يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس

18.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52805

⸱

يونيو 17, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University Medical Center, 2The Taub Institute for Research on Alzheimer's Disease and the Aging Brain, Columbia University Medical Center, 3Department of Neurology, Columbia University Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا للتسريب المباشر للدماغ التجسيمي للأميلويد بيتا. توفر هذه المنهجية نموذجا بديلا للفأر في الجسم الحي لمعالجة التأثيرات قصيرة المدى للأميلويد بيتا على الخلايا العصبية في الدماغ.

الملخص

مرض الزهايمر هو مرض الاعصاب التي تؤثر على شيخوخة السكان. وهناك ميزة عصبية مرضية الرئيسية لهذا المرض هو الإفراط في إنتاج اميلويد بيتا وترسب لويحات أميلويد بيتا في مناطق الدماغ للأفراد المصابين. على مر السنين العلماء قد ولدت العديد من نماذج الماوس مرض الزهايمر التي تحاول تكرار أمراض اميلويد بيتا. وللأسف، فإن نماذج الماوس فقط بشكل انتقائي تحاكي ملامح المرض. موت الخلايا العصبية، ولها تأثير بارز في أدمغة مرضى الزهايمر، تفتقر بشكل ملحوظ في هذه الفئران. وبالتالي، نحن وغيرنا قد استخدمت وسيلة لغرس مباشرة الأنواع القابلة للذوبان بلازميدة قليلة القسيمات من اميلويد بيتا - أشكال اميلويد بيتا التي ثبت أن يكون أكثر سمية للخلايا العصبية - stereotaxically في الدماغ. في هذا التقرير ونحن الاستفادة من الذكور C57BL / 6J الفئران لتوثيق هذه التقنية الجراحية لزيادة مستويات اميلويد بيتا في منطقة الدماغ محددة. الالهدف هو ضخ التلفيف المسنن من الحصين لهذا بنية الدماغ، جنبا إلى جنب مع الدماغ الأمامي القاعدية التي يتم توصيلها عن طريق الدائرة كوليني، يمثل واحدا من مجالات انحطاط في هذا المرض. نتائج رفع اميلويد بيتا في التلفيف المسنن عبر ضخ التجسيمي تكشف عن زيادة في فقدان الخلايا العصبية في التلفيف المسنن في حدود 1 في الاسبوع، في حين أن يصاحب ذلك زيادة في موت الخلايا وفقدان الخلايا العصبية كوليني في الطرف الرأسي للالفرقة قطري من بروكا من الدماغ الأمامي القاعدية. ولوحظت هذه التأثيرات لتصل إلى 2 أسابيع. وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن اميلويد بيتا نموذج ضخ الحالي يوفر نموذج الفأر بديلة لمعالجة موت الخلايا العصبية منطقة محددة في فترة قصيرة. وميزة هذا النموذج هو أن اميلويد بيتا يمكن أن تكون مرتفعة بطريقة المكانية والزمانية.

المقدمة

الودائع ترسبات الأميلويد، التي تتكون من بيتا اميلويد (Aβ 1-42)، هي سمة رئيسية من أمراض الزهايمر (AD). وقد أظهرت العديد من الدراسات أن مستويات عالية أو سامة المؤتلف بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 حصول وفاة الخلايا العصبية، ضمور متشابك، وفقدان وخلل وظيفي. فضلا عن التعلم والذاكرة العجز 1-4. وتشمل مناطق الدماغ أثرت على الحصين، القشرة، وهياكل تحت القشرية مثل الدماغ الأمامي القاعدية و5،6 اللوزة. حتى الآن، وهناك عدة نماذج الماوس المعدلة وراثيا التي تحاول محاكاة Aβ 1-42 أمراض AD. اعتمادا على سلالة هذه الحيوانات تثبت أن تكون مفيدة في دراسة الخصائص المرضية مختارة من AD. للأسف، مع استثناء من 2 خطوط المعدلة وراثيا، APP23 و5XFAD، هذه الفئران أبدا تكرار بالكامل فقدان الخلايا العصبية، جانبا رئيسيا من جوانب AD. حتى مع فقدان الخلايا العصبية التي لوحظت في APP23 و5XFAD، وobser موت الخلايا العصبيةكان فيد خفية، سن المعالين، ومعزولة لقلة مختارة المناطق 7،8.

