نصف بروتوكولا لعزل الخلايا التائية المقيمة في الجلد بكفاءة عن خزعات جلد الإنسان. ينتج عن هذا البروتوكول أعداد كافية من الخلايا الليمفاوية المقيمة في جلد الإنسان القابلة للحياة لتحليل قياس التدفق الخلوي والثقافة خارج الجسم الحي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
عزل الخلايا اللمفاوية من الجلد البشري لتحليل المظهري و
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الجلد البشري لديه وظيفة حاجز الهامة ويحتوي على العديد من الخلايا المناعية التي تساهم في توازن الأنسجة والحماية من مسببات الأمراض. وبما أن الجلد هو سهل نسبيا للوصول إلى ذلك، فإنه يوفر منصة مثالية لدراسة الآليات التنظيمية المناعة الطرفية. خلايا مناعية المقيمين في صحي سلوك الجلد الترصد المناعي، ولكن أيضا تلعب دورا هاما في تطوير الأمراض الجلدية الالتهابية، مثل مرض الصدفية. وعلى الرغم من الأفكار الناشئة، فهمنا للبيولوجيا الكامنة وراء العديد من الأمراض التهابات الجلد لا تزال محدودة. هناك حاجة لنوعية جيدة السكان (واحد) خلية معزولة من عينات الجلد تحتاج فحص. وحتى الآن، إجراءات العزل قد يعرقل بشكل خطير بسبب عدم الحصول على عدد كاف من خلايا قابلة للحياة. كما تأثرت العزلة وتحليلها لاحقا من قبل ضياع معالم خلية نسب المناعة، ويرجع ذلك إلى إجهاد ميكانيكي والكيميائية الناجمة عن إجراءات التفكك الحالية للحصول علىتعليق خلية واحدة. هنا، نحن تصف طريقة تعديلها لعزل الخلايا التائية من كلا صحي وتشارك جلد الإنسان الصدفي عن طريق الجمع بين الميكانيكية التفكك الجلد باستخدام dissociator النسيج الآلي والعلاج كولاجيناز. هذه المنهجية يحافظ على التعبير عن معظم علامات النسب المناعة مثل CD4، CD8، Foxp3 وCD11c وعلى إعداد تعليق خلية واحدة. وترد أمثلة ناجحة عزل خلايا CD4 + T والمظهرية لاحق والتحليل الوظيفي.
المقدمة
الجلد، مثل الواجهة الأساسية بين الجسم والبيئة، ويوفر خط الدفاع الأول ضد المادية الخارجية والكيميائية والبيولوجية الشتائم مثل جرح والأشعة فوق البنفسجية والكائنات الحية الدقيقة. يتألف الجلد قسمين رئيسيين، البشرة والأدمة، ويحتوي على مجموعة متنوعة من الخلايا المناعية بما في ذلك خلايا لانغرهانس، الضامة، والخلايا الجذعية (DCS)، وحوالي 20 مليار خلية التائية الذاكرة، ما يقرب من ضعف العدد الحالي في حجم الدم كله 1 ، 2. وهناك مجموعة متزايدة من البيانات يدعم الفكرة القائلة بأن الجلد لديه وظائف مناعية أساسية، سواء خلال توازن الأنسجة وفي مختلف الحالات المرضية. ويعتقد أن الخلايا المناعية المقيمين في الجلد الطبيعي لإجراء الترصد المناعي (3) ولقد ثبت أنها تلعب دورا في تطور الاضطرابات الالتهابية مثل الصدفية 4. في جلد الآفات الصدفي، تسلل على حد سواء CD4 + و CD8 + وكانت خلايا تي التوليدerved وتبين أن نسبة CD4 و CD8 يختلف باختلاف الحالة المرضية 5. ومع ذلك، هؤلاء السكان من خلايا يصعب دراسة لتقنيات الحالية تسمح للعزل الخلايا قليلة فقط.
التقنيات المستخدمة حاليا على نطاق واسع لتي زنزانة انفرادية من الجلد البشري الجمع الميكانيكي تفكك الجلد مع العلاج الأنزيمية. ومفروم خزعات الجلد البشري على نطاق واسع وحضنت مع الانزيمات مثل التربسين، كولاجيناز و / أو EDTA 6-8. وبالنظر إلى أن الجلد هو الأنسجة الحاجز الذي هو مقاومة عالية للقوات الشد وتفصيل الميكانيكية، والأساليب المتبعة في تي العزلة خلية تنتج عدد قليل جدا من الخلايا، وحتى انخفاض أعداد خلايا قابلة للحياة، الأمر الذي يجعل فيفو السابقين الثقافة خلية من هؤلاء السكان خلية صعبة و التحدي.
