العديد من أنواع أورام الدماغ البشرية مترجمة في مناطق محددة داخل الدماغ ويصعب نموها في الثقافة. يتناول هذا البروتوكول دور البيئة المكروية للورم ويبحث في العلاجات الدوائية الجديدة من خلال تحليل خلايا ورم الدماغ الأولية الفلورية التي تنمو في شريحة دماغ فأر عضوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ورم في المخ / شريحة عضوي النمط المشارك ثقافة النظام لدراسة ورم المكروية والمستهدفة المخدرات العلاجات
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أورام الدماغ هي سبب رئيسي للمراضة والوفيات المرتبطة بالسرطان. من الصعب تطوير علاجات جديدة لهذه السرطانات ، حيث لا يمكن زراعة العديد من هذه الأورام بسهولة في ظروف الاستزراع القياسية. وسعت مزارع الغلاف العصبي في ظل ظروف خالية من المصل والطعوم الغريبة تقويم العظام نطاق الأورام التي يمكن الحفاظ عليها. ومع ذلك ، لا يزال من الصعب نشر العديد من أنواع أورام المخ أو دراستها. هذا ينطبق بشكل خاص على أورام الدماغ لدى الأطفال مثل الأورام النجمية الشعرية والأورام الأرومية النخاعية. يصف هذا البروتوكول نظاما يسمح بزراعة أورام الدماغ البشرية الأولية في المزرعة. يمكن استخدام هذا الاختبار الكمي للتحقيق في تأثير البيئة المكروية على نمو الورم ، ولاختبار العلاجات الدوائية الجديدة. يصف هذا البروتوكول نظاما تزرع فيه خلايا ورم الدماغ المصنفة بالفلورسنت على شريحة دماغية عضوية من فأر صغير. يمكن دراسة استجابة الخلايا السرطانية للعلاجات الدوائية في هذا الاختبار ، من خلال تحليل التغيرات في عدد الخلايا الموجودة على الشريحة بمرور الوقت. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لهذا النظام معالجة طبيعة البيئة المكروية التي تعزز عادة نمو أورام الدماغ. يوفر مقايسة الزراعة المشتركة لشريحة النمط العضوي لورم الدماغ نظاما مناسبا لاختبار أدوية جديدة على الخلايا السرطانية البشرية داخل بيئة مكروية للدماغ.
المقدمة
جعلت أبحاث السرطان مؤخرا التطورات الهامة في تحديد الطفرات الجينية، والتغيرات الجزيئية والعلاجات الممكنة لمجموعة متنوعة من أورام المخ. وعلى الرغم من هذا التقدم، لا تزال أورام المخ واحدة من الأسباب الرئيسية للوفيات المرتبطة بالسرطان للبالغين والأطفال. وتشمل العوامل التي تحد في مجال البحوث ورم في المخ القيود المفروضة على توفر عينات المريض الابتدائية وخطوط الخلايا وصعوبة في تكرار المكروية الدماغ فريدة من نوعها وغير المتجانسة في النظم التجريبية يمكن الوصول إليها. بالنسبة لكثير من أورام الدماغ الشروط المطلوبة للحفاظ على الخلايا السرطانية مع مرور الوقت ليست معروفة بعد. حتى لعلاج أورام المخ التي يمكن زراعتها في تعليق خلية كما neurosphe....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد أجريت الإجراء التالي التي تجرى على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان السرطان المؤسسي دانا فاربر: بيان الأخلاق. وجرى استعراض جميع المواد الإنسان العمل الذي يقوم به المجلس لجان المراجعة المؤسسية للبريغهام ومستشفى النساء ودانا فاربر للسرطان معهد وجامعة ستانفورد للاستخدام المناسب، أن المستنيرة تم الحصول عليها من جميع المواد عند الحاجة، والتنازل المناسب لمتطلبات الموافقة تم الحصول على دراسات المخاطر ضئيلة.
الجدول الزمني للبروتوكول الثقافة شريحة:
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يجسد هذا القسم نوع النتائج التي يمكن توقعها من الاستفادة من ورم في المخ / عضوي النمط شريحة ثقافة مشتركة للتحقيق في تفضيل المكروية الإقليمي وكذلك لاختبار علاجات جديدة. وتبين لنا أن الفحص يهدف إلى تكرار المكروية لعلاج أورام المخ، باعتبارها المنظمة الأنسجة ويتم الحفاظ على الدولة التكاثري للشريحة (الشكل 3). علينا أن نبرهن أيضا أن الزيادة في عدد الخلايا السرطانية على شريحة مع مرور الوقت قد يرجع جزئيا إلى الهجرة من الخلايا على المكروية شريحة الدماغ (الشكل 4).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يصف هذا البروتوكول كيف خلايا ورم في المخ يمكن fluorescently المسمى ومطلي على جزء الدماغ سهمي على فأرة الحاسوب P6 ثم مراقبة لمدة أسبوع واحد في الثقافة. ويمكن استخدام هذا ورم في المخ / عضوي النمط شريحة شارك في الثقافة الاختبار لتحديد تأثير المكروية الإقليمية على عدد الخلايا السرطانية، ويمكن أيضا أن تستخدم كنظام لقياس فعالية من العلاج بالعقاقير الجديدة على نمو الورم البشري. وقد استخدمت دراسات سابقة استراتيجية مماثلة لتقييم دور الدماغ الصغير للبيئة على العصبية 7،8 انتشار ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لا يوجد لدى أي من المؤلفين مصالح متضاربة أو مصالح متضاربة.
شكر وتقدير
هذا العمل مدعوم بمنح من المعاهد الوطنية للصحة (P01CA142536 إلى RAS ، T32CA009361 إلى DPY) ومؤسسة الورم النجمي منخفض الدرجة للأطفال.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| هيبس | إنفيتروجين | 17504044 | |
| الجلوكوز | إنفيتروجين | 17502048 | |
| بينسيلين ستربتومايسين | لايف تكنولوجيز | 15140-122 | |
| HBSS | Life Technologies | 14185-052 | |
| B-27 | Life Technologies | 17504-044 | |
| N2 | Life Technologies | 17502-048 | |
| Glutamax | Life تقنيات | 35050061 | |
| Neurobasal-A- متوسط ناقص الفينول الأحمر | Invitrogen ؛ | 12349015 | |
| نقطة انصهار منخفضة Agarose | Promega | V2111 | |
| إدراج ثقافة الشريحة | Milipore | PICM0RG50 | |
| laminin | Invitrogen | 23017015 | |
| Cm-DiI | Invitrogen | V22888 | |
| EDU (وضع العلامات والكشف) | لايف تكنولوجيز | c10337 | |
| المجهرية | لايف تكنولوجيز | F-21010 | |
| Vibratome | Leica | ||
| متحد البؤر | نيكون Eclipse Ni C2si | ||
| ImageJ software | |||
| نظارات غطاء 5 مم | فيشر العلمي | 64-0700 (CS-5R) |
المراجع
- Heddleston, J. M., et al. Glioma stem cell maintenance: the role of the microenvironment. Curr Pharm Des. 17 (23), 2386-2401 (2013).
- Sasai, K. Shh pathway activity is down-regulated in cultured medulloblastoma cells: implications fo....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
