ونحن نقدم وسيلة لعزل وثقافة قناة وولف الماوس (WD). نحن أيضا يبرهن على وجود إجراءات مفصلة لجبل بأكمله المناعية من WDS مثقف / المعزولة حديثا مع الأجسام المضادة الموسومة fluorescently. معا، وتمكن هذه التقنيات دراسة التطور WD، اللف، والتمايز.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
هيئة الثقافة والجامع جبل المناعي تلون ماوس وولف القنوات
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التشكل البوق هو شرط أساسي لتنمية معظم أجهزة الثدييات، بما في ذلك الجهاز التناسلي الذكري. البربخ، جزءا لا يتجزأ من الجهاز التناسلي الذكري، هو المسؤول عن تخزين الحيوانات المنوية، والنضج، والنقل. البربخ الكبار هو أنبوب ملفوف جدا أن يتطور من السلائف الجنينية بسيطة ومباشرة والمعروفة باسم قناة وولف (WD). اللف السليم من البربخ هو ضروري لخصوبة الرجال، كما الحيوانات المنوية في الخصية غير قادرين على تخصيب بويضة. ومع ذلك، فإن الآلية المسؤولة عن التنمية بربخي واللف لا تزال غير واضحة، ويرجع ذلك جزئيا إلى عدم وجود طرق الثقافة الجهاز والتصوير كله. في هذه الدراسة، ونحن تصف نظام الثقافة في المختبر، وكله بروتوكول المناعي جبل لتصور أفضل لعملية WD اللف والتنمية، والتي يمكن أيضا أن تطبق على دراسة أجهزة الأنبوبية الأخرى.
المقدمة
الجهاز التناسلي الذكري يتكون أساسا من الخصية، موقع لتطوير الخلايا الجرثومية والتمايز، ونظام الأقنية معقدة ما هو مطلوب للنضوج، والنقل، وتخزين الحيوانات المنوية. البربخ هو الجهاز الأنبوبي الذي يصل الخصية مع الأسهر وتشارك بشكل رئيسي في تطوير ما بعد الخصية ونضوج الخلايا الجرثومية 1. البربخ الماوس الكبار ملفوف غاية تتطور من بسيطة ومباشرة أنبوب السلائف، قناة وولف (WD) 1. بنية معقدة وملفوف من البربخ هو ضروري للحيوانات المنوية لاكتساب القدرة على تخصيب خلايا الإناث الجرثومية 2. كيف هذا الجهاز ضروري لخصوبة الرجال يتطور ويحصل في شكل ليست مفهومة جيدا. وقد ثبت مختلف مسارات الإشارات إلى أن تشارك في تطوير WD مثل إشارات Wnt مسار 3،4 والاندروجين إشارات الطريق 5. وقد أنشأت عملنا مؤخرا شرط بالanced WNT يشير لWD اللف خلال تطوير ما قبل الولادة (4). ومع ذلك، هناك حاجة مزيد من الدراسات لفهم الآليات التي تشارك في اللف بعد الولادة بربخي، تمايز الخلايا، والاتصالات خلية إلى خلية داخل الظهارة بربخي ومع خلايا الخلالية.
وقد ثبت نماذج الماوس المعدلة وراثيا ليكون أداة قوية لتحديد / التحقق من الآليات الجزيئية الكامنة وراء تطور والمرض من أجهزة الجسم المختلفة 6. وعلى الرغم من الاستخدام الواسع النطاق، وهناك قيود كبيرة من نماذج الماوس المعدلة وراثيا، بما في ذلك النمط الظاهري غير متوقع من المسوخ الماوس المستهدفة فيما يتعلق وظيفة الجين يفترض، وليس النمط الظاهري في المسوخ فارغة في بعض الموديلات، تأثير العوامل الوراثية والبيئية، والعمل المكثف و عملية تطوير نماذج الماوس تستغرق وقتا طويلا. ولذلك، فإن تفسير أهمية النتائج فقط من مودى وراثيانماذج الماوس fied ليست دائما واضحة 6. هذه القيود يمكن التغلب عليها باستخدام في نظام الثقافة الجهاز المختبر الذي يعطي لنا المرونة اللازمة لمعالجة مسارات إشارات متعددة في الوقت الحقيقي في ظروف الثقافة التي تسيطر عليها. نظام الثقافة الجهاز هو دور أساسي في فهم علم وظائف الأعضاء وعلم الأمراض من أجهزة كاملة 7. وعلاوة على ذلك، والتصوير الأجهزة كلها ملطخة الأجسام المضادة fluorophore المسمى تمكننا من تصور علامات الاهتمام في سياق ثلاثي الأبعاد، كما هو موجود في الجسم الحي، وبالتالي توفير فهم أفضل لشكل الجهاز، وهيكل، وظيفة 8.
