مقالة منهجية

تحليل وظائف الخلايا الصاري في فيفو باستخدام 'الصاري خلية طرق في' الفئران

DOI:

10.3791/52753

⸱

مايو 27, 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology, Stanford University School of Medicine, 2Department of Microbiology & Immunology, Stanford University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن نصف طريقة لتوليد الخلايا الصاري المشتقة في المختبر ، وغرغرتها في الفئران التي تعاني من نقص الخلايا الصاري ، وتحليل النمط الظاهري والأرقام وتوزيع الخلايا الصارية المحتقنة في مواقع تشريحية مختلفة. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتقييم وظائف الخلايا السارية في الجسم الحي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا الصارية (MCs) هي خلايا دموية موجودة في أنسجة مختلفة ، وهي وفيرة بشكل خاص في المواقع المعرضة للبيئة الخارجية ، مثل الجلد والمسالك الهوائية والجهاز الهضمي. اشتهر دورهم الضار في الحساسية التي تعتمد على IgE ، كما ظهرت MCs كلاعبين مهمين في الدفاع المضيف ضد السم والبكتيريا الغازية والطفيليات. يمكن أن يتأثر النمط الظاهري ووظيفة MC بالعوامل المحيطة الدقيقة التي قد تختلف وفقا للموقع التشريحي و / أو استنادا إلى نوع أو مرحلة تطور الاستجابات المناعية. لهذا السبب، ونحن وآخرون قد فضلت في نهج في الجسم الحي على أساليب في المختبر للحصول على نظرة ثاقبة وظائف MC. هنا، نقوم بوصف طرق توليد المركبات متعددة الثقافات المشتقة من نخاع العظم (BMCMCs)، ونقلها بالتبني إلى فئران ناقصة وراثيا MC، وتحليل أعداد وتوزيع MCs المنقولة بالتبني في مواقع تشريحية مختلفة. وقد استخدمت هذه الطريقة ، التي تسمى'الصاري خلية طرق في' النهج ، على نطاق واسع على مدى السنوات ال 30 الماضية لتقييم وظائف الشركات متعددة الأجهزة والمنتجات المشتقة من MC في الجسم الحي. ونناقش مزايا هذه الطريقة وحدودها، في ضوء النهج البديلة التي تم تطويرها في السنوات الأخيرة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا الصارية (MCs) هي خلايا ما بين الهيماتوبوتية التي تنشأ من سلف نخاع العظم متعدد القدرات1-3. بعد خروج نخاع العظم، تهاجر السلف MCs إلى أنسجة مختلفة حيث تتطور إلى MCs ناضجة تحت تأثير عوامل النمو المحلية1-3. تقع MCs المقيمة في الأنسجة بشكل استراتيجي في واجهات البيئة المضيفة ، مثل الجلد والخطوط الجوية والجهاز الهضمي ، حيث تتصرف كخط دفاع أول ضد الإهانات الخارجية3-6. وغالبا ما تصنف الشركات متعددة الشخصيات على أساس خصائصها الظاهرية "الأساسية" ومواقعها التشريحية. في الفئران، تم وصف نوعين من MCs: "النسيج الضام من نوع" MCs (CTMCs) وMCs المخاطية (MMCs)1-3،7،8. غالبا ما تقع CTMCs حول النولس وبالقرب من الألياف العصبية ، وتقيم في تجا....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أجريت جميع عمليات العناية بالحيوانات وتجريبه وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة وبموافقة محددة من اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لجامعة ستانفورد.

1. توليد وتوصيف خلايا الصاري المستزرعة المشتقة من نخاع العظم (BMCMCs).

ملاحظة: يجب أن يتم إنشاء BMCMCs المانحة من خلايا نخاع العظم من نفس الخلفية الوراثية مثل الفئران المتلقية MC ناقصة. لا تصلح مراكز BMCMCs المانحة المشتقة من الذكور لرض الفئران الإناث. وستنجح البلدان المانحة المستمدة من الإناث في رعي الإناث في متلقين من الذكور والإناث على حد سواء.

  1. استخراج نخاع العظم.
    1. صب المحلول الملحي المعقم العازل بالفوسفات (PBS) في ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد في الشكل 1نظرة عامة على نهج'طرق الخلايا السارية'ويشمل توليد مركبات بي إم سي إم سي، وعدد الخلايا التي ينبغي أن تكون محفورة في أي p.p. أو أي أي في الفئران MC-deficient (يمكن أن يختلف العدد إذا أشير إليها على أساس التصميم التجريبي) والفاصل الزمني بين الحرمان والتجربة اعتمادا على موقع الحقن (يمكن أن يختلف هذا الفاصل الزمني أيضا، إذا أشير إلى ذلك؛ على سبيل المثال، يزيد محتوى الوسطاء المخزنين في حبيبات MC السيتوبلازمية باطراد مع الوقت38). ويبين الشكل 2 تحليلات.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ما يقرب من 30 عاما بعد وصفها الأولي38،'الصاري خلية طرق في'النهج لا يزال يقدم معلومات قيمة حول ما يمكن أن تفعله الشركات متعددة الشخصيات أو لا يمكن القيام به في الجسم الحي. كان يعتقد منذ فترة طويلة أن وظائف MCs تقتصر على دورها في الحساسية. البيانات التي تم إنشاؤها باستخدام'الصاري خلية طرق في'النهج قد غيرت هذا الرأي, من خلال تقديم أدلة على أن MCs يمكن, من بين وظائف أخرى, تلعب أدوارا حاسمة في الدفاع المضيف ضد مسببات الأمراض معينة4,39 أوالسموم 28,31, أو حتى يمكن قمع .......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

