يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

Coculture فحوصات لدراسة البلاعم والخلايا الدبقية الصغيرة تحفيز من ورم أرومي دبقي الغزو

13.9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/53990

⸱

أكتوبر 20, 2016

 ,  ,  , 
1New Jersey Center for Science, Technology and Mathematics, Kean University, 2Department of Physiology and Medical Physics, Royal College of Surgeons in Ireland, 3The Feinstein Institute for Medical Research at North Shore-LIJ, 4Department of Anatomy and Structural Biology, Gruss Lipper Biophotonics Center, Albert Einstein College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

يتطلب فهم السلوك الخبيث للسرطان إنشاء نماذج دقيقة لكيفية تفاعل الخلايا السرطانية مع مكونات البيئة المكروية للورم ، مثل الضامة. نصف هنا طريقتين لدراسة تفاعل خلايا الورم الأرومي الدبقي مع البلاعم المرتبطة بالورم والخلايا الدبقية الصغيرة حيث يتم تقييم التأثير على غزو الورم الأرومي الدبقي.

الملخص

ورم أرومي الأشكال (الصف الرابع الورم) هو سرطان البشري عدوانية جدا مع بقاء متوسط ​​آخر التشخيص 1 سنة. وعلى الرغم من زيادة فهم الأحداث الجزيئية التي تؤدي إلى glioblastomas، هذا النوع من السرطان لا يزال الحرارية العالية إلى وسائل العلاج التقليدية. الاستئصال الجراحي لأورام الدماغ عالية الجودة ونادرا ما كاملة نظرا لطبيعة الارتشاحي للغاية من خلايا ورم أرومي. لذا النهج العلاجية التي تخفف من غزو الخلايا ورم أرومي هو خيارا جذابا. وقد أظهرت مختبرنا وغيرها من الجهات التي ورم الضامة المرتبطة بها والخلايا الدبقية الصغيرة (الضامة الدماغ المقيمين) دفعة قوية غزو ورم أرومي. يتم استخدام بروتوكول صفها في هذه الورقة إلى نموذج ورم أرومي-بلعم / الخلايا الدبقية الصغيرة التفاعل باستخدام فحوصات في المختبر الثقافة. يمكن لهذا النهج يسهل إلى حد كبير في تطوير و / أو اكتشاف الأدوية التي تعطل التواصل مع الضامة التي تمكن هذه behav الخبيثمنطقة المحيط الهندي. أنشأنا اثنين قوية المقايسات الغزو coculture حيث تحفز الخلايا الدبقية الصغيرة / الضامة غزو الخلايا بالورم الدبقي 5-10 أضعاف. ومطلي خلايا ورم أرومي المسمى مع علامة فلوري أو التعبير بشكل جوهري بروتين فلوري دون ومع الضامة / الدبقية الصغيرة على إدراج غرفة البولي المغلفة مصفوفة أو جزءا لا يتجزأ من مصفوفة ثلاثية الأبعاد. ويتم تقييم غزو الخلايا باستخدام المجهر الفلورسنت على الصورة وعدد الخلايا فقط الغازية على الجانب السفلي من مرشح. باستخدام هذه المقايسات، عدة مثبطات الدوائية (JNJ-28312141، PLX3397، Gefitinib، وSemapimod)، وقد تم تحديد الذي منع البلاعم / حفز الخلايا الدبقية الصغيرة غزو ورم أرومي.

المقدمة

ورم أرومي الأشكال هو سرطان الدماغ البشري عدوانية مع بقاء متوسط ما يقرب من 12 شهرا من وقت التشخيص 1،2. ورم أرومي هو واحد من أكثر أنواع السرطان الأكثر فتكا وتحديا سريريا كما هو صهر للعلاج بالادوية الكيميائية والاستئصال الجراحي. طبيعة منتشر من ورم أرومي تمكن الخلايا السرطانية تنتشر في أرجاء الدماغ العادي مما يجعل الورم متقدمة من المستحيل عمليا إلى بتر جراحيا تماما. هذا الجانب الغازية للغاية هو سمة مميزة لورم أرومي وغيرها من astrocytomas المتقدمة. ولذلك، فقد كان تركيز الكثير من الأبحاث على الآلية الجزيئية من غزو الخلايا ورم أرومي. المكروية ورم أرومي الورم تلعب دورا حيويا في تأسيس خبيثة 3-6. / عرضت الخلايا الدبقية الصغيرة ورم المرتبطة الضامة لتكون مسؤولة عن تعزيز غزو ورم أرومي 7،8. ولكن معظم هذه الدراسات قياس تأثير الضامة / الدبقية الصغيرة باستخدامالمقايسات التي تفصل بينهما جسديا من خلايا ورم أرومي. وقد وضعت مختبرنا إلى توليد تحسين المقايسات التي تسمح لنا لدراسة كيفية غزو ورم أرومي يعتمد على الضامة / الدبقية الصغيرة في cocultures وتمكننا من صورة التفاعل الجسدي بينهما أثناء الغزو.

