مقالة منهجية

طريقة سريعة والمبسطة لارتفاع العزلة من خلال وضع-من ميرنا من نظافة البروتين الدهني عالي الكثافة

DOI:

10.3791/54257

⸱

يوليو 27, 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, Virginia Commonwealth University, 2McGuire Veterans Affairs Medical Center, Research BC-101

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الرنا الميكروية تلعب الدور التنظيمي المهم والناشئة كأهداف علاجية جديدة لمختلف الأمراض التي تصيب الإنسان. وقد تبين أن تتم miRNAs في البروتينات الدهنية عالية الكثافة. لقد قمنا بتطوير طريقة مبسطة لعزل بسرعة HDL النقي مناسبة لتحليل ميرنا من البلازما البشرية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RNAs الصغيرة غير المشفرة (miRNAs) متورطة في مجموعة متنوعة من الأمراض البشرية بما في ذلك متلازمات التمثيل الغذائي. يمكن استخدامها كمؤشرات حيوية للتشخيص والتشخيص أو قد تكون بمثابة أهداف لتطوير الأدوية ، على التوالي. لقد ثبت مؤخرا أن miRNAs يتم حملها في البروتينات الدهنية ، وخاصة البروتينات الدهنية عالية الكثافة (HDL) ويتم تسليمها إلى الخلايا المتلقية لامتصاصها. هذا يثير احتمال أن تلعب miRNAs دورا مهما ومحوريا في الوظيفة الخلوية والأعضاء من خلال تنظيم التعبير الجيني بالإضافة إلى الرسول للاتصالات الخلوية والخلية والحديث المتبادل بين الأعضاء. الطرق الحالية لعزل miRNA من HDL المنقى غير عملية عند استخدام عينات صغيرة على نطاق واسع. هذا يرجع إلى حد كبير إلى الطرق الشاقة التي تستغرق وقتا طويلا والمستخدمة لعزل البروتين الدهني. لقد طورنا نهجا مبسطا لعزل HDL المنقى بسرعة مناسب لتحليل miRNA من عينات البلازما. يجب أن تسهل هذه الطريقة التحقيقات في دور miRNAs في الصحة والمرض ، وعلى وجه الخصوص توفر رؤى جديدة حول مجموعة متنوعة من الوظائف البيولوجية ، خارج النقل العكسي للكوليسترول ، التي تنسب إلى HDL. أيضا ، يمكن أن توفر أنواع miRNA الموجودة في HDL معلومات قيمة عن المؤشرات الحيوية السريرية لتشخيص الأمراض المختلفة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MicroRNAs هي أنواع RNA صغيرة داخلية غير مشفرة محفوظة بشكل كبير وتعتبر لاعبين رئيسيين في تنظيم العمليات البيولوجية المختلفة عن طريق تحطيم أو قمع الحمض النووي الريبي المرسال المستهدفالمحدد 1. نظرا لأن miRNAs تعمل داخل الخلايا ، فقد تم استكشافها كمؤشرات حيوية مشتقة من الأنسجة مما أدى إلى اكتشاف الوظائف الخاصة بالأنسجة لهذه miRNA. ومع ذلك ، تم العثور على miRNAs أيضا خارج الخلية إما مرتبطة بالبروتينات أو في الإكسوسومات / الحويصلات الدقيقة التي يمكن أن تحميها بشكل فعال من التدهور بواسطة RNases خارجالخلية 2. أظهرت الدراسات الحديثة أن التأثير الوقائي ل HDL قد لا يكون مرتبطا ارتباطا وثيقا بقدرته على تعزيز تدفق الكوليسترول ولكن بالأحرى بحمولته غير الكوليسترول ، على وجه الخصوص كحامل miRNAs منتشر 3 ، 4. قد لا تعدل miRNAs هذه عملية التمثيل الغذائي للدهون فحسب ، بل ترتبط أيضا بالتأثيرات المضادة للالتهابات ومضادات الأكسدة والمضادة للتخثر لمركب HDL-miRNA 5 ، 6.

