يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الآلي إثراء خلية من الفيروس المضخم للخلايا محددة خلايا T للتطبيقات السريرية باستخدام نظام خلوى التقاط

12.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52808

⸱

أكتوبر 5, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Pediatrics, U.T. MD Anderson Cancer Center, 2Stem Cell Transplantation and Cellular Therapy, U.T. MD Anderson Cancer Center

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

الهدف من هذا البروتوكول هو تصنيع خلايا تائية سريرية خاصة بممرض الأمراض باستخدام جهاز تخصيب الخلايا الآلي من الجيل الثاني الذي يشتمل على نظام مغلق لالتقاط السيتوكين ولا يتطلب موظفين متخصصين أو استخدام منشأة GMP. يمكن إعطاء الخلايا التائية الخاصة بالفيروس المضخم للخلايا pp65 التي تم إنشاؤها مباشرة للمرضى.

الملخص

نقل بالتبني من الخلايا T الممرض محددة يمكن استخدامها لمنع وعلاج الأمراض الانتهازية مثل الفيروس المضخم للخلايا (CMV) العدوى التي تحدث بعد خيفي المكونة للدم زرع الخلايا الجذعية. خلايا T الفيروسية محددة من الجهات المانحة خيفي، بما في ذلك الجهات المانحة طرف ثالث، يمكن نشر السابقين الجسم الحي في الامتثال مع الممارسة الحالية التصنيع الجيدة (المركب)، وتوظيف الجولات المتكررة من التحفيز يحركها مستضد لنشر انتقائي خلايا T المطلوب. ويمكن أيضا أن تضطلع تحديد وعزل الخلايا T مستضد معين بناء على نظام التقاط خلوى الخلايا T التي تم تفعيلها لإفراز الإنترفيرون جاما (IFN-γ). ومع ذلك، التطبيق البشري على نطاق واسع للنظام التقاط خلوى (CCS) للمساعدة في استعادة الحصانة كانت محدودة لأن عملية إنتاج تستغرق وقتا طويلا وتتطلب مشغل المهرة. تطوير جهاز لتخصيب الخلية الجيل الثاني مثل CliniMACS معجزة الآنتمكن المحققون على توليد خلايا T الفيروسية محددة باستخدام، أقل النظام كثيفة العمالة الآلي. هذا الجهاز يفصل صفت مغناطيسيا الخلايا من الخلايا غير المسماة باستخدام المغناطيسية تنشيط الخلايا التكنولوجيا الفرز لتوليد المنتجات السريرية الصف، كما تم تصميم نظام مغلق ويمكن الوصول إليها وتعمل على الفوق. ونحن لشرح تشغيل هذا الجهاز الجديد لتخصيب الخلية الآلي لتصنيع خلايا T pp65 محددة CMV تم الحصول عليها من المنتج فصادة الحالة المستقرة التي تم الحصول عليها من متبرع مصاب بالفيروس المضخم للخلايا. ويمكن بعد ذلك هذه الخلايا T معزولة أن غرست مباشرة إلى المريض تحت الإشراف التنظيمي المؤسسي والاتحادي. كل الخطوات لمعالجة الحيوية بما في ذلك إزالة خلايا الدم الحمراء، ومؤتمتة بالكامل تحفيز خلايا T، وفصل الخلايا مستضد معين T، وتنقية، والغسيل. الأجهزة مثل هذه تثير احتمال أن خلايا T للتطبيق البشري يمكن تصنيعها خارج مخصصة الممارسات التصنيعية الجيدة (GMP) أن تنتج المرافق وبدلا من ذلك في التسهيلات المصرفية الدم حيث يمكن للموظفين الإشراف بروتوكولات الآلي لإنتاج منتجات متعددة.

