البروتين التسليم المباشر للخلايا الثدييات عن طريق خلية قابلة للاختراق السيستئين<sub&gt; 2</sub&gt; العاهل<sub&gt; 2</sub&gt; مجالات الزنك الاصبع

Thomas Gaj; Jia Liu

doi:10.3791/52814

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

البروتين التسليم المباشر للخلايا الثدييات عن طريق خلية قابلة للاختراق السيستئين

9.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/52814

⸱

مارس 25, 2015

Thomas Gaj^*¹ , Jia Liu^*¹^,²

¹Departments of Chemistry and Cell and Molecular Biology, The Scripps Research Institute, ²Shanghai Institute for Advanced Immunochemical Studies, ShanghaiTech University

^* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

المجالات الزنك الاصبع هي في جوهرها خلايا قابلة للاختراق وقادرة على التوسط تسليم البروتين في مجموعة واسعة من أنواع الخلايا الثديية. هنا، يتم تقديم خطوة بخطوة بروتوكول مفصلة لتنفيذ تكنولوجيا الزنك والإصبع للداخل الخلايا تسليم البروتين.

الملخص

نظرا لنمطيتها وقدرتها على إعادة برمجتها للتعرف على مجموعة واسعة من تسلسلات الحمض النووي ، ظهرت مجالات ربط الحمض النووي Cys_2-His ₂ بإصبع الزنك كأدوات مفيدة لهندسة الجينوم المستهدفة. مثل العديد من البروتينات الأخرى المرتبطة بالحمض النووي ، تمتلك أصابع الزنك أيضا القدرة الفطرية على عبور أغشية الخلايا. لقد أظهرنا مؤخرا أنه يمكن الاستفادة من نفاذية الخلايا الجوهرية هذه لتوصيل البروتين داخل الخلايا. يؤدي الاندماج الجيني لأشكال أصابع الزنك إلى النقل الفعال لشحنة البروتين والإنزيم إلى مجموعة واسعة من أنواع خلايا الثدييات. على عكس تقنيات نقل البروتين الأخرى ، فإن التوصيل عبر مجالات أصابع الزنك لا يثبط نشاط الإنزيم ويؤدي إلى مستويات عالية من توصيل العصارة الخلوية. هنا يتم تقديم بروتوكول مفصل خطوة بخطوة لتنفيذ تقنية إصبع الزنك لتوصيل البروتين إلى خلايا الثدييات. يتم تسليط الضوء على الخطوات الرئيسية لتحقيق مستويات عالية من التوصيل بوساطة إصبع الزنك داخل الخلايا ومناقشة استراتيجيات تعظيم أداء هذا النظام.

المقدمة

استراتيجيات فعالة للغاية وتنوعا تسليم البروتين حاسمة بالنسبة لكثير من البحوث الأساسية والتطبيقات العلاجية. النقل المباشر لتنقية البروتينات في خلايا يمثل واحدة من أسلم وأسهل الطرق لتحقيق ذلك. وخلافا ^1،2 الاستراتيجيات التي تعتمد على التعبير الجيني من الأحماض النووية، ^3-5 تسليم البروتين يشكل أي خطر من الطفرات إقحامي، مستقلة عن الخلوية النسخ / الآلات الترجمة وتسمح لها تأثير فوري. ومع ذلك، فإن عدم وجود طرق بسيطة وللتعميم عن ومنح النشاط لاختراق الخلية على البروتينات يفند بشكل روتيني دخولهم المباشر في الخلايا. تستند الأساليب الحالية لتسهيل داخل الخلايا تسليم البروتين على استخدام تحدث بشكل طبيعي ^6-8 أو ....