مقالة منهجية

الدورة الدموية توصيف نماذج القوارض من الرئوي الشرياني ارتفاع ضغط الدم

DOI:

10.3791/53335

⸱

أبريل 11, 2016

 ,  , 
1Department of Medicine, Duke University Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي (PAH) هو مرض يصيب الشرايين الرئوية يؤدي إلى طمسها وتطور فشل البطين الأيمن. تعتبر نماذج القوارض من الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات ضرورية في فهم الفيزيولوجيا المرضية للهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات نوضح هنا توصيف ديناميكية الدم ، مع قسطرة القلب الأيمن وتخطيط صدى القلب ، في الفأر والجرذ.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي (PAH) هو مرض نادر يصيب الأوعية الدموية الرئوية التي تتميز بموت الخلايا المبرمج للخلايا البطانية وتكاثر العضلات الملساء وطمس الشرايين الرئوية. وهذا بدوره يؤدي إلى فشل البطين الأيمن (RV) ، مع مراضة ووفيات كبيرة. تعتبر نماذج القوارض من الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات ، في الفأر والجرذ ، مهمة لفهم الفيزيولوجيا المرضية الكامنة وراء هذا المرض النادر. والجدير بالذكر أن النماذج المختلفة من الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات قد ترتبط بدرجات مختلفة من ارتفاع ضغط الدم الرئوي وتضخم RV وفشل RV. لذلك ، فإن التوصيف الديناميكي الدموي الكامل للفئران والجرذان المصابة بالهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات أمر بالغ الأهمية في تحديد آثار الأدوية أو التعديلات الجينية على المرض.

نوضح هنا الإجراءات القياسية لتقييم وظيفة البطين الأيمن وديناميكا الدم في كل من نماذج الهيدروكربوكربونية متعددة الحلقات الفئران والفئران. يعد تخطيط صدى القلب مفيدا في تحديد وظيفة RV في الفئران ، على الرغم من أن الحصول على مناظر قياسية للبطين الأيمن يمثل تحديا في الفأر المستيقظ. يتم الحصول على الوصول إلى قسطرة القلب الأيمن عن طريق الوريد الوداجي الداخلي في الفئران والجرذان المغلقة الصدر. يمكن قياس الضغوط باستخدام أنابيب البولي إيثيلين مع محول ضغط السوائل أو قسطرة ضغط ميكرومانومتر مصغرة. يمكن إجراء تحليل حلقة حجم الضغط في الصندوق المفتوح. بعد الحصول على ديناميكا الدم ، يتم القتل الرحيم للقوارض. يمكن تشريح القلب لفصل الجدار الخالي من RV عن البطين الأيسر (LV) والحاجز ، مما يسمح بتقييم تضخم RV باستخدام مؤشر Fulton (RV / (LV + S)). ثم يمكن حصاد العينات من القلب والرئتين والأنسجة الأخرى حسب الحاجة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الرئوي ارتفاع ضغط الدم الشرياني (الهيئة العامة للإسكان) هو مرض يصيب الأوعية الدموية الرئوية المرتبطة تسلل خلية التهابات، وانتشار العضلات الملساء وموت الخلايا المبرمج البطانية. هذه التغيرات تؤدي إلى طمس الشرايين الرئوية، مما يؤدي بعد ذلك إلى البطين الأيمن (RV) ضعف وقصور في القلب. من أجل فهم الفيزيولوجيا المرضية الكامنة الهيئة العامة للإسكان والفشل RV في الهيئة العامة للإسكان، وضعت عددا من النماذج المختلفة، بما في ذلك النماذج الوراثية والدوائية، لدراسة هذا المرض (إعادة النظر في أماكن أخرى 1،2).

