الحيوان والإسكان: الحصول القديمة 8 أسابيع C57BL / 6 الفئران الذكور. في 10 أسابيع من العمر، وإعطاء C57BL / 6 الفئران حرية الوصول إلى المياه واتباع نظام غذائي غني بالدهون (ديو الحمية: 35٪ سعر حراري من الدهون، 25.8٪ caseine، 1.30٪ العين المعدنية، 1.30٪ الفيتامينات، 1.70٪ فوسفات، 0.7 ٪ كربونات الكالسيوم، 2.10٪ البوتاسيوم سيترات، 0.026٪ بيطرطرات الكولين، 8.9٪ سكروز، 0.384٪ سيستين، 6.5٪ السليلوز، 31.7٪ شحم الخنزير، 3.3٪ زيت فول الصويا، و16.29٪ ملتدكستر) لمدة 8 (SG) أو 14 (RYGB) أسابيع قبل العمليات الجراحية لعلاج البدانة. لتعزيز وزيادة الوزن، وإعطاء الفئران مخصص لجراحة RYGB (صورية وRYGB) المياه التي تحتوي على 20٪ سكر الفواكه (ث / ت) بالإضافة إلى نظام غذائي عالي الدهون.
أخلاقيات الإعلان: جميع الخطوات البروتوكول هو موضح أدناه يتبع المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات التجارب على الحيوانات من وادي اللوار بموجب موافقة عدد 01953.01.
1. إعداد قبل الجراحة العامة
- صيام الفئران لمدة 6 ساعات قبل الجراحة. جل ديقدموا له طعاما وآخرون قبل 3 أيام من الجراحة وحصريا يوم واحد قبل الجراحة. حث التخدير في غرفة مع 5٪ الأيزوفلورين (0.4 لتر / دقيقة) وO 2 (dioxygen؛ 0.4 لتر / دقيقة). إجراء اختبار أخمص القدمين قرصة للتأكد من أن التخدير فعال. إدارة المسكنات (0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين)، والمضادات الحيوية (10 ملغ / كغ marbofloxacine)، والمؤيدة للحركية (1 ملغ / كغ ميتوكلوبراميد) عن طريق الحقن تحت الجلد.
- تخصيص منطقة عمل محددة لعملية جراحية (بعيدة عن حركة المرور المختبر والتهوية والمراوح). تنظيف المنطقة الجراحية مع المطهرات المخصصة سطح صلب. وضع وسادة التدفئة على منطقة مساحة العمل للحفاظ على ثبات الحرارة الماوس أثناء الجراحة. تطبيق، underpad ماصة نظيفة على لوحة التدفئة.
- حلق البطن من القص إلى الحوض باستخدام الحلاقة الكهربائية. التفاف البطن الماوس في تعقيم البلاستيك التفاف (الشكلان 1A و 2A) ووضع الماوس في موقف ضعيف على التدفئة صميلادي.
- تطبيق التعليم والتدريب المهني مرهم على العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير. ضع الماوس في مخروط الأنف والحفاظ على التخدير مع 2٪ الأيزوفلورين (0.4 لتر / دقيقة) وO 2 (0.4 لتر / دقيقة).
- قبل البدء في عملية جراحية، ووضع على ثوب معقم الفحص، قبعة الدعك يمكن التخلص منها، وقناع، وقفازات معقمة. فتح حزمة تحتوي على تعقيمها التعقيم مجموعة أداة جراحية، وهو مطلوب لجميع الخطوات العملية الجراحية. قطع نافذة في غلاف بلاستيكي تعقيم وتطهير الجلد مع 2 الحلول بوفيدون اليود المتعاقبة.
2. كم استئصال المعدة: إجراء الجراحة
- البطن متوسط (الشكل 1B)
- تحت المجهر مجهر ومع مشرط، إجراء شق خط الوسط من القص إلى منتصف البطن لفتح تجويف البطن (لا تضر عضلات البطن). حماية البشرة مع ضغط معقم غارقة مع 37 ° C حل المالحة.
- التعرض المعدة (الشكل 1C)
- حشد بلطف المعدة باستخدام مسحات مبلل القطن. تحرير المعدة من الملحقات الجانبية لها وثيقة النسيج الضام باستخدام قطعة قطن مبللة أو المقص الصغير.
- بلطف، تخريج المعدة بالكامل ووضع الكولاجين لوقف نزيف الدم ضغط خلف المعدة. خياطة بوابة المعدة والمريء السفن على طول المعدة أكبر انحناء مع 8.0 الغرز غير قابل للامتصاص لتجنب المستقبل النزيف (1D الشكل وE). ملاحظة: استخدام المرقأة يمكن أن تحدث تلف الأنسجة، للتأكد من استخدامها فقط على الأنسجة التي تهدف إلى أن تكون مقطوعة.
