الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا لدراسة مناعة الرفض. قدم النموذج الجراحي تقارير عن وقت تشغيل قصير وتقنية موجزة. اعتمادا على تركيبة سلالة المتبرع والمتلقي ، قد تصاب الكلية المزروعة برفض خلوي حاد أو تلف الطعم الخيفي المزمن ، والذي يتم تحديده من خلال التليف الخلالي وضمور أنبوبي.

الملخص

لا يزال رفض الكلى المزروعة في البشر سببا رئيسيا للمراضة والوفيات. يكرر نموذج الفأر لزراعة الكلى عن كثب كل من العمليات التقنية والمرضية التي تحدث في زراعة الكلى البشرية. على الرغم من وجود نماذج الفئران للرفض الخيفي في أعضاء أخرى غير الكلى ، وهي أكثر جدوى من الناحية الفنية ، إلا أن هناك أدلة على أن الأعضاء المختلفة تثير أنماط وديناميكيات رفض متباينة ، على سبيل المثال يختلف المسار الزمني للرفض في الطعم الخيفي للقلب والكلى اختلافا كبيرا في مجموعات سلالة معينة. هذا النموذج هو أداة جذابة لأسباب عديدة على الرغم من تحدياته التقنية. نظرا لأن الأنماط الفردانية لسلالة الفئران الفطرية تتميز جيدا ، فمن الممكن اختيار مجموعات المتبرعين والمتلقين لنمذجة رفض الطعم الخيفي الحاد عن طريق الزرع عبر مواقع معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الأولى والثانية. على العكس من ذلك ، من خلال الزرع بين السلالات ذات الأنماط الفردانية المتشابهة ، يمكن استنباط عملية مزمنة إذا أصيبت الكلية الخيفية بالتليف الخلالي وضمور أنبوبي. لقد قمنا بتعديل التقنية الجراحية لتقليل وقت التشغيل وتحسين سهولة الجراحة ، ولكن لا يزال يتعين التغلب على منحنى التعلم من أجل تكرار النموذج بأمانة. ستوفر هذه الدراسة نقاطا رئيسية في الإجراء الجراحي وتساعد في عملية إنشاء هذه التقنية.

المقدمة

وكان أول وصف زرع الكلى الناجحة لعلاج الفشل الكلوي في عام 1955 بين التوائم الزيجوت ^1، منذ ذلك الحين أصبح علاج الثورية لمرضى الفشل الكلوي في نهاية المرحلة في جميع أنحاء العالم، وتقدم كل من التحسن في طول ونوعية الحياة ^2. ومع بقاء الكسب غير المشروع على المدى الطويل قد تعوقها العديد من العمليات المرضية مما أدى إلى أضرار المزمن طعم خيفي ^3.

رفض الكلى المزروعة في البشر لا يزال سببا رئيسيا للاعتلال، على الرغم من التحسينات الكبيرة في نظم immunosupporessive. والهدف من تطوير نموذج الفأر من زرع الكلى هو تكرار عن كثب عملية وعلم الأمراض الموج....

البروتوكول

يجب أن تكون الأخلاق المؤسسية الوطنية والمحلية المناسبة في المكان قبل تنفيذ التجارب على الحيوانات. وتحديدا في المملكة المتحدة أجريت التجارب التالية تحت الحيوانات (الإجراءات العلمية) قانون 1986. أين هما microsurgeons المتاحة للعمل في وقت واحد الجراح المانحة يجب تنفيذ الخطوات 1،1-1،16 ثم 3،1-3،5، بينما الجراح يقوم المتلقي 2،1-2،8 . لمشغل واحد الخطوات يمكن اتباعها بالتسلسل.

1. المانحة إعداد

ملاحظة: الإجراء المقدمة هنا هو لالمانحة C57BL / 6 ^BM12 والمتلقي C57BL / 6 الفئران الذكور الذين تتر....

النتائج

يمكن تقييم الرفض طعم خيفي كلوي عن طريق التحليل النسيجي جزءا لا يتجزأ من البارافين أقسام الأنسجة الثابتة methacarn من زرع الكلى (الشكل 2). زرع الكلى طعم إسوي بين النتائج الفئران مسانج في الكلى إصابة إعادة إشباع الخلايا الدماغية، ولكن قبل 4 أسابيع وانتعشت الأنابيب وقابلة للمقارنة تشريحيا إلى الكليتين الأصلية. الرفض الحاد يمكن أن تكون على غرار بواسطة C57BL / 6 زرع الكلى في المتلقين BALB / ج، في حدود 1 في الاسبوع هو منتشر هناك تسلل خلية وحيدة النواة في جميع أنحاء حمة .......

