مقالة منهجية

التصور من الوخز على الحركة وتوصيف دور PilG في Xylella fastidiosa

DOI:

10.3791/53816

⸱

أبريل 8, 2016

 , 
1Department of Plant Science, University of California, Davis, 2Agricultural Research Service, San Joaquin Valley Agricultural Sciences Center, United States Department of Agriculture

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة، كان يعمل في غرفة تدفق نانو ميكروفلويديك لتصور وظيفيا تميز الحركة ارتعاش Xylella fastidiosa، وهي البكتيريا التي تسبب مرض بيرس في الكرمة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xylella fastidiosa هو نوع من البكتيريا سالبة الجرام غير سوطي التي تسبب عددا من الأمراض الهامة اقتصاديا من النباتات. تقدم الحركة الوخز اكس. fastidiosa وسيلة للحركة لمسافات طويلة داخل المصنع والاستعمار، إذ تسهم نحو المرضية في اكس. fastidiosa. إن الحركة ارتعاش اكس. يتم تشغيل fastidiosa من النوع الرابع الشعرة. وينظم النوع الرابع الشعرة من Xylella fastidiosa التي كتبها pilG، منظم الكيميائي في بيل-حزب الشعب الجمهوري البروتينات ترميز الاوبرون التي تشارك مع مسارات نقل الإشارة. لتوضيح أدوار pilG في الحركة ارتعاش اكس. وقد وضعت fastidiosa، وpilG -deficient متحولة XF ΔpilG وسلالة مكملة لها XfΔpilG- C التي تحتوي على pilG مواطن. واستخدمت غرف ميكروفلويديك متكاملة مع نظام تسجيل صورة مرور الزمن لمراقبة الوخز الحركة في XfΔpILG، XfΔpilG- C ونوع السلالة في البرية. باستخدام هذا النظام تسجيل، فإنه يسمح الملاحظات على المدى الطويل المكانية والزمانية لتجميع والهجرة من الخلايا الفردية والسكان من البكتيريا عبر حركية الوخز. اكس. أظهر fastidiosa النوع البري ومكملة XfΔpilG- C سلالة خصائص الوخز حركية نموذجية الملاحظة المباشرة في غرف تدفق الموائع الدقيقة، في حين عرضت متحولة XfΔpliG النمط الظاهري نقص الوخز. وتوضح هذه الدراسة أن pilG يساهم في الحركة ارتعاش اكس. fastidiosa. ويستخدم غرفة تدفق الموائع الدقيقة كوسيلة لمراقبة الوخز حركية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xylella fastidiosa هو غير سوطي، البكتيريا المسببة للأمراض سلبية الغرام التي تسبب عددا من الأمراض المحاصيل ذات الأهمية الاقتصادية، بما في ذلك مرض بيرس في الكرمة (كرمة العنب الاوروبي L.) 1،2، 3. هذه البكتيريا يقتصر على الخشب التي تضطلع المياه أوعية. إصابة الكرمة يتسبب في انسداد الأوعية الخشب والنتائج في الإجهاد المائي ونقص التغذية 3. الاستعمار الناجح يعتمد على قدرة بكتيريا للانتقال من موقع الأولي العدوى إلى بقية النبات 3. الوخز حركية وسيلة لحركة البكتيرية مستقلة سوطي من خلال الإرشاد، والمرفق، وتراجع من نوع القطبي الرابع البيلي 4 التي اتسمت في اكس. fastidiosa 5،6،7.

وقد لوحظ أن الحركة الوخز بواسطة ملاقط الليزر ومجهر القوة الذرية (AFM) 8،9،10. باستخدام هذه التقنيات، رmotilities السحر ولدت من النوع الرابع شعرة من N. السيلان و P. تميزت الزنجارية التي كتبها فلوريدا uorescently وضع العلامات البيلي والاستيلاء على تحركاتهم مجهريا. على الرغم من أن كلتا الطريقتين قد فصلت قوة لاصقة من البكتيريا الفردية، وإجراءات معقدة وتستغرق وقتا طويلا 9،10. استخدمت الدوائر uidic فلوريدا الصغيرة لمراقبة الهجرة لمسافات طويلة من الخلايا الفردية، وكذلك مجاميع صغيرة من الخلايا البكتيرية 5،6. وقد صممت هذه الغرف باعتبارها نانو قناة microfabricated في لوحة متكاملة مع الوقت الفاصل بين نظام تسجيل صورة 11،12،13،14. فلوريدا مايكرو الأجهزة غرفة uidic توفر مزايا عدة لدراسة السلوك الحركي وخلية خلية التفاعلات من البكتيريا: (ط) أنه يوفر منصة متكاملة مع قدرات قناة متعددة؛ (ب) فإنه يمكن دراسة الاقتراحات وتجمعات من الخلايا وحيدة في ملامح نانو النطاق من البكتيريا. (ج) لأنها تتيح م مباشرicroscopic تسجيل صورة من الخلايا البكتيرية وتحليل الوقت الفاصل، (د) ويوفر الملاحظات المكانية والزمانية على المدى الطويل من سكان الفردية و / أو من البكتيريا في بيئة الصغرى؛ (ت) معدل التدفق من مستنبت في قناة يمكن التحكم بدقة ومطلوب (السادس) فقط حجم صغير جدا (1 مل) من مستنبت لكل تجربة.

في الآونة الأخيرة، وقد تم توظيف الجزئي فلوريدا uidic آه فلوريدا نظام للتحقيق في سلوك الخلايا البكتيرية في إطار مختلف microenvironments 14،15،16. والإلتصاق والمرفق سطح E. القولونية 15، X. fastidiosa 16، وAcidovorax citrulli 14 إلى الواجهات الزجاجية وتقييمها باستخدام الصغير فلوريدا غرف uidic. وقد تم تحليل تشكيل تجميع وفاي الحيوي ل م بوساطة النوع الرابع الشعرة من Acidovorax citrulli 14. وعلاوة على ذلك، فإن الحركة من أ. لاحظ citrulli تحت آه فلوريدا جتظاهر onditions أن البيلي النوع الرابع قد تلعب أدوارا هامة في الاستعمار وانتشار A. citrulli في الأوعية الخشب تحت النسغ آه فلوريدا الظروف. وmotilities الوخز الزائفة الزنجارية وX. وقد لوحظت خلايا fastidiosa بنجاح ضد تيار السائل في غرفة تدفق microfabricated 5،6،17. نقص النوع الرابع شعرة pilB وpilQ المسوخ من X. تم العثور على fastidiosa إلى تغيير عميق في سرعة الوخز الحركة في ظل الظروف آه فلوريدا في الأجهزة uidic فلوريدا الصغيرة 5،6،18. وأشارت الدراسات التي أجريت على التصاق البكتيريا والحركة في الأجهزة uidic فلوريدا الصغرى أن الدوائر uidic الصغير فلوريدا هي مناسبة خاصة لتحليل حركية الوخز والهجرة من البكتيريا بوساطة البيلي في المختبر. تفسر هذه النتائج آلية الهجرة بوساطة الوخز مما يسهل التعلق خلية خلية، وتجميع والاستعمار فيالمضيف، تؤدي في النهاية إلى الإصابة النظامية.