ضخ مباشر للبلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 في البرية من نوع مخ الفأر يوفر ممتازة في نموذج الجسم الحي الذي يعيد الجانب موت الخلايا العصبية من amyloidopathy 1،9،10. خلافا للنماذج الماوس المعدلة وراثيا المستخدمة عادة في بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 نموذج ضخ مثالية لرفع مستويات حادة Aβ 1-42 بطريقة المكانية والزمانية. وميزة استخدام البرية من نوع الفئران لهذا النموذج يغني التعويض أو الآثار الجانبية المحتملة من الطفرات التي أدخلت في خطوط الماوس المعدلة وراثيا. وقد أظهرت دراسات سابقة أن غرس مستويات سامة من Aβ 1-42 في الحصين يتسبب موت الخلايا العصبية في المناطق القريبة من موقع الحقن ضمن 1 أسبوع 1. وعلاوة على ذلك، بما يتفق مع ملاحظة أن Aβ 1-42 سامة للخلايا العصبية الكوليني 11 الدماغ الأمامي القاعديةوانخفض الكوليني الخلايا العصبية (BFCN) السكان المشاريع التي لالحصين 20-50٪ في غضون 7-14 أيام التالية بيتا اميلويد ضخ 1،10 في الفئران، مما يسمح فعال للامتحانات من الدوائر العصبية معزولة في الدماغ. منذ مشروع BFCN ipsilaterally إلى التلفيف المسنن من الحصين 12، لمعظم تحكم جزء / مركبة وبلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 الحلول التي يمكن أن تحقن على جانبي الدماغ مما يتيح إجراء مقارنات بين اليسار واليمين نصفي الكرة الأرضية 1.

في هذا التقرير سوف نقدم منهجية مفصلة الجراحية وحقن للبالغين من النوع البري C57BL / 6J الفئران. تم اختيار هذه السلالة الماوس بسبب استخدامها على نطاق واسع في مجال البحوث. من الناحية الفنية، يمكن استهداف أي منطقة في الدماغ للتسريب، ولكن هنا سوف نستخدم التلفيف المسنن من الحصين كهدف لتوضيح هذه التقنية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: لجميع التجارب على الحيوانات، تم اتباع المؤسسية والمبادئ التوجيهية الوطنية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.

1. إعداد أدوات وحلول جراحية لجراحة

  1. الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية الفولاذ المقاوم للصدأ.
  2. إعداد 70٪ من الإيثانول عن طريق تمييع 200 دليل الايثانول المطلق مع الصف الجزيئية منزوع الأيونات الماء المعقم المقطر.
  3. إرفاق G إبرة 29 إلى حقنة هاملتون. تنظيف المناطق الداخلية من هاميلتون المحاقن والإبر عن طريق وضع والمياه إخراج nanopure مرارا وتكرارا لمدة 1 دقيقة. كرر هذا الإجراء مع 70٪ من الإيثانول.
    1. إزالة المكبس وإبرة من حقنة هاملتون. الهواء الجاف الأجزاء في تدفق الصفحي هود O / N.
    2. أشرق في الإبر والمحاقن مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام.
  4. إعداد محلول ملحي عن طريق إذابة كلوريد الصوديوم في الماء الصف الجزيئية إلى الوزن النهائي لتركيز حجم 0.9٪. تعقيم المنتجات السازي الحل من خلال تصفية من خلال 0.2 ميكرون فلتر المسام.

