مقالة منهجية

وسم الخلية واستهداف مع مغنطيسية مسايرة فائقة superparamagnetic أوكسيد الحديد النانوية

DOI:

10.3791/53099

⸱

أكتوبر 19, 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Cardiovascular Diseases, Mayo Clinic, 2Division of Engineering, Mayo Clinic, 3School of Medicine, Pharmacy and Health, Durham University, 4Regional Center for Applied Molecular Oncology, Masaryk Memorial Cancer Institute, 5Mayo Clinic College of Medicine, Mayo Clinic

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد توصيل الخلايا المستهدف مفيدا في مجموعة متنوعة من التطبيقات الطبية الحيوية. الهدف من هذا البروتوكول هو استخدام الجسيمات النانوية لأكسيد الحديد الفائق المغناطيسي (SPION) لتسمية الخلايا وبالتالي تمكين أساليب استهداف الخلايا المغناطيسية للحصول على درجة عالية من التحكم في توصيل الخلايا وتوطينها.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سوف تستهدف إيصال الخلايا والعوامل العلاجية تستفيد مجموعة واسعة من التطبيقات الطبية الحيوية من خلال التركيز على تأثير علاجي في الموقع المستهدف مع التقليل من الآثار الضارة إلى مواقع خارج المرمى. استهداف الخلايا المغناطيسي هي تقنية فعالة وآمنة واضحة التسليم. النانوية أكسيد الحديد مغنطيسية مسايرة فائقة superparamagnetic (SPION) هي قابلة للتحلل، حيويا، ويمكن endocytosed إلى خلايا لجعلها تستجيب للمجالات المغناطيسية. عملية التوليف ينطوي على خلق أكسيد الحديد الأسود (الحديد 3 O 4) النانوية تليها عالية السرعة استحلاب لتشكيل بولي (حمض اللاكتيك، شارك في الجليكوليك) (PLGA) الطلاء. وSPIONs PLGA-المغنتيت ما يقرب من 120 نانومتر في قطر بما في ذلك ما يقرب من 10 نانومتر قطر المغنتيت الأساسية. عندما وضعت في مستنبت، وendocytosed SPIONs بشكل طبيعي عن طريق الخلايا وتخزينها في شكل مجموعات صغيرة داخل الإندوسومات حشوية. هذه الجسيمات المغناطيسية نقلها كتلة كافية للخلاياللسماح لاستهداف ضمن المجالات المغناطيسية. يتم تمكين العديد من فرز الخلايا والتطبيقات التي تستهدف من خلال تقديم مختلف أنواع الخلايا تستجيب للمجالات المغناطيسية. SPIONs دينا مجموعة متنوعة من التطبيقات الطبية الحيوية الأخرى كذلك بما في ذلك استخدام كعامل النقيض التصوير الطبي، استهدفت تسليم المخدرات أو الجينات، وفحوصات تشخيصية، وجيل من ارتفاع الحرارة المحلي لعلاج الورم أو الأنسجة لحام.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من المستحسن التسليم المستهدف للخلايا والتقاطها إلى مواقع محددة داخل الجسم لمجموعة متنوعة من التطبيقات الطبية الحيوية. تم اقتراح توصيل الخلايا الجذعية العصبية إلى الدماغ عن طريق الموجات فوق الصوتية المركزة الموجهة بالرنين المغناطيسي كخيار علاجي محتمل للأمراض التنكسية العصبية وإصابات الدماغ الرضحية والسكتةالدماغية 1. تتم دراسة الخلايا الجذعية الوسيطة لقدرتها على توصيل الأدوية المضادة للسرطان إلى الأورام بسبب خصائصها الطبيعية للورمالاستوائي 2،3. تم تسليم الخلايا الجذعية للقلب إلى القلب كعلاج محتمل لاحتشاء عضلة القلب4،5. تم تطوير الدعامات الوعائية مع الأجسام المضادة CD34 لالتقاط الخلايا السلفية المنتشرة6. على الرغم من أنها واعدة ، إلا أن مناهج استهداف الخلايا هذه تمثل عيوبا بما في ذلك نقص خصوصية الخلية ، والاحتفاظ غير المتسق بالخلايا ، وتسليم الخلايا خارج الهدف.