بيل-حزب الشعب الجمهوري الاوبرون من X. fastidiosa يحتوي pilG، بيلي، pilJ، حبوب منع الحمل، chpB وchpC التي مسارات إشارة ترميز التنبيغ 20. والمستقبلات الكيميائية عبر الغشاء ربط المحفزات الكيميائية في نطاق محيط بالجبلة وتفعيل شلال يشير في جزء حشوية قدرتهم على السيطرة في نهاية المطاف البكتيرية حركية الوخز. في الاوبرون بيل-حزب الشعب الجمهوري من X. fastidiosa، وهو بروتين PilG الفوسفات المكوك هو نديد لCHEY. في E. القولونية و P. الزنجارية، CHEY هو منظم استجابة في أنظمة الكيميائي التي تتفاعل مع بروتينات سياط محرك 19 و 21. على الرغم من أن مساهمات الاوبرون بيل-حزب الشعب الجمهوري نحو الفوعة في اكس. تم فحص fastidiosa مؤخرا 20، ودور pilG في الاوبرون الكيميائي في استجابة لإشارات البيئية وتنظيم / المحرك النوع الرابع الشعرة من X. fastidiosa هو UNCلير. لتوضيح فكرة الكيميائي منظم pilG في نشاط الحركة ارتعاش اكس. fastidiosa، يتم استخدام غرفة uidic فلوريدا متناهية الصغر لتقييم الحركة ارتعاش اكس. fastidiosa. يتميز pilG من اكس fastidiosa بمقارنة الظواهر من المسخ حذف XF ΔpliG، سلالة مكملة XfΔpliG -C والنوع البري في المختبر. تسلط هذه النتائج الضوء على دور pilG في الحركة ارتعاش اكس. fastidiosa.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الطرفية هامش البكتيرية مستعمرة

  1. تنمو اكس. fastidiosa (XF) تيميكولا النوع البري 22، pilG حذف متحولة XF ΔpliG (باستخدام سبق وصفها استراتيجية حذف 23)، ولها مكملة XfΔpliG -C (باستخدام سبق وصفها القائم على كروموسوم استراتيجية تكامل الجيني 24) على PD2 لوحات المتوسطة أجار 25 عند 28 درجة مئوية لمدة 5-7 أيام.
  2. السيلوفان الأوتوكلاف (1 × 1 سم 2) في الماء عند 121 درجة مئوية (249 درجة فهرنهايت) لمدة 15 دقيقة. التقاط قطعة واحدة من السيلوفان، واستنزاف المياه من خلال لمس زاوية واحدة من السيلوفان على طبق بيتري فارغة، وضع بعناية السيلوفان أكثر من 15٪ من سطح أجار والهواء الجاف.
  3. التقاط فرد اكس. المستعمرات fastidiosa مع المسواك تقريب وخلايا بقعة عقيمة جو معقم و مطهر على ورقة تعقيمها من السيلوفان مضافين على 15٪ من سطح أجار في لوحات أجار. احتضان لوحةالصورة عند 28 درجة مئوية لمدة 2-3 أيام.
  4. دراسة مورفولوجية حافة المستعمرات باستخدام مجهر تشريح مع عدسة الهدف 2X و10X عدسة العين. تصوير هامش المحيطي حول المستعمرات.

2. المجهري وميكروفلويديك غرف تدفق

  1. صنع أجهزة ميكروفلويديك باستخدام إجراءات الصورة معدني مشابهة لتلك التي سبق وصفها 5،18. تصميم أربعة قنوات موازية مع برامج التصميم بمساعدة الكمبيوتر على سيد رقاقة السيليكون باستخدام أساليب الطباعة الحجرية القياسية 26.
  2. إنشاء غرف ميكروفلويديك من سيد رقاقة السيليكون مع ثنائي ميثيل بولي سيلوكسان (PDMS). صب PDMS unpolymerized على سيد رقاقة السيليكون وعلاجه عند 60 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. تقشر النسخة المتماثلة PDMS من سيد رقاقة وتقليم النسخة المتماثلة PDMS بشفرة إلى 22 ملم × 40 ملم ونفس الحجم من الزجاج ساترة.
  3. فضح النسخة المتماثلة PDMS، ساترة الزجاج (22 × 40 مم 2)، وmicroscشريحة مكتب مستشار رئيس الوزراء (51 × 76 مم 2) لالبلازما الجوية في 30 واط لمدة 2 دقيقة 27. شطيرة الجسم PDMS بين ساترة الزجاج وميكروسكوب لبناء غرفة uidic فلوريدا الصغيرة.
  4. حفر حفرة (مم 5.5) من خلال PDMS في نهاية كل من قناة نمط. قطع أنابيب السيليكون والمطاط إلى 12-20 سم. إدراج واحدة من نهاية أنبوب السيليكون والمطاط (5.1 ملم خارج القطر، 2.1 ملم داخل القطر، 0.8 مم الجدار) في نهاية كل فتح القنوات من النسخة المتماثلة PDMS، وختم ذلك مع PDMS unpolymerized في 60 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.
  5. ربط آخر من نهاية الأنبوب إلى نهاية الشائكة من الروابط LUER البلاستيكية. التفاف غرف ميكروفلويديك تجميعها مع رقائق الألومنيوم والأوتوكلاف لهم لمدة 20 دقيقة.
  6. جمع البكتيريا خلايا اكس. fastidiosa النوع البري، متحولة XF ΔpliG، ومكملة XfΔpliG -C عبر كشط، وذلك باستخدام بتلقيح المتاح حلقات من لوحات PD2 المتوسطة. ضبط كثافة الخليةإلى الكثافة البصرية من 0.05 في 600 نانومتر في PD2 مرق كما هو موضح سابقا 23. جمع حل الخلية البكتيرية إلى حقنة Gastight 1 مل.
  7. تركيب جهاز ميكروفلويديك على مرحلة المجهر المقلوب. توصيل أنبوب مدخل إلى حقنة Gastight 5 مل تحتوي على PD2 مرق. تناسب Gastight حقنة 5 مل مع مضخات الحقنة.
  8. توصيل أنبوب منفذ إلى خزان النفايات. الحفاظ على معدل التدفق المتوسط ​​من 0.2 دقيقة ميكرولتر -1 لمدة 30 دقيقة لتحقيق الاستقرار في النظام.
  9. ربط أنابيب الجانب مدخل إلى 1 مل Gastight حقنة تحتوي على محلول الخلية البكتيرية. مسح حل الخلية البكتيرية من خلال أنابيب مطاطية حتى يتم الوصول إلى القناة. الحفاظ على معدل التدفق المتوسط ​​من 0.2 دقيقة ميكرولتر -1 لمدة 30 دقيقة أخرى من أجل مطاردة خلايا غير منضم من الغرفة قبل التقاط الصورة.
  10. جبل مصراع المجهر تحت الجزء المعدلة مجال المجهر للسيطرة على ضوء. ربط مصراع للتعاون مصراعنظام ntrol وربط نظام التحكم مصراع الكاميرا لجهاز الكمبيوتر.
  11. جبل الكاميرا الرقمية إلى منفذ الفيديو المجهر وتوصيله إلى جهاز الكمبيوتر. تشغيل برنامج تسجيل مرور الزمن، حدد وظيفة "مصراع" من القائمة، والتعرف تلقائيا على مصراع الكاميرا المثبتة كما الافتراضي في البرنامج لتأسيس اتصالات لمصراع مع البرنامج.
  12. حدد وظيفة "كاميرا رقمية" من القائمة من برنامج تسجيل مرور الزمن إلى التعرف تلقائيا على الكاميرا الرقمية وجهاز الالتقاط الافتراضي في البرنامج وإقامة الاتصالات مع الكاميرا الرقمية مع البرنامج.
  13. تحديد موقع الخلايا البكتيرية في واحدة من القنوات باستخدام 20X البصريات على النقيض من المرحلة، ثم التبديل إلى 40X عدسة الهدف قبل التقاط الصورة.