من هذه النماذج، والأكثر شعبية هي (HX) الهيئة العامة للإسكان التي يسببها نقص الأكسجة في الماوس وmonocrotaline (MCT) ونماذج SU5416 نقص الأكسجة (SuHx) في الفئران. في نموذج HX الماوس، تتعرض الفئران إلى 4 أسابيع من نقص الأكسجة (إما نظامي الضغط أو ناقص الضغط الموافق على ارتفاع 18،000 قدم مع FiO2 من 0.10)، مع تطور الناتجة من انتشار وسطي، وزيادة RV نظم الالضغوط اوليتش ​​وتطوير RV تضخم 3. MCT في جرعة واحدة من 60 ملغ / كغ من النتائج في إصابة الخلايا البطانية الرئة من خلال آلية واضحة أن ذلك يؤدي إلى تطوير الهيئة العامة للإسكان 4. SU5416 هو مثبط لمستقبلات الأوعية الدموية البطانية عامل النمو (VEGFR) 1 و 2 مانع، وعلاج مع الحقن تحت الجلد واحد من 60 ملغ / كغ تليها التعرض لنقص الأكسجين المزمن لمدة 3 أسابيع النتائج في ارتفاع ضغط الدم الرئوي الدائم مع تغيرات مرضية مشابهة لتلك التي شوهدت في الأمراض التي تصيب البشر، مع تشكيل الآفات الوعائية مسد 5. في السنوات الماضية، وقد تم تطوير عدة نماذج الماوس المعدلة وراثيا لارتفاع ضغط الدم الرئوي. وتشمل هذه بالضربة القاضية والطفرات من مخلق العظام مستقبلات البروتين 2 (BMPR2)، كما تم العثور على الطفرات الجينية BMPR2 في كل من الأشكال العائلية ومجهول السبب من الهيئة العامة للإسكان، الهيم أوكسيجيناز-1 بالضربة القاضية وIL-6 overexpression (مراجعة أماكن أخرى 1،2).

هذه النماذج القوارض مختلفة من PH لديهم مستويات مختلفة من ارتفاع ضغط الدم الرئوي، تضخم RV والفشل RV. في حين أن نقص الأكسجة ومختلف نماذج الماوس المعدلة وراثيا ينتج في الهيئة العامة للإسكان أكثر اعتدالا بكثير من نموذج الفئران إما 1، فإنه لا يسمح اختبار الطفرات الجينية المختلفة وما يرتبط بها من مسارات الإشارات الجزيئية الخاصة بهم. نموذج MCT لا يؤدي في الهيئة العامة للإسكان حادة، على الرغم من MCT يبدو أن تكون سامة للخلايا البطانية في الأنسجة المتعددة (4). نموذج SuHx تتميز الأوعية الدموية يتغير أكثر مماثلة لتلك التي شوهدت في الهيئة العامة للإسكان مجهول السبب في البشر، على الرغم من أن يتطلب كل من التلاعب ونقص الأكسجة الصيدلانية التعرض. وعلاوة على ذلك، في كل من هذه النماذج، قد يكون هناك انفصال بين التغيرات النسيجية، والضغوط الرئوية وظيفة RV المرتبطة تطوير الهيئة العامة للإسكان. هذا هو على النقيض من الأمراض التي تصيب البشر، حيث عادة ما يكون هناك علاقة طردية بين التغيرات النسيجية، وشدة pulmonارتفاع ضغط الدم آرى ودرجة الفشل RV. وبالتالي، لا بد من توصيف شامل لهذه النماذج من القوارض PH، وينطوي على تقييم وظيفة RV (عادة عن طريق السونار)، ديناميكا الدم (عن طريق القسطرة القلبية) والتشريح المرضي للقلب والرئتين (من حصاد الأنسجة).

في هذا البروتوكول، ونحن تصف التقنيات الأساسية المستخدمة لتوصيف الدورة الدموية نماذج الهيئة العامة للإسكان في الفئران والفأر. هذه التقنيات العامة التي يمكن تطبيقها على أي دراسة من البطين الأيمن والأوعية الدموية الرئوية ولا يقتصر على نماذج من الهيئة العامة للإسكان. تصور RV عن طريق السونار واضح ومباشر نسبيا في الفئران، ولكنه أكثر تحديا في الفئران بسبب حجمها والمعقدة لتشكيل RV. وعلاوة على ذلك، بعض بدائل المستخدمة لقياس وظيفة RV، مثل TAPSE، الشريان الرئوي (PA) تسارع الوقت والسلطة الفلسطينية دوبلر الموجي الإحراز، لا يتم التحقق من صحة بشكل جيد في البشر وترتبط بشكل ضعيف مع تقييم بوارتفاع ضغط الدم lmonary وظيفة RV كتبها ديناميكا الدم الغازية. تقرير للديناميكا الدم RV هو أفضل القيام به مع الصدر مغلقة، للحفاظ على آثار الضغط داخل الصدر السلبي مع إلهام، على الرغم من فتح قسطرة الصدر مع القسطرة مقاومة تتيح تحديد حجم الضغط (PV) حلقات وتوصيف الدورة الدموية أكثر تفصيلا . كما هو الحال مع أي إجراء، وتطوير تجربة مع الإجراءات أمر بالغ الأهمية لنجاح التجربة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الإجراءات الموضحة اتباع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان من جامعة ديوك في كلية الطب.

1. قبل بدء الإجراءات

ملاحظة: قبل أي إجراءات الحيوانية، وضمان أن إذن مؤسسي ملائم قد تم الحصول عليها. كما هو الحال مع جميع الإجراءات، استخدام المسكنات المناسبة لضمان عدم وجود معاناة الحيوانات.

  1. القسطرة مع تدفق المياه المالحة عقيمة heparinized (100 U / مل) لضمان المباح. علامة نقطة من طرف ما يعادل القسطرة لمدة من القلب إلى منتصف الرقبة (حوالي 4 سم للفئران و 2 سم للفئران).
  2. تخدير الماوس أو الفئران. وتشمل الخيارات من مخدر الأيزوفلورين (الحث 3-4٪ والصيانة 1.5٪ مختلطة مع الأكسجين 100٪)، الكيتامين / زيلازين (80-120 / 10 ملغ / كلغ) وبنتوباربيتال (40-80 ملغ / كلغ) 6.
    1. على سبيل المثال، مع الكيتامين: زيلازين (80-120 ملغ / كغ: 10-16 ملغ / كغ IP للفئران و80-100 ملغ / كغ: 5-10 مز / IP كغ بالنسبة للفئران)، تستمر جرعة واحدة ل20-50 دقيقة من التخدير. لتخطيط صدى القلب، تخدير الماوس أو الفئران مع isoflurane (3-4٪ لتحريض و 1.5٪ للصيانة). تقييم عمق التخدير بواسطة معسر القوارض في منطقة العمليات الجراحية للتأكد من أن ردود الفعل انسحاب غائبة. استخدام مرهم البيطرية على العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
      ملاحظة: وكلاء مخدر مختلفة يمكن استخدامها للحصول على نتائج موثوقة مع الاستخدام السليم والأمثل (إعادة النظر في أماكن أخرى 6). تفضيلنا لالقسطرة هو استخدام الكيتامين: زيلازين. جرعة زائدة مع الكيتامين / زيلازين قد يقلل بشكل كبير معدل ضربات القلب وظيفة القلب، لذلك فمن الأهمية بمكان للحفاظ على درجة الحرارة المناسبة والتحكم في الجهاز التنفسي. للحفاظ على معدل ضربات القلب (> 400 / دقيقة) في الفئران، ونحن أداء روتيني قطع المبهم الثنائي. كمية من الكيتامين / زيلازين هنا سوف تستمر عادة 20-30 دقيقة، وهو ما يكفي لأداء إما مفتوح أو مغلق الصدر قسطرة القلب تليهاالقتل الرحيم للحيوان.
  3. إعداد الفئران / الماوس لإجراء العمليات الجراحية (الشكل 1).
    1. حلق الفراء من الصدر (للسماح ضربات القلب) ومن المنطقة الجراحية، في الرقبة اليمنى.
    2. فرك المناطق الجراحية حلق مع حملة دائري من المركز إلى الخارج باستخدام betadine، تليها تطهير مع الكحول 70٪ مسحة.
    3. وضع الحيوان على منصة الجراحية مع وسادة الاحترار تحتها. تعيين مستوى التدفئة للحفاظ على درجة حرارة الجسم من 37 حتي 37،5 درجة مئوية. مراقبة درجة حرارة الجسم مع التحقيق الذي تجريه المستقيم. انخفاض حرارة الجسم يمكن أن يؤدي إلى بطء القلب وارتفاع الحرارة نتائج هامة في عدم انتظام دقات القلب الكبير.

2. تخطيط صدى القلب

ملاحظة: يتم وصف وصف كامل للتخطيط صدى القلب القوارض في أماكن أخرى 7. الماوس، قبل التخدير، ويمكن الحصول على الصور على مستيقظا والحيوان ضبط النفس يدويا. للجرذ،التخدير قبل تخطيط صدى القلب لأنه يفضل الفئران هي كبيرة جدا بحيث لا يمكن ضبط النفس يدويا حين يستيقظ).

  1. القص طويل محور (PLAX) عرض.
    1. وضع الحيوان في موقف ضعيف على النظام الأساسي أو كبح يدويا.
    2. تحديد الوضع B على إبراز 2D صورة حية.
    3. محاذاة محول بالموجات فوق الصوتية مع تردد 40 ميغاهرتز للماوس أو 25 ميغاهيرتز لالجرذان إلى خط القص اليسار، ثم تناوب على محول عكس اتجاه عقارب الساعة 30 درجة مع مؤشر التحقيق تشير في اتجاه الذيلية (05:00 حتي 11:00 موقف خط) . زاوية محول قليلا (هزاز على طول محور قصيرة من محول في نفس الطائرة تصوير الشعاعي الطبقي) للحصول على عرض الغرفة LV الكامل في وسط الشاشة.
    4. تحديد مكان وعرض هذه الهياكل التشريحية (الشكل 2A): تجويف البطين الأيسر (LV)؛ الحاجز بين البطينين (الحبس الاحتياطي)؛ تجويف البطين الأيمن (RV)؛ الأبهر الصاعد (AO)؛ والأذين الأيسر (LA).
      5. <لى> التبديل إلى M واسطة، وبمجرد تصور بوضوح هذه الهياكل المذكورة أعلاه. وضع خط المؤشر من خلال اوسع جزء من التجويف LV باستخدام AO كنقطة مرجعية، وكذلك جعل كذبة التركيز عمق في وسط الغرفة LV (الشكل 2B). إجراء قياسات مماثلة من RV عن طريق تغيير التزوي للمحول والحصول على قياسات وضع M.
    5. استخدام مخزن سينمائية لخلق حلقة فيديو لتسجيل البيانات لقياس حاليا (LV غرفة البعد، FS و LV سمك الجدار).
    6. الحصول على اقتفاء أثر دوبلر من تدفق الأبهر في دوبلر الوضع PW عن طريق وضع المؤشر PW في الشريان الأورطي وتسجيل (الشكل 2C).
  2. القص القصير محور عرض (PSAX) على مستوى الأورطي.
    1. التبديل إلى الوضع ب.
    2. تدوير في اتجاه عقارب الساعة محول 90 درجة من وجهة محور طويل القص للحصول على عرض المحور قصيرة القص (الشكل 3). نقل وزاوية محول نحو الجمجمة إلى معرفentify الصمام الأبهري المقطع العرضي الرأي.
    3. تحديد تدفق المسالك البطين الأيمن (RVOT) كهيكل على شكل هلال المترجمة إلى الجزء العلوي الأيمن إلى الشريان الأورطي، واصلت مع شرفات الصمام الرئوي والشريان الرئوي.
    4. ثابتا في نفس الموقف يدويا. التبديل إلى الوضع دوبلر PW.
      ملاحظة: منصة محطة لعقد القوارض والتحقيق يمكن استخدامها لتقليل الحركة والتباين في موقف محول.
    5. وضع الداني حجم العينة لمستوى صمام رئوي في وسط الصحيح الجهاز البطيني تدفق ثم وضع مواز مؤشر لاتجاه تدفق الدم من خلال الأوعية الدموية (الشكل 3B).
      ملاحظة: من المهم لضبط زاوية أخذ العينات لاتجاه تدفق الدم أو استخدام البرنامج الموجات فوق الصوتية لتصحيح لتغيير زاوية. دون تصحيح، وأقصى زاوية للسفينة هي 30 درجة مئوية، والتي تتطابق مع ~ 15٪ أقل من الواقع من السرعة.
    6. صفةأوست مقياس (سرعة تدفق الدم) حسب الحاجة للحصول على "جيد" المغلف دوبلر، التي لها حدود بيضاء وجوفاء داخل يشير إلى تدفق الصفحي الدم الداكن (الشكل 3C). تسجيل تتبع دوبلر.
      ملاحظة: "سيئة" دوبلر المغلف لا تستوعب حدود بيضاء كافية وجوفاء الظلام.
    7. إذا لم يتم تنفيذ قسطرة في هذه المرحلة، والسماح للالقوارض لاسترداد إذا تم استخدام التخدير. لا تترك القوارض غير المراقب حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية ولا إعادته للشركة من الحيوانات الأخرى حتى يتم الشفاء منها تماما. إذا تم تنفيذ قسطرة، انتقل إلى القسم 3.