المقايسات الكلاسيكية لقياس غزو الخلايا تتضمن "القياسية" بويدن الكيميائي الغرفة وصيغ chemoinvasion. ومطلي هنا الخلايا لدراستها في غرفة البلاستيكية التي تحتوي على فلتر البولي على الجزء السفلي الذي يحتوي على مسام الحجم المحدد (عادة ما بين 0.4 و 8 ميكرومتر في القطر). عملية غزو الخلايا ينطوي على حاجز مادي، وعادة ما تتألف من البروتين مصفوفة خارج الخلية. في مقايسة chemoinvasion، مصفوفة فضل المستخدمة Matrigel (يشار إليها فيما يلي باسم "ماتريكس")، وهي خليط من البروتين مصفوفة خارج الخلية التي يفرزها Engelbreth-هولم-سرب (الصحة والسلامة) خلايا فأر ساركوما وتتألف في معظمها من العقيدنوع اجين الرابع و laminin. ثم توضع الدوائر في بئر زراعة الأنسجة التي تحتوي على وسائل الإعلام ثقافة الخلية مع أو بدون عوامل النمو التي يشتبه في تحفيز الغزو. الخلايا التي لديها القدرة على أعلى الغازية سوف تغزو خلال خارج الخلية مصفوفة مرشح المغلفة على تردد أعلى والتمسك السفلي من مرشح. لقد قمنا بتعديل هذا الاختبار من أجل تقييم دور الخلايا الدبقية الصغيرة وورم الضامة المرتبطة بها على غزو الخلايا ورم أرومي.

لقد كنا قادرين على تحديد باستخدام فحوصات coculture موضح في غضون هذه الورقة أن الخلايا الدبقية الصغيرة يمكن أن تحفز غزو اثنين من خطوط الخلايا ورم أرومي من 5-10 أضعاف 9،10. وهذا يعكس ما لوحظ في النماذج الحيوانية من الإصابة بالورم الأرومي الدبقي. وعلاوة على ذلك، قمنا بتطوير فحص ثلاثة الغزو الأبعاد حيث / الخلايا الدبقية الصغيرة يمكن فحص التفاعلات بين الخلايا ورم أرومي والضامة أكثر مباشرة. مدى غزو الخلايا ورم أرومي يحفزه macrophaغيس / الخلايا الدبقية الصغيرة في مقايسة 3D هي مماثلة لما ينظر إليه باستخدام نهج غرفة مصفوفة المغلفة. وقد وضعت فحوصات مماثلة سابقا لدراسة التفاعلات سرطان الثدي مع الضامة أثناء الغزو 11-13. يتعين على الطرق الموضحة في هذه الورقة أن تساعد في القدرة على تشريح الآلية الجزيئية (ق) من البلاعم الغزو / حفز الخلايا الدبقية الصغيرة من خلايا ورم أرومي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. الفلورسنت وصفها من الخلايا

ملاحظة: تسمية خطوط الخلايا ورم أرومي والخلايا الدبقية الصغيرة مع الأصباغ الفلورية 9. بدلا من ذلك، وتوليد خطوط الخلايا التي تعبر بشكل جوهري البروتينات الفلورية مثل GFP / RFP كما هو موضح في 14.

  1. لوحة الخلايا على طبق من 6 جيدا بحيث أنها ستكون 70-80٪ متكدسة في يوم من تلطيخ. للخط الفئران خلايا ورم أرومي GL261 والبشري خط خلية ورم أرومي U87، لوحة 1 × 10 6 و 1.5 × 10 6 خلايا، على التوالي على 6 سم طبق 24 ساعة قبل تلطيخ.
  2. إعداد الفلورسنت خلية وصمة عار محلول الصبغة في DMSO وإضافة صبغة 5 ميكرومتر إلى وسائل الإعلام، سواء معهد الحديقة التذكارية روزويل المتوسطة (RPMI) أو بلعم المتوسطة مجانا المصل (MSFM)، دوامة جيدا.
  3. احتضان الخلايا مع صبغة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2.
  4. إزالة الصبغة تحتوي على وسائل الإعلام وإضافة وسائط جديدة (RPMI أو MSFM) إلى الخلايا.
  5. احتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة. ملاحظة: الخلايا هي الآنالملون وعلى استعداد لاستخدامها في التجربة.

المغلفة قبل 2. الفحص مصفوفة غرفة Coculture الغزو

  1. التفريق THP-1 الخلايا باستخدام خلات phorbol ميريستات (سلطة النقد الفلسطينية) 15.
    1. لوحة 2-3 × 10 5 THP-1 الخلايا في 1.5 مل من RPMI / 10٪ FBS في لوحة الثقافة 6 جيدا. فورا بعد الطلاء إضافة 100 نانومتر سلطة النقد الفلسطينية واحتضان عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 لمدة 48 ساعة.
      ملاحظة: بعد 48 ساعة، THP-1 الخلايا التي خضعت التمايز بنجاح ستكون ملتصقة وامتدت الى الجزء السفلي من أخذ جيدا على التشكل المستديرة.
    2. إزالة سلطة النقد الفلسطينية عن طريق الغسيل مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني 1X واستبدالها مع الطازجة RPMI / 10٪ FBS. الانتظار لمدة 48 ساعة أخرى حتى الخلايا جاهزة للاستخدام في فحص.
  2. تتوازن مصفوفة غرف قبل المغلفة عن طريق وضعها في بئر تحتوي على 500 ميكرولتر من وسائل الإعلام وحدها (أي مصل) وإضافة 500 ميكرولتر من وسائل الإعلام وحدها إلى الأعلى. احتضان غرف لمدة 2 ساعة على 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2.
    ملاحظة: تم شراء غرف قبل المغلفة من الشركة المصنعة. انظر الجدول المواد / المعدات.
  3. فصل بلطف الخلايا (خطوط الخلايا ورم أرومي fluorescently المسمى والخلايا الدبقية الصغيرة / الضامة)، وإزالة وسائل الاعلام من الخلايا عن طريق الطموح. غسل الخلايا على الطبق مع 2 مم EDTA / PBS. إضافة 500 ميكرولتر من 2 ملي EDTA / PBS واحتضان لمدة 5-10 دقيقة في حاضنة الخلية عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2.
  4. خلايا resuspend في 5 مل من وسائل الاعلام التي تحتوي على 0.3٪ الأبقار مصل الزلال (BSA).
  5. أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 120 × ز.
  6. نضح وطاف بيليه resuspend في MSFM / 0.3٪ وسائل الإعلام BSA (للخلايا GL261 والخلايا الدبقية الصغيرة) أو RPMI / 0.3٪ BSA (لU87 وTHP-1 خلايا) بحيث يكون تركيز خلايا يساوي 1 × 10 6 خلية / مل . استخدام عدادة الكريات لحساب الخلايا.
  7. إضافة 500 ميكرولتر وسائل الاعلام / 0.3٪ BSA لكل بئر من 24 لوحة جيدا.
  8. إزالة وسائل الاعلام من الغرف التي تم معايرتها لا يقل عن 2 ساعة (الخطوة 2.2). مكان chambeالتمرير في احتواء من 500 ميكرولتر وسائل الاعلام / 0.3٪ BSA (الخطوة 2.7).
  9. إذا كان يتم استخدام مثبطات لدراسة تأثيرها على البلاعم / حفز الخلايا الدبقية الصغيرة غزو الورم، إضافة تركيز مناسب لكلا من أسفل وأعلى أجزاء من الغرفة.
    ملاحظة: تركيزات السائل النخاعي-1R المانع تستخدم لمنع تماما الخلايا الدبقية الصغيرة حفز الغزو ورم أرومي GL261 يمكن العثور عليها في إشارة 9.
  10. اعتمادا على خطوط الخلايا المستخدمة، إضافة الخلايا إلى الغرفة العليا كما هو موضح في الخطوتين التاليتين: ورم أرومي الماوس (2.10.1) وورم أرومي البشري (2.10.2).
    1. خلط 1.5 × 10 5 GL261 (ورم أرومي) الخلايا (150 ميكرولتر) و 5 × 10 4 الماوس الخلايا الدبقية الصغيرة (50 ميكرولتر) (راجع الخطوة 2.6 لمزيد من التفاصيل وسائل الإعلام). ليصل حجم 500 ميكرولتر بإضافة 300 ميكرولتر MSFM / 0.3٪ BSA. يضاف خليط الخلية إلى الغرفة العلوية واحتضان عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 لمدة 48 ساعة.
      ملاحظة: الخلايا الدبقية الصغيرة الفئران وعزله من الفئران حديثي الولادة كما هو موضح طن 1 6.

خلط 7.5 × 10 4 U87 (ورم أرومي) خلايا (75 ميكرولتر) و 2.5 × 10 4 THP1 (بلعم) خلايا (25 ميكرولتر). يصل حجم في 500 ميكرولتر بإضافة 400 ميكرولتر RPMI / 0.3٪ BSA. يضاف خليط الخلية إلى الغرفة العليا. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 لمدة 24 ساعة.

  1. بعد الحضانة، وإزالة الخلايا من أعلى غرفة من التطلع لطيف وإصلاح الدوائر عن طريق وضع في 3.7٪ الفورمالديهايد في برنامج تلفزيوني. السماح غرف للبقاء في تثبيتي لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (أو بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية). إزالة تثبيتي من التطلع لطيف واستبدالها مع 500 ميكرولتر برنامج تلفزيوني 1X. انتقل إلى القسم (4) لتحليل الصور.
    ملاحظة: تجربة يمكن أن يكون مؤقتا في هذه اللحظة وحفظها للتصوير في برنامج تلفزيوني 1X. يمكن الكشف عن إشارات صبغة الفلورسنت لمدة تصل إلى 2 أسابيع بعد التثبيت.

3. غزو الفحص "3D" -embedding الورم والضامة / الدبقية الصغيرة في مصفوفة

  1. مزيج مصفوفة ذوبان في 4 درجات مئوية خلال الليل. تنفيذ كافة التلاعب مزيد باستخدام مصفوفة على الجليد في غطاء محرك السيارة.
  2. إعداد 10 ملغ / مل تركيز مصفوفة في وسائل الإعلام (MSFM أو RPMI) بنسبة 0.3٪ BSA على الجليد.
    ملاحظة: سهم تركيز مصفوفة هو عادة حوالي 15 ملغ / مل.
  3. لإعداد الخلايا (المسمى في الخطوة 1) للتعليق في المصفوفة، وإزالة وسائل الاعلام من الخلايا عن طريق الطموح. غسل الخلايا على الطبق مع 2 مم EDTA / PBS. إضافة 500 ميكرولتر من 2 ملي EDTA / PBS إلى الخلايا واحتضان لمدة 5-10 دقيقة في حاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2.
  4. خلايا resuspend في 5 مل من وسائل الاعلام التي تحتوي على 0.3٪ BSA.
  5. أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 120 × ز.
  6. طاف نضح من بيليه. بيليه resuspend في وسائل الاعلام / 0.3٪ BSA مثل أن تركيز خلايا يساوي 1 × 10 6 خلية / مل. استخدام عدادة الكريات لحساب الخلايا.
  7. إضافة 1.5 × 10 5 خلايا GL261 (في 150 ميكرولتر) + 5 × 10 4 خلايا الدبقية الصغيرة (في 50 ميكرولتر) في أنبوب 1.5 مل microfuge.إضافة 2 × 10 5 خلايا GL261 (200 ميكرولتر) في أنبوب microfuge 1.5 مل منفصل.
    ملاحظة: خلايا GL261 وحدها دون الخلايا الدبقية الصغيرة بمثابة السيطرة.
  8. خلايا تدور في microfuge لمدة 5 دقائق في 120 × ز.
  9. Resuspend الخلايا في 200 مصفوفة الباردة ميكرولتر على الجليد.
  10. لوحة 50 ميكرولتر (50000 الخلايا) على مركز المقصورة العليا من 8 ميكرومتر غرفة حجم المسام إدراج.
  11. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لبلمرة تحدث.
  12. إضافة 200 ميكرولتر المتوسطة خالية من المصل لمجلس الشيوخ و 700 مصل ميكرولتر تحتوي على متوسط ​​نمو الخلية إلى أقل أيضا.
  13. احتضان عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 لمدة 48 ساعة.
  14. بعد الحضانة، وإزالة الخلايا من أعلى غرفة من التطلع لطيف وإصلاح الدوائر عن طريق وضع في 3.7٪ الفورمالديهايد في برنامج تلفزيوني. السماح غرف للبقاء في تثبيتي لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (أو بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية). إزالة تثبيتي من التطلع لطيف واستبدالها مع 500 ميكرولتر برنامج تلفزيوني 1X. انتقل إلى قسم 4 FOتحليل الصور ص.

4. التصوير فحوصات

  1. إزالة غرف من 3.7٪ الفورمالديهايد ويغسل جيدا في احتواء الطازجة 500 ميكرولتر برنامج تلفزيوني 1X.
    ملاحظة: لا يسمح غرف لتجف.
  2. باستخدام قضيب من القطن ذات الرؤوس، بلطف تنظيف الخلايا غير الغازية من الجزء العلوي من مرشح (الجانب يواجهها داخل الغرفة) عن طريق كشط سطح المرشح. بدء بلطف وزيادة الضغط تدريجيا. هل هذا على الأقل 3 مرات في الغرفة.
  3. ضع غرف إما في صحن القاع الزجاجي أو ترك في 24 لوحة جيدا.
  4. ضع العينة على مرحلة من مراحل epifluorescent أو الليزر المجهر الفلورسنت مبائر مجهزة الكاميرا والتقاط صورة البرنامج 9،10.
  5. يستغرق عدة 10X أو 20X الصور من المجالات التمثيلية.
  6. باستخدام برمجيات تحليل الصور، مثل يماغيج، حساب عدد خلايا ورم أرومي التي عبرت مرشح لالسفلي 9،10.
  7. إذا كان التصوير "3D. "مقايسة الغزو (الموصوفة في القسم 3)، تولد سلسلة Z كومة باستخدام الليزر فلوري المجهر متحد البؤر 5-6 لصورة سكان الخلية الغازية على الجانب السفلي من مرشح، اتبع الخطوات بروتوكول 4،2-4،6 المذكورة أعلاه.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

باستخدام الأساليب المذكورة هنا، لقد أظهرنا أن الخلايا الدبقية الصغيرة والضامة يمكن أن تحفز بشكل كبير غزو الخلايا ورم أرومي. ويعمل اثنان فحوصات غزو مختلفة، وصورت في الشكل 1. في الشكل 2، وخلايا GL261 التي تعبر بشكل جوهري على بروتين فلوري mCherry كانت مطلية على غرف قبل المغلفة مع وبدون الخلايا الدبقية الصغيرة لمدة 48 ساعة. وكانت الخلايا GL261 الغازية الحد الأدنى من تلقاء نفسها ولكن عندما مثقف مع الخلايا الدبقية الصغير...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الطبيعة الغازية للغاية من astrocytomas الدرجة العالية وورم أرومي تجعل هذه السرطانات الدماغ مميتة جدا. ولذا فمن الأهمية بمكان هو لفهم الآليات الجزيئية والخلوية من غزو ورم أرومي. عرف الكثير عن عملية الغزو ورم أرومي بالفعل 17. باستخدام صيغ الفحص المفصل في هذه الورقة، وقد أظهرت مختبرنا في كل من الفأر والنماذج البشرية التي ورم المرتبطة الضامة يمكن أن تحفز غزو الخلايا بالورم الدبقي 5-10 أضعاف. هذا النموذج coculture يكرر بأمانة قدرة خلايا ورم أرومي للتفاعل جسديا مع الضامة / ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نود أن نشكر الدكتور كونستانتين دوبرينيس على توفير الخلايا الدبقية الصغيرة للفئران لهذه الدراسات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
غرفة غزو Corning BioCoat Matrigel: مع BD Matrigel MatrixCorning / Fisher ScientificCat: 354481
Macrophage Serum Free Media (MSFM) (500 مل) LifeTechnologies12065-074
CellTracker Red CMTPX DyeLife Technologies / Molecular ProjectesC34552
CellTracker Green CMFDADye Life Technologies / Molecular ProbesC2925
خط الخلية GL261المعهد الوطني للسرطان (NCI) خط
الخلية U87ثقافة نوع الأنسجة الأمريكيةHTB-14
THP-1 خط الخليةثقافة نوع الأنسجة الأمريكيةATCC TIB-202
RPMI 1640 متوسط (500 مل)Technologies / Gibco11875-093
محلول الفورمالديهايدSigma AldrichF1635
Corning Transwell إدراج خلايا غشاء البولي كربونات (8 & micro; M المسام) 48 لكل عبوة.مصفوفة ثقافة CorningCLS3422
Cultrex 3-D مستخلص الغشاء القاعدي لعامل النمو المخفض ، PathClearTrevigen3445-005-01
مصل عجل الجنين (FBS)Life TechnologiesCat: 10500064
ألبومين مصل البقر ، الكسر V ، العلاج بالصدمة الحراريةFisherscientificBP1600-100
0.5 M EDTAThermoFisher Scientific15575-020
فوربول 12-ميريستات 13-أسيتات (PMA)سيجما ألدريتشP8139-1MG
مجموعة مجموعة Life

المراجع

  1. Buckner, J. C., et al. Central nervous system tumors. Mayo Clin Proc. 82 (10), 1271-1286 (2007).
  2. Furnari, F. B., et al. Malignant astrocytic glioma: genetics, biology, and paths to treatment. Genes. Dev. 21 (21), 2683-2710 (2007).
  3. Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. The brain tumor microenvironment. Glia. 60 (3), 502-514 (2012).
  4. Li, W., Graeber, M. B. The molecular profile of microglia under the influence of glioma. Neuro. Oncol. 14 (8), 958-978 (2012).
  5. Watters, J. J., Schartner, J. M., Badie, B. Microglia function in brain tumors. J. Neurosci. Res. 81 (3), 447-455 (2005).
  6. Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. Microglia/macrophages promote glioma progression. Glia. 59 (3), 472-485 (2011).
  7. Bettinger, I., Thanos, S., Paulus, W. Microglia promote glioma migration. Acta Neuropathol. 103 (4), 351-355 (2002).
  8. Wesolowska, A., et al. Microglia-derived TGF-beta as an important regulator of glioblastoma invasion: an inhibition of TGF-beta-dependent effects by shRNA against human TGF-beta type II receptor. Oncogene. 27 (7), 918-930 (2008).
  9. Coniglio, S. J., et al. Microglial stimulation of glioblastoma invasion involves epidermal growth factor receptor (EGFR) and colony stimulating factor 1 receptor (CSF-1R) signaling. Mol Med. 18, 519-527 (2012).
  10. Miller, I. S., et al. Semapimod sensitizes glioblastoma tumors to ionizing radiation by targeting microglia. PLoS One. 9 (5), (2014).
  11. Goswami, S., et al. Macrophages promote the invasion of breast carcinoma cells via a colony-stimulating factor-1/epidermal growth factor paracrine loop. Cancer Res. 65 (12), 5278-5283 (2005).
  12. House, R. P., et al. Two functional S100A4 monomers are necessary for regulating nonmuscle myosin-IIA and HCT116 cell invasion. Biochemistry. 50 (32), 6920-6932 (2011).
  13. Wang, W., et al. The activity status of cofilin is directly related to invasion, intravasation, and metastasis of mammary tumors. J Cell Biol. 173 (3), 395-404 (2006).
  14. Zagzag, D. 1, Miller, D. C., Chiriboga, L., Yee, H., Newcomb, E. W. Green fluorescent protein immunohistochemistry as a novel experimental tool for the detection of glioma cell invasion in vivo. Brain Pathol. 13 (1), 34-37 (2003).
  15. Tsuchiya, S., et al. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int. J. Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).
  16. Dobrenis, K. Microglia in cell culture and in transplantation therapy for central nervous system disease. Methods. 16 (3), 320-344 (1998).
  17. Coniglio, S. J., Segall, J. E. Molecular mechanism of microglia stimulated glioblastoma invasion. Matrix Biol. 32 (7-8), 372-380 (2013).
  18. See, A. P., Parker, J. J., Waziri, A. The role of regulatory T cells and microglia in glioblastoma-associated immunosuppression. J Neurooncol. 123 (3), 405-412 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

THP 1
Coculture فحوصات لدراسة البلاعم والخلايا الدبقية الصغيرة تحفيز من ورم أرومي دبقي الغزو
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.