2. إعداد بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42

  1. Monomerize و resuspend المؤتلف الإنسان Aβ 1-42 في DMSO إلى 5 ملي بالضبط كما هو موضح في نشر فا "وغيرهم (13).
  2. تمييع 5 ملي Aβ 1-42 مع معقم (1X) PBS إلى 100 ​​ميكرومتر في اليوم قبل الجراحة.
  3. مزيج الحل بشكل جيد من قبل سحن.
  4. احتضان Aβ 1-42 حل لمدة 12 ساعة على 4C.
    ملاحظة: الحلول تحكم مثل تمييع DMSO في برنامج تلفزيوني أو مشوشة / عكس ينبغي إعداد Aβ 1-42 الببتيد بنفس طريقة Aβ 1-42.

3. تحديد الاحداثيات حقن

  1. استخدام الكبار أطلس مخ الفأر لتحديد بالضبط الأمامي الخلفي (AP)، وسطي الاطراف (ML)، وظهري بطني (DV) الإحداثيات للمنطقة الدماغ التي تهم 14.
    لاالشركة المصرية للاتصالات: لتوضيح تقنية اخترنا التلفيف المسنن من الحصين كهدف مع الإحداثيات التالية من bregma: AP، -2.00 مم؛ ML، ± 1.3 مم؛ DV، -2.2 مم. الإشارة السلبية التي سبقت قيمة AP يدل على أنه 2،00 ملم الخلفي من bregma. علامة ± السابقة قيمة ML يشير الاتجاه الأيمن والأيسر من وسط المدينة. وأخيرا، فإن الإشارة السلبية التي سبقت DV تشير الى انها تتحرك من الناحية البطنية من سطح الدماغ.

4. إعداد الإطار التجسيمي

  1. ارتداء قناع جراحي الوجه، ومعطف مختبر نظيفة، والقفازات الجراحية المعقمة.
  2. مسح أسفل أداة التجسيمي ومحول الفأر مع الايثانول 70٪.
  3. وضع الستارة الجراحية المعقمة على العداد.
  4. ضع أداة التجسيمي مع محول الماوس على الجزء العلوي من الستارة الجراحية المعقمة.
  5. مسح لوحة الماوس التدفئة مع 70٪ من الإيثانول. وضع وسادة التدفئة على السرير إطار التجسيمي. استخدام مختبر للأغراض العامةحزب المحافظين الشريط وضع العلامات على الشريط أسفل وسادة التدفئة على السرير محول الماوس.
    1. إرفاق سادة التدفئة إلى الحارة مضخة recirculator المياه وفقا لتوجيهات المصنع.
    2. بدوره على مضخة الحارة recirculator المياه وضبط درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية، ثم انتظر حتى تصل درجة الحرارة.
  6. يلصق 50 ميكرولتر هاميلتون المحاقن مع إبرة 29 G على الإطار التجسيمي قبل الشد وضعها على الآلية الرأسي رمح الحقن وفقا لتوجيهات المصنع.
  7. تشغيل جهاز التعقيم حبة وانتظر حتى تصل درجة الحرارة مسبقا الشركة المصنعة.
    ملاحظة: يستخدم هذا لتعقيم الأدوات الفولاذ المقاوم للصدأ بين الحيوانات. يستغرق أدوات و 20 ثانية من الاتصال مع حبات لتعقيم.
  8. بدوره على طبق ساخن وتعيينها إلى 42 درجة مئوية، ووضع قفص فارغ نظيفة فوق.
  9. بينما يتم إصلاح حقنة هاميلتون على الإطار التجسيمي استخدام التجسيمي ط بمحركاتnjector لوضع Aβ 1-42 حل.
    ملاحظة: رسم ما يزيد على 4 ميكرولتر من الحل في حقنة ثم استخدام محقن التجسيمي لضبط حجم عن طريق الحقن. تشغيل حاقن وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.