المناقشة

الطريقة الأكثر موصوفة وصفا جيدا لإجراء مفاغرة شريانية هو استخدام الأبهر القاصي من الجهات المانحة، مع الشريان الكلوي في استمرار، بطريقة نهاية إلى جانب الشريان الأورطي إلى المتلقي. وصفنا استخدام التصحيح الأبهر، على غرار النسخ المتطابق "كاريل التصحيح" التي أجريت في زرع الكلى البشرية التي نعتقد أن تكون أكثر ملاءمة. على الرغم من التقارير في الأدب من الجهات المانحة والمتلقية الوقت المنطوق هي متفرق نعتقد أن استخدام التصحيح الأبهري إلى الشريان الأبهر المتلقي بدلا من الشريان الأو.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
الأدوات الجراحية
مقص تشريح حاد	أدوات العلوم الدقيقة	14072-10	لقطع الجلد
مقص Castoviejo المنحني	أدوات العلوم الدقيقة	15017-10	لقطع الأنسجة
مقص زنبركي & أدوات العلوم الدقيقة المستقيمة		15000-08	لقطع الخياطة
ملقط مسنن 1x2 أسنان	أدوات العلوم الدقيقة	11021-12
2 × ملقط طرف ناعم (دومون رقم 5)	أدوات العلوم الدقيقة	11251-20
ملقط ذو طرف ناعم بزاوية (دومون رقم 5/45)	أدوات العلوم الدقيقة	11253-25	للتشريح الحاد
ملقط المنحني ذو الطرف الدقيق (دومون رقم 7)	أدوات العلوم الدقيقة	11273-22	مفيد لتمرير الأوعية
الدقيقة	المنحنية	1300-04
مشبك صغير مع قفل	أدوات العلوم الدقيقة	18056-14
2 × عرض الزنبرك الصغير 2 مم ، طول الفك 4 مم	أدوات العلوم	الدقيقة 18055-04	مشابك الأوعية الدموية الدقيقة
2 × Colibri 3 سم ضام الأسلاك	أدوات العلوم الدقيقة	17000-03
حامل إبرة Castroviejo مع قفل	أدوات العلوم	الدقيقة 120660-01
قضيب مشبك الجرح	أدوات العلوم الدقيقة	12031-07
الجرح 7 مم	العلوم الدقيقة أدوات	12032-07	قم بإزالة 7 إلى 10 أيام بعد الجراحة
مجهر OPMI pico	Carl Zeiss	S100
وحدة الكي الحراري بطرف رفيع	Geiger	150A
وسادة إلكترونية حرارية	Cozee Cumfort	n / a
Euroklav 23-S	Melag	n / a	Autoclave
يمكن التخلص منها المعدات
7 / O خياطة مضفرة من الحرير	بيرسال	30514
10 / O خياطة دافيلون (بولي أميد)	B-Braun	& nbsp ؛ G1118099
6 / O Vicryl (plygalectin)	Ethicon	W9537
إبرة مخروطية عادية ، 1 بوصة ، 21G	Bection ، Dickinson and Company	305175	لتراجع الحالب
إبرة مخروطية عادية ، 5/8 بوصة ، 25G	Bection ، Dickinson and Company	305122
إبرة مخروطية عادية ، 1/2 بوصة ، 30G	Bection ، Dickinson and Company	304000
إبرة الأنسولين 1 مل ، 29 جرام	بيكشن ، ديكنسون وشركاه	324827
إبرة الأنسولين 0.3 مل ، 30 جرام	بيكيون ، ديكنسون وشركاه	324826
1 مل طرف حقنة	بيكشن ، ديكنسون وشركاه	300184
مسحات ورقية ويبال	كيمبرلي كلارك	L40	معقم بواسطة الأوتوكلاف
براعم الصوف القطني	جونسون آند جونسون	غير معقمة	بواسطة الأوتوكلاف
ستائر عادية	Guardian	CB03	معقمة بواسطة الأوتوكلاف
طبق ثقافة الخلية 60 مم × 15 مم	كورنينج إنكوربوريتد	430166
الاستغناء عن دبوس	B-Braun	DP3500L / 413501	يستخدم مع كلوريد الصوديوم 0.9٪
إعادة العوامل والأدوية
(Lacri-Lube) البارافين الأبيض الناعم 57.3٪ ، الزيوت المعدنية 42.5٪ وكحول اللانولين 0.2٪	Allergan Ltd	21956GB10X
(Videne) Povidone-iodine 10٪	Ecolab Ltd	PL 04509/0041
(Vetalar V) هيدروكلوريد الكيتامين	Pfizer Animal Health	VM 42058/4165	محلول 100 مجم / مل (جرعة 200 مجم / كجم)
(Domitor) ميديتوميدين هيدروكلوريد   ؛	أوريون فارما	VM 06043/4003	1 مجم / مل (جرعة 0.5 مجم / كجم)
(طبيب بيطري) بوبيرنورفين هيدروكلوريد   ؛	Alsto Animal Health	VM 00063/4002	0.3 مجم / مل (جرعة 0.05 مجم / كجم)
(مضاد للسيدان) أتيبامزول هيدروكوريد	أوريون فارما	VM 06043/4004	5 مجم / مل (جرعة 2 مجم / كجم)
حل جامعة ويسكونسن	بيلزر بريدج تو لايف	ن	/ جرعة حوالي 500 ميكرولتر / فأر
كلوريد الصوديوم 0.9٪	باكستر	FKE1323
كبريتات الهيبارين	غير مملوكة	غير متوفر	5000 وحدة / مل (جرعة 5 وحدات / فأر)

أدوات العلوم قضيب مقاطع < td colspan = "4" > معدات 5 مل طرف حقنة بيسيون ، ديكنسون وشركاه 302187