المقدمة

للدم زرع الخلايا الجذعية (HSCT) 1 يمكن الجمع بين العلاج T-خلية بالتبني لتحسين الطعم ضد الورم تأثير وتوفير الحصانة للعدوى الانتهازية 2. جيل من الخلايا T-المستمدة المانحة مستضد معين للتسريب قد تطلبت من الناحية التاريخية الموظفين المهرة واستخدام المرافق المتخصصة التي GMP المتوافقة. وقد نتج عن تسليم مثل هذه الخلايا T في القرار من العدوى الانتهازية 3 وكذلك علاج الورم الخبيث الكامن 4. في الآونة الأخيرة، وقد أثبتت المحققين أن نقل بالتبني من بضعة آلاف فقط خلايا T الفيروس محددة (~ 1 × 10 4-2،5 × 10 5 خلايا / كغم من وزن الجسم المتلقي) يمكن علاج الالتهابات الانتهازية CMV بعد خيفي HSCT 5-9 بنجاح. وهناك عدد محدود من مرافق GMP بما يرتبط بها من متطلبات التصنيع الماهرة والتكلفة العالية المرتبطة بإنتاج الخلايا ومع ذلك، فقد restricted وصول المريض إلى اعدا العلاجات T-10 خلية. ويستند نهج واحد لعزل خلايا T مستضد معين على CCS باستخدام كاشف ثنائية محددة للاعتراف CD45 وIFN-γ. كما هو مبين، هذه المنهجية يمكن استخدامها لتوليد السريرية الصف CMV محددة خلايا T توظيف مؤتمت الجهاز CCS تخصيب الخلية (الشكل 1B).

يتم إنشاء خلايا T CMV الخاصة التي يحتضنها الببتيدات متداخلة من CMV pp65 المستضد مع مجموع الخلايا فصادة الكريات البيض النووية (TNC) من المانحين CMV-مصليا. هذه الببتيدات، المعروضة في سياق الكريات البيض مستضد البشرية (HLA)، وتفعيل خلايا T CMV pp65 محددة داخل المجلس الوطني الانتقالي لإفراز الإنترفيرون γ. هذه الخلايا T ويمكن بعد ذلك أن "القبض" وفصل مغناطيسيا. تشغيل الجهاز من الجيل الأول لتخصيب الخلية (الشكل 1A) المطلوبة الموظفين المهرة في زراعة الخلايا في ظل ظروف GMP، والتنسيق من الموظفين للقيام ليالي متعددةteps اللازمة لتوليد منتج "القبض".

الإجراء المطلوب عادة 10-12 ساعة من العمل المتواصل، وبالتالي من المرجح الموظفين بحاجة إلى العمل على فترتين في منشأة GMP. ويتجنب هذه القيود الآن من تنفيذ جهاز الجيل الثاني (هو مبين في الشكل 1B). يتعهد هذا الجهاز تخصيب المغناطيسي، مماثل لجهاز الجيل الأول، ولكن بأتمتة جوانب أخرى من قانون الأحوال المدنية في نهج unbreached. هذا يخفف كثيرا من عبء على الفريق GMP لأن معظم الخطوات التي يمكن أن يتحقق دون مراقبة من قبل الموظفين. وعلاوة على ذلك، لأن الجهاز يعمل كنظام مغلق، وخلايا T مستضد معين يمكن الحصول عليها ومعالجتها على الفوق باستثناء الخطوات المتبعة في عزلة فصادة الكريات البيض وإعداد المواد قبل البدء في الصك. وقد حانة تفاصيل الأجهزة كاملة وظيفة هذا الجهاز تخصيب الخلية الجيل الثانيأسسنا 11.

هنا، نحن تصف الخطوات لإثراء CMV خلايا T pp65 محددة من منتج فصادة الحالة المستقرة باستخدام نظام CCS تخصيب الخلية الآلي. معزولة مرة واحدة، وهذه الخلايا T-CMV محدد قد غرست مباشرة إلى المريض.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد المواد تحت العقيمة شروط (انظر المواد والمعدات الجدول)

  1. إعداد 3 L من PBS / EDTA العازلة تستكمل مع ألبومين المصل البشري (HSA) إلى تركيز النهائي من 0.5٪ (ث / ت).
  2. إعداد 1 L كيس من السريري الصف 0.9٪ كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) حل و2 L من GMP الصف خلية ثقافة المتوسط.
  3. إعداد 60 نانومول من CMV محددة الببتيد مستضد كوكتيل خلال إعادة تأسيس قنينة واحدة من CMV pp65 مع 8 مل من الماء المعقم.
  4. نقل CMV pp65 الببتيد الكوكتيل الى تجميد كيس 50 حجم مل باستخدام لور / سبايك interconnector والمشبك مع قفل ملقط لتجنب التوزيع لاحق من الكوكتيل في مجموعة الأنابيب. خلية مفتوحة مجموعة أنابيب التخصيب (TS 500) تحت ظروف معقمة.
  5. استخدام معقم أنابيب لحام، وربط الببتيد كوكتيل كيس تجميد في اتصال أنبوب صمام 2 من مجموعة أنابيب TS 500. لا تفتح الحقيبة الببتيد كوكتيل المشبك في هذا الوقت.
  6. إزالة 1 × 10 9 TNC بدءا من المنتجات الخلوية وتعليق في برنامج تلفزيوني / EDTA العازلة التي تحتوي على 2.5٪ HSA إلى إجمالي حجم 50 مل. حقن المنتج الخلوي في كيس نقل 150 مل.