5. إعداد الحيوان

  1. تحديد وزن الماوس باستخدام تزن الحجم.
  2. تخدير الفأر مع الكيتامين / زيلازين الكوكتيل في 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغ / كغ زيلازين عن طريق حقن داخل الصفاق (IP). رصد عمق التخدير عن فقدان قرصة أخمص قدميه لا ارادي.
  3. بعد مخدرا الماوس اتخاذ قص الشعر وحلاقة رأسه لفضح الجلد فوق الجمجمة.
  4. ضع الماوس على رأس وسادة التدفئة على رأس السرير التجسيمي.
  5. استخدام ملعقة لفتح الفم ووضع القواطع داخل الحرس الأسنان. تأمين الأنفية على وجه الماوس. تضييق عليه بلطف وليس ضيق جدا.
  6. POSIنشوئها والعارضتين الأذن الثنائية إلى الصماخ السمعي لتأمين الرأس. نقل كل العارضة في حين كان يضرب الجمجمة، ثم تتحول المسمار لقفله.
    1. للتأكد من تأمين رأس استخدام السبابة لدفع برفق على رأسه. إذا تم تأمين رأس صحيح أنها لن نعطيه أو تحرك عند الضغط عليه.
  7. تطبيق قطرة من كريم العين أو قطرة العين للعين للحفاظ عليها رطبة. تأكد من أن العيون هي رطبة طوال العملية الجراحية.
  8. لتطهير الموقع الجراحي استخدام قطعة قطن معقمة لتطبيق حل betadine إلى الجلد فوق الجمجمة، تليها 70٪ من الإيثانول. أداء betadine بالتناوب و 70٪ من الإيثانول تنظيف 2 مرات أكثر.

6. جراحة والتسريب

  1. استخدام مشرط لجعل 2-3 ملم شق في خط الوسط من فروة الرأس، ومن ثم استخدام مقص غرامة على التوالي لتمديد خط شق إلى 1،0-1،5 سم لفضح الدرز السهمي، bregma، وامدا من الجمجمة أو المعالمالصورة التي تقوم إحداثيات التجسيمي جرا. استخدام المشابك الصغيرة للحفاظ على بشرة على حدة.
    ملاحظة: يتم شرح مواقف bregma وامدا في الماوس أطلس المخ "الفأر الدماغ في التجسيمي إحداثيات" 14.
  2. خذ قطعة من القطن، نقع في محلول ملحي، واستخدامه لتنظيف الجمجمة. ثم، استخدم نظيفة مسحة القطن الجاف لتجف الجمجمة.
  3. استخدام معقم غرامة نقطة القلم بمناسبة نقطة على bregma. استخدام micromanipulator التجسيمي لوضع حقنة هاميلتون بحيث غيض من الإبرة اللمسات مجرد نقطة على bregma.
    1. تسجيل DV بتنسيق.
    2. لمعرفة ما اذا كان محور AP الجمجمة هو مستوى نقل حقنة هاميلتون الخلف بحيث غيض من الإبرة يلمس نقطة لامدا.
    3. تسجيل موقف DV. تأكد من تنسيق DV لbregma وامدا هي تقع ضمن نطاق 0.5 مم.
      ملاحظة: إن الهدف هو تقليل الفرق بين DV bregma وامدا.
  4. استخدمهمicromanipulator للعودة هاميلتون إبرة حقنة طرف إلى bregma نقطة.
  5. تسجيل موقف AP البدء.
  6. حساب موقف AP تنتهي بطرح 2.00 مم من AP بدء تنسيق.
  7. استخدام micromanipulator لإعادة إبرة حقنة هاميلتون إلى AP النهائي تنسيق.
  8. تسجيل ML الحالي تنسيق.
  9. حساب الجهة اليسرى وتنتهي الحق ML إحداثيات عن طريق إضافة أو طرح 1.3 ملم من بدء ML تنسيق.
  10. استخدام micromanipulator لتحريك إبرة حقنة هاميلتون إما إلى ML إنهاء تنسيق.
    1. لمس طرف الإبرة على سطح الجمجمة على حد سواء تنتهي إحداثيات ML وتسجيل إحداثيات DV وتأكد من أن القيم هي تقع ضمن نطاق 0.5 مم.
      ملاحظة: إن الهدف هو تقليل الفرق DV بينهما تنتهي تنسق ML.
    2. وفي حال حدوث انتكاسة تنسيق سحب الإبرة حتى 0.5-1 سم فوق الجمجمة. اتخاذ العقيمة نقطة غرامة القلم للاحتفال نقطة على الالسطح (ه) من الجمجمة. كرر هذه الخطوة الجانب المقابل من الجمجمة.
  11. تأرجح حقنة هاميلتون واضحة للخروج من الطريق.
  12. نعلق 0.8 ملم رأس الحفر إلى الحفر. اتخاذ حفر بكلتا يديه، ووضع مرفقيه على سطح الطاولة من أجل الاستقرار، ووضع رأس الحفر قليلا فوق نقطة sharpie سواء على اليسار أو اليمين ML تنسيق. تفعيل الحفر، وانخفاض رأس الحفر على سطح الجمجمة لإدخال ثقب في الجمجمة. كرر هذه الخطوة الجانب المقابل.
    ملاحظة: قد يحدث بعض النزيف من الثقوب التي أدخلت حديثا. إذا كان هناك نزيف ثم استخدام قطعة من القطن نظيفة جافة لربت الدم.
  13. نقل حقنة هاميلتون العودة الى الموقف على أي من الثقوب ML التي أدخلت حديثا. خفض الإبرة هاميلتون الماضي فقط الجمجمة. عند هذه النقطة يجب الحرص على عدم ثقب الدماغ. للتأكد من أن الإبرة قد مرت الجمجمة تأخذ السبابة وبلطف دفع الإبرة ضد الجمجمة لجعل سوره لا خروج الإبرة في ثقب.
  14. تسجيل DV بدء تنسيق.
  15. حساب DV إنهاء تنسيق عن طريق طرح 2.2 ملم من DV بدء تنسيق.
  16. خفض الإبرة وصولا الى انهاء DV تنسيق.
  17. تفعيل مضخة حقن التجسيمي لضخ 4 ميكرولتر من Aβ 1-42 في التلفيف المسنن بمعدل 0.5 ميكرولتر / دقيقة.
  18. عندما ضخ اكتمال السماح تبقى الإبرة في المكان لمدة 1 دقيقة إضافية لتقليل ارتداد الحل للخروج من موقع الحقن.
  19. تحريك الإبرة إلى الجانب الآخر من الدماغ وكرر الخطوات 6،13-6،18.

7. إزالة الحيوان والعناية بعد العملية الجراحية

  1. فك قضبان الأذن والحرس الوجه / الأنف. إزالة الماوس من الجهاز.
  2. استخدام ملقط الطالب نمط القياسية لسحب إغلاق فروة الرأس ثم ختم الجرح مع خياطة.
  3. حقن 1 مل من محلول ملحي في الماوس عن طريق IP لترطيب.
  4. فيالبوبرينورفين ject (0.1 ملغ / كلغ) تحت الجلد لتخفيف الألم.
  5. الحفاظ على الماوس في قفص فارغ نظيف تعيين على أعلى من 42 ° C صفيحة ساخنة حتى يستيقظ، ثم إعادته إلى القفص الإسكان مع الغذاء وافرة والمياه.
  6. إدارة البوبرينورفين عن طريق الحقن تحت الجلد كل 12 ساعة لمدة 3 أيام لتخفيف الألم.

إزالة 8. خياطة

  1. تخدير الفأر مع الكيتامين / زيلازين الكوكتيل في 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغ / كغ xlyazine بواسطة IP. ملاحظة: يتم ذلك بعد 7-10 أيام من الجراحة.
  2. استخدام ملقط الطالب نمط القياسية ومقص غرامة على التوالي لإزالة خياطة.
  3. حقن 1 مل من محلول ملحي في الماوس عن طريق IP لترطيب.
  4. الحفاظ على الماوس في قفص فارغ نظيف تعيين على أعلى من 42 ° C صفيحة ساخنة حتى يستيقظ، ومن ثم إعادته إلى القفص الإسكان مع الغذاء وافرة والمياه.

النحر والأنسجة الحيوانية 9. معالجة

  1. تخدير الماوس وصerfuse مع امتصاص العرق 15 4٪، وإزالة المخ، وبمعالجة ذلك cryosectioning 16.
    ملاحظة: توقيت التضحية بالحيوانات يعتمد على المجرب. ومع ذلك، لدراستنا اخترنا 7 و 14 أيام بعد الجراحة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

المنهج الحالي لإعداد البشري المؤتلف بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 غلة الأنواع بلازميدة قليلة القسيمات القابلة للذوبان التي تتكون من أحادية، dimers، trimers، وtetramers (الشكل 1A). هذه منخفضة الوزن الجزيئي Aβ 1-42 الأنواع، ولكن ليس الألياف واللوحات، وقد ثبت في العديد من الإعدادات ليكون أكثر سمية للخلايا العصبية 1،4،9،17-19. لتحديد ما إذا كان أو لم بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 يؤدي الى موت الخلايا العصبية في مخ الفأر ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