هنا، ونحن التقرير طريقة تعديلها لعزل الخلايا الليمفاوية من كلا صحي وتشارك جلد الإنسان الصدفي عن طريق الجمع بين ميكانالتفكك كال من الجلد باستخدام dissociator النسيج الآلي بدلا من الأسلوب المعمول بها تنميق على نطاق واسع، جنبا إلى جنب مع عملية الهضم الأنزيمي تستخدم كولاجيناز. وقد لوحظت مختلف مجموعات فرعية الخلايا المناعية قابلة للحياة بما في ذلك البلدان النامية وخلايا T بعد إعداد تعليق وحيد الخلية. أهمية التعبير عن علامات سطح CD3، CD4 و CD8 والحفاظ عليها جيدا. خلايا أعدت وبالتالي، نحن على استعداد لاستخدامها في السابق مزارع الخلايا الحية أو تحليل تدفق cytometric. واستخدمت هذا البروتوكول بنجاح لتحليل خزعات الجلد واحدة (4 مم) المستمدة من جلد الآفات من مرضى الصدفية. وأظهرت النتائج أن الجلد المقيمين خلايا المريض تي تنتج السيتوكينات الالتهابية أكثر مثل IL-17 و IFNγ بالمقارنة مع المتطوعين الأصحاء 9.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: تم الحصول على خزعات الجلد من أشخاص أصحاء من بقايا الجلد في منطقة البطن من الأفراد يخضعون لجراحة التجميل الانتخابية بعد موافقة شفهية أو مكتوبة علم للاستخدام العلمي. وتمت الموافقة على استخدام جلد الإنسان وفقا للأنظمة من قبل اللجان الطبية الأخلاقية المحددة للبحوث البشري من المركز الطبي في جامعة رادبود، نيميغن، وهولندا، وجامعة إيسن، ألمانيا.
1. إعداد تعليق خلية واحدة من الجلد البشري (العمل العقيمة في تدفق مجلس الوزراء إذا خلية ثقافة اللاحقة هو مطلوب)
- إعداد خلية ثقافة المتوسط: وأضاف RPMI 1640 + البنسلين / الستربتومايسين (تركيزات النهائي 100 وحدة / مل و 100 ميكروغرام / مل على التوالي) + البيروفات (0.02 ملم) وglutamax (0.02 ملم)، مع عدم وجود مصل.
- إعداد مستنبت الكامل: مستنبت أعدت في الخطوة 1.1 + 10٪ البشرية تجميع المصل (HPS)؛ تخزين عند 4 درجات مئوية. جلب المتوسط إلى 20 درجة مئوية ± 2 قبل لناجي.
- الحصول على خزعة الجلد باستخدام 4mm جولة أداة خزعة لكمة وابقائه في RPMI1640 مستنبت الكامل عند 20 درجة مئوية ± 2 لمدة تصل إلى 4 ساعات أو عند 4 درجات مئوية ON. معالجة خزعة في أقرب وقت ممكن عند وصولهم في المختبر.
ملاحظة: أطول تخزين الجلد تؤثر على العائد الخلية وبقاء الخلية. - تسمية أنبوب تفارق توج الأزرق وإضافة 5 مل مستنبت الكامل في أنبوب المسمى.
- إضافة 2 مل من مستنبت الكامل في كل بئر (من مجموع 3 آبار) من المعقمة لوحة الثقافة 6 جيدا. استخدام أدوات معقمة لوضع خزعة في بئر واحدة، شطف، وتحريكه لأكثر من البئر الثانية وكرر هذه الخطوة واحدة لمزيد من الوقت، وبالتالي تحقيق ما مجموعه ثلاثة يشطف.
- نقل خزعة الجلد تشطف جيدا إلى طبق بتري معقمة، إضافة 100 ميكرولتر من مستنبت كامل على الجزء العلوي من خزعة، وكشط قبالة بعناية النسيج الدهني تحت الجلد باستخدام الفولاذ المقاوم للصدأ المتاح مشرط معقم.
ملاحظة: تهو هو خطوة حاسمة. - قطع كل خزعة الجلد إلى 4 قطع صغيرة على طبق بتري معقمة. بنقل العينات (ما يصل إلى أربعة من 4 الخزعات ملم في أنبوب) إلى أنبوب تفارق استعداد تحتوي على 5 مل من مستنبت كاملة.
- بإحكام إغلاق أنابيب مع غطاء، وإرفاق رأسا على عقب لكم من dissociator النسيج الآلي. تأكد من أن جميع المواد عينة يقع في منطقة الدوار.
- بدء عملية التفكك عن طريق تشغيل "_01 m_spleen برنامج" (برنامج محدد مسبقا المقدمة من الذاكرة الداخلية الصك أو عن طريق بطاقة برنامج رافق) لفصل خزعة في سرعة الدوران المناسبة لمدة 56 ثانية.
- بعد المعالجة، فصل أنبوب تفارق من dissociator والتأكد من أن جميع المواد فصلها يتم جمعها في الجزء السفلي من الأنبوب.
- إضافة 150 ميكرولتر كولاجيناز IA (80 ملغ / مل) في أنبوب التفكك واحتضان العينة في حمام ماء اهتزاز في 37° مئوية لمدة 60 دقيقة. إضافة 100 ميكرولتر من الدناز الأول (5 MU / مل) في أنبوب thedissociation، وتخلط جيدا.
ملاحظة: التركيز العالي للكولاجيناز أو أطول فترة حضانة ستغير بقاء الخلية. - نعلق أنبوب التفكك إلى كم من dissociator النسيج الآلي وتشغيل "M_ برنامج الطحال _01" لفصل خزعة واحدة لمزيد من الوقت.
- وضع 70 ميكرومتر الخلية النايلون مصفاة على الجزء العلوي من أنبوب فالكون 50 مل. تطبيق المواد عينة نأت إلى هذا مصفاة خلية لإزالة كتل خلية / الحطام الأنسجة.
- غسل مصفاة الخلية مرة واحدة مع 5 مل من مستنبت كاملة. الطرد المركزي عند 20 درجة مئوية ± 2، 450 x ج لمدة 10 دقيقة، وطاف نضح.
- كرر الخطوة غسل واحد مزيد من الوقت. الكريات الخلايا resuspend في 300 ميكرولتر من مستنبت كاملة. وحيدة الخلية تعليق على استعداد لمزيد من التحليل. تواصل مع بروتوكولات لالسابقين زراعة الخلايا الحية أو التدفق الخلوي التحليل.
- في حالة حدوث مزيد من طntracellular خلوى تلطيخ، وتحفيز الخلايا مع سلطة النقد الفلسطينية (12.5 نانوغرام / مل)، Ionomycin (500 نانوغرام / مل)، وBrefeldine ألف (5 ميكروغرام / مل) لمدة 4 ساعة على 37 درجة مئوية، 5٪ CO 2 الحاضنة لمدة 4 ساعة قبل تنفيذ تدفق تحليل الخلوي.
2. بولكلونل تنشيط الخلايا T-الجلد المقيم (فيفو السابقين الثقافة الخلية)
- قسامة 100 ميكرولتر وحيدة الخلية تعليق (المعد في الخطوة 1.15) في لوحة الجولة القاع 96-جيدا.
ملاحظة: للحصول على كل 4 ملم خزعة الجلد، وحيدة الخلية تعليق المكتسبة ويمكن تقسيمها إلى اثنين على الأقل من الآبار لوحة 96-جيدا. - إضافة مكافحة CD3 / مكافحة CD28 ميكروبيدات المغلفة ماب (25000 الخرز لكل بئر)، المؤتلف خلوى البشري ريلاينس اندستريز-2 (تركيز النهائي 25 U / مل)، وريلاينس اندستريز-1β (النهائي تركيز 50 نانوغرام / مل).
- تغطية لوحة الثقافة مع غطاء لوحة المسمى جيدا، واحتضان في 5٪ CO 2، 100٪ الرطوبة، 37 ° مئوية الحاضنة. تغيير المتوسطة عندما يتحول اللون متوسطة إلى الأصفر.
ملاحظة: مستعمرة خلية واضحة يمكن ملاحظتها من يوم 8 من زراعة الخلايا.
3. تحليل التدفق الخلوي الابتدائي / مثقف خلايا الجلد مقيم T
- إعداد نظام مراقبة الأصول الميدانية العازلة: برنامج تلفزيوني + 0.2٪ BSA.
- نقل خلايا الفائدة إلى لوحة 96-جيدا ضد القاع. الطرد المركزي عند 20 درجة مئوية ± 2، 450 x ج لمدة 2 دقيقة، وطاف نضح.