استخدام الآلي نظام خلية إثراء 2. إعداد و(انظر المواد والمعدات الجدول)

  1. تشغيل نظام تخصيب الخلية (الشكل 1B) وحدد البرنامج "CCS_IFN-γ التخصيب". مراقبة واجهة المستخدم تظهر الشاشات مع التعليمات والصور الإرشادية المشغل من خلال هذا الإجراء.
  2. أدخل المعلمة "المشغل" و "أنابيب مجموعة P / N لا". المقبل، تثبيت الجهاز الأنابيب مجموعة 500 لتخصيب الخلية الآلي حسب التعليمات التي تظهر على الشاشة التفاعلية.
  3. اتبع التعليمات خطوة بخطوة المعروضة على الشاشة لربط المتوسطة ومخازن للجهاز. سجل رقم الكتالوج والكثير عدد من الكواشف التي تربط قبلز في الصك.
  4. بعد الاختيار النهائي للمجموعة الأنابيب، وفتح المشبك من كيس الببتيد كوكتيل. فتح الحقيبة المتوسطة والشروع فتيلة التلقائي للمجموعة الأنابيب.
  5. بعد الانتهاء من الخطوة فتيلة، تكملة HSA (2.5٪) إلى كلوريد الصوديوم عازلة في حقيبة الخزان (200 مل) مع مساعدة من أنابيب لحام العقيمة. نقل المنتج الخلوي بدءا في "حقيبة تطبيق" باستخدام أنابيب لحام العقيمة.
  6. ربط CCS (IFNγ) الكواشف في أنابيب منها عن طريق المحولات. دخول الوقت المفضل لجمع جزء من المواد الخلوية قبل عملية التخصيب. مراجعة والتحقق من صحة جميع البيانات / دخلت المعلمات. بدء العملية.
  7. قبل بدء عملية تخصيب الخلية الآلي، وإزالة كيس مراقبة الجودة (مصرف قطر المركزي، جزء الأصلي (أوري) يحتوي على حوالي 1.3 مل من أصل 100 المحتوى مل غرفة المخفف مع PBS عازلة / EDTA). ختم مصرف قطر المركزي، وزن، وتخزينها في 4 درجات مئوية.
  8. بدء enrichmeعملية الإقليم الشمالي. في نهاية هذه العملية، سيتم مزال الخلايا المستهدفة مع حجم تقريبي من شطف العازلة من الكيس الخزان.
  9. ختم غير المستهدفة خلية حقيبة (NTCB، جزء سلبي = NEG) وحقيبة الخلية المستهدفة (ادارة التعاون الفني، سواء كان إيجابيا جزء = نقاط البيع) وتزن كل كيس. سيتم استخدام الأوزان في وقت لاحق لحساب أعداد الخلايا.
  10. مباشرة بعد إجراء تخصيب جمع اثنين قسامات في جزء لتحليل التدفق الخلوي، وتخزين بقية العينات عند 4 درجات مئوية. استخدام أحد قسامة عينة لتحديد عدد الخلايا وغيرها من قسامة عينة لتحليل أداء تخصيب (الجدول 1).
  11. إزالة أنابيب مجموعة من الصك تخصيب الخلية. نقل ملف السجل إلى محرك أقراص USB لاستخدامها في المستقبل.
    ملاحظة: يجب أن تكون على استعداد جميع الكواشف تحت ظروف معقمة. ينصح بشدة استخدام السلامة الأحيائية نوع II غطاء محرك السيارة. استخدام الحالة المستقرة فصادة المنتجات الخلوية (غير المعبأة) معزولة عن صحيةCMV-مصليا المانحة لإثراء خلايا T معينة CMV المستضد. فقط مرخص FDA HSA ينبغي استخدامها. يجب أن تبقى المخزن المؤقت لإعداد الخلية في +19 درجة مئوية إلى +25 درجة مئوية عن انخفاض أو ارتفاع درجات الحرارة المحيطة سيؤدي إلى خفض النقاء والعائد المخفض للخلايا المستهدفة.