الهدف العام للطريقة الحالية هو تمكين الاستهداف الموجه مغناطيسيا للخلايا لمجموعة متنوعة من تطبيقات توصيل الخلايا وفرزها. يسمح الاستهداف المغناطيسي بالتسليم الخاضع للرقابة لخلايا معينة إلى موقع مستهدف معين مع الحد الأدنى من التأثيرات غيرالمستهدفة 7. يمكن إنشاء المجالات المغناطيسية بواسطة الأجهزة المزروعة أو الخارجية لتوجيه حركة الخلايا ذات العلامات المغناطيسية داخل الجسمبأمان 8. ركزت العديد من الجهود البحثية على استهداف الخلايا الجذعية الموجهة مغناطيسيا للأنسجة المصابة مثل القلب9-14 ، وشبكيةالعين 15 ،والرئة 16 ، والجلد17 ، والحبل الشوكي18،19 ، والعظام20 ، والكبد21 ، والعضلات22،23 من أجل تحسين نتائج التجديد.

< p class = 'jove_content'> تمت دراسة الاستهداف المغناطيسي للخلايا على نطاق واسع كوسيلة لإنقاط أجهزة القلب والأوعية الدموية القابلة للزرع. توفر البطانة الموحدة والكاملة حاجزا بين الجهاز وعناصر الدم المنتشرة للتخفيف من تجلط الدم والالتهابات. يمكن توصيل الخلايا البطانية إلى الجهاز إما قبل الزرع أو عبر نظام الأوعية الدموية بعد الزرع. في كلتا الحالتين ، يتم استخدام المجالات المغناطيسية لالتقاط الخلايا على سطح الجهاز والاحتفاظ بالخلايا عند تعرضها لإجهاد القص الناتج عن الدورة الدموية. تم تصنيع واختبار دعامات الأوعية الدموية المغناطيسية24-27 والطعوم الوعائية28 لهذا الغرض.

يتطلب استهداف الخلايا المغناطيسية

استراتيجية لتصنيف الخلايا بجزيئات الناقل المغناطيسي. يمكن ربط هذه الجسيمات بسطح الخلايا عبر الأجسام المضادة أو أزواج الترابط / المستقبلات أو يمكن إدخالها في الخلايا. الجسيمات النانوية لأكسيد الحديد فائقة المغناطيسية (SPION) قابلة للتحلل البيولوجي ومتوافقة حيويا ويمكن خلطها بسهولة بواسطة مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا29. تجعل هذه الجسيمات الخلية تستجيب بشكل فعال للمجالات المغناطيسية وتتحلل بشكل طبيعي بمرور الوقت. توفر SPIONs وسيلة مباشرة وآمنة لوضع العلامات المغناطيسية على الخلايا في المزرعة لمجموعة متنوعة من تطبيقات الاستهداف والفرز المغناطيسية. يتم توفير طريقة لتصنيع SPIONs مع قلب المغنتيت (Fe3O4) وقشرة بولي (حمض اللاكتيك كو جليكوليك) (PLGA). بالإضافة إلى ذلك ، يتم توفير طريقة لوضع العلامات على الخلايا في الثقافة باستخدام SPIONs.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. توليف أكسيد الحديد الأسود جل

  1. غسل جميع الأواني الزجاجية باستخدام حمض الهيدروكلوريك المركز يليه الماء منزوع الأيونات تليها الكحول الإيثيلي. السماح ليجف O / N، ويفضل أن يكون في فرن التجفيف.
    الحذر! حمض الهيدروكلوريك هو ضار - ارتداء معدات الوقاية الشخصية والعمل في غطاء الدخان. الكحول الإيثيلي مضر - ارتداء معدات الوقاية الشخصية.
  2. استخدام زجاجة Dreschel للتخلص من الغاز 500 مل من H 2 O منزوع الأيونات التي ظهرت على السطح بلطف N 2 الغاز لمدة 30 دقيقة.
  3. انشاء جهاز التوليف المغنتيت داخل غطاء الدخان الكيميائية.
    1. وضع 500 قارورة مل ثلاثة الرقبة جولة القاع داخل سخان isomantle وتأمين الرقبة مركز باستخدام المشبك والوقوف.
    2. تثبيت الحاجز المطاطي في واحدة من رقاب الجانب دورق كروي ومكثف ارتداد مع الحاجز المطاطي في الرقبة الجانب المتبقية. باستمرار تشغيل المياه الباردة من خلال المكثف الراجع.
    3. ثقب عشرالبريد الحاجز المطاطي دورق كروي مع إبرة متصلة بخط الغاز N 2 وثقب الحاجز المطاطي المكثف الراجع مع إبرة متصلة خط للغاز يمتد إلى الفوار (أي قارورة بالماء) لتصور تدفق الغاز.
    4. تثبيت مجداف نصل إلى مركز رقبة دورق كروي وعبر محول مجداف. إرفاق رمح مجداف شفرة لوالنمام النفقات العامة التي شنت على موقف.
  4. تطهير دورق كروي مع N 2 الغاز وترك N 2 تدفق الغاز بمعدل منخفض، ولكن يمكن كشفها.
  5. إزالة المكثف الراجع من دورق كروي وإضافة 1.000 غرام من الحديد (III) كلوريد، 0.6125 غرام من الحديد (II) كلوريد tetrahydrate، و 50 مل من بالغاز دي H 2 O.
    الحذر! الحديد (III) كلوريد الحديد و(II) كلوريد tetrahydrate ضارة - ارتداء معدات الوقاية الشخصية.
  6. استبدال المكثف الراجع ويقلب في 1000 دورة في الدقيقة في حين تسخين إلى 50° C. اثارة في ظل هذه الظروف تنتج 10 نانومتر النانوية قطر المغنتيت.
  7. مرة واحدة على 50 ° C، إضافة 10 مل من 28٪ من محلول هيدروكسيد الأمونيوم عن طريق حقن من خلال الحاجز المطاطي في دورق كروي في حين لا يزال التحريك.
    الحذر! هيدروكسيد الأمونيوم مضر - ارتداء معدات الوقاية الشخصية.
    ملاحظة: يستخدم محلول هيدروكسيد الأمونيوم لترسيب الحديد الأسود وينبغي أن يتحول الحل السوداء.
  8. إزالة الحاجز المطاطي وخط الغاز N 2 من دورق كروي والحرارة إلى 90 درجة مئوية إلى سيغلي غاز الامونيا في حين لا يزال التحريك.
    ملاحظة: وهو اختياري للحفاظ على تدفق N 2 في دورق كروي بواسطة ثقب الحاجز المطاطي المكثف الراجع، ومع ذلك، أكسدة المغنتيت إلى maghemite لا يكاد يذكر خلال هذه الخطوة.
  9. مرة واحدة على 90 ° C، إضافة 1 مل من حمض الأوليك إلى دورق كروي في حين لا يزال التحريك. يتم استخدام حمض الأوليك لمعطف المغنتيت غnoparticles لتشكيل هلام المغنتيت.
    الحذر! حمض الأوليك مضر - ارتداء معدات الوقاية الشخصية.
  10. استبدال الحاجز المطاطي وخط الغاز N 2 على دورق كروي وإزالة المكثف الراجع.
  11. إيقاف الحرارة ويقلب في 500 دورة في الدقيقة لمدة 2 ساعة.
  12. إزالة دورق كروي من المدفأة isomantle وصب أي السائل المتبقي أثناء استخدام مغناطيس قوي عقد على أسفل القارورة الإبقاء على هلام المغنتيت.
    الحذر! التعامل مع مغناطيس قوي مع الحذر الشديد لتجنب أضرار أو إصابات.
  13. السماح هلام المغنتيت إلى O-الهواء الجاف / N (اختياري).

2. تنقية أكسيد الحديد الأسود جل

  1. إضافة 40 مل من الهكسان في دورق كروي بحل جل المغنتيت
    الحذر! الهكسان مضر - ارتداء معدات الوقاية الشخصية والعمل في غطاء الدخان.
  2. استخدام قمع فصل مع 40 مل من بالغاز دي H 2 O لإزالة المتبقي H 2 O جيئة وذهابام الحل المغنتيت.
    1. صب ببطء الحل المغنتيت على H 2 O في قمع فصل ودوامة بلطف السائل مرحلتين لمدة 5 دقائق.
    2. تجفيف والتخلص من جزء مائي أقل.
    3. إضافة ببطء 40 مل من بالغاز دي H 2 O لقمع فصل بحيث يستقر تحت الحل المغنتيت ودوامة بلطف واستنزاف كما كان من قبل.
    4. تكرار غسل للمرة الثالثة.
  3. نقل حل المغنتيت إلى دورق مخروطي، إضافة بضع ملاعق بقيمة كبريتات الصوديوم اللامائية، ودوامة لإزالة أي بقايا المتبقية H 2 O من الحل المغنتيت.
  4. تصفية حل المغنتيت من خلال ورق الترشيح 1 ميكرون في قمع مرشح لإزالة كبريتات الصوديوم وH 2 O. المتبقية
    ملاحظة: يوصى المساعدة فراغ.
  5. نقل الحل المغنتيت إلى 50 مل تبخر قارورة واستخدام المبخر الدوار حتى يتبخر الهكسان ل2 ساعة مع الشروط التالية: معتدلة السرعة التناوب، فراغ تطبيقها، تبخر قارورة في 50 ° C حمام الماء، و 24 ° C المياه من خلال تعميم المكثف.
    ملاحظة: اختياريا، تخزين هلام المغنتيت قبل طلاء مع PLGA.

3. طلاء من أكسيد الحديد النانوية مع PLGA شل

  1. حل 3.60 غرام من PLGA (75/25 مزيج) في 240 مل من خلات الإيثيل لخلق 1.5٪ (م / ت) حل. تنبيه: خلات الإيثيل هو ضار - ارتداء معدات الوقاية الشخصية والعمل في غطاء الدخان.
  2. حل 25.00 غرام من Pluronic F-127 في 500 مل من بالغاز دي H 2 O باستخدام محرك مغناطيسي لخلق 5.0٪ (م / ت) حل.
    ملاحظة: Pluronic F-127 هو غير الأيونية البوليمرات كتلة محبة للجهتين التي تعمل بمثابة السطحي حيويا. فإنه يساعد على استقرار مستحلب النفط في المياه في الخطوة 3.3.2.
  3. باستخدام microspatula، وجمع جل المغنتيت إلى ست 0.040 ز قسامات داخل قوارير زجاجية مرجح. الأداء الإقتصادي الأداءاسندت عملية الطلاء وغسل التالية لكل قسامة.
    ملاحظة: قسامات ضرورية لضمان التعامل الفعال والصفق المغناطيسي، والذي سوف يضاعف النقاء والعائد وتقليل تدهور مسبق لتجميد التجفيف في الخطوة 4.
    1. إضافة 0.040 ز قسامة من هلام المغنتيت و 40 مل من محلول PLGA إلى كوب من البلاستيك ويصوتن في نظافة بالموجات فوق الصوتية لمدة 10 دقيقة.
    2. إضافة 80 مل من محلول Pluronic إلى كوب من البلاستيك ويستحلب فورا مع خلاط مختبر في أعلى الإعداد لمدة 7 دقائق لتشكيل طلاء PLGA على الجسيمات النانوية أكسيد الحديد الأسود كما مستحلب النفط في المياه.
    3. تمييع فورا الحل SPION في 1 لتر من H 2 O منزوع الأيونات ويصوتن لمدة 1 ساعة في غطاء الدخان الكيميائي لتتبخر وخلات الإيثيل.
    4. وضع مغناطيس قوي إلى جانب حل SPION ويحرك برفق لجمع SPIONs البني في المغناطيس.
      ملاحظة: قد يكون من الضروري أن يحرك بشكل متقطع لعدة ساعاتالصورة قبل حل يتحول بيضاء تشير إلى أن معظم SPIONs تم جمعها.
    5. صب محلول مائي مع الاحتفاظ SPIONs في الدورق مع المغناطيس.
    6. غسل SPIONs ثلاث مرات على النحو التالي.
      1. تعليق SPIONs في 1 لتر من منزوع الأيونات H 2 O.
      2. يصوتن الحل SPION لمدة 20 دقيقة.
      3. وضع مغناطيس قوي إلى جانب حل SPION ويحرك برفق لجمع SPIONs البني في المغناطيس. قد يكون من الضروري أن يحرك بشكل متقطع لعدة ساعات قبل يدور الحل واضح يشير إلى أن معظم SPIONs تم جمعها.
      4. صب محلول مائي مع الاحتفاظ SPIONs في الدورق مع المغناطيس.
  4. جمع SPIONs توليفها من كل من الستة قسامات هلام المغنتيت في عملية واحدة المرجح قارورة زجاجية بمثابة تعليق مائي. اختياريا صب الماء الزائد مغناطيسيا حسب الحاجة.

4. تجميد-drying من SPIONs

  1. تجميد الحل SPION.
  2. تجميد الجافة الحل SPION O / N في مجفاد.
  3. تزن SPIONs تجميد المجفف. ويمكن تخزين SPIONs تجميد المجفف في -20 درجة مئوية حتى تستخدم لوضع العلامات الخلية.
    ملاحظة: التخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية بشكل كبير يقلل حركية التدهور ويزيد من العمر الافتراضي.

5. وصفها من الخلايا مع SPIONs

  1. تعليق قسامة من SPIONs في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) بتركيز 40 ملغ / مل ويصوتن لمدة 30 دقيقة.
  2. إضافة محلول SPION إلى قارورة متكدسة تقريبا من الخلايا بتركيز 5 ميكرولتر / مل من مستنبت الخلية. ضمان حتى التوزيع هزاز بلطف القارورة.
  3. احتضان الخلايا لمدة 16 ساعة على 37 درجة مئوية.
  4. نضح بلطف مستنبت وغسل خلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني.
  5. جمع الخلايا المسمى مغناطيسيا واستخدام لإجراء التجارب.
  6. ويمكن تخزين حل SPION غير مستخدمة في 4 درجات مئوية، وينبغي أن يكون لناإد في غضون بضعة أشهر. يصوتن لمدة 30 دقيقة قبل كل استعمال.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النانوية أكسيد الحديد الأسود ما يقرب من 10 نانومتر في قطر نتيجة لاثارة محلول مائي من الحديد (III) كلوريد الحديد و(II) كلوريد tetrahydrate في 50 ° C و 1،000 دورة في الدقيقة (الشكل 1). هذه النتائج تظهر التوليف الناجح للجزيئات النانوية أكسيد الحديد الأسود. من المهم التحقق من حجم وشكل الجسيمات النانوية أكسيد الحديد الأسود أخذت من عينة صغيرة من الدفعة عند محاولة توليف للمرة الأولى. المجهر انتقال الإلكترون (TEM) هو الأسلوب المفضل لتصور هذه الجسيمات. يجب التخلص من الدفعة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما هو الحال مع أي بروتوكول تخليق جسيمات متناهية الصغر، ونقاء من المواد الكيميائية المتفاعلة أمر بالغ الأهمية لتحقيق SPIONs جودة عالية من شأنها أن يكون لها تأثيرات السامة للخلايا الحد الأدنى. ولذلك فمن المهم لشراء الكواشف نقية جدا بما في ذلك حمض الأوليك (≥99٪)، الحديد (II) tetrahydrate كلوريد (≥99.99٪)، الحديد (III) كلوريد (≥99.99٪)، خلات الإيثيل (HPLC الصف، ≥99.9٪ )، الهكسان (الصف HPLC، ≥97.0٪)، هيدروكسيد الأمونيوم (≥99.99٪)، وكبريتات الصوديوم (≥99.0٪). ومن أهمية خاصة لشراء نقية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرغب المؤلفون في الاعتراف بالتمويل المقدم من صندوق التنمية الإقليمية الأوروبي - FNUSA-ICRC (no. CZ.1.05 / 1.1.00 / 02.0123) ، منحة تطوير علماء جمعية القلب الأمريكية (AHA # 06-35185N) ، والمعاهد الوطنية للصحة (NIH #T32HL007111).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
محلول هيدروكسيد الأمونيوم ، 28٪ NH3< / sub> في H2< / sub>O ، & ge ؛ 99.99٪ أساس معدني نزرةسيجما ألدريتش338818-100ML   ؛كاشف ضار - ارتداء معدات الحماية الشخصية
زجاجة دريشيل ، 500 ملAce Glass5516-16
Ethyl Acetate ، CHROMASOLVR Plus ، ل HPLC ، 99.9٪   ؛كاشف ضار Sigma-Aldrich650528-1L- ارتد معدات الحماية الشخصية واعمل في غطاء الدخان
الكحول الإيثيليSigma-AldrichE7023كاشف ضار - ارتد معدات الحماية الشخصية
قارورة تبخير ، 50 مل ، 24/40 مشتركSigma-AldrichZ515558للاستخدام مع المبخر الدوار
ورق ترشيح ، قطر 3 سم ، درجة 1فيشر09-805Pللاستخدام مع قمع مرشح الزجاج
أكواب زجاجية ، 1 لترفيشرFB-101-1000لغسل SPIONs
قمع مرشح زجاجي ، محول خرطوم فراغ ، يناسب 24/40 ، 30 ملفيشرK954100-0344   ؛
أغطية قارورة زجاجيةفيشر03-391-46للاستخدام مع قوارير زجاجية
قوارير زجاجية ، 2 ملفيشر03-391-44لجمع جل المغنتيت و SPIONs
Hexane ، CHROMASOLVR ، ل HPLC ، & ge ؛ 97.0٪ (GC)سيجما ألدريتش34859-1L كاشف ضار - ارتد معدات الحماية الشخصية واعمل في غطاء الدخان
حمض الهيدروكلوريكسيجما ألدريتشH1758كاشف ضار - ارتد معدات الحماية الشخصية واعمل في غطاء الدخان
الحديد (II) كلوريد رباعي الهيدرات ، & ge ؛ 99.99٪ أساس المعادن النزرة كاشف ضار Sigma-Aldrich380024-5G- ارتد معدات الحماية
الشخصية كلوريد الحديد (III) اللامائي ، مسحوق ، & ge ؛ 99.99٪ أساس المعادن النزرةSigma-Aldrich451649-1Gكاشف ضار - ارتداء معدات الحماية
الشخصية سخان Isomantle ، 500 ملخلاط مختبر Voight GlobalEM0500 / CEX1
SilversonL5M-A
LyophilizerLabconco7670520
MicrospatulasFisher21-401-25Aلنقل المغنتيت
مغناطيس هلام NdFeB ، 1 في × 1 بوصة × 1 فيمغناطيس مذهلC1000H-Mمغناطيس قوي جدا ، يتعامل بحذر
حمض الأوليك ، & ge ؛ 99٪ (GC)Sigma-AldrichO1008-5G تخزينها في الفريزر ؛ كاشف ضار - ارتداء معدات الحماية الشخصية
النمام العلويIKA2572201
مشبك النمام العلويIKA2664000للاستخدام مع النمام العلوي
النمام العلوي H-standIKA1412000للاستخدام مع النمام العلوي
الفوسفات المخزنةالملحية Life Technologies10010-023
أكواب بلاستيكية ، 250 مليمكن أيضا استخدام Fisher02-591-28
PLGA PURASORB PDLG (مزيج 75/25)يمكن استخدام PuracPDLG 7502PDLG 7502A ؛ يحفظ في الفريزر
مسحوق Pluronic F-127 ، كاشف حيوي ، مناسب لزراعة الخلاياSigma-AldrichP2443-250G & nbsp ؛
مجداف شفرة قابل للتوسيع PTFE ،SciQuipSP4018
PTFE بقطر 8 مم ، يناسب 24/40 ، مجداف 8 مم محولMonmouth ScientificPTFE A480للاستخدام مع مجداف الشفرة القابل للتوسيع PTFE
مبرد إعادة التدويرClarkson696613للاستخدام مع مكثف الارتجاع المبخر
الدوار ، يناسب 24/40 ، 250 ممزجاج Ace5997-133
المبخر الدواركلاركسون216949
الحاجز المطاطي ، يناسب 24/40Ace Glass9096-56
قمع فاصل مع سدادة ، 250 ملفيشر10-438E
كاشف كبريتات الصوديوم ACS ، & ge ؛ 99.0٪ ، لا مائي ، حبيبيSigma-Aldrich239313-500G & nbsp ؛
ثلاثة قارورة مستديرة للرقبة ، بزاوية ، 24/40 مفاصل ، 500 ملAce Glass6948-16
منظف بالموجات فوق الصوتية مثقب عمومفيشر15-335-20Aللاستخدام مع منظف بالموجات فوق الصوتية
منظف بالموجات فوق الصوتية ، 2.8 لترفيشر15-335-20
وحدة تحكم فراغClarkson216639للاستخدام مع المبخر الروتوي (اختياري)
فراغ مضخةكلاركسون219959للاستخدام مع المبخر الروتوبي
محول وعاء سفينة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Burgess, A., et al. Targeted delivery of neural stem cells to the brain using MRI-guided focused ultrasound to disrupt the blood-brain barrier. PLoS One. 6 (11), e27877(2011).
  2. Nguyen, K. T. Mesenchymal Stem Cells as Targeted Cell Vehicles to Deliver Drug-loaded Nanoparticles for Cancer Therapy. J Nanomed Nanotechol. 4 (1), e128(2013).
  3. Kean, T. J., Lin, P., Caplan, A. I., Dennis, J. E. MSCs: Delivery Routes and Engraftment, Cell-Targeting Strategies, and Immune Modulation. Stem Cells Int. , 732742(2013).
  4. Suzuki, K., et al. Targeted cell delivery into infarcted rat hearts by retrograde intracoronary infusion: distribution, dynamics, and influence on cardiac function. Circulation. 110 (11 Suppl 1), II225-II230 (2004).
  5. Garbern, J. C., Lee, R. T. Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration. Cell Stem Cell. 12 (6), 689-698 (2013).
  6. Duckers, H. J., et al. Accelerated vascular repair following percutaneous coronary intervention by capture of endothelial progenitor cells promotes regression of neointimal growth at long term follow-up: final results of the Healing II trial using an endothelial progenitor cell capturing stent (Genous R stent). EuroIntervention. 3 (3), 350-358 (2007).
  7. Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells. Chem Soc Rev. 41 (7), 2912-2942 (2012).
  8. Huang, Z. Y., et al. Deep magnetic capture of magnetically loaded cells for spatially targeted therapeutics. Biomaterials. 31 (8), 2130-2140 (2010).
  9. Shen, Y., et al. Comparison of Magnetic Intensities for Mesenchymal Stem Cell Targeting Therapy on Ischemic Myocardial Repair: High Magnetic Intensity Improves Cell Retention but Has No Additional Functional Benefit. Cell Transplant. , (2014).
  10. Cheng, K., et al. Magnetic antibody-linked nanomatchmakers for therapeutic cell targeting. Nat Commun. 5, 4880(2014).
  11. Vandergriff, A. C., et al. Magnetic targeting of cardiosphere-derived stem cells with ferumoxytol nanoparticles for treating rats with myocardial infarction. Biomaterials. 35 (30), 8528-8539 (2014).
  12. Huang, Z., et al. Magnetic targeting enhances retrograde cell retention in a rat model of myocardial infarction. Stem Cell Res Ther. 4 (6), 149(2013).
  13. Chaudeurge, A., et al. Can magnetic targeting of magnetically labeled circulating cells optimize intramyocardial cell retention. Cell Transplant. 21 (4), 679-691 (2012).
  14. Cheng, K., et al. Magnetic targeting enhances engraftment and functional benefit of iron-labeled cardiosphere-derived cells in myocardial infarction. Circ Res. 106 (10), 1570-1581 (2010).
  15. Yanai, A., et al. Focused magnetic stem cell targeting to the retina using superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Cell Transplant. 21 (6), 1137-1148 (2012).
  16. Ordidge, K. L., et al. Coupled cellular therapy and magnetic targeting for airway regeneration. Biochem Soc Trans. 42 (3), 657-661 (2014).
  17. El Haj, A. J., et al. An in vitro model of mesenchymal stem cell targeting using magnetic particle labelling. J Tissue Eng Regen Med. , (2012).
  18. Vanecek, V., et al. Highly efficient magnetic targeting of mesenchymal stem cells in spinal cord injury. Int J Nanomedicine. 7, 3719-3730 (2012).
  19. Sasaki, H., et al. Therapeutic effects with magnetic targeting of bone marrow stromal cells in a rat spinal cord injury model. Spine (Phila Pa 1976). 36 (12), 933-938 (2011).
  20. Oshima, S., et al. Enhancement of bone formation in an experimental bony defect using ferumoxide-labelled mesenchymal stromal cells and a magnetic targeting system. J Bone Joint Surg Br. 92 (11), 1606-1613 (2010).
  21. Luciani, A., et al. Magnetic targeting of iron-oxide-labeled fluorescent hepatoma cells to the liver. Eur Radiol. 19 (5), 1087-1096 (2009).
  22. Oshima, S., Kamei, N., Nakasa, T., Yasunaga, Y., Ochi, M. Enhancement of muscle repair using human mesenchymal stem cells with a magnetic targeting system in a subchronic muscle injury model. J Orthop Sci. 19 (3), 478-488 (2014).