لتحقيق النجاح Aβ 1-42 حقن المجرب أو الجراح أن: 1) استخدام تقنية العقيم؛ 2) تحديد منطقة في الدماغ بشكل صحيح في المصالح مع إحداثيات دقيقة. 3) أن يكون قادرا على تأمين الماوس بشكل صحيح في إطار التجسيمي مع الدماغ وتعادل في محور AP وML؛ 4) لديها القدرة على تشغيل micromanipulator بدقة. 5) ضمان الرعاية المناسبة بعد العملية. إذا اتبعت هذه الخطوات الرئيسية الماوس يجب البقاء على قيد الحياة لعملية جراحية مع أي عدوى يمكن ملاحظتها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية منح NS081333 (لCMT)، الزهايمر منحة جمعية NIRG-10-171721 والمعهد الوطني للصحة النفسية منحة MH096702 (لUH)، والمعهد الوطني لبحوث الشيخوخة الممولة من مرض الزهايمر مركز جامعة كولومبيا AG008702 منح الطيار (لYYJ وJB).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الكيتامين هيدروكلوريك (100 مجم / مل)هنري شاينالطبي 1049007100 مجم كيتامين لكل 1 كجم من الزيلازين الحيواني
(20 مجم / مل) هنريشاين الطبيغير متوفر10 مجم زيلازين لكل 1 كجم
من بوبرينكس (0.3 مجم / مل) 1217793هنري شاين الطبية0.1 مجم بوبرينكس لكل 1 كجم
A & beta ؛ 1-42< / sub>David Teplow / UCLAغير متوفر100 & mu ؛ M; تم استخدام هذا الأميلويد في ورقة
A & beta. 1-42< / sub>BachemH-1368يمكن استخدامها بدلا من الأميلويد من مختبر Teplow
A & beta ؛ يمكن استخدام 1-42< / sub>American Peptide62-0-80Bبدلا من الأميلويد من مختبر Teplow
Scrambled A & beta ؛ يمكن استخدام 1-42< / sub>American الببتيد62-0-46Bكببتيد تحكم لمقارنة A & beta ؛ 1-42
الجسم المضاد NU4 (الأجسام المضادة للأميلويد قليل القلة)هديةمن ويليام كلاين / نورث وسترن يو.غير متوفر1: 2,000 التخفيف
المضاد للأجسام المضادة للأميلويد قليل الميلويد  (أرنب متعدد النسيلة)EMD MilliporeAB9234بدلا من Nu4 ؛ يحتاج إلى   ؛ يتم اختباره من قبل المستخدم النهائي
الجسم المضاد 6E10 (الفأر أحادي النسيلة) (الجسم المضاد للأميلويد) Biolegendsig-393201: 1،000 تخفيف
الجسم المضاد ChAT (الماعز متعدد النسيلة) MilliporeAB144P1: 100 التخفيف
نظام TUNEL الفلورومتريالمسدود PromegaG3250اتبع إرشادات الشركة المصنعة ل استخدم
كاشف Prolong Gold Antifade مع DAPIInvitrogenP36935استخدمه عند تغطية الشرائح
FluorogoldFluorochrome، LLCغير متوفرمحلول 2٪
الإيثانول المطلق (200 دليل)فيشر ScientificBP2818-4لصنع 70٪ إيثانول لتعقيم وتطهير
Novex 10-20٪Tricine gel Life TechnologiesEC6625BOXلفصل A & beta ؛ 1-42
Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)Life TechnologiesLC1675لتشغيل 10-20٪ Tricine Gel Novex
Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)TechnologiesLC3675لنقل 10-20٪ من المواد الهلامية Tricine
SuperSignal Western Blot EnhancerThermo Scientific46640لتعزيز A & beta ؛ 1-42 إشارة ؛ اتبع بروتوكول الشركة المصنعة
غشاء نشاف النيتروسليلوز Protran BA79 ، 0.1 & mu ؛ mGE Healthcare LifeSciences 10402088لنقل 10-20٪ من المواد الهلامية Tricine
Xcell SureLockMini-Cell Life TechnologiesEI0001الرحلان الكهربائي aparatus لتشغيل 10-20٪ من المواد الهلامية Tricine
GenTeal Lubricant Eye GelNovartisغير متوفرللحفاظ على رطوبة عيون الفأر أثناء الجراحة ؛ يمكن العثور عليها في متاجر الصيدليات المحلية
&# 160;
Refresh Optive Lubricant Eye DropsAllerganغير متوفرللحفاظ على رطوبة عيون الفأر أثناء الجراحة ؛ يمكن العثور عليها في متاجر الصيدليات المحلية ؛ يمكن استخدامه بدلا من GenTeal
BetadineStoelting50998لتعقيم وتطهير
الملعقة المستديرة / المدببة   ؛VWR82027-490لفتح فم
Bulldog Serrefines Clamps (خافت الفك 9X1.6 مم ؛ الطول 28 مم)أدوات العلوم الدقيقة18050-28اختياري ؛ للحفاظ على جلد فروة الرأس بعيدا أثناء الحقن
مقص مستقيم ناعم (حافة القطع 25 مم ؛ الطول 11.5 سم)أدوات العلوم الدقيقة14060-11لقطع فروة الرأس
# 3 مقبض مشرطأدوات العلوم الدقيقة10003-12
# 11 شفرة جراحيةأدوات العلوم الدقيقة10011-00لعمل شق فروة الرأس
ملقط نمط قياسي للطالب (طرف يخفت 2.5 × 1.5 مم ؛ الطول 11.5 سم)أدوات العلوم الدقيقة91100-12لإبقاء فروة الرأس مغلقة أثناء خياطة
ماكينة تشذيب مجموعة كومبوكينت ScientificCL9990-1201لحلاقة الشعر
T / مضخة إعادة تدوير الماء الدافئ   ؛كينت ساينتفيك TP-700لتدفئة أثناء الجراحة
وسادة التعدين القابل لإعادة الاستخدام (5 "× 10") كينتالعلمية   ؛TPZ-0510FEAلتثبيته بجهاز تدوير الماء الدافئ T / Pump لتدفئة أثناء الجراحة
الحفر الصغير اللاسلكي58610استخدم نتوءات فولاذية مقاس 0.8 مم لحفر ثقوب في الجمجمة
مختبر أداة تجسيمية قياسية مع الماوس و محول الفئران لحديثي الولادةStoelting51615
فقط للفأر أداة StereotaxicStoelting51730يمكن استخدام هذا بدلا من Stoelting Cat. # 51615
حاقن التجسيم الجوهريStoelting53311
معقم حبة الزجاج الجافStoelting50287لتعقيم أدوات الفولاذ المقاوم للصدأ
ستارة جراحية معقمة (18 بوصة × 26 ")حقنة هاميلتون50981
هاميلتون 50 مل ، موديل 705 RN SYR ،NDL شركة هاميلتون7637-01لحقن الدماغ ؛ استخدم محاقن مختلفة لحلول مختلفة
29 G إبرة ، محور صغير RN NDLشركة هاميلتون7803-06للتوصيل بحقنة هاميلتون لحقن الدماغ
1 مل BD Tuberculin SyringesVWRBD309659لإدارة التخدير والمحلول الملحي
30 جم إبرة (0.5 بوصة)VWRBD305106لإدارة التخدير والمحلول الملحي
مقياس سلسلة CS الإلكتروني المحمول (Ohaus)VWR65500-202لوزن لتحديد جرعة التخدير
الصفيحة الساخنة (اللوحة العلوية تعتيم 7.25 × 7.25 بوصة)VWR47751-148لتدفئة بعد الجراحة
خياطة الحرير Sofsilk C-1 3/8 ، 12 ممCovidienS1173لإغلاق الجرح
لاصق الأنسجة Vetbond (3M) سانتاكروز للتكنولوجيا الحيويةsc-361931اختياري: للمساعدة في إغلاق الجرح ؛ استخدميه مع خياطة.
أدوات تطبيق معقمة ذات عمود خشبي من القطنفيشر علمي22-029-488لتنظيف وتجفيف الجروح الجراحية
Fisherbrand Superfrost Plus Microscope SlidesFisher Scientific & nbsp ؛12-550-15لجمع أقسام الدماغ
VWR غطاء مايكرو زجاجي 24 × 50 ممVWR48393241لتركيب شرائح المجهر
مرشح حقنة نالجيني العلمي الحراري 0.2 & مفيشر سيانتيفيك194-2520لتعقيم المحلول الملحي
علامات جلدية معقمة مزدوجة الطرف من Viscot MedicalMedline VIS1422SRL91لتمييز الإحداثيات على الجمجمة
يمكن استخدام Life < td colspan = "4" > [header] قطع