3. خلية عدد تقرير

  1. اتخاذ aliquots من مصرف قطر المركزي، NTCB وادارة التعاون الفني لعدد الخلايا كما هو مبين في الجدول 1. إضافة CD45-VoBlue لكل قسامة (عيار 01:11)، واحتضان في الظلام لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
  2. إضافة 1.5 مل الطازجة حل الخلية تحلل الدم الحمراء (1X) إلى جزء الأصلي وجزء سلبي، 450 ميكرولتر الطازجة الدم الحمراء حل تحلل الخلية إلى جزء إيجابي، واحتضان جميع الكسور لمدة 15 دقيقة في RT.
  3. فقط قبل التحليل، إضافة يوديد propidium إلى تركيز النهائي من 1 ميكروغرام / مل (1: 100 التخفيف من 100 ميكروغرام / مل). استخدام العداد الخلية التلقائي لتحديد عدد الخلايا والسادسالقدرة. استخدام خلية جهاز مكافحة البرامج الموصى بها لتحليل التدفق الخلوي. تحديد التهم المطلقة من الكريات البيض لكسور الأصلية، السلبية والإيجابية.
    ملاحظة: يتم تحديد عدد خلايا الكريات البيض قادرة على البقاء في مل من العينات المأخوذة للتحليل عدد خلايا باستخدام محلل خلية البرامج الموصى بها.
  4. تعيين المنطقة كما هو مبين في الشكل 2 (المنطقة 5، الكريات البيض قادرة على البقاء). استخدام استراتيجية النابضة التالية لتحديد عدد الخلايا. ويرد الكريات البيض قادرة على البقاء في جزء الأصلي في الشكل 2.
  5. المناطق المشار إليها (الشكل 2، 1-6) هي هرميا على النحو التالي:
    1: دوام بوابة → 2: خلايا مفردة → 3: CD45 + الخلايا → 4: الكريات البيضاء (الحطام مستبعد) → 5: الكريات البيضاء قابلة للحياة → 6: الخلايا الليمفاوية قابلة للحياة
  6. تكرار نفس الخطوات لتحديد عدد الخلايا لكسور السلبية والإيجابية. حساب عدد خلايا الكسر كلهمن خلال النظر في عامل مخفف من العينة والحجم الكلي للجزء (الجدول 2).

4. فحص الأداء الفصل

  1. غسل aliquots من مصرف قطر المركزي، NTCB وخلايا جزء ادارة التعاون الفني مع برود قبل PBS / EDTA العازلة / 0.5٪ AB المصل. الطرد المركزي الخلايا في 300 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية، ونضح طاف.
  2. Resuspend الخلايا في 100 ميكرولتر الضد تألقي خليط تلطيخ تحتوي CD3-FITC، CD4-APC، CD8-APC-Vio770، CD14-PerCP، CD20-PerCP، CD45-VioBlue ومكافحة IFNγ-PE (عيار 01:11) و احتضان في الظلام لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
  3. إضافة 1 مل الطازجة حل الخلية تحلل الدم الحمراء (1X)، واحتضان لمدة 15 دقيقة في RT. أجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية، ونضح طاف. resuspend الخلايا في حجم كاف من PBS / EDTA العازلة / 0.5٪ AB المصل.
  4. إضافة يوديد propidium إلى تركيز النهائي من 1 ميكروغرام / مل فقط قبل التحليل (1: 100 dilutiعلى 100 ميكروغرام / مل). أداء التدفق الخلوي تحليل لتقييم نقاء العينة.
  5. استخدام استراتيجية النابضة التالية لحساب الخلايا CD3 + T في استراتيجية قابلة للحياة المحاصرة الكريات البيض لتحديد الخلايا CD3 + T يظهر في جزء إيجابية بعد عملية تخصيب CCS. المناطق المشار إليها (الشكل 3A و 3B، 1-6) ترتبط بشكل هرمي على النحو التالي:
    1: دوام بوابة → 2: خلايا مفردة → 3: CD45 + الخلايا → 4: خلايا (الحطام مستبعد) → 5: الكريات البيضاء قابلة للحياة → 6: قابلة للحياة CD3 + الخلايا السكان
  6. تحديد ترددات CD4 +، CD8 +، CD4 + IFN-γ + CD8 + وIFN-γ + خلايا T بعد عملية تخصيب CCS (الجدول 2).
  7. استخدام استراتيجية النابضة لتحديد ترددات CD4 +، CD8 +، CD4 + IFN-γ + CD8 + وIFN-γ + خلايا T و هو مبين أدناهأو (القبض) جزء إيجابي الأصلي والمخصب بعد عملية CCS. ترتبط هيكليا المناطق المشار إليها واسمه على النحو التالي:
    1: دوام بوابة → 2: خلايا مفردة → 3: CD45 + الخلايا → 4: خلايا (الحطام مستبعد) → 5: الكريات البيضاء قابلة للحياة → 6: قابلة للحياة CD3 + الخلايا → 7: CD4 + الخلايا → 7A: CD4 + IFN-γ + الخلايا (مربع) → 8: CD8 + خلايا → 8A: CD8 + IFN-γ + الخلايا (مربع)