- Resuspend وبيليه في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. الطرد المركزي عند 20 درجة مئوية ± 2، 450 x ج لمدة 2 دقيقة، وطاف نضح.
- خلايا وصمة عار مع 100 ميكرولتر من eFluorescence780 استعداد مترافق صبغ الجدوى قابل للتثبيت (1: 1000 تخفيف باستخدام برنامج تلفزيوني) في 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. إضافة 100 ميكرولتر من FACS العازلة، الطرد المركزي عند 20 درجة مئوية ± 2، 450 x ج لمدة 2 دقيقة، وطاف نضح.
- اختر المطلوبة سطح الخلية MABS علامة، على سبيل المثال: CD45-BV421 (HI30، 01:20)، CD3-تنمية الطفولة المبكرة (UCHT1، 01:50)، CD4-PC5.5 (1388.2، 1: 200)، CD8-APC-AlexFluo700 (B9.11، 1: 400)، CD14-FITC (TUK4، 01:50)، CD19-APC-AlexFluo750 (13-119، 1:50)، CD56-PE (MEM-188، 01:50)، CD25-PeCy7 (BC96، 01:50)، CD11c و-PeCy7 (BU15، 01:10)، وCD1c-APC (AD5-8E7، 01:10)، وإعداد خليط MABS باستخدام FACS العازلة وفقا لكل عامل التخفيف ماب اختبارها. تحديد إعدادات بوابة باستخدام isotype السيطرة من الأجسام المضادة مع عينة غير وصمة عار.
- إضافة 25 ميكرولتر من استعداد MABS-الخليط في كل بئر. احتضان 20 دقيقة عند 20 درجة مئوية ± 2، بعيدا عن الضوء.
- إضافة 100 ميكرولتر من FACS العازلة، الطرد المركزي عند 20 درجة مئوية ± 2، 450 x ج لمدة 2 دقيقة، وطاف نضح.
- للعينات التي لا تتطلب سوى خلية تلطيخ السطح، تابع الخطوة 3.16.
- في حالة تلطيخ Foxp3 داخل الخلوي:
- إعداد وتثبيت العازلة permeabilization عن طريق خلط جزء واحد من التركيز مع 3 أجزاء من منظفة.
- إعداد العازلة permeabilization 1X: 1 جزء من 10X permeabilization عازلة + 9 أجزاء من H 2 O. تعقيم
- الكريات Resuspend في 100 ميكرولتر من تثبيت وpermeabiliعازلة اإلثيوبية، وتخلط جيدا، واحتضان عند 4 ° مئوية لمدة 30 دقيقة.
- إضافة 100 العازلة permeabilization ميكرولتر إلى كل بئر، الطرد المركزي في 450 x ج في RT لمدة 2 دقيقة، وطاف نضح.
- غسل الخلايا مع العازلة permeabilization احد مزيد من الوقت.
- اختر المطلوبة MABS داخل الخلايا، على سبيل المثال، Foxp3-eFluo450 (PCH101، 01:50)، IL-17A-AlexFluo488 (eBio64DEC1، 01:50) وIFNγ-PeCy7 (4S.B3، 1: 400). تحضير خليط MABS باستخدام العازلة permeabilization تحتوي على 2٪ الفئران العادية المصل وفقا لكل عامل ماب تخفيف اختبارها. تحديد إعدادات بوابة باستخدام isotype السيطرة من الأجسام المضادة مع عينة غير وصمة عار.
- إضافة 20 ميكرولتر من استعداد ماب-الخليط في كل بئر. احتضان عند 4 ° مئوية لمدة 30 دقيقة، بعيدا عن الضوء.
- بعد 30 دقيقة الحضانة، إضافة 100 ميكرولتر من العازلة permeabilization في كل بئر. الطرد المركزي عند 20 درجة مئوية ± 2، 450 x ج لمدة 2 دقيقة، وطاف نضح.
- غسل الخلايا مع العازله permeabilizationص واحد مزيد من الوقت. بيليه resuspend في 110 ميكرولتر من FACS العازلة، وتعليق خلية نقل في أنبوب microFACS.