- استئصال المنطقة القلب من المعدة (قاع)
- إجراء بضع المعدة على خط الحاضر التشريحية بين منطقة البواب (جسم) ومنطقة القلب من المعدة (قاع) (الشكل 1F).
- إزالة الطعام المتبقي مع 2 قطعة قطن مبللة تجاه بعضهمجانب من المعدة. باستخدام المقص الصغير، وقطع المعدة على طول الحدود بين قاع وجسم المعدة (الشكل 1G).
- اضغط على الكولاجين لوقف نزيف الدم ضغط لمدة 2 دقيقة في حالة نزيف كبير. إغلاق الفتحة المعدة مع 8.0 الغرز غير قابل للامتصاص من تقاطع المعدي oesophagal إلى نهاية شق (الشكل 1H).
- استئصال المنطقة البواب من المعدة (جسم)
- استكمال استئصال المعدة على طول أكبر انحناء وذلك لإزالة ما يقرب من 80٪ من المعدة (الشكل 1I). توحيد عرض سان جرمان إلى 3 ملم. اضغط على الكولاجين لوقف نزيف الدم ضغط لمدة 2 دقيقة في حالة نزيف كبير.
- إغلاق الفتحة في المنطقة البواب في المعدة مع 8.0 خياطة غير قابل للامتصاص (الشكل 1J). لفة بلطف 2 قطعة قطن مبللة نحو كل جانب من المعدة لضمان خياطة هي مانعة للتسرب.
- أكمل مع 8.0 الغرز غير قابل للامتصاص في حالة وجود تسرب. إزالة الكمادات الكولاجين مرقئ والعودة المعدة إلى تجويف البطن. ترك الكولاجين لوقف نزيف الدم ضغط ضد خياطة.
- إغلاق البطن
- إغلاق الطبقة العضلية لجدار البطن مع 5.0 الغرز غير قابل للامتصاص (الشكل 1K). تقليل التخدير عن طريق الحد من تركيز الأيزوفلورين إلى 1٪. إغلاق الجلد باستخدام 5.0 الغرز غير قابل للامتصاص (الشكل 1L).
3. رو اون Y تجاوز المعدة: إجراء الجراحة
- البطن متوسط
- تحت المجهر مجهر ومع مشرط، إجراء شق خط الوسط من القص إلى منتصف البطن لفتح تجويف البطن (لا تضر عضلات البطن). حماية البشرة مع ضغط معقم غارقة مع 37 ° C محلول ملحي (الشكل 2B).
- أطرافهم Biliopancreatic والأطراف الهضمية
- تخريج الأمعاء (الشكل 2C). قياس 8 سم من البواب وتنفيذ اثنين من الأربطة من الأمعاء مع 5.0 الغرز غير قابل للامتصاص (الشكل 2D).
- قطع الأمعاء بين الحروف المركبة (الشكل 2E). وضع الطرف القريب من طرفي في الربع العلوي الأيمن من البطن. ملاحظة: سيتم استخدام هذا كما أطرافهم الهضمية (الشكل 2F).
- وضع الطرف البعيد من طرفي مواجهة الطرف الهضمية 6 سم تحت الطرف الداني (الشكل 2F).
ملاحظة: سيتم استخدام هذا كما أطرافهم الصفراوي.
- Jejuno-فغر الصائم
- قطع كل من الأطراف القريبة وحلقة الأمعاء باستخدام المقص الصغير وتنفيذ اثنين من الشقوق مقابل المساريق من نفس الطول (الشكل 2G و 2H).
- أداء جنبا إلى جنب مع اثنين من مفاغرة 8.0الغرز غير قابل للامتصاص. إجراء مفاغرة الجانب الظهري الأول (الشكل 2I)، تليها مفاغرة الجانب البطني (الشكل 2J).
- لفة بلطف 2 قطعة قطن مبللة نحو كل جانب من مفاغرة لضمان خياطة هي مانعة للتسرب. أكمل مع 8.0 الغرز غير قابل للامتصاص في حالة وجود تسرب.
- المعدي فغر الصائم
- حشد بلطف المعدة باستخدام قطعة قطن مبللة. تحرير المعدة من الملحقات الجانبية لها وثيقة النسيج الضام باستخدام قطعة قطن مبللة أو المقص الصغير.