وتظهر أول 6 المناطق المشار إليها من الروابط التسلسل الهرمي هي نفس الشكل (3)، (1-6) وأخيرا 2 المناطق في الشكل 4 (6-8a): ملاحظة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في هذه الدراسة، تم استخدام خلية الآلي التخصيب نظام CCS لإنتاج الآلي من CMV خلايا T pp65 محددة. تم تخصيب خلايا T CMV محددة من ثلاثة منتجات خلية فصل مكونات الدم. كان حصادها المنتج فصادة الحالة المستقرة أكثر من 2 ساعة من المانحين CMV مصليا ولدت 10 10 مجموع الخلايا النووية (TNC). 10 9 TNC ثم تم تفعيلها مع CMV الببتيدات المستمدة من pp65 (60 نانومول) لمدة 4 ساعة وIFN-γ إفراز تم عزل خلايا T باستخدام CCS على الجهاز تخصيب الخلية الآلي. هناك حاجة إلى المشغل في بداية ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد برز العلاج T-خلية بالتبني كخيار قابل للتطبيق لعلاج الأورام الخبيثة B-الخلية 4. إمكانات علاجية تعتمد على غرس العدد المطلوب من الخلايا T محددة المستضد الهدف التي تفتقر تنسخي الشيخوخة 2. ويمكن تحقيق ذلك من خلال الفصل بين السكان نقية من خلايا T معينة مستضد من خلايا T الموسعة في الامتثال لممارسات التصنيع الجيدة الحالية. وتستخدم إجراءين الفرز على نطاق واسع، وهي الخلية مضان تنشيط الفرز (FACS) والمغناطيسية خلية تنشيط الفرز (MACS) لتوليد خلايا T معينة CMV المستضد ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

كل من مركز أندرسون للسرطان، والدكتور كوبر لديهم مصلحة مالية في ZIOPHARM الأورام، وشركة، وشركة Intrexon. في 7 مايو 2015، تم تعيين الدكتور كوبر في منصب الرئيس التنفيذي في ZIOPHARM الأورام. الدكتور كوبر وهو الآن عالم زائر في MD أندرسون. الدكتور كوبر أسس وتمتلك InCellerate، وشركة لديه براءات الاختراع مع Sangamo العلوم البيولوجية مع nucleases الاصطناعية. وقال انه يتشاور مع Targazyme، وشركة (الخلايا الجذعية الأمريكية سابقا، وشركة)، جنرال إلكتريك للرعاية الصحية، فيرينغ Ferring الصيدلة، مصير التداوي، يانسن الصيدلة، وبريستول مايرز سكويب. وهو عضو في المجلس الاستشاري العلمي لCellectis. وقال انه يتلقى الأتعاب من ميلتيني بيوتيك.