هنا، التي وصفناها الطرق لعزل الماوس التلال الغدد التناسلية الجنينية، في المختبر الثقافة وجبل بأكمله المناعي التصوير WDS، التي يمكن تطبيقها للرد على مجموعة متنوعة من الأسئلة المتعلقة التشكل من أجهزة أنبوبي مثل WDS. في هذا البروتوكول، ونحنمعزولة الماوس الجنينية التلال البولي التناسلي من 15.5 يوم تال للجماع (DPC) السدود الحوامل ومثقف منهم لمدة 3 د تليها المناعية للعلامة الظهارية خلية (cytokeratin 8، CK8)، علامة تكاثر الخلايا (الفوسفات-هيستون 3، PH3) ونشطة βcatenin.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت رعاية الحيوان والإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة الرعاية وأخلاقيات الحيوان من جامعة نيوكاسل، وأكد أن قانون نيو ساوث ويلز الحيوان بحوث، نيو ساوث ويلز الحيوان تنظيم البحوث، ورمز الاسترالي لرعاية و استخدام الحيوانات لأغراض علمية. تمت الموافقة على جميع الإجراءات المتخذة على الفئران عن طريق لجنة الرعاية وأخلاقيات الحيوان من جامعة نيوكاسل.
1. الوقت التزاوج
- الزوج 6-8 أسابيع من العمر من الذكور وإناث الفئران فقط قبل نهاية دورة وضح النهار.
- تحقق من الإناث لوجود المقابس المهبلية الصباح الباكر (في أو قبل 08:00)، كل يوم. ويعتبر اليوم من المكونات 0.5 DPC.
- نقل الأنثى مع المكونات المهبلية في قفص جديد (بدون ذكر) وتسمية تاريخ المكونات.
2. عزل الفأر الجنينية الغدد التناسلية مرتفعات
- عزل embryon الماوسجيم التلال الغدد التناسلية من 15.5 DPC الإناث الحوامل كما هو موضح في 9، مع بعض التعديلات كما هو موضح أدناه.
- تنفيذ تشريح قبل الظهر كما في المرة تعتبر الإناث الحوامل للدخول في اليوم التالي من الحمل بعد الظهر.
- تضحية 15.5 DPC الإناث الحوامل باستخدام خلع عنق الرحم (أو وفقا للبروتوكول المعتمد من قبل لجنة الأخلاقيات الحيوانية المؤسسية).
- الحفاظ على الماوس على ظهرها على المناديل الورقية الماصة ورش الجانب البطني من البطن مع الايثانول 70٪.
- رفع جلد البطن السفلي (الجانب البطني) مع ملقط وجعل شق الوحشي باستخدام مقص جراحي، وتمتد من افتتاح البولي التناسلي حتى النهاية لالقفص الصدري. سحب الجلد نحو رأس الحيوان لفضح البطن.
- قطع عضلات البطن مع مقص جراحي لفضح التجويف البريتوني. الاستيلاء على الرحم الحامل مع ملقط فقط فوق عنق الرحم واجراء خفض. الآن رفع الرحم عن طريق الضغط على رس المثانة البولية وقطع في الرباط واسع الرحم تليها تخفيضات في تقاطعات رحمي بوقي الرحم لفصل من المرفق البريتوني.
- نقل الرحم في أنبوب 50 مل تحتوي على الجليد الباردة HBSS (هانك المتوازن محلول الملح). غسل الرحم الحامل بلطف مع الجليد الباردة HBSS لإزالة الدم الزائد.