3. الحق في القلب قسطرة

  1. نهج مغلق الصدر لقياس ضغط RV
    1. اقامة:
      1. قم بتوصيل محول الضغط على مدخلات قناة 1. في البرنامج، تعيين القناة 1 لضغط وchannشرم 2 لمعدل ضربات القلب.
      2. لتحويل وحدات لمم زئبق، وسجل تتبع خط الأساس، إجراء معايرة الضغط يدويا باستخدام مقياس الضغط (في حالة استخدام محول ضغط الدم وPE أنابيب). ثم أداء وحدات التحويل تحت قناة 1.
      3. لتحديد معدل ضربات القلب، وإيقاف مدخلات قناة 2. حدد القياسات الدورية تحت قناة 2 واختيار القناة 1 لمصدر ومعدل للقياس.
    2. ضع الماوس / الفئران تحت المجهر تشريح مع التركيز في العمق والتكبير من 5X.
    3. شق الجلد من الفك السفلي لعظمة القص (الشكل 1). وضع زوج من مبعدات على كل جانب من شق للكشف تماما عن منطقة عنق الرحم.
    4. تشريح بصراحة لفصل الغدد اللعابية لفضح الصحيح الوداجي الخارجي الوريد باستخدام ملقط غيض حادة غرامة (الشكل 4A، B).
    5. بعناية عزل الصحيح الوريد الوداجي الخارجي من الأنسجة الضامة المحيطة بها.
      6. <لى> ضع قطعتين من خياطة الحرير (4-0 بالنسبة للفئران، 6-0 للفئران) تحت الصحيح الوريد الوداجي الخارجي، ligate الوريد بشكل أقصى (أقرب إلى الفك السفلي ممكن)، ومن ثم ربط عقدة فضفاضة قريب ( الشكل 4C).
    6. استخدام مقص القزحية لجعل صغير "نيك" (قطع) الأقرب إلى عقدة تعادل البعيدة.
    7. عقد القسطرة مع ملقط وإدراج قسطرة في قطع الوريد، ومن ثم تشديد عقدة القريبة.
      ملاحظة: نحن عادة استخدام البولي إثيلين (PE) -10 أنابيب (~ 2 الاب حجم) للفئران وPE-50 (~ 3 الاب حجم) بالنسبة للفئران، وهذا مرتبط إلى الضغط على المفاتيح العادية خلال 31 G أو 21 G إبرة و معايرة. بمناسبة القسطرة مع علامة على طول المقابلة تقريبا وضع طرف في البطين الأيمن. كبديل لPE أنابيب، القسطرة مقياس الضغط المكروي يمكن استخدامها. سحب بلطف العقدة البعيدة يمكن أن تساعد في إدخال القسطرة.
    8. دفع بلطف قسطرة في القلب الصحيح، ورصدعمق تقدم وفقا للعلامة. رصد أثر الضغط في البرنامج للتحقق من موقع القسطرة وتحديد ضغط RV (الشكل 5).
    9. إبقاء القسطرة متحرك وجمع البيانات (بيانات تبديل تسجيل بجانب زر ابدأ) لمدة 2 دقيقة.
    10. الشروع في جمع العينات (القسم 4).
  2. منهج مفتوح الصدر لRV PV تحليل حلقة.
    ملاحظة: تحليل PV حلقة من البطين الأيمن لا يمكن أن يؤديها مع نهج مغلقة الصدر بسبب تصلب القسطرة تصرف، والتي لا يمر من SVC إلى RA. تجاريا مصممة القسطرة تصرف المتاحة للتحليل LV PV حلقة.
    1. في البرنامج وضع القناة 1 للتصرف. قناة 2 للضغط. وقناة 3 لمعدل ضربات القلب.
    2. أنبوبا الفئران مع 16 أنبوب G تفلون وتوصيل أنبوب لجهاز التنفس الصناعي الميكانيكي. حساب وتعيين المعلمات التهوية بالنسبة للفئران أو جرذان باستخدام متابعةجي الصيغ 6: حجم المد والجزر (V ر، مل) = 6.2 س M 1.01 (M كتلة = حيوان، كلغ). معدل التنفس (RR، دقيقة -1) = 53.5 س M -0.26 (الشكل 6A).
    3. انتشار الكحول 70٪ على الفراء للحد من انتشار الفراء على الجراحي الميداني.
    4. إجراء شق تحت عملية سيفي الشكل وتشريح ثنائيا الجلد مع مقص نحو الجهة.
    5. قطع طريق جدار البطن وفتح تجويف البطن عن طريق تشريح الثنائي على الحجاب الحاجز.
    6. فتح الحجاب الحاجز لفضح ذروة القلب وثنائيا قطع القفص الصدري (الشكل 6A). منع التبخر وتجفيف الأنسجة عن طريق رش المياه المالحة في تجاويف الصدر والبريتوني باستخدام حقنة.
      ملاحظة: نحن عادة استخدام مقص تشريح لفتح البطن تجويف والقفص الصدري. النزيف عادة ليس كبيرا، ولكن إذا كان هناك نزيف، كهربي يمكن استخدامها.
    7. عشر العزلة بعنايةالبريد الأجوف السفلي الوريد (الوريد الأجوف السفلى) من الأنسجة الضامة المحيطة بها.
    8. ضع قطعة من الخيط الحرير (4-0 بالنسبة للفئران، 6-0 للفئران) حول IVC، ومن ثم ربط عقدة فضفاضة (أو الخيط الخيط من خلال 16 أنبوب G تفلون) (الشكل 6B).
    9. ثقب قمية RV جدار الحرة مع 27-30 إبرة قياس موازية لجدار حر RV وإزالة الإبرة. يجب الحرص على عدم دفع الإبرة في أكثر من 4 مم.
      ملاحظة: بدلا من ذلك، قطعة صغيرة من PE-60 أنابيب يمكن استخدامها لتوجيه ثقب القسطرة تصرف في قمة RV.
    10. إدراج غيض تصرف القسطرة من خلال طعنة الجرح على قمية RV جدار حر حتى كل الأقطاب الكهربائية داخل البطين (الشكل 6C).
    11. مراقبة حلقة حجم الضغط في البرنامج ومن ثم ضبط موضع القسطرة للحصول على حلقات على شكل باستمرار أن لا تظهر التباين في الجهاز التنفسي كبير (الشكل 7B، C).
    12. سجلخط الأساس PV حلقات (بيانات تبديل تسجيل بجانب زر ابدأ) لا يقل عن 10 ثانية للحصول على عدد من PV حلقات.
    13. سحب الخيط ضعت في جميع أنحاء IVC لتغيير تحميلها مسبقا وتسجيل الحلقات الكهروضوئية. تحليل البيانات خارج الخط واستخلاص معايير مختلفة من وظيفة RV الانقباضي (الشكل 7D). وقد وصفت هذا التحليل السابق 8.
      ملاحظة: IVC يمكن بدلا من ذلك أن المغطي بواسطة ملقط. رصد أثر الضغط RV لتأكيد الحد من التحميل المسبق.
    14. أداء المالحة وكفيت المعايرة كما هو موضح سابقا للسماح للتحويل من وحدات تصرف إلى وحدات حجم 6.
    15. بعد تسجيل البيانات، وسحب بلطف القسطرة من ووضع طرف القسطرة مباشرة إلى حمام الماء مع المياه المالحة. عند الانتهاء، وتنظيف القسطرة في تعليمات الشركة الصانعة.