ملاحظة: نموذج جاهز للقياس باستخدام 10 ألوان قياس التدفق الخلوي. - في حالة عدد الخلايا المحدد المطلوبة، إضافة 10 ميكرولتر من تعليق موحد مختلطة جيدا fluorospheres في كل عينة على الفور قبل تنفيذ القياسات باستخدام التدفق الخلوي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
فإن بروتوكول المعروضة هنا تسفر بين 2200 ± 615 (يعني ± ووزارة شؤون المرأة، والجلد من المتطوعين الأصحاء) ما يصل إلى 178،000 ± 760 (يعني ± SEM، جلد الآفات من مرضى الصدفية) الخلايا الليمفاوية قابلة للحياة من الجلد البشري عند استخدام واحد 4 ملم خزعة الجلد.
وقد تم تحديد أنواع مختلفة من CD45 + الخلايا في تعليق وحيد الخلية المستمدة من الجلد من أشخاص أصحاء بما في ذلك CD4 + T-الخلايا (~ 45٪)، CD8
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا، نقدم بروتوكول لعزل كفاءة خلايا T مقيم الجلد من خزعات الجلد البشري. وميزة هذا البروتوكول هو عزل أعداد كبيرة نسبيا من الخلايا الليمفاوية قابلة للحياة، ومعربا عن علامات سطح ذات الصلة. وكانت مجموعات فرعية الخلايا التي تم تحديدها: CD11c و+ البلدان النامية، وخلايا CD4 + والخلايا CD8 + T وFoxp3 + CD25 +. الأهم من ذلك، كانت خارج الحي ثقافة خلايا T معزولة المقيمين الجلد جدا مجدية بشكل جيد وسمحت للتحليل وظيفي لاحق.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تفضلت خزعات الجلد من مرضى الصدفية الدكتور أندرياس Koerber (قسم الأمراض الجلدية في جامعة إيسن، ألمانيا) بعد موافقة شفهية أو مكتوبة علم للاستخدام العلمي.
ويدعم XH أيضا NSFC 61263039 و11101321 NSFC.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
خزعة
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| يمكن التخلص منها | Kai Europe | BP-40F | 4 مم |
| مشارط معقمة يمكن التخلص | منها Dalhausen | 1100000510 | |
| لطيفMACS C أنبوب | Miltenyi Biotech | 130-093-237 | أزرق الغطاء ، يستخدم كأنبوب التفكك. |
| gentleMACS Dissociator | Miltenyi Biotech | 130-093-235 | آلة تفكيك الأنسجة الآلية. استخدام "برنامج spleen_01" لتفكك خزعة الجلد. |
| مصفاة الخلية | 352350 | دينار | بحريني 70 & ميكرو; م نايلون |
| 96 بئر U-bottom لوحة | Greiner Bio-One | 650180 | |
| RPMI 1640 | Life Technologies | 22409-015 | |
| Sodium Pyruvate | Life Technologies | 11360-039 | |
| GlutaMAX | Life Technologies | 35050-061 | |
| Penicillin / Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | |
| Human مصل مجمع (HPS) | في المنزل أعد | ||
| Collagenase I | Sigma-Aldrich | C2674 | Type 1-A ، مناسب لزراعة الخلايا |
| DNase I | Calbiochem | 260913 | |
| PBS | B Braun | 3623140 | |
| BSA | Sigma-Aldrich | A4503-500G | |
| صبغة الجدوى القابلة للإصلاح (FVD) APC-eFluo780 | eBioscience | 65-0865-18 | تلطيخ الخلايا الميتة قبل تثبيت الخلية ؛ تمييع باستخدام PBS عند 1: 1,000 |
| تركيز التثبيت / النفاذية | eBioscience | 00-5123-43 | |
| التثبيت / النفاذية المخفف | eBioscience | 00-5223-56 | |
| المخزن المؤقت للنفاذية (10x) | eBioscience | 00-8333-56 | |
| BV421 الفأر المضاد للإنسان CD45 | BD | 563879 | استنساخمرحبا 30 ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| FITC ماوس مضاد للإنسان CD14 | استنساخ Dako | T0844 | : TUK4 ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| PE ماوس مضاد للإنسان CD56 | Dako | R7127 | استنساخ: MOC-1 ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| ماوس ECD مضاد للإنسان CD3 | Beckman - استنساخ Coulter | A07748 | : UCHT1 ؛ عامل التخفيف 1:50 لتلوين السطح ؛ عامل التخفيف 1:25 للتلوين داخل الخلايا. |
| PC5.5 ماوس مضاد للإنسان CD4 | بيكمان - استنساخ كولتر | B16491 | : 13B8.2 ؛ عامل التخفيف 1: 200 |
| PeCy7 ماوس مضاد للإنسان CD11c | بيكمان - كولتر | A80249 | استنساخ: BU15 ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| APC ماوس مضاد للإنسان CD1c | Miltenyi Biotech | 130-090-903 | استنساخ: AD5-8E7 ؛ عامل التخفيف 1:10 |
