قياس البارامترات الأساسية من متوسط ضغط الدم الشرياني (MAP)، برنامج المقارنات الدولية وتدفق الدم الدماغي (البرازيلي) باستخدام جهاز multiparameter وأربع قنوات الأنسجة الليزر دوبلر مراقبة نضح الدم.
7. التحويلة التعريفي
- ربط الحصول إبرة في العمود الفقري في صهريج ماجنا إلى الشريان تحت الترقوة مقسطر سابقا عبر مراقبة ضغط أنابيب مملوءة بالدم. استخدام 3 في اتجاه ومحبس لقياس ضغط الدم وكميناء أخذ عينات الدم.
ملاحظة: شدة SAH تعتمد على كمية من الدم، ويمكن أن يقدرها واتساع جلطات تحت العنكبوتية في وقت الحصاد الدماغ 5،11. - باستمرار مراقبة MAP، الموارد البشرية، تخطيط القلب، معدل التنفس ونهاية المد CO 2 بمعدل أخذ العينات من 1 هرتز في الفترة من 6 حتى 20 دقيقة قبل دقيقة على الأقل بعد SAH.
- تأكد من أن الحيوان هو تخدير كامل من خلال ضمان عدم وجود استجابة قرصة أخمص قدميه قبل فتح تحويلة اتصال بين الشريان تحت الترقوة والصهريج الكبير للحث SAH قبل gradie الضغطالإقليم الشمالي.
ملاحظة: يمكن تحقيق SAH تسيطر عليها إغلاق تحويلة في أي نقطة زمنية (على سبيل المثال، في المستوى المطلوب من ICP). - تسجيل قيم حالة مستقرة خلال فترة زمنية تقريبا 15 دقيقة.
- بعد ICP تصل ذروتها، والحفاظ على الوصول إبرة في العمود الفقري في مكان حتى يعود ICP إلى حالة ثابتة قريبة من القيم الأساسية. إذا تم الحفاظ على هضبة ICP لأكثر من 10 ثانية أو إذا ICP يقلل بشكل عفوي، إغلاق تحويلة.
- إزالة البرازيلي تحقيقات غرامة إبرة وICP التحقيق، سد الثقوب لدغ بالشمع العظام، وإزالة جميع القسطرة (بما في ذلك القسطرة تحت الترقوة، حيث يرتبط التلاعب القسطرة مع نزيف التوالي مع ارتفاع معدلات المراضة والوفيات، ويزيد معدل الإصابة)، نفذ الدقيق الري الجرح سلفات النيوميسين وخياطة الجلد.
8. إدارة ما بعد الجراحة
- يستمر هذا الإجراء لمدة 2 ساعة. نظرا لأعمار النصف من الكيتامين وزيلازين، ووقت الشفاء من أنيماl غير قصيرة جدا - حوالي 1 ساعة. يتم الاحتفاظ الحيوانات تحت مصباح التدفئة خلال الانتعاش. لا يتم توفير سوائل إضافية. خلال هذه المرحلة التعافي بعد الجراحة الأولية، وتطبيق البوبرينورفين 0.02 مغ / كغ كل 8 الشوري ساعة لمدة 24 ساعة.
- تطبيق الفنتانيل عبر الجلد بقع مصفوفة الإفراج 12.5 ميكروغرام / ساعة في منطقة الرقبة حلق من الحيوانات لتسكين فعال خلال ساعة 72 المقبلة.
- لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه أنه كاف للحفاظ على الاستلقاء القصية.
- لا عودة الحيوان الذي خضع لعملية جراحية في الشركة من الحيوانات الأخرى حتى تعافى تماما.
9. متابعة الرقمية الطرح تصوير الأوعية الدموية لتقييم DCVS في يوم 3
- تنفيذ الخطوات 1،1-3،6 كما هو موضح أعلاه.
- الموت ببطء الحيوانات الشرياني حقن البلعة من thiopenthal الصوديوم (40 ملغ / كغ) (Pentothal، Ospedalia AG، Hünenberg، سويسرا). في الحالات التي تكون فيها الأنسجة وimmunohistوهناك حاجة ochemistry، إجراء داخل القلب نضح-RT في تثبيت عند ضغط التروية من 100 سم H 2 O.