المراجع

  1. Baleriola, J., et al. Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions. Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).
  2. Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews. Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).
  3. Knowles, J. K., et al. The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).
  4. Troy, C. M., et al. beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation. Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).
  5. Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis. Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).
  6. Gotz, J., Ittner, L. M. Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).
  7. Calhoun, M. E., et al. Neuron loss in APP transgenic mice. Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).
  8. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  9. Jean, Y. Y., et al. Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death. The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).
  10. Sotthibundhu, A., et al. Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).
  11. Kar, S., Quirion, R. Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology. Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).
  12. Leranth, C., Frotscher, M. Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers. The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).
  13. Fa, M., et al. Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices. Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).
  14. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Second edn, Academic Press. (2001).
  15. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).
  16. Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain. Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).
  17. Jin, M., et al. Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).
  18. Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).
  19. Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262(2012).
  20. Chakrabarti, M., et al. Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration. Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).
  21. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  22. Puzzo, D., et al. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).
  23. Puzzo, D., et al. Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory. Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).
  24. Akpan, N., et al. Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).
  25. Fulmer, C. G., et al. Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).
  26. Thakker-Varia, S., et al. The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).
  27. Greferath, U., et al. Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice. The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).
  28. Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band. Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).
  29. Clarke, D. J. Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study. Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).
  30. Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. Amyloid beta mediates memory formation. Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.