يجب أن تكون الأخلاق المؤسسية الوطنية والمحلية المناسبة في المكان قبل تنفيذ التجارب على الحيوانات. وتحديدا في المملكة المتحدة أجريت التجارب التالية تحت الحيوانات (الإجراءات العلمية) قانون 1986. أين هما microsurgeons المتاحة للعمل في وقت واحد الجراح المانحة يجب تنفيذ الخطوات 1،1-1،16 ثم 3،1-3،5، بينما الجراح يقوم المتلقي 2،1-2،8 . لمشغل واحد الخطوات يمكن اتباعها بالتسلسل.
1. المانحة إعداد
ملاحظة: الإجراء المقدمة هنا هو لالمانحة C57BL / 6 BM12 والمتلقي C57BL / 6 الفئران الذكور الذين تتراوح أعمارهم بين 8 إلى 16 أسابيع من العمر مع وزن الجسم أكبر من 20 غراما. بيد أن هذا الإجراء لا يمكن أن يؤديها بتكاثر على مجموعة متنوعة من سلالات الماوس. تم الحصول على البيانات المقدمة في قسم نتائج ممثلة من C57BL / 6، C57BL / 6 BM12 وBALB / ج الفئران.
- إجراءات سير النقيبز الأدوات الجراحية المعقمة والمواد الاستهلاكية (تعقيمها)، مع المساعي للحفاظ على منطقة التشغيل معقمة قدر الإمكان. أداء إعداد المانحين بالتزامن مع إعداد المتلقي إذا نوعان من الجراحين المتاحة.
- تخدير الفأر مع حقنة داخل الصفاق (31G إبرة) من medetomidine (0.5 ملغ / كلغ) والكيتامين هيدروكلوريد (200 ملغ / كغ). هذه النتائج في طائرة التخدير التي يتم الاحتفاظ لمدة 4 ساعة توفير ما يكفي من الوقت لإجراء العملية كلها التي يتعين القيام بها. التخدير التكميلي ليست ضرورية.
- تأكد من أن الفأر هو إفقاد إحساس (أي استجابة لقرصة أخمص قدميه).
- حلق البطن الماوس وإزالة أي الشعر فضفاض مع شريط لاصق.
- ضع الماوس على ظهرها على حصيرة ساخنة رايات sterilely وفضفاضة لشل حركة أطرافه مع معقم اخفاء الشريط.
- مراقبة الماوس في جميع أنحاء الداخلي للحروق الحرارية. إذا أمكن استخدام مصدر حرارة غير كهربائي.
- تطبيق مواد التشحيم العين وساnitize جدار البطن بمحلول مخفف من اليود.
- جعل شق خط الوسط في البطن لدخول التجويف البريتوني وإدراج 3 سم Calibri ضام البطن.
- تطبيق المالحة استعد للحفاظ على الأمعاء ومنطقة الجراحية رطبة وتجنب تجفيف لزوم لها من الأحشاء.
- تغطية الماوس مع الستائر معقمة وتحريك الأمعاء إلى اليسار المشغل (يمين الماوس) لفضح الشريان الأبهر، الوريد الأجوف والكلية اليسرى.
- تطبيق forcep صعد إلى المعدة وسحب متفوق لفضح السفن الكبرى والكلية اليسرى بالكامل. حزمة مسحات معقمة رطبة (2 ملم × 2 ملم) في البطن لسحب الأنسجة بعيدا عن المنطقة الجراحية، مثل فصوص الكبد، والحويصلات المنوية، والأمعاء.
- عزل الكلية اليسرى من adventia المحيطة والدهون والغدة الكظرية اليسرى في التجويف البريتوني عن طريق تشريح بصراحة النسيج الضام باستخدام ملقط غيض غرامة. وضع نصائح مغلقة من ملقط بين المناطق التي شمال شرقإد لفصلها والسماح ببطء نصائح forcep لفتح لتشريح الفضاء.
- عزل الوريد الكلوي الأيسر من ligating ثم تقسيم اليسار الوريد الكظرية والغدد التناسلية مع ترك الوريد 9 / O النايلون. وضع خياطة قريبة من الوريد الكلوي.
- Ligate وتقسيم الحالب مع 7 / O الحرير خياطة قريبة من المثانة ترك خياطة تنتهي طويلة. وسوف تستخدم هذه الغايات خياطة طويلة عندما يتم حصاد الكلى والتي تكون ضرورية لمفاغرة الحالب.
- تعبئة وتشريح الشريان الأورطي بالكامل والوريد الأجوف متفوق وأدنى من الشريان والوريد الكلوي استخدام ملقط غيض غرامة لتشريح بصراحة الأوعية اللمفاوية والدهون من الأمام والجانبين من السفن.
- العثور على طائرة الأنسجة بين الشريان الأبهر والوريد الأجوف وتنتشر ببطء ملقط. فتح ببطء نصائح من الرؤوس ملقط غرامة لنشر الأنسجة مع الحد الأدنى من الصدمة.
- ربط فضفاضة 7 / O الحرير حول الشريان الأورطي متميز وأقل شأنا من الشريان الكلوي عن طريق تمرير غرامة الزاويةالملقط تلميح حول الجزء الخلفي من السفن ورسم خياطة من خلال. سيتم تشديد هذه الغرز قبل استرجاع الكلى للسماح نضح الوراء من جامعة ويسكونسن الحل.
2. مستلم إعداد
وفقا لمتابعة إعداد المانحة الخطوات 1،2-1،8.
- تحريك الأمعاء إلى اليمين المشغل (يسار الماوس) لفضح الشريان الأبهر، الوريد الأجوف. تغطية الأمعاء مع ملحي معقم غارقة مسحة.
- إجراء استئصال الكلية اليمنى بواسطة ligating الشريان الكلوي الأيمن والوريد مع 7/0 الحرير خياطة ثم تقسيم.
- Ligate الحالب الأيمن مع 7 / O خياطة الحرير والانقسام.
- تعبئة وتشريح الشريان الأورطي بالكامل والوريد الأجوف السفلي إلى الشريان الكلوي والوريد كما هو موضح في الخطوة 1.14 و 1.15. ضمان تشريح كامل بين الشريان الأبهر والوريد الأجوف. العناية للحفاظ على الشريان المنوي الداخلي الذي يمتد الأمامي إلى الوريد الأجوف وaortوجنبا إلى جنب مع حزمة اللمفاوية.
- تحديد السفن قطني تعمل في الحيز خلف الصفاق من الوريد الأجوف والوريد إلى العمود الفقري، مع ligate 9 / O الحرير في الاستمرارية، وليس هناك حاجة لتقسيم السفن.
- تحديد مساحة كافية لوضع المشابك الاوعية الدموية الدقيقة مع الفضاء بين لanastomoses الأوعية الدموية.
- إدارة الهيبارين عن طريق الحقن الوريدي (5 وحدات) عن طريق الوريد الظهري القضيب.
3. المانحة الكلى استرجاع
تشديد العلاقات الحرير 7 / O التي وضعت حول الشريان الأورطي أدنى وأعلى لعزل الكلى من التداول الشرياني.
- لبث الوراء الباردة 0،2-0،5 مل من جامعة ويسكونسن حل مع إبرة (31G) في الشريان الأورطي.
- تقسيم الشريان الأورطي داخل الغرز وتقسيم الوريد الكلوي في تقاطع مع الوريد الأجوف لإزالة الكلى والشريان الكلوي بطول الشريان الأبهر. تقسيم السفن أسفل الظهر الناتجة عن الشريان الأبهر، إذا كانت موجودة، ثithout ربط.
- وضع الكلى في المياه المالحة الباردة على مسحة معقمة في صحن الثقافة.
- الموت ببطء الماوس المانحة خلع عنق الرحم.
4. زرع الكلى - إعداد الكلى
- تهيئة التصحيح الأبهر بقسمة جدار الشريان الأورطي طوليا مباشرة قبالة الشريان الكلوي. تحديد أي شمعة سفينة في التصحيح التي يجب تجنبها و ligated أو عند إجراء مفاغرة شريانية.
- وضع خياطة 10 / O من الخارج إلى داخل التجويف الوريد الكلوي متفوق وخياطة منفصلة الثانية دون المستوى. الغرز المستخدمة لتقسيم الوريد الكظرية والغدد التناسلية الوريد يمكن استخدامها لتوجيه السفينة.
- وضع الكلى في الجهة اليمنى من المتلقي (الشكل 1.1)، وضمان وضع الغرز جيدا لضمان anastomoses الأوعية الدموية يمكن أن تكتمل دون أن تصبح خيوط تتشابك في مسحات أو غيرها من الصكوك.
5. الكلى Transplanالكساء - التحام الأوعية الدموية
تطبيق المشابك الاوعية الدموية الدقيقة الأولى دون المستوى ثم متفوق تشمل الوريد الأجوف والشريان الأورطي.
- جعل ventomy بإبرة (31G) من خلال ثقب في الجدار الأمامي من الوريد الأجوف. تدفق الدم من الوريد الأجوف عن طريق ضخ ما يقرب من 50 ميكرولتر من كلوريد الصوديوم 0.9٪.
- توسيع فصد باستخدام ملقط غيض غرامة من خلال فتح لهم داخل فصد بحيث يكون طول ما يعادل قطر الوريد الكلوي المانحة.
- وضع خياطة متفوقة 10 / O (التي هي بالفعل في تجويف الوريد الكلوي) لأول مرة في ذروة فصد (الشكل 1.2) والانضمام إلى الجدار الخلفي للمفاغرة في خياطة تشغيل حتى يتم الوصول إلى قمة أدنى (الشكل 1.3).
- وضع 10 / O خياطة رديئة وربطة عنق أولا مع عقدة واحدة (الشكل 1.4) ثم ادراك التعادل لخياطة يمتد من الحائط الخلفي.
- باستخدام خياطة أدنى خلق وول الأماميلتر من مفاغرة (الشكل 1.5) مع خياطة تشغيل وربطة عنق حتى نهاية خياطة متفوقة على قمة أعلى (الشكل 1.6).
- إنشاء بضع الأبهر عن طريق التقاط جدار الشريان الأورطي مع ملقط وقطع التصحيح بيضاوي الشكل مع مقص (ما يقرب من بضع الأبهر يجب أن تكون خمس محيط الشريان الأورطي وثلاث مرات لمعة الشريان الكلوي في الطول).
- وضع 10 / O خياطة عند نقطة متفوقة من التصحيح الأبهر من الخارج إلى الداخل (الشكل 1.7) ويمر عبر الشريان الأورطي إلى التعادل خارج الأوعية في ذروة أعلى من بضع الأبهر.
- إنشاء مفاغرة شريانية مع خياطة تبدأ تشغيل متفوق (الشكل 1.8) anastomosing التصحيح المانحة إلى الشريان الأورطي المتلقي، والحرص على عدم تقليص مفاغرة من خلال ربط الخيط ضيقة جدا (الشكل 1.9).
- إزالة المشابك الأوعية الدموية أدنى أولا ثم المشبك متفوقة على reperfuse الكلى (الرقم 1.10 و 1.11). التمعج المرئي من الحالب ينظر ربما لو يتحقق يكفي من الدم إلى الحالب.
6. زرع الكلى - التحام الحالبي
- تقسيم أي مرفقات المثانة من جدار البطن.
- تمرير إبرة (21G) من اليسار إلى اليمين من المثانة عن طريق كل الجدران.
- وضع نصائح forcep متتالية في التجويف إبرة وتمرير كل مرة أخرى من خلال المثانة بحيث ملقط تمر الآن من اليمين إلى اليسار من الجانب الأيسر من المثانة.
- رسم خياطة على المانحين من خلال الحالب المثانة بحيث يمر الحالب في المثانة الخلل الأيسر ثم من الجانب الأيمن.
- خياطة البرانية من الحالب إلى المثانة البرانية مع ثلاثة خيوط متقطعة واحدة حول نقطة الدخول مع 9 / O النايلون خياطة على إبرة ذهابا وجسديا.
- قطع الحالب الأقرب إلى ضمد، مما فتح الالبريد الحالب للسماح لتدفق البول والسماح للنهاية الحالب ليتراجع إلى الجسم من المثانة. ويمكن ملاحظة إنتاج المرئي من البول مع نزيف من شبه الحالبي السفن.
- إغلاق الصحيح الخلل الجانب المثانة مع واحدة انقطاع 9 / O خياطة الحرير.
7. الإنعاش والعناية بعد الجراحة
استبدال الأحشاء الهضمي في البطن في توجهها الأصلي وإغلاق جدار البطن عن طريق تقريب العضلات المستقيمة مع 6 / O خياطة للامتصاص.
- تقريب الجلد مع الجلد مقاطع معدنية.
- عكس جزئيا التخدير مع الحقن تحت الجلد من هيدروكلوريد atipamazole (10 ميكرولتر / ز).
- إدارة التسكين تحت الجلد بواسطة هيدروكلوريد البوبرينورفين (0.05 ملغ / كلغ) ودعم للحقن السوائل تحت الجلد 1 مل من كلوريد الصوديوم 0.9٪.
- استرداد الماوس في خزانة ارتفاع درجة حرارة عند 28 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة. مراقبة الماوس للمرض حتىالانتهاء من التجربة.
- إزالة مقاطع جلد معدن 7 - 10 أيام مرحلة ما بعد الجراحة.
- وبمجرد اكتمال التجربة الموت ببطء الماوس عن طريق خلع عنق الرحم.
- إزالة وجمع الكلى المقابل وطعم خيفي للتحليل النسيجي.