4. جمع القلب والرئة عينات

ملاحظة: كما أن الإجراءات هناإعادة وصفها بأنها محطة، يجب أن يتم التخلص من الحيوان بعد إما المغلقة أو الصدر المفتوح قسطرة الصحيح القلب.

  1. الموت ببطء الفئران عن طريق فتح الصدر (بضع الصدر الثنائي) إذا تم استخدام نهج مغلق الصدر، exanguination، أو عن طريق إيقاف جهاز التنفس الصناعي بعد جرعة زائدة من مخدر.
    ملاحظة: لا ينصح خلع عنق الرحم.
  2. لأداء نضح التضخم في الرئة، قم بتوصيل أنابيب التضخم في الصعود إلى ringstand المقرر أن تضخيم الرئة مع ضغط من 20 شركة بيت إدارة المال 2 O (ولكن لا تقم بفتح صمام بعد لتضخيم الرئتين).
  3. تشريح بصراحة القصبة الهوائية من العضلات المحيطة والنسيج الضام.
  4. ضع قطعة من الخيط الحرير (4-0 بالنسبة للفئران، 6-0 للفئران) حول القصبة الهوائية، ومن ثم ربط عقدة فضفاضة.
  5. تمتد برفق القصبة الهوائية عن طريق الضغط على الرأس واجراء خفض (70٪ من محيط) على مقربة من الفك السفلي.
  6. حافظ على امتداد طيف وإدراج قنية القصبة الهوائية (20 G للفئران أو 16 G للفئران).تأمين قنية باستخدام الخيط. توصيل قنية على أنابيب التضخم وربط الخيط حول قنية لمنع ارتداد مثبتات.
  7. مسح الرئتين مع برنامج تلفزيوني باستخدام حقنة 10 مل طعن RV جدار حر وحقن نحو الشريان الرئوي. نيك الأذين الأيسر مرة واحدة تبدأ الرئتين إلى بلانش.
  8. حصاد القلب عن طريق خفض في جذر الشريان الأورطي.
  9. المشبك الصحيح الفص السفلي من الرئة باستخدام مرقئ البعوض وقطع الصحيح الفص السفلي. وضع القطع في أنابيب microcentrifuge والمفاجئة التجميد في النيتروجين السائل.
  10. تضخيم الرئة بنسبة 10٪ مخزنة محايدة الفورمالين لمدة 5 دقائق وإزالة قنية القصبة الهوائية تليها ligating القصبة الهوائية.
  11. تشريح الرئة من الصدر وإصلاح مع 10٪ مخزنة الفورمالين محايدة.
    ملاحظة: بدلا من ذلك، تضخم الرئة مع قطع وسائل الاعلام الأمثل (أكتوبر، المخفف 1: 1 مع برنامج تلفزيوني) وتجميد في مخفف أكتوبر للإعداد لاحق من الأبواب المجمدة.
  12. بعنايةفصل الأذينين من البطينين وعزل الأيمن البطين جدار المجاني عن طريق تشريح جنبا إلى جنب مع حاجز بين البطينين.
  13. تزن RV وLV + الحاجز (LV + S) لحساب مؤشر فولتون (RV / LV + S) 9، الذي يكمم درجة تضخم RV.
    ملاحظة: يختلف مؤشر TheFulton في نماذج مختلفة من PH. فأر 10: السيطرة، 0.28 ± 0.01. نقص الأكسجة الناجم، 0.57 ± 0.02. المعالجة MCT، 0.51 ± 0.03. C57BL6 / J الماوس 11: السيطرة، 0.26 ± 0.01. SuHx (14 يوما)، 0.40 ± 0.02. SuHx (21 يوما)، 0.43 ± 0.01. SuHx (28 يوما)، 0.44 ± 0.03.
  14. التقط تجميد RV وLV + S في النيتروجين السائل أو إصلاح في 10٪ مخزنة الفورمالين محايدة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما الصحيحة قسطرة القلب في القوارض هي عادة إجراء الطرفي الذي لا ينطبق على الطولي المتابعة، وضربات القلب هو بديل ممتاز موسع للفحص والمتابعة 12. في حين الضغط الرئوي الانقباضي الشريان في الهيئة العامة للإسكان البشري على ضربات القلب وعادة ما تكون مستمدة من قلس ثلاثي الشرفات التي عادة ما تكون وضوحا التي يمكن الحصول عليها من وجهة قمي، لا يتم الحصول على مثل هذا الرأي صحيح في القوارض، ومنع تقدير الضغط الرئوي الانقباضي الشريان بواسطة دوبلر. ومع ذلك، وهو رأي PSAX على مستوى الأبهر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف البروتوكولات الموضحة هنا توصيفا شاملا لديناميكا الدم ووظيفة البطين الأيمن في نماذج القوارض لارتفاع ضغط الدم الرئوي. في حين أن قسطرة القلب الأيمن كما هو موضح هنا هي إجراء نهائي ، فإن معدل الوفيات المرتبط بتخطيط صدى القلب ضئيل للغاية ، مما يسمح بفحص ومتابعة تطور المرض. ومع ذلك ، على غرار المرضى الذين يعانون من درجة الحموضة الذين زاد بشكل ملحوظ من معدل الوفيات مع التخدير17 ، في تجربتنا ، فإن الفئران المصابة بدرجة حموضة شديدة لا تتسامح مع التخدير أيضا ، بسبب قصور القلب الأيمن اللاتعويضي ، وانخفاض الحمل المسبق ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