  23. Ohkawa, S., et al. Magnetic targeting of human peripheral blood CD133+ cells for skeletal muscle regeneration. Tissue Eng Part C Methods. 19 (8), 631-641 (2013).
  24. Tefft, B. J., et al. Magnetizable Duplex Steel Stents Enable Endothelial Cell Capture. Ieee T Magn. 49 (1), 463-466 (2013).
  25. Uthamaraj, S., et al. Design and validation of a novel ferromagnetic bare metal stent capable of capturing and retaining endothelial cells. ABME. 42 (12), 2416-2424 (2014).
  26. Polyak, B., et al. High field gradient targeting of magnetic nanoparticle-loaded endothelial cells to the surfaces of steel stents. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 105 (2), 698-703 (2008).
  27. Pislaru, S. V., et al. Magnetically targeted endothelial cell localization in stented vessels. J Am Coll Cardiol. 48 (9), 1839-1845 (2006).
  28. Pislaru, S. V., et al. Magnetic forces enable rapid endothelialization of synthetic vascular grafts. Circulation. 114 (1 Suppl), 314-318 (2006).
  29. Wang, Y. X., Xuan, S., Port, M., Idee, J. M. Recent advances in superparamagnetic iron oxide nanoparticles for cellular imaging and targeted therapy research. Curr Pharm Des. 19 (37), 6575-6593 (2013).
  30. Yellen, B. B., et al. Targeted drug delivery to magnetic implants for therapeutic applications. J Magn Magn Mater. 293 (1), 647-654 (2005).
  31. Granot, D., et al. Clinically viable magnetic poly(lactide-co-glycolide) particles for MRI-based cell tracking. Magn Reson Med. , (2013).
  32. Levy, M., et al. Long term in vivo biotransformation of iron oxide nanoparticles. Biomaterials. 32 (16), 3988-3999 (2011).
  33. Mirshafiee, V., Mahmoudi, M., Lou, K., Cheng, J., Kraft, M. L. Protein corona significantly reduces active targeting yield. Chem Commun (Camb). 49 (25), 2557-2559 (2013).
  34. Salvati, A., et al. Transferrin-functionalized nanoparticles lose their targeting capabilities when a biomolecule corona adsorbs on the surface. Nat Nanotechnol. 8 (2), 137-143 (2013).
  35. Landazuri, N., et al. Magnetic targeting of human mesenchymal stem cells with internalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Small. 9 (23), 4017-4026 (2013).
  36. Sun, J. H., et al. In vitro labeling of endothelial progenitor cells isolated from peripheral blood with superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Mol Med Rep. 6 (2), 282-286 (2012).
  37. Zhang, B., et al. Detection of viability of transplanted beta cells labeled with a novel contrast agent - polyvinylpyrrolidone-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles by magnetic resonance imaging. Contrast Media Mol Imaging. 7 (1), 35-44 (2012).
  38. Song, M., et al. Labeling efficacy of superparamagnetic iron oxide nanoparticles to human neural stem cells: comparison of ferumoxides, monocrystalline iron oxide, cross-linked iron oxide (CLIO)-NH2 and tat-CLIO. Korean J Radiol. 8 (5), 365-371 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

PLGA

مقالات ذات صلة