لاستكشاف دور miRNAs المحمولة في جزيئات HDL ، يجب إنشاء بروتوكول بسيط وسهل لاستخراج miRNA من HDL المعزول عالي النقاء لاستخدامه في الروتين السريري. تم وصف العديد من الطرق لعزل HDL. هذه الطرق إما تستغرق وقتا طويلا أو تتطلب كمية كبيرة من البلازما التي قد تتطلب تجميع العينات ، وغسيل الكلى المكثف لتحلية البروتينات الدهنية المعزولة ولا تزيل الإكسوسومات تماما كمصدر ل miRNAs3 ، على التوالي. نصف هنا طريقة بسيطة وسريعة يمكنها عزل miRNA عن HDL عالي النقاء باستخدام حجم صغير من عينات الدم على نطاق أوسع. نعتقد أن هذه الطريقة قد تكون بمثابة مرجع جيد لتعزيز البحث في دور miRNAs المنتشرة وعلى وجه الخصوص دور HDL في تسهيل الاتصال بين الخلايا والأعضاء المختلفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. جمع عينات الدم

  1. جمع الصيام عينات من الدم الوريدي المحيطية إلى 10 مل الأنابيب البلاستيكية التي تحتوي على حمض تخثر Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) (التي لديها العديد من المزايا أكثر من مضادات التخثر الأخرى) من خلال بزل الوريد القياسية من الوريد بارز في الحفرة المرفقية.
  2. أجهزة الطرد المركزي لعينات الدم في 1600 x ج لمدة 20 دقيقة على 4 درجات مئوية في جهاز للطرد المركزي الطاولة للحصول على البلازما خالية من خلايا الدم الحمراء وكميات صغيرة من الحمض النووي الريبي.
  3. بالتتابع أجهزة الطرد المركزي لطاف في 3000 غ (4 درجة مئوية) في الدلو المتأرجح الدوار لمدة 10 دقيقة لإزالة WBC والصفائح الدموية ومن ثم إضافي 15 دقيقة لإزالة الحطام الخلية المتبقية على التوالي.
  4. قياس كثافة البلازما باستخدام مقياس الكثافة في RT حسب تعليمات التصنيع.
    ملاحظة: تعديل كثافة (د = 1.023 جم / مل) مع 0.9٪ محلول ملحي قد تكون هناك حاجة بعد إزالة exosomes ولكن قبل تنبيذ فائق الكثافة التدرج.

    5. 2. إزالة Exosome من البلازما

    1. إزالة exosomes المتداولة التي لها كثافة مماثلة لHDL، وتمثل مصدرا هاما من الناحية الكمية من ميرنا 3.
      1. القيام بذلك عن طريق إضافة 252 ميكرولتر حل exosome هطول الأمطار إلى 1 مل البلازما تليها الحضانة لمدة 30 دقيقة على 4 درجات مئوية. لتكوير خارج exosomes، الطرد المركزي الخليط لمدة 30 دقيقة في 1500 غرام عند 4 درجات مئوية.
      2. لعزل HDL، نقل 1 مل من طاف مما أدى إلى البولي سميكة الجدران أنبوب نابذة لمزيد من المعالجة مع تنبيذ فائق التدرج الكثافة (أنظر أدناه).

    3. التدرج الكثافة تنبيذ فائق (الشكل 1).

