بنقل العدوى إلى خلايا RAW264.7 مع luciferase المراسل مراسل جين

Sylvia T. Cheung; Soroush Shakibakho; Eva Y. So; Alice L-F Mui

doi:10.3791/52807

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

بنقل العدوى إلى خلايا RAW264.7 مع luciferase المراسل مراسل جين

21.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52807

⸱

يونيو 18, 2015

Sylvia T. Cheung¹^,²^,³ , Soroush Shakibakho¹^,² , Eva Y. So¹^,² , Alice L-F Mui¹^,²^,³

¹Immunity and Infection Research Centre, Vancouver Costal Health Research Institute, ²Department of Surgery, University of British Columbia, ³Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of British Columbia

في هذه المقالة

ملخص

تعداء في خط خلية البلاعم ، RAW264.7 ، صعب بسبب الاستجابة الطبيعية للخلية ضد المواد الغريبة. وصفنا هنا إجراء لطيفا ولكنه قوي لنقل جينات مراسل لوسيفيراز إلى خلايا RAW264.7.

الملخص

يعد نقل المواد الوراثية المرغوبة إلى الخلايا إجراء لا مفر منه في الدراسات البحثية الطبية الحيوية. بينما تم وصف العديد من الطرق ، فإن أنواعا معينة من الخلايا تقاوم العديد من هذه الطرق وتنتج كفاءة تعداء منخفضة¹ ، مما قد يعيق البحث في تلك الأنواع من الخلايا. في هذا البروتوكول ، نقدم إجراء تعداء محسن لإدخال جينات مراسل لوسيفيراز كحمض نووي بلازميد في خط خلايا البلاعم RAW264.7. يتم وصف نوعين مختلفين من كواشف التعدي (القائمة على الدهون والبولي أمين) ، ويتم تقديم ملاحظات مهمة في جميع أنحاء البروتوكول لضمان تغيير خلايا RAW264.7 بشكل طفيف من خلال إجراء التعداء وأي بيانات تجريبية تم الحصول عليها هي النتائج المباشرة للمعالجة التجريبية. في حين أن كفاءة التعدي قد لا تكون أعلى مقارنة بطرق التعدي الأخرى ، إلا أن الإجراء الموصوف قوي بما يكفي للكشف عن إشارة لوسيفيراز في RAW264.7 دون تغيير الاستجابة الفسيولوجية للخلايا للمنبهات.

المقدمة

ترنسفكأيشن من الأحماض النووية في خلايا لديه تطبيق متنوعة في مجال البحث العلمي. ومن الأمثلة على ذلك (1) الجينات مراسل لدراسة دور العناصر الجينات المختلفة في التعبير الجيني، (2) البلازميدات التعبير البروتين إلى بإفراط البروتين من الفائدة، و (3) الصغيرة بالتدخل RNA إلى downregulate التعبير الجيني. عن طريق التلاعب في مستوى التعبير عن جينات معينة وقياس الأثر التفاضلي لهذه التلاعبات، يمكن للباحثين استدلال على وظائف الجينات في النظم البيولوجية الذي تم اختياره. ليس كل طرائق نقل توفر نفس الكفاءة ترنسفكأيشن، وحتى نفس الأسلوب ترنسفكأيشن لا transfect جميع أنواع الخلايا على قدم المساواة ^1. وبالتالي، تم وضع طرائق نقل مختلفة مثل طر....