شكر وتقدير

نشكر Miltenyi Biotec ، ألمانيا على توفير الكواشف ومعدات CliniMACS Prodigy لدراسات التقييم. نشكر جورج تي ماكنمارا (قسم طب الأطفال ، مركز إم دي أندرسون للسرطان) على قراءة المخطوطة. دعم المنحة: منحة مركز السرطان الأساسية (CA16672) ؛ RO1 (CA124782 ، CA120956 ، CA141303 ؛ CA141303) ؛ R33 (CA116127) ؛ P01 (CA148600) ؛ صندوق بوروز ويلكوم. معهد الوقاية من السرطان والبحوث في تكساس. مؤسسة CLL العالمية للأبحاث ؛ ملكية نويلان ل. بيبلر. مؤسسة جيلسون لونغنبو. هاري تي مانغوريان جونيور ، صندوق العلاج المناعي لسرطان الدم. معهد علاج السرطان الشخصي. جمعية سرطان الدم وسرطان الغدد الليمفاوية. مؤسسة أبحاث سرطان الغدد الليمفاوية. صندوق شبكة المؤسسات الشقيقة التابع ل MDACC ؛ مؤسسة ميلر. السيد هيرب سيمونز. السيد والسيدة جو إتش سكايلز ؛ السيد توماس سكوت. المؤسسة الوطنية لأبحاث السرطان. مؤسسة أبحاث سرطان الأطفال. مؤسسة ويليام لورانس وبلانش هيوز للأطفال.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
CliniMACS PBS / EDTA Buffer 3 L BagMiltenyi Biotec GmbH700-29
CliniMACS Prodigy Tubing Set TS 500Miltenyi Biotec GmbH130-097-182
5 لتر كيس نفاياتMiltenyi Biotec GmbH110-004-067
CliniMACS نظام التقاط السيتوكين (IFN-gamma)Miltenyi Biotec GmbH279-01
الألبومين (الإنسان) 25٪   ؛Grifols58516-5216-2
Luer / Spike InterconnectorMiltenyi Biotec GmbH130-018-701
0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم (1 لتر)Miltenyi Biotec GmbH
MACS GMP PepTivator HCMV pp65Miltenyi Biotec GmbH170-076-109
مياه للحقنHospira، inc ، Lake Forest ، ILNDC-0409-4887-10
وحدة فلتر MILLEX GV 0.22 & mu ؛ m كيس نقل MilliporeSLGV033RB
TexMACS GMP متوسط سعة 2 لترMiltenyi Biotec GmbH170-076-306
، 150 مل (لمواد البداية الخلوية)Miltenyi Biotec GmbH130-018-301
كيس تجميد CryoMACS 50Miltenyi Biotec GmbH200-074-400
60 مل محاقن معقمةBD ، Laagstraat ، Temse ، بلجيكا309653
منتج الفصادة الإيجابية المصلية CMVKey Biologics، LLC، ممفيس
<مواد قياس التدفق الخلوي القوية> القوية< / قوي ><قوي>الشركة المصنعة < / قوي ><قوي>رقم الكتالوج < / قوي >
AB مصل ، GemCellGemini Bio-Products ، غرب ساكرامنتو ، الولايات المتحدة الأمريكية100-512
CD3-FITCMiltenyi Biotec GmbH130-080-401
CD4-APCMiltenyi Biotec GmbH130-098-033
CD8-APC-Vio770Miltenyi Biotec GmbH130-098-065
CD14-PerCPMiltenyi Biotec GmbH130-098-072
CD20-PerCPMiltenyi Biotec GmbH130-098-077
CD45-VioBlueMiltenyi Biotec GmbH130-098-136
aIFN-γ-PE, HumanMiltenyi Biotec GmbH130-097-940
CD3-PEMiltenyi Biotec GmbH130-091-374
محلول يوديد البروبيديوم (100 & micro; جم / مل)Miltenyi Biotec GmbH130-093-233
< قوي > معدات < / قوي >< قوي > الشركة المصنعة < / قوي >< قوي > رقم الكتالوج < / strong>
CliniMACS Prodigy Device   ؛Miltenyi Biotec GmbH200-075-301
Software V1.0.0.RC
MACSQuant Analyzer 10Miltenyi Biotec GmbH130-096-343
Software 2.4
جهاز طرد مركزي 5415R & nbsp ؛Eppendorf AG22331
Cellometer K2Nexelom Bioscience ، Lawrence ، MALB-001-0016
لحام الأنابيب المعقمة SCDIIBTerumo Medical Corp. ، Elkton ، MA7811

المراجع

  1. Syed, B. A., Evans, J. B. From the Analyst's Couch Stem Cell Therapy Market. Nat Rev Drug Discov. 12 (3), 185-186 (2013).
  2. Maus, M. V., et al. Adoptive Immunotherapy for Cancer or Viruses. Annu Rev Immunol. 32, 189-225 (2014).
  3. Kumaresan, P. R., et al. Bioengineering T cells to target carbohydrate to treat opportunistic fungal infection. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10660-10665 (2014).
  4. Singh, H., et al. Redirecting specificity of T-cell populations for CD19 using the Sleeping Beauty system. Cancer Res. 68 (8), 2961-2971 (2008).
  5. Kumaresan, P. R., et al. Automating the manufacture of clinically appealing designer T cells. Treatment Strategies-BMT. (1), Available from: http://www.cambridgeresearchcentre.co.uk/all-publications/blood-and-marrow-transplantation/ 55-59 (2014).
  6. Einsele, H., et al. Adoptive transfer of CMVpp65-peptide loaded DCs to improve CMV-specific T cell reconstitution following allogeneic stem cell transplantation. Blood. 100 (11), 214a-214a(2002).
  7. Blyth, E., et al. Donor-derived CMV-specific T cells reduce the requirement for CMV-directed pharmacotherapy after allogeneic stem cell transplantation. Blood. 121 (18), 3745-3758 (2013).
  8. Gerdemann, U., et al. Safety and clinical efficacy of rapidly-generated trivirus-directed T cells as treatment for adenovirus, EBV, and CMV infections after allogeneic hematopoietic stem cell transplant. Mol Ther. 21 (11), 2113-2121 (2013).
  9. Meij, P., et al. Effective treatment of refractory CMV reactivation after allogeneic stem cell transplantation with in vitro-generated CMV pp65-specific CD8+ T-cell lines. J Immunother. 35 (8), 621-628 (2012).
  10. Lee Buckler, J. Enal Razvi,. Rise of Cell-Based Immunotherapy : Personalized Medicine Takes Next Step Forward. Genetic Engineering & Biotechnology News. 33 (5), 12-13 (2013).
  11. Apel, M., et al. Integrated Clinical Scale Manufacturing System for Cellular Products Derived by Magnetic Cell Separation, Centrifugation and Cell Culture. Chem-Ing-Tech. 85 (1-2), 103-110 (2013).
  12. Brestrich, G., et al. Adoptive T-Cell Therapy of a Lung Transplanted Patient with Severe CMV Disease and Resistance to Antiviral Therapy. Am J Transplant. 9 (7), 1679-1684 (2009).
  13. Feuchtinger, T., et al. Clinical grade generation of hexon-specific T cells for adoptive T-cell transfer as a treatment of adenovirus infection after allogeneic stem cell transplantation. J Immunother. 31 (2), 199-206 (2008).
  14. Peggs, K. S., et al. Directly selected cytomegalovirus-reactive donor T cells confer rapid and safe systemic reconstitution of virus-specific immunity following stem cell transplantation. Clin Infect Dis. 52 (1), 49-57 (2011).
  15. Tischer, S., et al. Rapid generation of clinical-grade antiviral T cells: selection of suitable T-cell donors and GMP-compliant manufacturing of antiviral T cells. Journal of Translational Medicine. 12 (1), 336(2014).
  16. Svahn, B. M., Remberger, M., Alvin, O., Karlsson, H., Ringden, O. Increased Costs after Allogeneic Haematopoietic Sct Are Associated with Major Complications and Re-Transplantation. Biol Blood Marrow Transplant. 18 (2), S339-S339 (2012).
  17. Leen, A. M., et al. Multicenter study of banked third-party virus-specific T cells to treat severe viral infections after hematopoietic stem cell transplantation. Blood. 121 (26), 5113-5123 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الخلايا التائية النوعية للفيروس المضخم للخلاياتحليل قياس التدفق الخلويفرز الخلايا بالتنشيط المغناطيسيCliniMACS Prodigyإثراء إنترفيرون جاماعزل الخلايا التائيةالعلاج المناعي التبنيممارسات التصنيع الجيد
الآلي إثراء خلية من الفيروس المضخم للخلايا محددة خلايا T للتطبيقات السريرية باستخدام نظام خلوى التقاط
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.