    1. لفصل HDL استخدام 3 خطوة عملية توظيف نابذة أرضية مع الدوار زاوية ثابتة تعمل على 448811 س G و 8 درجة مئوية، على التوالي.
    2. إعداد ثلاثة حلول مختلفة الكثافة بالتتابع وجديدة لكل العزلة.
      1. إعداد الحل ألف (عزل VLDL، د = 1.006 جم / مل) عن طريق إذابة 11.4 غرام كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم: 0.195 مول)، 0.1 غرام EDTA2Na و 1 مل 1N هيدروكسيد الصوديوم في 1000 مل من الماء المقطر تعقيمها. ثم إضافة 3 مل إضافية من المياه وتعقيمها المقطر.
      2. إعداد الحل ب (عزل LDL، د = 1.182 جم / مل) وذلك بإضافة 25.2 غرام NaBr إلى 100 مل من محلول ألف (كلوريد الصوديوم 0.195 مول، NaBr 2.44 مول).
      3. إعداد الحل C (عزل HDL، د = 1.470 جم / مل) عن طريق خلط 78.8 غرام NaBr مع 100 مل من محلول ألف (كلوريد الصوديوم 0.195 مول، NaBr 7.7 مول). تأكيد الكثافة المناسبة في RT باستخدام جهاز قياس شدة الضوء. إبقاء جميع الحلول في 4 درجات مئوية حتى استخدامها مرة أخرى.

    4. عزل VLDL

    1. خلط 1 مل من البلازما (متوسط ​​الكثافة = 1.023 جم / مل)، ونوكلياز حرة 200 ميكرولتر من الدهون الأحمر 7B في أنبوب نابذة 6.5 مل البولي سميكة الجدران.
    2. ثم طبقة بعناية 5 مل من محلول وعلى أعلى من الخليط. إذا لزم الأمر، إضافة إضافي الدهون الأحمر 7B على رأس حل تيس موازنة وزن كل أنبوب. أجهزة الطرد المركزي لمدة 2 ساعة (التسارع - 5)، (التباطؤ - 7).
      ملاحظة: أثناء الطرد المركزي، يتم تجميع البروتينات الدهنية والفرقة في مناطق الكثافة توازنها.
    3. في نهاية المدى مراقبة 2 طبقات. إزالة 1.5 مل من الكسر VLDL يمثلون الطبقة العليا وتخزينها في 4 درجات مئوية.
    4. وأخيرا، وذلك باستخدام ماصة نقل 4 مل من أسفل الأنبوب الذي يحتوي على LDL، HDL، الزلال والحامض الدهني جزء من أنبوب البولي الجديد لعزل LDL.

    5. عزل LDL

    1. مزيج 2 مل من محلول B و 100 نوكلياز ميكرولتر خالية من الدهون الأحمر 7B إلى الأنبوب الذي يحتوي على LDL و HDL جزء (القسم 4)، على التوالي.
    2. ثم الطرد المركزي من ل3 ساعات (تسارع 9، تباطؤ 7). بعد ذلك، قم بإزالة 1.5 مل من الكسر LDL يمثلون الطبقة العليا والحفاظ على 4 درجات مئوية أو مخزن في -80 درجة مئوية. وأخيرا، ونقل 4 مل من أسفل الأنبوب الذي يحتوي على HDLجزء من أنبوب البولي الجديد.

    6. عزل HDL

    1. مزيج 2 مل من محلول C، 100 نوكلياز ميكرولتر خالية من الدهون الأحمر 7B و 15 ميكرولتر من 98٪ β-المركابتويثانول إلى الأنبوب الذي يحتوي على نسبة HDL، على التوالي.
    2. الطرد المركزي لمدة 3 ساعات (تسارع 9، تباطؤ 7). بعد ذلك إزالة 2 مل من الكسر HDL يمثلون الطبقة العليا وإما الحفاظ على 4 درجات مئوية أو مخزن في -80 درجة مئوية.

    7. تحلية وتركيز البروتين الدهني الكسور

    1. لتجنب التداخل مع احق الكهربائي للهلام الاغاروز وPCR، وإزالة الملح الزائد وأضاف خلال تنبيذ فائق الكثافة التدرج باستخدام أجهزة الطرد المركزي فلتر مع قطع الوزن الجزيئي المناسب (أنبوب 3K لVLDL وأنبوب 10K ل LDL / HDL) كما وصفها تعليمات الشركة الصانعة.
      1. لفترة وجيزة، بعد إضافة 2.5 مل PBS الباردة (137 ملي مول كلوريد الصوديوم، 2.7 ملي بوكل، 8 ملي Na2HPO4، 2 مم KH2PO4، ودرجة الحموضة 7.4) centrifuجنرال الكتريك VLDL جزء كامل جمعت خلال التدرج الكثافة تنبيذ فائق في 4 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة باستخدام الدوار الدلو المتأرجح.
      2. تحلية جزء LDL مرتين مع 10 مل الجليد الباردة برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة لكل منهما. بعد ذلك، استخدم 13 مل الجليد الباردة PBS مرتين لتحلية جزء HDL. حجم برنامج تلفزيوني العالي ضروري لتحسين التنقل مع الكهربائي للهلام الاغاروز. بعد الطرد المركزي، وإزالة البروتين الدهني يحتوي على الأملاح والحفاظ على 4 درجات مئوية أو تخزينها في -80 درجة مئوية.

    8. الاغاروز جل الكهربائي

    1. Perfrom البروتين الدهني الاغاروز الكهربائي للهلام توظيف عدة مع تعديلات طفيفة من إرشادات الشركة المصنعة على النحو التالي.
      ملاحظة: هذه الخطوة هي فقط لتقييم جودة ونقاء عينات البروتين الدهني المركزة.
      1. لفترة وجيزة، الحصول على 6 ميكرولتر من الكسر البروتين الدهني المحلاة مع تنبيذ فائق الكثافة التدرج وتحميل على جل البروتين الدهني مسبقة الصب. استخدام lipop الإنسانمعايير rotein لVLDL، LDL و HDL كمرجع الحجم. تنفيذ الكهربائي في RT على 100 فولت لمدة 60 دقيقة باستخدام عازلة النائب الإعدادية.
      2. يجف الجل لمدة 10 دقيقة وبعد ذلك وصمة عار لمدة 10 دقيقة في RT مع الدهون الأحمر 7B. يزيل اللون هلام في خليط من الميثانول في الماء 75:25 (ت / ت) والجافة مرة أخرى لمدة 5 دقائق.

    9. استخراج الحمض النووي الريبي وتنقية

    1. Perfrom عزل ميرنا بواسطة HDL البشري النقي باستخدام عدة المصل / البلازما ميرنا العزل والتنقية.
      1. لفترة وجيزة، إضافة 1 مل من الحمض النووي الريبي تحلل الكاشف 200 ميكرولتر من HDL النقى الاختلاط مع vortexer ثم حضنت لمدة 5 دقائق على RT لضمان التفكك الكامل للمجمعات البروتين النووي وتثبيط RNases.
      2. ثم ارتفاع 3.5 ميكرولتر من الاصطناعية انواع معينة ايليجانس الرنا الميكروي (سل-مير-39؛ 1.6 × 10 8 نسخ / ميكرولتر) إلى الخليط. ثم تنفيذ استخراج الحمض النووي الريبي وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
    2. أداء purificatiعلى من استخراج ميرنا مع الأعمدة تدور أزل حسب تعليمات الشركة الصانعة. قياس تركيز ميرنا من HDL النقي مع spectrophorometer.
      ملاحظة: شطف من ميرنا من الأعمدة تدور توظيف 16 ميكرولتر من ريبونوكلياز خالية من المياه.

    10. النسخ العكسي (RT-PCR)

    1. عزل 100 نانوغرام من ميرنا من HDL ارتفعت مع ميرنا الاصطناعية (سل-مير-39) وكتب العكسي في حجم رد الفعل 20 ميكرولتر توظيف مجموعة النسخ العكسي وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
    2. أداء الضوابط المناسبة دون قالب ميرنا (NTC) ودون العكسي مزيج أنزيم الناسخ (NRT).

    11. في الوقت الحقيقي PCR (QRT-PCR)

    1. Perfrom في الوقت الحقيقي PCR في الحجم الكلي لل20 ميكرولتر مع 2 ميكرولتر من التخفيف 1: 2 من كدنا]، 10 ميكرولتر مزيج PCR، 2 ميكرولتر التمهيدي العالمي، 2 ميكرولتر من التمهيدي ميرنا و 4 ميكرولتر المياه خالية من ريبونوكلياز.
    2. تشغيل reactiعلى في لوحات 96-جيدا في درجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، تليها 45 دورات من 94 درجة مئوية لمدة 15 ثانية و 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية ومرحلة التمديد على 70 درجة مئوية لمدة 30 s.ec Perfrom جميع ردود الفعل في يثلث .
    3. بعد ذلك، Calcuate الكميات النسبية من ميرنا باستخدام 2 طريقة -ΔΔ ط م بعد تطبيع إلى التدبير المنزلي الجينات الاصطناعية وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عزل البروتين الدهني العالي الكثافة بعد إزالة Exosomes
للحصول ميرنا من HDL عالي النقاء فمن الضروري إزالة exosomes التي تمثل مصدرا للتلوث ميرنا 7. وقد تم ذلك قبل تنبيذ فائق الكثافة التدرج مع مجموعة المتاحة تجاريا. لأغراض عملية تم تعديل معيار بروتوكول تنبيذ فائق الكثافة التدرج ثلاث خطوات التي وضعتها شركة تجارية (الشكل 1). يتطلب هذا البروتوكول الطرد المركزي مع الدوار زاوية ثابتة بسرعة 1...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتحديد المؤشرات الحيوية جديدة من الدم تساعد في التشخيص السريري والتشخيص للأمراض المختلفة. لقد عرف الرنا الميكروية لامتلاك كل الصفات من المؤشرات الحيوية وثبت في دراسات مختلفة 14-17. في هذه الدراسة أننا أظهرنا طريقة سهلة سريعة وبسيطة لعزل ميرنا من HDL البلازما. كثافة التقليدية التدرج طريقة فائقة الطرد المركزي من العزلة من VLDL، LDL و HDL يعتمد على عينات دقيقة من البلازما، وإعداد دقيق للحل العازلة، وقياس الكثافة ونقل كمية من كسور البروتين الدهني أسفل 8. هناك طرق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل ، كليا أو جزئيا ، من قبل NIH Grants R01 AA 020758-04 و U01DK 061731-13 و T32 DK 007150-38 إلى AJS و T32 DK 007150-38 إلى AA. هذا عمل أصلي وليس قيد النظر في مكان آخر للنشر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
البلاستيك Vacutainer لافندر K2EDTA الأنابيب بيكتون وديكنسون وشركاه366643
الطرد المركزيThermo Scientific و Sorvall Legend X1R & nbsp ؛75004261
Densito 30PX مقياس الكثافةMettler ToledoMT51324450
ExoQuick solution Invitrogen4484451
البولي كربونات سميكة الجدران أنبوب الطرد المركزيالفائق Thermo ScientificO3237
Sorvall WX100 أجهزة الطرد المركزي الفائقة Thermo Scientific46902
Fat Red 7B سيجما ألدريتش201618
β-mercaptoethanol الطرد المركزي Sigma-Aldrich
Amicon Ultra-15 10KMilliporeUFC901008
Amicon أجهزة تصفية الطرد المركزي الفائق 3KMilliporeUFC800308
QuickGel Lipo kit  مختبرات هيلينا 3344،3544T
معايير البروتين الدهني البشري ل VLDL و LDL و HDLLipoTrol ؛ مختبرات هيلينا5069
Rep Prep buffer  مختبرات هيلينا 3100
RNeasy MinElute أعمدة الدوران محلل Qiagen
NanoDrop 1000Thermo Scientific
miScript II RT Kit  Qiagen218161
CFX96 نظام الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقيBioRad
miRNeasy Serum / Plasma KitQIAGEN217184
miScript Primer AssaysQIAGEN141078139
miScript SYBR Green PCR Kit  QIAGEN218073
miRNeasy مصل / بلازما سبايك في التحكمQIAGEN219610
NaOHSIGMA-ALDRICH
0.20 &# 181 ؛ مرشح حقنة معقمةM SIGMA-ALDRICHZ227536
أجهزة تصفية 480878