| APC-AlexFluo700 ماوس مضاد للإنسان CD8 | بيكمان - كولتر | A66332 | استنساخ: B9.11 ؛ عامل التخفيف 1: 400 |
| APC-AlexFluo750 ماوس مضاد للإنسان CD19 | Beckman - كولتر | A94681 | استنساخ: J3-119 ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| PeCy7 ماوس مضاد للإنسان CD25 | eBioscience | AD5-8E7 | استنساخ: BC96 ؛ عامل التخفيف 1: 50 |
| & nbsp ؛ استنساخ PE Rat المضاد للإنسان CLA | Miltenyi Biotech | 130-091-635 | : HECA-452 ؛ عامل التخفيف 1: |
| eFluo450 الفئران المضادة للإنسان Foxp3 | eBIoscience | 48-4776-42 | الاستنساخ: PCH101 ؛ تلغيان داخل الخلايا ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| AlexFluo488 الفأر المضاد للإنسان IL-17A | eBioscience | 53-7179-42 | استنساخ: eBio64DEC17 ؛ تلطيخ داخل الخلايا ؛ عامل التخفيف 1:50 |
| PeCy7 الفأر المضاد للإنسان IFNg | eBioscience | 25-7319-41 | استنساخ: 4S. ب 3 ؛ تلطيخ داخل الخلايا عامل التخفيف 1: 400 |
| الغلاف الفلوري لعدد التدفق | بيكمان - كولتر | 7547053 | عد الخرز ، لقياس التدفق الخلوي |
المراجع
- Clark, R. A., et al. The vast majority of CLA+ T cells are resident in normal skin. J Immunol. 176, 4431-4439 (2006).
- Zaba, L. C., Fuentes-Duculan, J., Steinman, R. M., Krueger, J. G., Lowes, M. A. Normal human dermis contains distinct populations of CD11c+BDCA-1+ dendritic cells and CD163+FXIIIA+ macrophages. J Clin Invest. 117, 2517-2525 (2007).
- Gebhardt, T., et al. Memory T cells in nonlymphoid tissue that provide enhanced local immunity during infection with herpes simplex virus. Nature Immunol. 10, 524-530 (2009).
- Boyman, O., et al. Spontaneous development of psoriasis in a new animal model shows an essential role for resident T cells and tumor necrosis factor-alpha. J Exp Med. 199, 731-736 (2004).
- Christophers, E., Mrowietz, U. The inflammatory infiltrate in psoriasis. Clin Dermatol. 13, 131-135 (1995).
- Jiang, X., et al. Skin infection generates non-migratory memory CD8+ T(RM) cells providing global skin immunity. Nature. 483, 227-231 (2012).
- Havran, W. L., et al. Limited diversity of T-cell receptor gamma-chain expression of murine Thy-1+ dendritic epidermal cells revealed by V gamma 3-specific monoclonal antibody. Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4185-4189 (1989).
- Campbell, J. J., et al. CCR7 expression and memory T cell diversity in humans. J Immunol. 166, 877-884 (2001).
- He, X., et al. Targeting PKC in human T cells using sotrastaurin (AEB071) preserves regulatory T cells and prevents IL-17 production. J Invest Dermatol. 134, 975-983 (2014).
- Clark, R. A., et al. A novel method for the isolation of skin resident T cells from normal and diseased human skin. J Invest Dermatol. 126, 1059-1070 (2006).
- Clark, R. A., Kupper, T. S. IL-15 and dermal fibroblasts induce proliferation of natural regulatory T cells isolated from human skin. Blood. 109, 194-202 (2007).
- Keijsers, R. R., et al. In vivo induction of cutaneous inflammation results in the accumulation of extracellular trap-forming neutrophils expressing RORgammat and IL-17. J Invest Dermatol. 134, 1276-1284 (2014).
- Hybbinette, S., Bostrom, M., Lindberg, K. Enzymatic dissociation of keratinocytes from human skin biopsies for in vitro cell propagation. Experimental dermatology. 8, 30-38 (1999).
- Hennino, A., et al. Skin-infiltrating CD8+ T cells initiate atopic dermatitis lesions. J Immunol. 178, 5571-5577 (2007).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