- إبقاء الرحم في طبق بتري تحتوي على الجليد الباردة HBSS والحفاظ على الجليد. قطع جدار الرحم وإخراج الأجنة. الحفاظ على الأجنة في طبق بيتري جديدة مع HBSS على الجليد.
- إلقاء المناديل الورقية المعقمة نظيفة ووضعها على طبق بيتري جديد. رذاذ الايثانول 70٪ على المناديل الورقية. حافظ على الجنين في هذه المناديل الورقية على الجانب الوحشي وقطع عليه من أسفل البطن باستخدام شفرة معقمة في الاتجاه كما يتضح من الخط المنقط في الشكل 1.
- إصلاح الجنين على قاعدة الإسفنج العقيمة التي تعلق في العمود الفقري.
- وضعه تحت مجهر تشريحي تشريح وقطع بعناية على طول خط الوسط بطني. إزالة الكبد والأمعاء. نظام الماوس البولي التناسلي (الكلى، الحالب، الخصية، WD، والأسهر) الآن يجب أن تكون واضحة.
- قطع الخصية و WD، ونضع في طبق بتري جديدة مع HBSS، على الجليد. لإخراج WD والخصية، وقطع الأسهر قريبة من حرصه على مجرى البول وخفض الحجز على الجزء السفلي من WD من رسن.
- تجمع الخصيتين وWDS من الأجنة من نفس المجموعة (و يمكن أن يختلف وفقا لخطة تجريبية).
3. ثقافة الجنينية الغدد التناسلية مرتفعات (الشكل 2)
- إعداد المتوسطة لزراعة التلال الغدد التناسلية الجنينية من خلال استكمال DMEM / F12 مع 10٪ FBS (مصل بقري جنيني)، 1٪ البنسلين / الستربتومايسين و 1٪ L-الجلوتامين. تدفئة وسائل الإعلام إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي.
- إضافة 300 ميكرولتر من وسائل الإعلام لكل بئر من 24 لوحة جيدا ثقافة الخلية.
- تأخذ لوحة بيتري الطازجة ووضع قطرة صغيرة من المعقم HBSS على ذلك. وضع غشاء البولي المسار حفر (0.881؛ م) على هذا قطرة من HBSS مع سطح ساطع تواجه HBSS.
- وضعت باستخدام ملقط نظيفة اثنين WDS والغدد التناسلية على الغشاء (على سطحه خشن، التي تواجه أعلى) وإزالة أكبر قدر ممكن من HBSS باستخدام مناديل معقمة / ورقة ماصة. لا تلمس الأنسجة مع ورقة ماصة للرطوبة؛ خلاف ذلك، فإنه سوف يضر الأنسجة.
- ضمان أن لا WDS ولا الغدد التناسلية ولمس بعضها البعض. خلاف ذلك، فإنها تلتصق ببعضها البعض أثناء الحضانة لاحقة.
- نقل الغشاء مع الأنسجة في بئر من 24 لوحة جيدا يحتوي على 300 ميكرولتر مستنبت والثقافة لهم في واجهة المتوسطة الهواء. الكثير من مستنبت على النتائج الأغشية في نمو الكيسي من WDS.
- احتضان لوحة في الحاضنة 37 درجة مئوية، في ظل وجود 5٪ CO 2.
- تغيير ثقافة المتوسط كل يوم. لتغيير المتوسطة مع ماصة، وإزالة المتوسطة من أول جيدا ثم إضافة 300 ميكرولتر من متوسطة جديدة prewarmed.
ملاحظة:لدراسة تأثير مسارات الإشارات المختلفة على WD التشكل، ويمكن أن يضاف المنشطات الكيميائية و / أو مثبطات في التركيزات المطلوبة لمستنبت. - ثقافة الأنسجة لمدة 3 د. خلال 3 د، WDS محلول التي تم جمعها من 15.5 DPC الجنين تتحول إلى أنابيب الملتوية للغاية (الشكل 3B). إضافة المانع WNT، IWR1، والنتائج في تثبيط WD اللف (الشكل 3C).
- لحصاد هذه الأنسجة تأخذ طبق بيتري مع الثلج الباردة برنامج تلفزيوني. نقل الغشاء مع الغدد التناسلية مثقف وWD إلى لوحة بيتري. فإن غشاء تطفو على برنامج تلفزيوني. اضغط على غشاء لاغراقها في برنامج تلفزيوني واخراج الغدد التناسلية و WD.