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bartel, D. P. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell. 116 (2), 281-297 (2004).
  2. Arroyo, J. D., et al. Argonaute2 complexes carry a population of circulating microRNAs independent of vesicles in human plasma. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (12), 5003-5008 (2011).
  3. Vickers, K. C., et al. MicroRNAs are transported in plasma and delivered to recipient cells by high-density lipoproteins. Nat Cell Biol. 13 (4), 423-433 (2011).
  4. Wagner, J., et al. Characterization of levels and cellular transfer of circulating lipoprotein-bound microRNAs. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33, 1392-1400 (2013).
  5. Wang, L., et al. MicroRNAs 185, 96, and 223 repress selective high-density lipoprotein cholesterol uptake through posttranscriptional inhibition. Mol Cell Biol. 33 (10), 1956-1964 (2013).
  6. Rayner, K. J., Moore, K. J. MicroRNA control of high-density lipoprotein metabolism and function. Circ Res. 114 (1), 183-192 (2014).
  7. Raposo, G. Exosomes: endosomal-derived vesicles shipping extracellular messages. Curr Opin Cell Biol. 16 (4), 415-421 (2004).
  8. Redgrave, T. G., Roberts, D. C., West, C. E. Separation of plasma lipoproteins by density-gradient ultracentrifugation. Anal Biochem. 65, 42-49 (1975).
  9. Foreman, J. R., et al. Fractionation of human serum lipoproteins by single-spin gradient ultracentrifugation: quantification of apolipoproteins B and A-1 and lipid components. J Lipid Res. 18, 759-767 (1977).
  10. Dong, J., et al. Serum LDL- and HDL-cholesterol determined by ultracentrifugation and HPLC. J Lipid Res. 52, 383-388 (2011).
  11. Tong, H., Knapp, H. R., VanRollings, A. low temperature flotation method to rapidly isolate lipoproteins from plasma. J Lipid Res. 39, 1696-1704 (1998).
  12. Fless, G. M., ZumMallen, M. E., Scanu, A. M. Physicochemical properties of apolipoprotein (a) and lipoprotein (a-) derived from the dissociation of human plasma lipoprotein (a). J Biol Chem. 261, 8712-8718 (1986).
  13. Brownie, J., et al. The elimination of primer-dimer accumulation in PCR. Nucleic Acids Res. 25, 3235-3241 (1997).
  14. Alton, E., Inyoul, L., Leroy, H., David, G., Kai, W. Extracellular microRNA: a new source of biomarkers. Mutat Res. 717 (1-2), 85-90 (2011).
  15. Stefanie, S. J. Cancer biomarker profiling with microRNAs. Nature Biotechnology. 26, 400-401 (2008).
  16. Prasun, J. M. MicroRNAs as promising biomarkers in cancer diagnostics. Biomarker Research. 2 (19), (2014).
  17. Creemers, E. E., Tijsen, A. J., Pinto, Y. M. Circulating microRNAs: novel biomarkers and extracellular communicators in cardiovascular disease? Circ Res. 110, 483-495 (2012).
  18. Jonathan, S., Martin, S., Eric, L. miRNA profiling from blood -challenges and recommendations. , www.qiagen.com (2015).
  19. Francesco, M., Paola, D. C., Anna, T., Jesper, T., Sergio, A., Riccardo, L. R. Normalization of circulating microRNA expression data obtained by quantitative real-time RT-PCR. Brief Bioinform. 3, 1-9 (2015).
  20. Chen, Y., et al. Circulating microRNAs, novel biomarkers of acute myocardial infarction: a systemic review. World J Emerg Med. 3, 257-260 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

HDL miRNA Real time PCR HDL Fraction

مقالات ذات صلة