  14. تشغيل برنامج تسجيل مرور الزمن، حدد وظيفة "الحصول على الصور" باستخدام المعلمات الافتراضية من القائمة للحصول على صور من المجهر.بعد ذلك، فتح وظيفة "اكتساب الوقت الفاصل"، وتعيين الفاصل الزمني إلى 30 ثانية 5،18،28 لمدة 6-24 ساعة اعتمادا على التجربة اللازمة لمراقبة الوخز الحركة من X. fastidiosa 5،18،28. انقر على زر "موافق" لبدء تسجيل مرور الزمن. انقر على "وظيفة المكدس" من القائمة، حدد "حفظ باسم" إلى كومة من الصور في مجلد الوجهة على جهاز الكمبيوتر بعد الانتهاء من التسجيل.
  15. لقنوات متعددة، والتقاط الصور الوقت الفاصل بين من القناة الأولى كل 30 ثانية لمدة 6 ساعة. نقل عدسة الهدف من المجهر إلى القناة التالية لتحديد موقع الخلايا المستهدفة. تكرار الدالة مرور الزمن كما هو موضح أعلاه لالتقاط الصور في كل من أربع قنوات بالتتابع إذا تم تعيين التجربة حتى الاستفادة من أربع قنوات. مواصلة التقاط الصور الوقت الفاصل بين لطالما ثلاثة أيام متتالية. أجريت جميع التجارب في درجة حرارة الغرفة (23 ± 2 درجة مئوية).
  16. تجميع الصور الوقت الفاصل إلىملف الفيديو باستخدام الوقت الفاصل بين برنامج تسجيل التصوير. تشغيل الوقت الفاصل بين تسجيل البرامج، انقر فوق "وظيفة كومة" من القائمة، ثم اختر "وظيفة كومة مفتوحة" لفتح الملفات مكدسة من الكمبيوتر.
  17. بدء تشغيل وظيفة "جعل الفيلم" من وحدة كومة، واختيار جميع الصور واختيار "افي" تنسيق الإخراج. انقر فوق "حفظ باسم" لتخزين ملف الفيديو في مجلد الوجهة على الكمبيوتر.
  18. اختيار الأفلام التي تم تجميعها من المجلد الوجهة على الكمبيوتر واللعب بها. ثم، ومراقبة الحركة من الخلايا واحد من خلال التصور الناتجة من النشاط الوخز حركية من خلايا البكتيريا الموجودة في ملفات الفيديو التي تم إنشاؤها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وجود هامش مستعمرة الطرفية يدل على النوع الرابع بوساطة شعرة الوخز حركية، لوحظ في مستعمرات اكس. النوع البري fastidiosa ومكملة سلالة XF ΔpliG -C (الشكل 1). متحولة XfΔpliG، ومع ذلك، لم تظهر هامشية حول المحيط الخارجي للمستعمرات (الشكل 1). كشفت الوقت الفاصل بين التصوير من الخلايا البكتيرية في غرف تدفق نانو ميكروفلويديك أن لوحظ الوخز الحركة في كل من النوع البري اكس. fastidi...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة، ونحن ميزت سلوك حركة اكس. fastidiosa PilG متحولة XF ΔpilG ومتكاملة سلالات XfΔpilG- C في المصممة حديثا متعددة متوازية نانو قناة الصغرى غرف uidic فلوريدا. لا تستطيع الدوائر uidic المصممة حديثا الصغير فلوريدا قد تصل إلى أربع قاعات متوازية مع 100 ميكرومتر نانو القناة في عرض مقارنة لتصاميم سابقة مع واحد فقط 50 ميكرون قناة واسعة 18. تحسن أوسع قناة نانو تسهل إدخال الخلايا البكتيرية مع المتدفقة من وسائل الإعلام. وبالإض...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذه الدراسة من قبل الولايات المتحدة وزارة الزراعة، دائرة البحوث الزراعية. وذكر الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور فقط لغرض توفير معلومات محددة، ولا تعني توصية أو تأييد من قبل وزارة الزراعة في الولايات المتحدة. وزارة الزراعة الأميركية تساوي مزود الفرصة وصاحب العمل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<مواد علم الأحياء القوية > < / قوية >
< م > X. fastidiosa (Xf) < / م > تيميكولا نوعكوستا ، إتش إس ، <م > وآخرون < / إم > ، 2004 22< / sup>
pilG< em> حذف متحولة Xf & Delta; pliG< / em>Shi ، X. Y. ، et al.< / em> ، 2007 26< / sup>
pilG< em> سلالة تكميلية Xf & Delta; pliG-C ديفيس ، إم جيه ، <م > وآخرون < / إم > 1998 23< / sup>
المواد والمعدات الفيزيائية < / قوي> حلقات
التلقيح التي يمكن التخلص منهاVWR الدولية ، Radnor ، PA# 22-363-607الإجراءات الكمية مثل الجمع البكتيري
Polydimethylsiloxane (PDMS)شركة داو كورنينج# 0002709226سيلجارد 184 سيليكون أطقم المرن
AmScope MD2000 الكاميرا الرقميةAmScope, إيرفين, CASE305R-AZ-Eصورة, تسجيل الفيديو والقياس&NBSP;
خط الأنابيبEdgewood ، نيويوركمتصل بالحقنة وغرفة الموائع
الدقيقة موصلات اللور البلاستيكيةEdgewood ، NYمتصلة بالحقنة وغرفة السوائل
مضخات الحقنة PicoPlus ، Harvard Apparatus ، MA# 702209يمكن ضبط معدل التدفق أثناء تشغيل المضخة.
المحاقنGastight ، شركة Hemilton ، Reno ، NV# 1005توفير المرق المتدفق
مقلوب أوليمبوس IMT-2 مجهرأوليمبوسIMT-2 FLuoro PHaseمراقبة الصور وتسجيل
الكاميرا الرقمية SPOT-RTأدوات التشخيص ، Inc. ، MIRT230الصورة وتسجيل الفيديو والقياس
مصراع المجهرThe UNIBLITZ ، الولايات المتحدة < م >#LS2T2كاميرا التحكم s التعرض الوقت
المجهر مصراع نظامالتحكم في UNIBLITZ, الولايات المتحدة< / em>VCM-D1VCM-D1 قناة واحدة CE / UL / CSA وافق مصراع سائق
MetaMorph صورة البرمجياتUniversal Imaging Corp., PAفي الوقت الحقيقي معالجة الصور فائقة الدقة  
البري #T4300 الدقيقة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Purcell, A. H., Hopkins, D. L. Fastidious xylem-limited bacterial plant pathogens. Annu. Rev. Phytopathol. 34, 131-151 (1996).
  2. Purcell, A. H. Xylella fastidiosa, a regional problem or global threat. J. Plant Pathology. 79, 99-105 (1997).
  3. Hopkins, D. L. Xylella fastidiosa: Xylem-limited bacterial pathogen of plants. Annu. Rev. Phytopathol. 27, 271-290 (1989).
  4. Mattick, J. S. Type IV pili and twitching motility. Annu. Rev. Microbiol. 56, 289-314 (2002).
  5. Meng, Y., et al. Upstream migration of Xylella fastidiosa via pilus-driven twitching motility. J. Bacteriol. 187, 5560-5567 (2005).
  6. Li, Y., et al. Type I and type IV pili of Xylella fastidiosa affect twitching motility, biofilm formation and cell-cell aggregation. Microbiology. 153, 719-726 (2007).
  7. Simpson, A. J. G., et al. The genome sequence of the plant pathogen Xylella fastidiosa. Nature. 406, 151-157 (2000).
  8. Maier, B., Potter, L., So, M., Long, C. D., Seifert, H. S., Sheetz, M. P. Single pilus motor forces exceed 100 pN. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 16012-16017 (2002).
  9. Touhami, A., Jericho, M. H., Boyd, J. M., Beveridge, T. J. Nanoscale characterization and determination of adhesion forces of Pseudomonas aeruginosa pili by using atomic force microscopy. J. Bacteriol. 188, 370-377 (2006).
  10. Skerker, J. M., Berg, H. C. Direct observation of extension and retraction of type IV pili. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 6901-6904 (2001).
  11. Brown, D. C., Larson, R. S. Improvements to parallel plate flow chambers to reduce reagent and cellular requirements. BMC Immunol. 2, 9(2001).
  12. Thomas, W. E., Nilsson, L. M., Forero, M., Sokurenko, E. V., Vogel, V. Shear-dependent 'stick-and-roll' adhesion of type 1 fimbriated Escherichia coli. Mol. Microbiol. 53, 1545-1557 (2004).
  13. Thomas, W. E., Trintchina, E., Forero, M., Vogel, V., Sokurenko, E. V. Bacterial adhesion to target cells enhanced by shear force. Cell. 109, 913-923 (2002).