N.G. هو المستفيد من الزمالات من الفرنسية "مؤسسة من أجل Recherche Médicale FRM" ومؤسسة فيليب; R.S. تدعمها مؤسسة لوسيل باكارد لصحة الطفل وجائزة ستانفورد NIH/NCRR CTSA رقم UL1 RR025744; 20- وتحظى شهادة البكالوريوس بدعم من زمالة ماكس كادي من مؤسسة ماكس كادي والأكاديمية النمساوية للعلوم وزمالة شرودينغر من الصندوق النمساوي للعلوم: J3399-B21؛ وزمالة شرودينغر من صندوق العلوم النمساوي( FWF): J3399-B21؛ S.J.G. تعترف بدعم المعاهد الوطنية للصحة منح U19 AI104209, NS 080062 ومن برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ في جامعة كاليفورنيا; L.L.R. يعترف بدعم من مؤسسة البحوث الوطنية لالتهاب المفاصل (ANRF) والمعاهد الوطنية للصحة منحة K99AI110645.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1٪ محلول مضاد للحيوية ومضاد للفطرياتكورنينج سيلجرو30-004-Cl
3 مل حقنةفالكون309656
35 مم × 10 مم طبقكورنينج سيلجرو430588
5 مل بوليسترين أنبوب دائري القاعفالكون352058
حمض الخليك الجليديفيشر العلميA35-500
ألكيان بلو 8GXRowley Biochemical Danver33864-99-2
Allegra 6R جهاز طرد مركزيبيكمان
مضاد للفأر CD16 / 32 (استنساخ 93) علمحيويمنقى 14-0161-81
2-MercaptoethanolSigma AldrichM7522
BD 1 مل حقنة TBBDحقنة 309659
22 جم × 1 (0.7 مم × 25 مم) إبرBD إبرة انزلاقية دقيقة205155
25 جم 5/8 إبرحقنة BD305122
30 جم × 1/2 إبرBD Precision Glide305106
أزرق ماكس جونيور ، 15 مل أنبوب مخروطي من مادة البولي بروبيلينفالكون352097
كلوروفورمفيشر ScientificC298-500
Cytoseal 60 تصاعد متوسطريتشارد آلان Scientific8310-4
Cytospin3ShandonNA
Dakoقلم CytomationDakoS2002
Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 1xCorning cellgro15-013-CM
الإيثانولSigma AldrichE 7023-500 مل
مصل الأبقار الجنيني المعطل الحرارةسيجما ألدريتشF4135-500 مل
FITC المترافق IgG2b K التحكم في النمط المتشافي للفئرانeBioscience14-4031-82
للفأر المترافقة من الفلوريسين (FITC) (CD117 ؛ استنساخ 2B8)eBioscience11-1171-82
الفورمالديهايدفيشر ScientificF79-500
Giemsa Stain ModifiedSigma AldrichGS-1L
IsothesiaHenry Schein صحة29405
May-Grunwald StainSigma AldrichMG-1L
Multiwell 6 ألواح آبار Falcon35 3046
Olympus BX60 المجهرأوليمبوسNA
Paraplast Plus تضمين الأنسجة متوسطفيشر العلامة التجارية23-021-400
PE المترافق IgG التحكم في النمط المتشاوي للهامستر الأرمنيeBioscience12-4888-81
محلول ملحي للفوسفات (PBS) 1xCorning cellgro21-040-CV
Phycoerythrin (PE) مترافق مضاد للفأر FceRIa (استنساخ MAR-1)eBioscience12-5898-82
محلول تلطيخ يوديد البروبيديومeBioscience00-6990-50
ماوس مؤتلف IL-3Peprotech213-13
معتمد من Safranin-oقوارير زراعة الأنسجة Sigma AldrichS8884
T25 25 سم 2< / sup>353109بيكتون ديكنسون
T75 75 سم 2< / sup>بيكتون ديكنسون353110
تولويدين أزرق 1٪ مائيLabChem-IncLC26165-2
ماوس مؤتلف SCFPeprotech250-03
إلكتروني مجموعة مضادة قوارير زراعة الأنسجة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kitamura, Y. Heterogeneity of mast cells and phenotypic change between subpopulations. Annu. Rev. Immunol. 7, 59-76 (1989).
  2. Galli, S. J., Borregaard, N., Wynn, T. A. Phenotypic and functional plasticity of cells of innate immunity....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة