مقالة منهجية

التصحيح المشبك تسجيل من خلايا النجمي عديم الاستطالات في جبل شقة إعداد Deafferentated شبكية العين الفأر

DOI:

10.3791/54608

⸱

أكتوبر 13, 2016

 ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology, Baylor College of Medicine, 2Department of Neuroscience, Baylor College of Medicine, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, Baylor College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يوضح هذا البروتوكول كيفية تنفيذ خلية كاملة تسجيل المشبك التصحيح على الخلايا العصبية للشبكية من إعداد شقة جبل.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

شبكية العين الثدييات هي نسيج الطبقات تتألف من أنواع الخلايا العصبية متعددة. لفهم كيفية الإشارات البصرية يتم معالجتها داخل الشبكة متشابك معقد لها، وتستخدم التسجيلات الكهربية في كثير من الأحيان إلى دراسة الروابط بين الخلايا العصبية الفردية. لقد الأمثل لإعداد جبل مسطح لتسجيل المشبك التصحيح من الخلايا العصبية ملحوظ وراثيا في كل العمالي (طبقة الخلايا العقدية) والقائمة العراقية الوطنية (طبقة النووية الداخلية) من شبكية العين الماوس. تسجيل الخلايا العصبية INL في يتصاعد مسطحة ويحظي على شرائح ليتم الحفاظ على الاتصالات الرأسية والجانبية في تكوين السابق، والسماح الدوائر الشبكية مع مكونات جانبية كبيرة لدراستها. وقد استخدمنا هذا الإجراء لمقارنة الاستجابات من الخلايا العصبية المرآة شراكة في شبكية العين مثل خلايا عديم الاستطالات النجمي كوليني (الحويصلات).

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كجزء يسهل الوصول إليه من الجهاز العصبي المركزي ، كانت شبكية العين لعقود من الزمن نموذجا مفيدا في دراسات علم الأعصاب. سمحت العلامات الجينية للخلايا العصبية بالتوصيف التفصيلي للوصلات المشبكية في شبكية العين. مع وجود العديد من المنهجيات المتاحة لفحص وظيفة وتشكل الخلايا العصبية في الشبكية ، كانت تقنية تسجيل مشبك التصحيح مفيدة في فهمنا الحالي للإشارات المنقولة رأسيا في شبكية العين. تنشأ هذه الإشارات من امتصاص الفوتون في المستقبلات الضوئية ويتم إرسالها إلى المراكز البصرية للدماغ من خلال ارتفاع خلايا العقدة الشبكية (RGCs). على الرغم من وجود مجموعة كبيرة من المعرفة المتراكمة حتى الآن ، إلا أن التنوع العصبي في شبكية الثدييات الوعائية لا يزال دون حل ويعيق التقدير الكامل لدوائر الشبكية التي تخدم الرؤية الطبيعية. ويرجع ذلك جزئيا إلى أن معظم التسجيلات تم إجراؤها على شرائح الشبكية لتداول سلامة الدائرة الجانبية للوصول إلى المزيد من الخلايا العصبية الشبكية القريبة1-3. للحصول على صورة شاملة حول كيفية حساب شبكية العين للإشارات المرئية ، فمن المستحسن بالتالي تسجيل الخلايا العصبية في حوامل مسطحة حيث يمكن الحفاظ على الوصلات الجانبية ، الكبيرة والصغيرة ، بشكل أفضل.

عندما ينقطع الانتقال المشبكي من المستقبلات الضوئية إلى الخلايا ثنائية القطب بسبب خلل في مسار إشارات مستقبلات الغلوتامات الأيضية 6 (mGluR6) في إزالة الاستقطاب من الخلايا ثنائية القطب4-6 أو ببساطة نتيجة لفقدان المستقبلات الضوئية في شبكية العينالمتدهورة 7-10 ، تظهر العديد من RGCs أنشطة تذبذبية. تنشأ هذه التذبذبات من مصادر متعددة ، ولكن تلك التي تنطوي على اقتران تقاطع الفجوة بين خلايا AII amacrine (AII-ACs) والخلايا المخروطية ثنائية القطب مزيلة الاستقطاب (DCBCs) قد حظيت بأكبر قدر من الاهتمام ، وبالتالي فمن الأفضلفهمها 1،7،11. لقد وجدنا مصدرا آخر ، والذي لا يزال تحت الحصار الدوائي لشبكة AII-AC / DCBC المذكورة أعلاه ويدفع تذبذب SACs من النوع OFF-type في الفئران RhoΔCTA و Nob مع شبكية العينمنزوعة التآكل 7،8،12. هنا نقوم بتفصيل بروتوكولنا لإعداد حوامل الشبكية المسطحة لتسجيل الخلايا العصبية INL. يستخدم هذا النهج خطوط الفئران التجارية (رقم مخزون Jax 006410 و 007905) لتمييز الخلايا العصبية الشبكية الكولينية عن طريق تعبير البروتين الفلوري (tdTomato) الذي يمكن التعرف عليه تحت مجهر فلوري مجهز بصريات معززة للتباين. تم الإبلاغ عن بعض النتائج التجريبية المكتسبة من خلال هذا النهجسابقا 4،5،7،13.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت الإجراءات التي تجرى على الحيوانات وفقا للقواعد والأنظمة المعمول بها في المعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية لحيوانات التجارب، كما وافقت عليها رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام لجنة من كلية بايلور للطب - الموافقة الأخلاقية.

1. الخارجية وحلول داخلي

  1. استخدام الحل الثدييات قارع الأجراس خلال تشريح شبكية العين وهو الحل الخارجي في تسجيل الكهربية لاحق. إعداد الحل قارع الأجراس الثدييات من 10X حل سهم (بدون الكالسيوم) في يوم تسجيل وإضافة CaCl 2 قطرة من الحكمة بعد 15 دقيقة من carbogenation (95٪ O 2 و 5٪ CO 2). يحتوي النهائي 1X الحل (مم): 120 كلوريد الصوديوم، 5 بوكل، 25 NaHCO 3، 0.8 نا 2 هبو 4، 0.1 ناه 2 ص 4، 2 CaCl 2، 1 MgSO 4 و 10 مد الجلوكوز.
  2. استخدام اثنين من الحلول الداخلية لتوصيف التذبذبات SAC. اختبارفائدة من الحلول التي يجري اعدادها في خلية كاملة التسجيلات المشبك التصحيح طويلة على RGCs الماوس الكبار وتخزين دفعات التحقق في 500 مكل في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
    1. لتسجيل غشاء التذبذب المحتملين، واستخدام الحل الداخلي القائم على البوتاسيوم الذي يحتوي على (مم): 125 K-غلوكونات، 8 كلوريد الصوديوم، 4 ATP-المغنيسيوم، و 0.5 ليثيوم GTP، 5 EGTA، 10 HEPES و 0.2٪ biocytin (ث / الخامس). ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع KOH.
    2. لتسجيل مثير والتيارات بعد المشبكي المثبط، استخدام حل يستند إلى السيزيوم الداخلي الذي يحتوي على (مم): 100 CS-methanesulfonate، 8 كلوريد الصوديوم، 4 ATP-المغنيسيوم، و 0.5 ليثيوم GTP، 5 EGTA، 10 HEPES و 0.2٪ biocytin ( ث / ت). ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع CsOH.

2. إعداد ليوم تسجيل

  1. لإعداد غشاء النيتروسليلوز مع الثقوب مفتوحة، يدويا لكمة الغشاء مع الناخس مخصصة مصنوعة من أضعفت 16 G إبرة حقنة وتتسطح الغشاء بين اثنين من لوحات زجاجية نظيفة. لwhole-جبل شبكية العين، وجعل ثقب المركزي 0.2 مم في القطر، وتحيط بها 4 الثقوب الكبيرة التي هي 1-1،2 ملم في القطر.
  2. لجعل خيوط الردم مخصصة لتحميل الحل الداخلي إلى الأقطاب، تذوب 10 ميكرولتر ماصة في الوسط وإطالة بلطف الجزء ذاب حتى يبرد ويصلب. فقط قبل استخدامها، واستخدام شفرة حلاقة نظيفة لخفض خيوط حتى كان أطول قليلا من ماصات التصحيح.
  3. سحب ماصات التصحيح في مجتذب برمجة من أنبوب الزجاج البورسليكات مع خيوط الداخلي. تصنيع بال micropipettes في يوم التجربة والاستفادة منها على الفور.
    ملاحظة: للحصول على تسجيل الحويصلات، ونحن نستخدم الإعداد مجتذب التالي: الحرارة: 484. سحب: 0؛ السرعة: 25. تأخير الساعة: 1؛ الضغط: 400 وقيمة المنحدر من 462. والتطوير التنظيمي ومعرف من أنابيب البورسليكات و1.65 ملم و 1.0 ملم على التوالي. المقاومة من الماصات هي 10-14 MΩ.
  4. واحد ساعة قبل الحصاد الأنسجة، وذوبان الجليد أنبوب من حل داخلي من قبل SHAKIنانوغرام على دوامة ل> 30 دقيقة.

3. الشبكية تشريح

  1. تخدير الحيوان بنسبة 4٪ الأيزوفلورين في الأكسجين حتى يفقد الحيوان الاستجابة لقرصة أخمص قدميه. التضحية الحيوانية خلع عنق الرحم.
  2. قطع كل من مقل العيون قبالة الأعصاب البصرية في 1-2 ملم بعيدا عن رؤساء العصب البصري مع قزحية مستقيمة وأشار مقص.
  3. لفة مقل العيون على منشفة ورقية نظيفة لإزالة الدم ومن ثم تزج بهم في carbogenated حل قارع الأجراس في الثدييات. لكمة ثقب في حوف مع 23 G إبرة وشطر مقل العيون عن طريق قطع على طول حوف مع مقص الصغرى. إزالة القرنية والعدسة باستخدام ملقط غرامة.
    1. لشبكية العين كله جبل، قشر بلطف شبكية العين بأكملها قبالة الظهارة الصباغية مع ملقط غرامة وإجراء تخفيضات أربعة 1.5-2 مم المتعامدة من على حافة تجاه رأس العصب البصري.
  4. تزج غشاء النيتروسليلوز لكمات في طبق وسحب بلطف شبكية العين أكثر من ذلك معالجانب العمالي تصل. ضع رأس العصب البصري في حفرة مركز عند إعداد شبكية العين كلها جبل. نقل الغشاء مع شبكية العين في صحن نظيف آخر. تتسطح بلطف شبكية العين باستخدام فرشاة الطلاء غرامة لتبدو وكأنها الصليب المالطي ووضع كل أربع حواف خلال الثقوب.
    1. إذا كان جزء من شبكية العين ومن المقرر أن ينظر في وقت واحد، وقطع كل فنجان العين المحضرة من الخطوة 3.3 إلى 3-4 قطع بشفرة حلاقة مع يبقى الظهارة الصباغية المرفقة. حماية القطع غير المستخدمة من ضوء في حل خارجي carbogenated واستخدامها خلال 12 ساعة.
  5. وصمة عار على غشاء النيتروسليلوز مع قطعة من ورق الترشيح جافة وإزالة الغشاء المحدد الزجاجي والداخلي مع ملقط وفرشاة الدهان.
  6. تأكد من أن جميع حواف الشبكية هي التي تعلق تماما لغشاء قبل نقل التجمع في غرفة تسجيل مع مختوم زلة غطاء زجاجي في القاع. تأمين الغشاء مع الشحوم فراغ إلى انزلاق الغطاء وrehydratالبريد شبكية العين مع الحل الخارجي. يجب الحرص على عدم اعتراض أي فقاعات الهواء تحت التجميع.
  7. تعيين غرفة على مرحلة المجهر تستقيم. يروي الغرفة مع الدافئة (34-35 درجة مئوية) حل خارجي carbogenated بمعدل ~ 3 مل لكل دقيقة.
  8. فحص شبكية العين تحت عدسة الهدف 10X أولا، ومن ثم استخدام عدسة 60X الغمر بالمياه لرؤية العمالي وINL الخلايا العصبية تحت المقابل تدخل الفرق (DIC) و / أو epifluorescence. لتصور الحويصلات، معربا عن tdTomato، استخدم الأبيض مصدر ضوء LED في تركيبة مع مرشح الإثارة من 554 نانومتر وعامل تصفية الانبعاثات من 581 نانومتر.

4. خلية كاملة المشبك التصحيح التسجيل من مسطحة جبل الشبكية

  1. تصفية حل داخلي من خلال مرشح حقنة في خيوط الردم المخصصة.
  2. إدراج خيوط في micropipette سحبت حديثا والاستغناء عن حل داخلي بالقرب من الحافة حتى يغطي حل السلك الكهربائي الفضة ل>5 مم. ربط micropipette على حامل القطب مع القطب الشفط، والتي من خلالها الضغط داخل القطب يمكن تعديلها عن طريق دفع أو سحب الغواص من 10 مل حقنة بلاستيكية متصلة أنبوب.
  3. البحث ماصة تحت هدف واسقاطها إلى ~ 100 ميكرون فوق الشبكية. في ظل وضع أتباع الحالي (I = 0)، واستخدام تعويض العاصمة إلى الصفر يقف العاصمة إشارة الجهد. قياس المقاومة ماصة تحت المشبك الحالي وضع (أنا المشبك) عن طريق حقن السعة ثابتة التيارات موجة مربعة من خلال ماصة أثناء وجوده في الحمام وتحييد الفرق من خلال تحويل مقبض الباب Raccess. استخدام القراءة على مقبض Raccess لحساب المقاومة ماصة بموجب القانون أوم.
  4. جلب ببطء القطب إلى ~ 10 ميكرون فوق الشبكية. تطبيق الضغط الايجابي إلى القطب. مشاهدة التغيير انعكاس بالقرب من غيض ماصة وهي تقترب من شبكية العين. بسرعة ولكن قوة بلطف ماصة في GCL وتقليل لض إيجابيإعادة فورا.
  5. نقل ماصة نحو الخلايا العصبية المسمى. تجنب الاتصال الخلايا العصبية الأخرى، والأوعية الدموية وendfeet الخلايا مولر. الضغط أكثر إيجابية إذا لزم الأمر لمنع القطب انسداد.
  6. ضع طرف ماصة بالقرب من خط الوسط من الخلايا العصبية المسماة حتى الدمل مرئيا. الافراج عن الضغط الايجابي والسماح للغشاء البلازما لترتد مرة أخرى على طرف ماصة.
  7. تطبيق 20-120 التيارات السلبية السلطة الفلسطينية إلى ماصة للمساعدة في تشكيل ختم جيجا أوم. تطبيق طيف الامتصاص إذا لزم الأمر لسحب غشاء البلازما في ماصة. انتظر 5 دقائق بعد تشكيل ختم للتمزق غشاء الخلية. وهذا يسمح للحل داخلي امتد إلى أن يتم مسح من قبل superfusion. تمزق الغشاء من قبل طيف الامتصاص.
  8. بعد تمزق الغشاء وأثناء وجوده في وضع المشبك الحالي، والتحول في توازن الجسر وتعديله باستخدام مقبض Raccess.
    ملاحظة: للحصول على زنزانة صغيرة مثل SAC، فقط هناك حاجة إلى تعديل طفيف، إن وجدت. Alternatively، سجل مثير والتيارات بعد المشبكي المثبط في وضع المشبك الجهد (V المشبك) من خلال عقد الخلية في إمكانات عكس كلوريد (حوالي -75 بالسيارات) والغلوتامات (حوالي 0 بالسيارات)، على التوالي. فحص وضبط الموقف ماصة إذا لزم الأمر لاستيعاب شبكية العين العرضية و / أو الانجراف micromanipulator.
  9. لتسجيل غشاء المحتملة أو تغيير الحالي قبل وأثناء وبعد العلاج الدوائي، وإعداد حاصرات متشابك (على سبيل المثال، CNQX، AP5، بيكروتوكسين، توبوكورارين، الخ) وجهري قناة (على سبيل المثال، flupirtine، الدوبامين، حمض meclofenamic، وما إلى ذلك) جديدة على يوم التجربة من الأسهم المجمدة. تمييع المخدرات مع حل carbogenated رينغر. تطبيقها بطريقة دفعة من خلال نضح.
  10. بعد تسجيل، وإزالة بلطف ماصة من سوما. نقل التجمع من غرفة إلى طبق نظيف. فصل وإعادة نعلق شبكية العين على آخر غشاء النيتروسليلوز بالارض دون الحول لكماتوفاق لضمان ثبات شبكية العين أثناء التثبيت.
  11. إصلاح شبكية العين عن طريق غمر في 4٪ امتصاص العرق لمدة 30 دقيقة في RT. إزالة الشبكية من غشاء النيتروسليلوز وشطفه على نطاق واسع مع برنامج تلفزيوني 1X. الكشف عن التشكل من الخلايا التي سجلتها O / N تلطيخ مع streptavidin صبغ مترافق المخفف في برنامج تلفزيوني 1X مع 0.4٪ تريتون X-100 في 4 درجات مئوية (14). تركيب شبكية العين في وسط antifade ومراقبة الخلايا المسجلة باستخدام المجهر متحد البؤر.
    ملاحظة: إجراءات تنطوي على امتصاص العرق، والتي هي متقلبة والسامة، ينبغي أن تجري في مشروع غرفة للسلامة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأظهرت تسجيلات تمثيلية من داخل وخارج نوع الحويصلات من شبكية العين الماوس deafferentated في الشكل 1. خلايا الكوليني في كل العمالي وINL يمكن بشكل موثوق به من tdTomato مضان وتستهدف خلية كاملة تسجيل المشبك التصحيح تحت مدينة دبي للإنترنت (الشكل 1A) للكشف عن التذبذب من طاقاتهم غشاء (أعلى آثار) والتيارات متشابك أن قيادتها (آثار أسفل، الشكل 1B). وكشف التيارات متشابك المثبطة ومثير من خلال عقد الخلايا في 0 ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد سجلت العديد من المعامل من الخلايا العصبية العمالي في الشقة جبل إعداد 15-18، ولكن إجراءاتنا السماح تسجيل من الخلايا العصبية INL. ونحن نؤكد هنا العديد من الخطوات التي تعتبر بالغة الأهمية للتسجيلات روتينية ناجحة.

نضارة والتسطيح للشبكية مهمة لاختراق ذلك مع ماصة تسجيل. في هذا الصدد، والالتزام الراسخ من الشبكية إلى غشاء النيتروسليلوز اللكم هو الهدف الأسمى ويتحقق عن طريق امتصاص عابر حل تليها الإماهة في ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر Joung Jang و Xin Guan على المساعدة الفنية. نشكر الدكتور روري ماكويستون من جامعة فرجينيا كومنولث على إنشاء أول جهاز تثبيت ونصائح حول الإجراءات التجريبية. نشكر الدكتور صموئيل وو على اقتراحاته بشأن تسجيل مشبك الجهد. يتم دعم العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة EY013811 و EY022228 ومنحة أساسية للرؤية EY002520. C-KC هو كرسي مؤسسة أبحاث الشبكية في كلية بايلور للطب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مجهر الفلورسنت ذو المرحلة الثابتة مع DICأوليمبوسBX51-WI
معالجات دقيقةSutterMP-225
مكبر صوت مشبك التصحيحنظام AM2400
AD محولالأداة الوطنيةNI-USB-6221
وحدة تحكم السخانWarner InstrumentTC-324B
مضمنة سخانWarner InstrumentSC-20
مضخة تمعجيةRaininDynamax
مجتذب ماصةSutter InstrumentP-1000
أنبوب زجاجي مع خيوطKing Precision Glass
A.M.P.I.ماستر 8
BiocytinSigmaB4261
كلوريد الصوديومسيجماS6191
KClسيجماP5405
NaHCO3< / sub>FisherBP328-1
Na2HPO4S0876
Na2HPO4< / sub>سيجماS5011
CaCl 2< / sub>سيجماC5670
MgSO4< / sub>سيجماM1880
D-glucoseSigmaG6152
K-gluconateSigmaG4500
ATP-MgSigmaA9187
Li-GTPSigmaG5884
EGTASigmaE0396
HEPESSigmaH4034
KOHSigmaP5958
Cs-methanesulfonateSigmaC1426
CsOHSigma232041
مرشح حقنةNalgene171
1 مل حقنةRainin17013002
10 & ل طرف ماصةجينيسي Scientific24-130RL
Streptavidin-488ThermoFisherS-11223
10x PBSLonza17-517Q
محفز مخصص

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Choi, H., et al. Intrinsic bursting of AII amacrine cells underlies oscillations in the rd1 mouse retina. J Neurophysiol. 112 (6), 1491-1504 (2014).
  2. Gregg, R. G., et al. Nyctalopin expression in retinal bipolar cells restores visual function in a mouse model of complete X-linked congenital stationary night blindness. J Neurophysiol. 98 (5), 3023-3033 (2007).
  3. Hellmer, C. B., Ichinose, T. Recording light-evoked postsynaptic responses in neurons in dark-adapted, mouse retinal slice preparations using patch clamp techniques. J Vis Exp. (96), (2015).
  4. Tu, H. Y., Bang, A., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. Increased dendritic branching in direction selective retinal ganglion cells in nob1 mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (13), (2014).
  5. Tu, H. Y., Chen, Y. J., Chiao, C. C., McQuiston, A. R., Chen, C. K. J. Rhythmic membrane potential fluctuations of cholinergic amacrine cells in mice lacking ERG b-waves. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
  6. Demas, J., et al. Failure to maintain eye-specific segregation in nob, a mutant with abnormally patterned retinal activity. Neuron. 50 (2), 247-259 (2006).
  7. Tu, H. Y., Chen, Y. J., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. A Novel Retinal Oscillation Mechanism in an Autosomal Dominant Photoreceptor Degeneration Mouse Model. Front Cell Neurosci. 9, 513(2015).
  8. Borowska, J., Trenholm, S., Awatramani, G. B. An intrinsic neural oscillator in the degenerating mouse retina. J Neurosci. 31 (13), 5000-5012 (2011).
  9. Margolis, D. J., Detwiler, P. B. Cellular origin of spontaneous ganglion cell spike activity in animal models of retinitis pigmentosa. J Ophthalmol. , (2011).
  10. Stasheff, S. F. Emergence of sustained spontaneous hyperactivity and temporary preservation of OFF responses in ganglion cells of the retinal degeneration (rd1) mouse. J Neurophysiol. 99 (3), 1408-1421 (2008).
  11. Trenholm, S., Awatramani, G. B. Origins of spontaneous activity in the degenerating retina. Front Cell Neurosci. 9, 277(2015).
  12. Trenholm, S., et al. Intrinsic oscillatory activity arising within the electrically coupled AII amacrine-ON cone bipolar cell network is driven by voltage-gated Na+ channels. J Physiol. 590 (Pt 10), 2501-2517 (2012).
  13. Chen, C. K. J., et al. Cell-autonomous changes in displaced cholinergic amacrine cells lacking Gbeta5. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
  14. O'Brien, B. J., Isayama, T., Richardson, R., Berson, D. M. Intrinsic physiological properties of cat retinal ganglion cells. J Physiol. 538 (Pt 3), 787-802 (2002).
  15. Lee, S., et al. An Unconventional Glutamatergic Circuit in the Retina Formed by vGluT3 Amacrine Cells. Neuron. 84 (4), 708-715 (2014).
  16. Hoggarth, A., et al. Specific wiring of distinct amacrine cells in the directionally selective retinal circuit permits independent coding of direction and size. Neuron. 86 (1), 276-291 (2015).
  17. Margolis, D. J., Gartland, A. J., Singer, J. H., Detwiler, P. B. Network oscillations drive correlated spiking of ON and OFF ganglion cells in the rd1 mouse model of retinal degeneration. PLoS One. 9 (1), e86253(2014).
  18. Schmidt, T. M., Kofuji, P. An isolated retinal preparation to record light response from genetically labeled retinal ganglion cells. J Vis Exp. (47), (2011).
  19. Ivanova, E., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. Increased phosphorylation of Cx36 gap junctions in the AII amacrine cells of RD retina. Front Cell Neurosci. 9, 390(2015).
  20. Enoki, R., Koizumi, A. A method of horizontally sliced preparation of the retina. Methods Mol Biol. 935, 201-205 (2013).
  21. Akrouh, A., Kerschensteiner, D. Morphology and function of three VIP-expressing amacrine cell types in the mouse retina. J Neurophysiol. 114 (4), 2431-2438 (2015).
  22. Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina. Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

tdTomato

مقالات ذات صلة