  14. Bahar, O., Fuente, D. L., Burdman, S. Assessing adhesion, biofilm formation and motility of Acidovorax citrulli using microfluidic flow chambers. FEMS Microbiol. Lett. 312, 33-39 (2010).
  15. Thomas, W. E. Using a laminar flow system to explain shear-enhanced bacterial adhesion. Proceedings of ICMM2005, Third International Conference on Microchannels and Mini-channels. Toronto, Ontario, Canada, , 751-759 (2005).
  16. Fuente, D. L., et al. Assessing adhesion forces of type I and type IV pili of Xylella fastidiosa bacteria by use of a microfluidic flow chamber. Appl. Environ. Microbiol. 73, 2690-2696 (2007).
  17. DeLange, P. A., Collins, T. L., Pierce, G. E., Robinson, J. B. PilJ localizes to cell poles and is required for type IV pilus extension in Pseudomonas aeruginosa. Curr Microbiol. 55, 389-395 (2007).
  18. Fuente, D. L., Burr, T. J., Hoch, H. C. Mutations in type I and type IV pilus biosynthetic genes affect twitching motility rates in Xylella fastidiosa. J. Bacteriol. 189, 7507-7510 (2007).
  19. Ferandez, A., Hawkins, A. C., Summerfield, D. T., Harwood, C. S. Cluster II che genes from Pseudomonas aeruginosa are required for an optimal chemotactic response. J. Bacteriol. 184, 4374-4383 (2002).
  20. Cursino, L., et al. Identification of an Operon, Pil-Chp, That Controls Twitching Motility and Virulence in Xylella fastidiosa. Mol. Plant Microbe Interact. 10, 1198-1206 (2011).
  21. Hazelbauer, G. L., Falke, J. J., Parkinson, J. S. Bacterial chemoreceptors: High-performance signaling in networked arrays. Trends Biochem. Sci. 33, 9-19 (2008).
  22. Costa, H. S., et al. Plant hosts of Xylella fastidiosa in and near southern California vineyards. Plant Dis. 88, 1255-1261 (2004).
  23. Shi, X. Y., Dumenyo, C. K., Hernandez-Martinez, R., Azad, H., Cooksey, D. A. Characterization of regulatory pathways in Xylella fastidiosa: genes and phenotypes controlled by algU. Appl. Environ. Microbiol. 73, 6748-6756 (2007).
  24. Matsumoto, A., Young, G. M., Igo, M. M. Chromosome-Based Genetic Complementation System for Xylella fastidiosa. Appl. Environ. Microbiol. 75, 1679-1687 (2009).
  25. Davis, M. J., Purcell, A. H., Thomson, S. V. Isolation Media for the Pierce's Disease Bacterium. Phytopathology. 70, 425-429 (1980).
  26. Xia, Y. N., Whitesides, G. M. Soft lithography. Annu. Rev. Mater. Sci. 28, 153-184 (1998).
  27. Chaudhury, M. K., Whitesides, G. M. Direct measurement of interfacial interactions between semispherical lenses and flat sheets of poly-(dimethylsiloxane) and their chemical derivatives. Langmuir. 7, 1013-1025 (1991).
  28. Cruz, L. F., Parker, J. K., Cobine, P. A., De La Fuente, L. Calcium-enhanced twitching motility in Xylella fastidiosa is linked to a single PilY1 homolog. Appl. Environ. Microbiol. 80, 7176-7196 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Twitching MotilityXylella fastidiosaPilG GeneMicrofluidic Flow ChamberTime Lapse ImagingType IV PiliBacterial MotilityGene DeletionComplementary StrainPathogenicity Analysis

مقالات ذات صلة