- بلطف، تخريج المعدة بشكل كامل، ووضع إعادة امتصاص الكولاجين لوقف نزيف الدم ضغط خلف المعدة. إجراء ضمد من بوابة المعدة باستخدام 5.0 خياطة غير قابل للامتصاص مرت الثرب باستخدام ملقط الصغيرة المنحنية (الشكل 2K و2L).
- قطع كل من الجانب البطني من المعدة، و 1.5 سم من البواب، وأطرافه البعيدةباستخدام المقص الصغير، وخلق اثنين من الشقوق من نفس الطول (الشكل 2M).
- أداء مفاغرة جنبا إلى جنب مع اثنين من 8.0 الغرز غير قابل للامتصاص. نبدأ مع مفاغرة الجانب الظهري (الشكل 2N)، ثم قم بإجراء مفاغرة الجانب البطني (الشكل 2O). لفة بلطف 2 مسحات مبلل القطن نحو كل جانب من مفاغرة لضمان خياطة هي مانعة للتسرب. أكمل مع 8.0 الغرز غير قابل للامتصاص في حالة وجود تسرب.
- إغلاق البطن
- إغلاق الطبقة العضلية لجدار البطن باستخدام 5.0 الغرز غير قابل للامتصاص (الشكل 2P). الحد من التخدير عن طريق الحد من تركيز الأيزوفلورين إلى 1٪. إغلاق الجلد باستخدام 5.0 الغرز غير قابل للامتصاص (الشكل 2Q) .Administer 25 مل / كغ من محلول ملحي دافئ عن طريق الحقن تحت الجلد.
4. عامة بعد العملية الجراحية العناية
- وقف الأيزوفلورينوتواصل مع تدفق O 2 0.8 لتر / دقيقة حتى الفأر هو مستيقظا تماما. لا تترك الماوس غير المراقب حتى يستعيد التحكم في المحركات، التي أشار إليها انطلاق الحيوان على التحرك القفص والقدرة على الوقوف والمشي من دون الوقوع.
- ضع الماوس (الفأرة فقط واحد في القفص) في حاضنة 30 درجة مئوية تحت حالة درجة الحرارة لمدة 5 أيام.
- الحفاظ على الحديد (0.5 ملغ / كغ / يوم؛ والحقن تحت الجلد) وفيتامين (800 ملغ / 180 مل في الماء) supplementations في الفئران RYGB حتى نهاية البروتوكول.
- العودة حرية الوصول إلى هلام الحمية الغذائية (الدهون عالية هلام حمية: 10٪ شحم الخنزير، و 10٪ من السكر السائل والماء 57٪) لمدة 5 أيام بعد الجراحة. إعادة تقديم نظام غذائي الصلبة بعد 3 أيام من الجراحة.
- تحت الجلد حقن البوبرينورفين (0.1 ملغ / كغ، مرتين يوميا، من يوم 0 إلى 3 أيام بعد الجراحة)، ميلوكسيكام (1 ملغ / كغ، من يوم 0 إلى 3 أيام بعد الجراحة)، ميتوكلوبراميد (1 ملغ / كغ، من يوم 0 ل اليوم 5 بعد الجراحة)، وmarbofloxacine (10 ملغ / كغ، من يوم إلى يوم 0 3 بعد عملية الشراء جراحة ص).
تقييم 5. ما بعد الجراحة الاستقلابية معلمات
- قياس كمية الغذاء
- السماح للفئران لاستعادة ل1 أسبوع بعد الجراحة. بيت الفئران واحد في القفص. قياس كمية الغذاء الصلبة وضعها في قفص. الوزن في وقت لاحق ما تبقى من 24 ساعة الغذاء. كرر هذه الخطوة طالما لزم الأمر.
- الجلوكوز عن طريق الفم اختبار تحمل
- صيام الفئران لمدة 6 ساعات قبل بلعة عن طريق الفم. حصاد قطرة دم من طرف الذيل وتطبيقه على قطاع السكر في إدراجها في غلوكمتر لتحديد الوقت 0 الدم قيمة الجلوكوز.
- إدارة لبلعة عن طريق الفم من 20٪ محلول مد الجلوكوز (2 جم / كجم). قياس مستويات السكر في الدم بنسبة 15، 30، 60، و 120 دقيقة بعد تسمين.
- تحليل مستوى الهيموغلوبين
- باستخدام نظام الدم، قياس 20 ميكرولتر من الدم النقي لأخذ عينات من مستوى الهيموجلوبين.
"> 6. القتل الرحيم
- تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق حل زيلازين / الكيتامين (10/80 ملغ / كلغ). تنفيذ خلع عنق الرحم. تحقق من القتل الرحيم الكامل من خلال ضمان أن القلب لا ينبض ويتم فقدان طرفة المنعكس مقلة العين.