SR مدعوم من قبل K08HL114643 المعاهد الوطنية للصحة ، وعلماء أبحاث جيلياد في ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي وجائزة Burroughs Wellcome Fund المهنية لعلماء الطب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام التصوير Vevo 2100 (120V) VisualSonics, inc. VS-11945
محطة التصوير Vevo 2100  VisualSonics, inc. 
محولات الطاقة الميكانيكية عالية الترددVisualSonics, inc. MS250 ، MS550D ، MS400
جل الموجات فوق الصوتية باركر   ؛شركة المختبرات 01-08
PowerLab 4/35ADInstrumentsML765
Labchart 8ADnstruments
محول الطاقة مع محبس وكابلADnstrumentsMLT1199
طقم معايرة محول BPADnstrumentsMLA1052
قسطرة ضغط Mikro-Tip للماوسMillarSPR-1000القسطرة البديلة المتاحة من Scisense FT111B (الماوس) و FT211B (الفئران)
قسطرة الضغط Mikro-Tip للفئرانMillarSPR-513القسطرة البديلة المتاحة من Scisense FT111B (الماوس) و FT211B (الفئران) Millar
Mikro-Tip   ؛ قسطرة حلقة PV مصغرة للغاية للفئرانMillarPVR-1035قسطرة بديلة متوفرة من Scisense FT112 (فأر)
قسطرة حلقة PV مصغرة للغاية Millar Mikro-Tip للفئران MillarSPR-869قسطرة بديلة متوفرة من Scisense FT112 (الماوس) نظام
ميلار الكهروضوئية MPVS-300 & nbsp ؛MillarMPVS-300
4-0 جديلة سوداء حريرية 100 ياردة بكرةRoboz جراحيةSUT-15-2
6-0 جديلة سوداء حريرية 100 ياردة بكرةRoboz جراحيةSUT-14-1
مقص قزحية ، حساسة ، Integra MiltexVWR21909-248
مقص تشريح VWR ، طرف حاد / حادVWR82027-588
مقص رقيق VWR ، 4 1/2 "VWR82027-582
مرقئ نجمتين ، ExceltaVWR63042-090
فورمالين محايدمخزن VWR89370-094
كروتالينسيجماC2401
SU5416Tocris Biosciences3037
3.5X-45X بوم ستاند ثلاثي العينيات تكبير مجهر ستيريو AmScopeSM-3BX
PE (أنابيب البولي إيثيلين) -10Braintree Scientific IncPE10 36 FT
PE (أنابيب البولي إيثيلين) -50Braintree Scientific IncPE50 36 FT
PE (أنابيب البولي إيثيلين) -60Braintree Scientific IncPE60 36 FT
وحدة تخدير الأيزوفلوران المنضديةكينت ScientificACV-1205S
منصة جراحية متعددة الوظائفمن كينت ScientificSurgisuite
مجموعة ضامKent ScientificSURGI-5002
غرفة تحريض التخديرVetEquip941443
التخدير علبة تصفية غازكينت ScientificACV-2001
مخروط أنف القوارضVetEquip921431
BP