- إصلاح الأنسجة مع بارافورمالدهيد 4٪ (PFA) O / N عند 4 درجات مئوية أو لمدة 1 ساعة على RT. إذا لزم الأمر، واتخاذ الصور الحقل مشرقة من WDS قبل التثبيت.
4. الجامع جبل المناعي
- غسل الأنسجة الثابتة 3X مع برنامج تلفزيوني-T (PBS + 1٪تريتون X-100) مع هزاز بطيئة، 10 دقيقة لكل منهما، في RT.
- يذوى الأنسجة في سلسلة متدرجة من الايثانول (25٪، 50٪، 75٪ و 100٪)، و 10 دقيقة لكل منهما، في 4 درجات مئوية، مع بطء هزاز (~ 30 دورة في الدقيقة). في هذه الخطوة، والأنسجة ويمكن تخزينها في 4 درجة مئوية في 75٪ من الإيثانول.
- لتغيير الإيثانول، والحفاظ على الأنسجة دون عائق لمدة 2 دقيقة، والسماح للأنسجة يستقر. إخراج أكبر قدر من طاف وقت ممكن ثم قم بإضافة تركيز أعلى المقبل من الإيثانول. لتجنب أي ضرر للأنسجة، ينبغي للطرف ماصة لا تلمس الأنسجة في أي مرحلة.
- وبعد الجفاف، وترطيب أنسجة في سلسلة متدرجة من الإيثانول (100٪، 75٪، 50٪ و 25٪)، و 10 دقيقة لكل منهما، في 4 درجات مئوية، مع هزاز بطيئة.
- غسل الأنسجة مع PBS-T (PBS + 0.1٪ تريتون X-100)، 4X، 20 دقيقة لكل منهما، في RT، مع طيف هزاز (~ 30 دورة في الدقيقة).
- منع الأنسجة لمدة 1 ساعة على RT مع عازلة تمنع (PBS + 1٪ BSA + 0.2٪ الخالي من الدسم الحليب الجاف مسحوق + 0.3٪ تريتون X-100).
- بعد عملية الشراءص عرقلة، ونقل الأنسجة إلى حل الأجسام المضادة الأولية (المخفف في عرقلة العازلة)، واحتضان O / N عند 4 درجات مئوية مع طيف هزاز (~ 30 دورة في الدقيقة). ووصف التخفيفات من الأجسام المضادة الأولية المستخدمة في جدول المواد.
- في اليوم التالي، وغسل الأنسجة مع PBS-MT (PBS + 2٪ الخالي من الدسم مسحوق الحليب الجاف + 0.5٪ توين-20)، 4X، 30 دقيقة لكل منهما، في RT، مع طيف هزاز (~ 30 دورة في الدقيقة).
- وبعد هذه الخطوة الغسيل، إضافة الأجسام المضادة الثانوية في التخفيف من 1: 250 (هذه الخطوة تحتاج الأمثل لأجسام مضادة الفردية) في المخزن الحجب واحتضان لمدة 1 ساعة على RT، مع هزاز لطيف.
- من الآن فصاعدا حفاظ على الأنسجة مغطاة بورق الألمنيوم لمنع التعرض للضوء كما وصفت الأجسام المضادة الثانوية مع fluorophores الحساسة للضوء.
- غسل الأنسجة 3X مع برنامج تلفزيوني-T (PBS + 0.1٪ توين-20)، 30 دقيقة لكل منهما، مع هزاز لطيف.
- إعداد الشرائح لتركيب الأنسجة الملون.
- لهذا، وقطع زلات غطاء زجاجيإلى شرائح رقيقة باستخدام قلم الماس والعصا قطعتين أحدهما على الآخر على شريحة زجاجية باستخدام المينا الأظافر. جعل اثنين من الحدود والأنسجة مكان ما بين هذه الحدود البلدين.
- إضافة دابي تحتوي المتوسطة المتزايدة وضعت على زلة غطاء. تطبيق المينا الأظافر في زوايا الغطاء زلة لإصلاحه إلى الشريحة.
ملاحظة: الأنسجة هي الآن جاهزة للتصوير. تخزين هذه الشرائح في -20 درجة مئوية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
خلال التنمية، وWD يخضع لتغيرات كبيرة حيث يتم تحويل أنبوب بسيط ومستقيم إلى قناة معقدة للغاية وملفوف. استخدام الأساليب المذكورة أعلاه، WDS يخضع لعملية تحول مماثل في ظروف الثقافة. هنا نحن أظهرت النتائج من WDS تربيتها لمدة 3 د (الشكل 3). لتشريح الآليات الجزيئية المشاركة في WD التشكل، مستنبت يمكن أن تستكمل مع مثبطات ومنشطات تستهدف مسارات الإشارات المختلفة. ويبين الشكل 3C محلول WD بعد 3 د للثقافة في وجود إشارات Wnt المانع محددة، IWR1 10. السه...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نظام الثقافة الجهاز لديه العديد من المزايا على خلية نظام الثقافة التقليدية. هذا النظام يحتفظ العلاقات الهيكلية الأصلية والتفاعلات بين أنواع مختلفة من الخلايا. أنه يحاكي في أنظمة الجسم الحي ويعطي معلومات أكثر دقة من دراسات ثقافة الخلية حيث العامل المتخصصة غائب. استخدام أنظمة الثقافة الجهاز حتى يكون من المزايا أكثر من استخدام كل الحيوانات. وتشمل هذه التكلفة المرتفعة لاستخدام الحيوان كله، والرعاية سهلة وصيانة نظام الجهاز ثقافة، الخ وعلاوة على ذلك، ومختلف وك...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
ونود أن نشكر أعضاء المجموعة الأورام أمراض النساء لقراءة نقدية لهذه المخطوطة. وهذا العمل في جزء يدعمها تمويل من الصحة الوطنية ومجلس البحوث الطبية، والمجلس الأسترالي للأبحاث، ومعهد السرطان في نيو ساوث ويلز (PST). عضو الكنيست هي المستفيدة من جامعة نيوكاسل الدراسات العليا زمالة أبحاث.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| يمكن شراء ألواح 24 بئرا | Corning ، USA | 3524 | من بائعين آخرين |
| Hank ' يمكن شراء محلول الملح المتوازن (HBSS) | GE Healthcare Life Sciences ، الولايات المتحدة الأمريكية | SH30031.02 | من بائعين آخرين |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium: خليط المغذيات F-12 (DMEM / F12) | Sigma ، الولايات المتحدة الأمريكية | D8437 | دافئ في 37 درجة ؛ C حمام مائي قبل الاستخدام |
| مصل الأبقار الجنيني (FBS) Interpath | , أستراليا | SH30034.02 | 10٪ FBS المستخدمة في وسط الاستزراع |
| L-Glutamine | GE Healthcare Life Sciences ، الولايات المتحدة الأمريكية | SH30034.01 | تركيز 1٪ يستخدم |
| البنسلين / الستربتومايسين | جيبكو ، الولايات المتحدة الأمريكية | 15070-063 | تركيز 1٪ مستخدم |
| Whatman Nuclepore Polycarbonate Track-Etch ؛ | Whatman ، الولايات المتحدة الأمريكية | 110409 | غشاء (0.8 & micro; م) |
| IWR1 | سيجما ، الولايات المتحدة الأمريكية | 10161-5 ملغ | 100 وميكرو ؛ يستخدم تركيز |
| M بارافورمالدهيد (PFA) علوم | المجهر الإلكتروني ، الولايات المتحدة الأمريكية | 15710 | 16٪ مخزون ، 4٪ في PBS للاستخدام. سامة - ارتد قفازات ولا التخلص منها في الحوض |
| Ethanol | Thermo Scientific Fisher ، الولايات المتحدة الأمريكية | 214-20L PL | Absolute ، اصنع 25 و 50 و 75٪ بماء milliQ. |
| Tween-20 | Thermo Scientific Fisher ، الولايات المتحدة الأمريكية | 2509-500 مل | لزج جدا ، حذر أثناء الاستغناء |
| عن Triton X-100 | Sigma ، الولايات المتحدة الأمريكية | T8787-50ml | لزج جدا ، حذر أثناء الاستغناء عن |
| الصوديوم فوسفات الهيدروجين | الحراري Scientific Fisher ، الولايات المتحدة الأمريكية | 621-500 مجم | يمكن شراؤها من بائعين آخرين |
| الصوديوم ثنائي فوسفات الهيدروجين | Ajax Finechem ، الولايات المتحدة الأمريكية | 4745-500 جم | يمكن شراؤها من بائعين آخرين |
| كلوريد الصوديوم | الحراري Scientific Fisher ، الولايات المتحدة الأمريكية | 465-500 جرام | يمكن شراؤها من بائعين آخرين |
| Cytokeratin8 / Troma I | Studies Developmental Hybrid Bank ، الولايات المتحدة الأمريكية (DHSB) | TROMA-I | 1: 250 في منع العازلة |
| النشطة وبيتا ؛ Catenin | تكنولوجيا إشارات الخلية, الولايات المتحدة الأمريكية | D13A1 | 1: 200 في منع المخزن المؤقت |
| phospho-Histone 3 | Millipore ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية | 06-570 | 1: 200 في منع العازلة |
| Alexa488 Goat anti-rabbit IgG | Jackson ImmunoResearchLabs ، ؛ الولايات المتحدة الأمريكية | 111-545-047 | 1:250 في منع العازلة |
| Alexa594 Goat anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearchLabs, الولايات المتحدة الأمريكية | 112-585-072 | 1: 250 في حجب العازلة |
| Glycerol | Thermo Fisher Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية | 242-500 مل | يمكن شراؤها من بائعين آخرين |
| n-Propyl galate | Sigma ، الولايات المتحدة الأمريكية | 2370-2 | |
| - (4-amidinophenyl) -1H -indole-6-carboxamidine (DAPI) | Sigma ، الولايات المتحدة الأمريكية | D9564-10mg | استخدم لتلطيخ الأحماض النووية (DNA) ثنائي |
| ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | ثيرمو فيشر علمي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 2225-500 مل | المذيبات |
| زلات (24 × 50 مم) | Lomb Scientific | CS24501GP | - |
المراجع
- Joseph, A., Yao, H., Hinton, B. T. Development and morphogenesis of the Wolffian/epididymal duct, more twists and turns. Dev Biol. 325, 6-14 (2009).
- Murashima, A., Xu, B., Hinton, B. T. Understanding normal and abnormal development of the Wolffian/epididymal duct by using transgenic mice. Asian J Androl. 17, 1-7 (2015).
- Carroll, T. J., Park, J. S., Hayashi, S., Majumdar, A., McMahon, A. P. Wnt9b plays a central role in the regulation of mesenchymal to epithelial transitions underlying organogenesis of the mammalian urogenital system. Dev Cell. 9, 283-292 (2005).
- Kumar, M., Syed, S. M., Taketo, M. M., Tanwar, P. S. Epithelial Wnt/βcatenin signalling is essential for epididymal coiling. Dev Biol. 412, 234-249 (2016).
- Murashima, A., et al. Essential roles of androgen signaling in Wolffian duct stabilization and epididymal cell differentiation. Endocrinology. 152, 1640-1651 (2011).
- Lin, J. H. Applications and limitations of genetically modified mouse models in drug discovery and development. Curr Drug Metab. 9, 419-438 (2008).
- Rak-Raszewska, A., Hauser, P. V., Vainio, S. Organ In Vitro Culture: What Have We Learned about Early Kidney Development? Stem Cells Int. 959807, 1-16 (2015).
- Hirashima, T., Adachi, T. Procedures for the Quantification of Whole-Tissue Immunofluorescence Images Obtained at Single-Cell Resolution during Murine Tubular Organ Development. PLoS One. 10, 0135343(2015).
- Chan, W. Y., Blomberg, L. A. Germline Development: Methods and Protocols. Methods Mol Biol. 825, (2012).
- Karner, C. M., et al. Tankyrase Is Necessary for Canonical Wnt Signaling During Kidney Development. Dev Dyn. 239, 2014-2023 (2010).
- Traykova-Brauch, M., et al. An efficient and versatile system for acute and chronic modulation of renal tubular function in transgenic mice. Nat Med. 14, 979-984 (2008).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