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gomez-Arroyo, J., et al. A brief overview of mouse models of pulmonary arterial hypertension: problems and prospects. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 977-991 (2012).
  2. Ryan, J. J., Marsboom, G., Archer, S. L. Rodent models of group 1 pulmonary hypertension. Handbook of experimental pharmacology. 218, 105-149 (2013).
  3. Voelkel, N. F., Tuder, R. M. Hypoxia-induced pulmonary vascular remodeling: a model for what human disease. J Clin Invest. 106, 733-738 (2000).
  4. Gomez-Arroyo, J. G., et al. The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 363-369 (2012).
  5. Abe, K., et al. Formation of plexiform lesions in experimental severe pulmonary arterial hypertension. Circulation. 121, 2747-2754 (2010).
  6. Pacher, P., Nagayama, T., Mukhopadhyay, P., Batkai, S., Kass, D. A. Measurement of cardiac function using pressure-volume conductance catheter technique in mice and rats. Nat Protoc. 3, 1422-1434 (2008).
  7. Brittain, E., Penner, N. L., West, J., Hemnes, A. Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice. J. Vis. Exp. (81), e50912(2013).
  8. Abraham, D. M., Mao, L. Cardiac Pressure-Volume Loop Analyses Using Conductance Catheters in Mice. J Vis Exp. , In revision (2015).
  9. Vergadi, E., et al. Early macrophage recruitment and alternative activation are critical for the later development of hypoxia-induced pulmonary hypertension. Circulation. 123, 1986-1995 (2011).
  10. Mam, V., et al. Impaired vasoconstriction and nitric oxide-mediated relaxation in pulmonary arteries of hypoxia- and monocrotaline-induced pulmonary hypertensive rats. J Pharmacol Exp Ther. 332, 455-462 (2010).
  11. Wang, Z., Schreier, D. A., Hacker, T. A., Chesler, N. C. Progressive right ventricular functional and structural changes in a mouse model of pulmonary arterial hypertension. Physiol Rep. 1, 00184(2013).
  12. Thibault, H. B., et al. Noninvasive assessment of murine pulmonary arterial pressure: validation and application to models of pulmonary hypertension. Circ Cardiovasc Imaging. 3, 157-163 (2010).
  13. Abe, K., et al. Long-term treatment with a Rho-kinase inhibitor improves monocrotaline-induced fatal pulmonary hypertension in rats. Circ Res. 94, 385-393 (2004).
  14. Ma, W., et al. hypoxia chamer info--Calpain mediates pulmonary vascular remodeling in rodent models of pulmonary hypertension, and its inhibition attenuates pathologic features of disease. J Clin Invest. 121, 4548-4566 (2011).
  15. de Man, F. S., et al. Bisoprolol delays progression towards right heart failure in experimental pulmonary hypertension. Circ Heart Fail. 5, 97-105 (2012).
  16. de Man, F. S., et al. Dysregulated renin-angiotensin-aldosterone system contributes to pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit Care Med. 186, 780-789 (2012).
  17. Pritts, C. D., Pearl, R. G. Anesthesia for patients with pulmonary hypertension. Curr Opin Anaesthesiol. 23, 411-416 (2010).
  18. Paulin, R., et al. A miR-208-Mef2 Axis Drives the Decompensation of Right Ventricular Function in Pulmonary Hypertension. Circ Res. 116, 56-69 (2015).
  19. Brittain, E., Penner, N. L., West, J., Hemnes, A. Echocardiographic assessment of the right heart in mice. J Vis Exp. , (2013).
  20. Cheng, H. W., et al. Assessment of right ventricular structure and function in mouse model of pulmonary artery constriction by transthoracic echocardiography. J Vis Exp. , e51041(2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة