مقالة منهجية

توليف الكيماوي الانزيمية من N-جليكانس للتنمية الصفيف وأضداد الفيروس التنميط

DOI:

10.3791/55855

⸱

فبراير 5, 2018

 ,  ,  , 
1Genomics Research Center, Academia Sinica

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نهج نموذجي لتوليف N-جليكانس للتمسك زجاج معدني مغلف بأكسيد الألومنيوم الشريحة (شريحة ACG) كما تم وضع ميكرواري جليكان وقد ثبت استعماله للتنميط فيروس نقص المناعة البشرية على نطاق واسع تحييد الأجسام المضادة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نتقدم بطريقة ذات كفاءة عالية للتحضير السريع لمجموعة واسعة النطاق من N-ترتبط oligosaccharides (يقدر أن يتجاوز هياكل 20,000) التي توجد عادة في جليكوبروتينس البشرية. لتحقيق التنوع الهيكلي المطلوب، بدأت الاستراتيجية مع توليف الكيماوي الانزيمية لثلاثة أنواع من وحدات فلوريد أوليجوساكتشاريل، تليها بهم جليكوسيليشنز α-انتقائية التدرجي في 3-O و 6-يا مناصب يطلق بقايا من تريساكتشاريدي الأساسية المشتركة وجود صلة حاسمة β-مانوسيدي. نحن كذلك تعلق N-جليكانس على سطح شريحة زجاجية المغلفة بأكسيد الألومنيوم (ACG) لإنشاء مجموعة مختلطة التساهمية لتحليل التفاعل هترو-يجند مع جسم فيروس نقص المناعة البشرية. على وجه الخصوص، بسلوك ملزمة المعزولة حديثا فيروس نقص المناعة البشرية-1 على نطاق واسع من تحييد جسم (بناب)، PG9، إلى الخليط من رجل المتقاربة5جلكناك2 (رجل5) ومجمع ثنائي أنتيناري 2، 6-دي-سياليلاتيد اكتب N-جليكان (SCT ) على صفيف ACG، يفتح سبيلاً جديداً لتوجيه تصميم إيمونوجين فعالة لتطوير لقاحات فيروس نقص المناعة البشرية. وبالإضافة إلى ذلك، لدينا مجموعة ACG يجسد أداة قوية لدراسة أخرى الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية لسلوك ملزم يجند المتغايرة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

N-جليكانس على جليكوبروتينس تساهمي ترتبط أسباراجين بقايا (Asn) من سكون Asn-الثلاثون-Ser/الثريونين إلى توافق في الآراء، التي تؤثر على العديد من العمليات البيولوجية مثل الاعتراف أنتيجينيسيتي والذوبان، تكيف ويكتين البروتين 1 , 2-التوليف الكيميائي من N-oligosaccharides مرتبط تمثل تحديا كبيرا اصطناعية بسبب التباين الجزئي الهيكلي ضخمة وهندسة عالية متفرعة. الاختيار الدقيق لحماية مجموعات لضبط مفاعليه لبنات البناء، تحقيق الانتقائية في مراكز أنوميريك، والاستخدام السليم للمروج/activator(s) عناصر رئيسية في توليف oligosaccharides المعقدة. لحل هذه المشكلة من التعقيد، وقدرا كبيرا من العمل للنهوض بتوليف-جليكان نذكر مؤخرا3،4. وعلى الرغم من هذه النهج قوية، إيجاد طريقة فعالة لإعداد مجموعة واسعة من N-جليكانس (~ 20,000) ما زال تحديا رئيسيا.

معدل الطفرات السريعة لفيروس نقص المناعة البشرية-1 تحقيق التنوع الوراثي الواسعة وقدرته على الهروب من تحييد استجابة الأجسام المضادة، من بين أكبر التحديات التي تواجه تطوير لقاح أمن والوقاية ضد فيروس نقص المناعة البشرية-15،6 , 7-تكتيك فعال واحد يستخدم فيروس نقص المناعة البشرية لتجنب الاستجابة المناعية المضيف هو جليكوسيليشن بوستترانسلاشونال من المظروف بروتين سكري gp120 مع أحد متنوعة ن-مرتبطة جليكانس المستمدة من المضيف glycosylation إليه8، 9. تقرير صدر مؤخرا فيما يتعلق بتحليل دقيق لفيروس نقص المناعة البشرية-1 أحادي المؤتلف gp120 glycosylation من الخلايا 293T الكلي الجنينية البشرية (HEK) يوحي بحدوث ميكروهيتيروجينيتي الهيكلية مع مميزة الخاصة بخلية نمط10 , 11 , 12-ولذلك، فهم خصوصيات جليكان بنابس فيروس نقص المناعة البشرية-1 يتطلب كذلك تتسم gp120 المتعلقة بهياكل-جليكان نبكميات كافية للتحليل.

قدم اكتشاف جليكان ميكرواري تكنولوجيا الاستكشاف المستندة إلى إنتاجية عالية من الخصائص المميزة لمجموعة متنوعة من البروتينات الكربوهيدرات ملزم، أدهيسينس الفيروسات/البكتيريا والسموم، والأجسام المضادة ولكتينس13،14 . يمكن تحديد هذا الترتيب المنهجي جليكانس في شكل القائم على رقاقة arrayed إشكالية تقارب منخفضة البروتين-جليكان التفاعلات من خلال عرض متعددي15،16،،من1718. يظهر هذا الترتيب القائم على رقاقة جليكان مريح فعالية تحاكي واجهات خلية خلية. لإثراء هذه التكنولوجيا والتغلب على مسألة تفاوت المرتبطة بصيغ الصفيف التقليدية، مجموعتنا مؤخرا بوضع مصفوفة جليكان على شريحة زجاج المغلفة بأكسيد الألومنيوم (ACG) استخدام جليكانس المنتهية في حمض الفوسفونيك لتعزيز كثافة إشارة، التجانس، وحساسية19،20.

لتحسين التفاهم الحالية حول [ابيتوبس] جليكان حديثا عزل فيروس نقص المناعة البشرية-1 تحييد الأجسام المضادة (بنابس) على نطاق واسع، قمنا بتطوير استراتيجية وحدات ذات كفاءة عالية لإعداد مجموعة واسعة من N-يرتبط جليكانس21 ،22 لتتم طباعتها على ACG الشريحة (انظر الشكل 1). خصوصية عرضت دراسات التنميط لفيروس نقص المناعة البشرية-1 بنابس في صفيف ACG الكشف غير عادية من سلوك ربط هترو-جليكان من بناب قوية للغاية PG9 التي كانت معزولة من فيروس نقص المناعة البشرية إصابة الأفراد23،،من2425.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-إعداد D1/D2 تسليح الوحدات22

  1. إعداد الوسيطة 2
    1. وزن ابتداء من المواد 1 (هو مبين في الشكل 2، ف-methoxyphenyl-O-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-D-mannopyranoside (100 مغ، 0.204 ملمول)) في أنبوب 15 مل وتذوب في تريس الذي يحتوي على المخزن المؤقت (25 مم، الرقم الهيدروجيني 7.5) كلوريد المنغنيز (الحركة2، 10 ملم) لتحقيق تركيز جليكان نهائي من 5 ملم.
    2. إضافة 2 مكافئات أردين diphosphate اللبن (UDP-غال).
    3. إضافة 150 وحدة من إنزيم بيتا-1، 4 ترانسفيراسيس جالاكتوسيل من حليب البقر، واحتضان المخلوط في 37 سج عن ح 15.
    4. بعد 15 ح، أداء طبقة رقيقة اللوني (TLC) للإشارة إلى إجمالي الاستهلاك من بدء تشغيل المواد باكتشاف الخليط رد فعل على صفيحة TLC، وضع مع ن-حمض الخليك/وبيوتانول/المياه (ح2س) في 1:1: نسبة 1 وتلطيخ من حل موليبدات أمونيوم سيريوم 0.25 م متبوعاً بالتدفئة. ثم إخماد رد فعل من التدفئة في 90 سج لمدة 5 دقائق.
    5. الطرد المركزي خليط رد الفعل بسرعة 2,737 ز س لمدة 3 دقائق، وتحميل المادة طافية في الجزء العلوي من العمود جل polyacrylamide (انظر الجدول للمواد). الوت عمود باستخدام الماء المقطر الشطب المتأين، وجمع المنتج مع كسور من 1-2 مل.
    6. رصد الكسور التي تم جمعها عن طريق TLC26، وضع مع ن-butanol: H2o: حمض الخليك في 1:1: نسبة 1، وتلطيخ بحل موليبدات أمونيوم سيريوم متبوعاً بالتدفئة. ليوفيليزي27 المنتج الذي يحتوي على كسور للحصول على متوسط 2 (115 ملغ، 86 في المائة) كمسحوق أبيض. تميز المنتج بالرنين المغناطيسي النووي28 والتحليل الطيفي الشامل29 (انظر ملف البيانات التكميلية).
  2. إعداد 3 متوسطة
    1. وزن ابتداء من المواد 2 (هو مبين في الشكل 2، ف-methoxyphenyl-O-β-D-galactopyranosyl-(1→4)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-D-mannopyranoside (80 ملغ، 0.122 ملمول)) في أنبوب 15 مل وتذوب في تريس المخزن المؤقت (25 مم، الرقم الهيدروجيني 7.5) التي تحتوي على الحركة2 (10 مم) لإعداد تركيز جليكان نهائي من 5 مم.
    2. إضافة 2 مكافئات جانسين ثنائي 5 '-ديفوسفو-β-L-فوكس الملح (الناتج المحلي الإجمالي-الجبهة).
    3. إضافة 150 وحدة من إنزيم α-1، ترانسفيراسيس فوكوسيل 3 من الملوية البوابية (Hp1-3FTΔ26695)، واحتضان المخلوط في 37 سج عن ح 15.
    4. اتبع الخطوة 1.1.4.
    5. اتبع الخطوة 1.1.5.
    6. اتبع الخطوة 1.1.6 للحصول على متوسط 3 (مغ 82، 84%) كمسحوق أبيض. تميز المنتج بالرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي الجماعي (انظر ملف البيانات التكميلية).
  3. إعداد وحدات 4 و 5
    1. وزن المركبة 2، ف-methoxyphenyl-O-β-D-galactopyranosyl-(1→4)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-D-mannopyranoside (ز 0.230، ملمول 0.360) أو مركب 3، ف- methoxyphenyl-O-β-D-galactopyranosyl-(1→4)-[α-L-fucopyranosyl-(1→3)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl]-(1→2)-α-D-mannopyranoside (ز 0.100، ميللي مول 0.125) إلى 25 مل واحد-رقبته قارورة مستديرة القاع والجاف تحت الفراغ لمدة 30 دقيقة.
    2. إزالة قارورة من الفراغ وملئه بغاز النيتروجين، وإضافة شريط إثارة مغناطيسية، كاب مع الغشاء المطاطي وإرفاق بالون نيتروجين.
    3. حقن 7 مل بيريدين الجافة و 3 مل من أنهيدريد الخل (Ac2س) في قارورة يوضع في حمام الثلج في 0 سجيم إثارة رد فعل الناتجة عن ح 12 في درجة حرارة الغرفة باستخدام محرض مغناطيسي من 600-700 لفة في الدقيقة. تتبخر المذيبات استخدام منظمة روتاري المبخر عند ضغط فراغ من 0-10 [مبر] في 50 سجيم
    4. تمييع الخليط الخام باستخدام 30 مل الميثان (DCM) واستخراج مع كربونات هيدروجين الصوديوم المائية المشبعة (ناكو3) (2 × 20 مل) في قمع سيباراتوري 50 مل.
    5. إعادة استخراج الطبقة المائية مع DCM (3 × 15 مل) وجاف الطبقات العضوية مجتمعة فوق كبريتات الصوديوم. إزالة كبريتات الصوديوم عن طريق الترشيح ويغسل مع DCM (5 مل). تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 400 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
    6. تحميل الحل مزيج النفط الخام إلى 2 مل DCM على رأس السرير والسليكا.
    7. الوت العمود مع خليط يحتوي على والتولوين، والاسيتون من 0-20% الأسيتون في والتولوين وجمع كسور من 5-10 مل.
    8. رصد الكسور التي تم جمعها قبل TLC (الخطوات 1.1.4 و1-1-6)، وضع مع التولوين/الأسيتون (7/3)، وتلطيخ مع حل موليبدات أمونيوم سيريوم تليها تدفئة على طبق ساخن.
    9. تتبخر المنتج الذي يحتوي على كسور استخدام مبخر دوراني للحصول على المنتجات المطلوبة رغوة بيضاء في 72 في المائة والغلال 85 في المائة، على التوالي.
    10. حل المنتجات إلى 7 مل من الاسيتو الانيتريل: التولوين: ح2س 4: نسبة 2:1 في قارورة أسفل جولة 25 مل.
    11. إضافة نترات الأمونيوم السيريوم (المعادل 2) أثناء التبريد إلى 0 سج استخدام حمام الثلج. إثارة رد فعل في درجة حرارة الغرفة ح 3 ~ 500-800 لفة في الدقيقة.
    12. بعد TLC يشير إلى مجموع استهلاك ابتداء من المواد (TLC النامية مع التولوين/الأسيتون (7/3) وتصور بامتصاص الأشعة فوق البنفسجية في 254 نانومتر أو تلطيخ مع حل موليبدات أمونيوم سيريوم متبوعاً بتدفئة)، تضعف خليط التفاعل مع خلات الإيثيل (30 مل) واستخراج مع ح2س (15 × 2 مل).
    13. استخراج الطبقات العضوية المشتركة مع 5 مل من محلول كلوريد الصوديوم المشبعة (كلوريد الصوديوم).
    14. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 240 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
    15. تحميل الحل من النفط الخام المنتج في 2 مل DCM على رأس السرير والسليكا. الوت العمود مع خليط يحتوي على والتولوين، والاسيتون (0-20% الأسيتون، في التولوين) وجمع كسور من 5-10 مل. رصد الكسور التي تم جمعها قبل TLC، وضع مع التولوين/الأسيتون (7/3).
    16. تتبخر الكسور التي تحتوي على المنتج استخدام مبخر دوراني في 77 [مبر] فراغ و 40 سج للحصول على المنتجات المطلوبة رغاوي بيضاء.
    17. حل الكحول كل منهما إلى 10 مل DCM في قارورة مستديرة القاع واحد-رقبته 25 مل وباردة إلى-30 ياجيم
    18. إضافة فلوريد ثلاثي ديثيلامينوسولفور (دست، مكافئات 2). يقلب الخليط رد فعل في-30 سج عن ح 2.
    19. بعد TLC يشير إلى استهلاك ابتداء من المواد (TLC النامية مع التولوين/الأسيتون (4/1) وتصور بامتصاص الأشعة فوق البنفسجية في 254 نانومتر أو تلطيخ مع حل موليبدات أمونيوم سيريوم متبوعاً بتدفئة)، يضعف رد فعل المخلوط مع DCM (30 مل) ، والمياه والصرف الصحي مع المشبعة ناكو3 (15 × 2 مل).
    20. استخراج الطبقة العضوية المشتركة مع 5 مل محلول كلوريد الصوديوم المشبعة والجافة عن طريق إضافة سلفات المغنيزيوم اللامائى وتصفية الخليط عقب يغسل مع DCM (5 مل) وأنه جمع في قارورة مستديرة القاع واحد-رقبته 100 مل.
    21. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 400 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
    22. تحميل الحل من النفط الخام المنتج في 2 مل DCM على رأس السرير والسليكا. الوتي العمود باستخدام خليط من والتولوين، والاسيتون (0-20% الأسيتون في التولوين) والكسور جمع 5-10 مل.
    23. رصد الكسور التي تم جمعها قبل TLC، وضع مع التولوين/الأسيتون (7/3).
    24. تتبخر المنتج الذي يحتوي على كسور استخدام مبخر دوراني للحصول على المنتجات المطلوبة 4، [2,3,4,6-O-tetraacetyl-β-D-galactopyranosyl]-(1→4)-[3,6-O-diacetyl-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl]-(1→2)-3,4,6- س-ترياسيتيل-α-د-مانوبيرانوسيل الفلوريد (54% عن الخطوات 2) و 5، [2,3,4,6-O-tetraacetyl-β-D-galactopyranosyl]-(1→4)-[2,3,4-O-triacetyl-α-L-fucopyranosyl-(1→3)-3,6-O-diacetyl-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl]-(1→2)- فلوريد 3,4,6-O-triacetyl-α-D-mannopyranosyl (67% عن الخطوات 2) كالمواد الصلبة البيضاء.
    25. تميز المنتج بالرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي الجماعي (انظر ملف البيانات التكميلية).

2-إعداد جليكان 10

  1. إعداد intermidiate 7
    1. وزن الفضة تريفلات كلوريد bis(cyclopentadienyl)hafnium(IV) (أجوتف) (0.039 ز، 0.155 ملمول)، (Cp2هفكل2) (0.041 ز، ملمول 0.108) في قارورة مستديرة القاع واحد-رقبته 25 مل، الجافة تحت فراغ خط شلينك لمدة 30 دقيقة، وإزالته من فراغ، وملئه بغاز النيتروجين.
    2. نقل المجفف الطازج 4 Å الجزيئية ثقب سيتا (0.2 g) في قارورة تحتوي على أجوتف وحزب المحافظين2هفكل2وإضافة شريط المغناطيسي إثارة وكاب مع حاجز الفور وإضافة بالون النيتروجين.
    3. تحويل التولوين الجافة 3 مل إلى قارورة مع حقنه زجاجية جافة. يقلب الخليط رد فعل ح 1 في درجة حرارة الغرفة وبارد ثم إلى 0 ياجيم
    4. حقن حلاً المانحة 4 (الشكل 2، ز 0.043، ملمول 0.046) ويقبلون 6، 5-Azidopentyl-O-2-O-acetyl-4,6-O-benzylidine-β-D-mannopyranosyl-(1→4)-O-(3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-(2,2,2-trichloroethoxy) carbonylamino-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-(2,2,2-trichloroethoxy)carbonylamino-β-D-glucopyranoside (الشكل 3، ز 0.045، 0.031 ملمول) في 3 مل التولوين في قارورة من خلال حاجز استخدام حقنه 10 مل 0 o جيم إثارة رد فعل الخليط في درجة حرارة الغرفة ح 3.
    5. بعد TLC يشير إلى استهلاك المواد الأولية (TLC، البلدان النامية مع DCM/الأسيتون (8.5/1.5) وتصور بامتصاص الأشعة فوق البنفسجية في 254 نانومتر أو تلطيخ مع حل موليبدات أمونيوم سيريوم متبوعاً بتدفئة)، إخماد رد فعل بالحقن 10 معادلات لرباعي الإيثيل أمين.
    6. تصفية ثقب سيتا الجزيئية عن طريق سرير سليت في قارورة القاع المستديرة 50 مل، وكذلك يغسل مع 10 مل خلات الإيثيل. استخراج الطبقات العضوية مجتمعة مع حل مشبعة مائي ناكو3 (2 × 20 مل) في قمع سيباراتوري 50 مل. استخراج الطبقة المائية مع وخلات الإيثيل (3 × 15 مل).
    7. استخراج الطبقات العضوية مجتمعة مع محلول كلوريد الصوديوم المشبعة (5 مل)، الجافة باستخدام سلفات المغنيزيوم اللامائى، تصفية الخليط إزالة سلفات المغنزيوم وتغسل مع وخلات الإيثيل (3 × 15 مل) جمع فيلتراتي في قارورة القاع المستديرة 100 مل.
    8. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 240 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
    9. تحميل الحل من النفط الخام المنتج في DCM على رأس العمود سرير والسليكا. الوت العمود مع خليط يحتوي على DCM والاسيتون (0-10% الأسيتون في DCM) وجمع كسور من 5-10 مل.
    10. رصد الكسور التي تم جمعها قبل TLC، وضع مع DCM/الأسيتون (8.5/1.5). تتبخر الكسور التي تحتوي على المنتج باستخدام مبخر دوراني للحصول على [intermidiate 5-Azidopentyl-O-{[2,3,4,6-O-tetraacetyl-β-D-galactopyranosyl]-(1→4)-[3,6-O-diacetyl-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl]-(1→2)- 7، 3,4,6-O-triacetyl-α-D-mannopyranosyl]}-(1→3)-[2-O-acetyl-4,6-O-benzylidine-β-D-mannopyranosyl-(1→4)-O-(3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-(2,2,2-trichloroethoxy)carbonylamino-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-( 2,2,2-تريتشلوروثوكسي) كاربونيلامينو-β-د-جلوكوبيرانوسيدي (0.052 ز، 70%)، رغوة بيضاء.
    11. تميز المنتج بالرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي الجماعي (انظر ملف البيانات التكميلية).
  2. إعداد intermidiate 8
    1. تزن هيكساساكتشاريدي 7 (الشكل 3، ز 0.040، 0.016 ميللي مول) في قارورة مستديرة القاع واحد-رقبته 25 مل والجافة تحت الفراغ ح 1، إزالته من فراغ، وملئه بغاز النيتروجين، إضافة شريط إثارة مغناطيسية، وكاب مع الغشاء المطاطي.
    2. نقل 3 مل acetonitrile:methanol (ميوه) (نسبة 2:1) إلى قارورة.
    3. إضافة فمونوهيدرات حامض السلفونيك التولوين (ز 0.001، ملمول 0.008) في قارورة رد فعل وآثاره رد فعل 800 لفة في الدقيقة ح 5.
    4. بعد TLC يشير إلى استهلاك من ابتداء من المواد (TLC، وضع مع DCM/الأسيتون (8.5/1.5)، وتصور بامتصاص الأشعة فوق البنفسجية في 254 نانومتر أو تلطيخ مع حل موليبدات أمونيوم سيريوم متبوعاً بتدفئة)، إخماد رد فعل بالحقن 10 معادلات لرباعي الإيثيل أمين.
    5. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 337 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
    6. حل الخليط الخام مع حوالي 2 مل DCM وتحميله على رأس السرير والسليكا.
    7. الوتي العمود باستخدام خليط من DCM والاسيتون (0-10% الأسيتون في DCM) والكسور جمع 5-10 مل. رصد الكسور التي تم جمعها قبل TLC، وضع مع DCM/الأسيتون (8.5/1.5). تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 400 [مبر] فراغ و 40 سجيم
    8. الجاف لبقايا تحت ضغط انخفاض إعطاء متوسط 8، 5-أزيدوبينتيل-س-(2-O-acetyl-3,4,6-tri-O-benzyl-ced pressure to give →3)-2-س-أسيتيل-4, 6-س-بينزيليديني-β-مانوبيرانوسيل د----(1→4)-O-(3.6- di-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-nzyl-2-deoxy-2-phth. (الشكل 3، ز 0.022، 57 في المائة) صلبة بيضاء. تميز المنتج بالرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي الجماعي (انظر ملف البيانات التكميلية).
  3. إعداد intermidiate 9
    1. وأنجز إعداد intermidiate 9 (الشكل 3) استخدام المانحة 5 (ز 0.015، 13.2 µmol) ويقبلون 8 (الشكل 3، 0.020 ز، 8.80 µmol).
    2. أجوتف (ز 0.011، 44.1 µmol) و Cp2هفكل2 (0.012 ز، 30.8 µmol) استخدمت بروموتورس.
    3. نفذ الخطوات 2.1.1 ل 2.1.10 للحصول على متوسط 9، 5-أزيدوبينتيل-س-{[2,3,4,6-س-تيتراسيتيل-β-د-galactopyranosyl]-(1→4)-[3,6-O-دياسيتيل-2-أسيتاميدو-2-ديوكسي-β-د-glucopyranosyl]-(1→2)-[3,4,6-O-ترياسيتيل-α-د-مانوبيرانوسيل]} -(1→3)-{2,3,4,6-O-tetraacetyl-β-D-galactopyranosyl]-(1→4)-[2,3,4-O-triacetyl-α-LS160fucopyranosyl-(1→3)-3,6-O-diacetyl-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl]-(1→2)-3,4,6-O-triacetyl-α-D-mannopyranosyl}-(1→6)-[2- O-acetyl-β-D-mannopyranosyl-(1→4)-O-(3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-(2,2,2-trichloroethoxy)carbonylamino-β-D-glucopyranosyl)-(1O-benzyl-2-deoxy-2-(2,2,2-trichloroethoxy)carbonylamino-β-D-glucopyranosyl)-D-glucopyra (0.010 g, 34%), as رغوة بيضاء.
  4. Deprotection العالمي ل intermidiate
    1. تزن المركبة 9 (ز 0.010، 2.9 µmol) في قارورة مستديرة القاع واحد-رقبته 25 مل وإضافة شريط إثارة مغناطيسية، كاب مع الغشاء المطاطي، وإرفاق بالون نيتروجين.
    2. نقل 2 مل 1, 4 dioxane: ح2س (4:1) إلى قارورة. إضافة هيدروكسيد الليثيوم (ليوه) (0.005 ز، 50% بالوزن) إلى قارورة. إثارة رد فعل الخليط في 90-100 سج عن ح 12 والسماح لتبرد في الرايت
    3. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني وجاف قارورة تحت الفراغ ح 1 وملئه بالنيتروجين وإزالته من فراغ المتشعبة وكاب مع الغشاء المطاطي.
    4. حقن 4 مل من بيريدين الجافة و 2 مل من أنهيدريد الخل في قارورة من خلال حاجز استخدام حقنه 10 مل في 0 سجيم يقلب الخليط رد فعل ح 12 في الرايت
    5. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني من 0-10 [مبر] ضغط فراغ في 50 سجيم
    6. حل النفط الخام المخلوط باستخدام 30 مل DCM واستخراج الحل مع المشبعة مائي ناكو3 (2 × 20 مل) في قمع سيباراتوري 50 مل.
    7. إعادة استخراج الطبقة المائية مع DCM (3 × 15 مل). تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني.
    8. تحميل حل للمنتج في حوالي 2 مل DCM على رأس السرير والسليكا C18. الوت العمود باستخدام خليط من الماء والميثانول (0-100% ميثانول في الماء) وجمع كسور من 5-10 مل.
    9. جمع الكسور المنتج وتتبخر تحت الحد من الضغط للحصول على المنتج المطلوب رغوة بيضاء.
    10. حل المنتج إلى 5 مل ميثانول الجاف في 25 مل جولة قارورة السفلي وكاب مع الغشاء المطاطي.
    11. نقل 0.1 مل ميثوكسيد الصوديوم (ناومي) في الميثانول وباردة إلى 0 سج استخدام حمام الثلج ويقلب الخليط ح 12.
    12. إزالة المذيب استخدام مبخر دوراني والجاف للمنتج تحت التفريغ العالي.
    13. حل منتجات النفط الخام في 5 مل ميثانول: H2o: حمض الخليك (6:3:1).
    14. إضافة هيدروكسيد البلاديوم (Pd(OH)2) (50% بالوزن) وآثاره رد فعل تحت الغلاف الجوي الهيدروجين باستخدام بالون هيدروجين ح 15.
    15. تصفية رد فعل من خلال سرير سليت وتغسل مع الميثانول 2 مل تليها 2 مل الماء dd.
    16. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني.
    17. حل الخليط الخام بحوالي 1 مل من الماء وتحميله على رأس السرير جل polyacrylamide (انظر الجدول للمواد). الوت المنتج مع الماء وجمع الكسور 1-2 مل.
    18. رصد الكسور التي تم جمعها قبل TLC، ووضع مع n-butanol: H2o: حمض الخليك (1:1:1).
    19. جمع الكسور المنتج وليوفيليزي للحصول المنتج المطلوب 10، (5-Aminopentyl-β-D-galactopyranosyl-(1→4)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-α-D-mannopyranosyl]-(1→3),-[β-D-galactopyranosyl-(1→4)- α-L-fucopyranosyl-(1→3)-2-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-α-D-mannopyranosyl]-(1→6)-β-D-mannopyranosyl-(1→4)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranoside (0.002 g, 36%), as a مسحوق أبيض.
    20. تميز المنتج بالرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي الجماعي (انظر ملف البيانات التكميلية).

3-إعداد جليكانس مع ذيل حمض الفوسفونيك19،22

  1. تزن جليكان كل منهما (µmol 2-5) في قارورة أسفل المائدة مستديرة 5 مل وإضافة شريط إثارة مغناطيسية، وكاب مع الغشاء المطاطي.
  2. نقل 400 ميليلتر من ديميثيلفورماميدي الطازج المجفف.
  3. إضافة [2 (2 (2 (مكررا (بينزيلوكسي) فوسفوريل) اثوكسييثوكسي) كربونات الإيثيل (2، 5-dioxopyrrolidin1-يل)] (µmol 10-25، أعدت في البيت) لحل جليكان. يقلب الخليط 800 لفة في الدقيقة ح 5.
  4. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 5-10 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
  5. حل الخليط رد فعل في 0.5 مل مياه وتحميل في الجزء العلوي من السرير جل polyacrylamide (انظر الجدول للمواد). الوت المنتج باستخدام المياه وجمع الكسور 1-2 مل.
  6. مراقبة الكسور التي تم جمعها عن طريق TLC26. بقعة الخليط رد فعل على صفيحة TLC، وإضافة حل وصمة عار من موليبدات أمونيوم سيريوم 0.25 م؛ اتبع بالتدفئة باستخدام لوحة الساخن. جمع المنتجات المحتوية على الكسور وليوفيليزي للحصول على المنتج المطلوب كمسحوق أبيض.
  7. حل المنتج في 2 مل الماء، وإضافة Pd (OH)2 (50% بالوزن). إثارة رد فعل 800 لفة في الدقيقة تحت الغلاف الجوي الهيدروجين باستخدام بالون هيدروجين ح 15.
  8. تصفية رد فعل من خلال سرير أنود التمويه وتغسل مع الميثانول 2 مل تليها 2 مل ماء المقطر الشطب المتأين. تتبخر المذيبات استخدام مبخر دوراني في 300 [مبر] ضغط فراغ في 40 سجيم
  9. حل الخليط الخام بحوالي 1 مل من الماء وتحميله على رأس السرير جل polyacrylamide (انظر الجدول للمواد).
  10. الوت المنتج مع الماء وجمع الكسور 1-2 مل. مراقبة الكسور التي تم جمعها عن طريق TLC26. ليوفيليزي الكسور (تجميد المنتج باستخدام النتروجين السائل ثم ضعه في ليوفيليزير تحت فراغ) للحصول على المنتج المطلوب كمسحوق أبيض. تتميز المنتجات بواسطة الرنين المغناطيسي والتحليل الطيفي الجماعي (انظر ملف البيانات التكميلية) باستخدام د2س كمذيب.

4-جليكان الصفيف

  1. إعداد ألومنيوم المطلي الشرائح الزجاجية (ACG الشريحة) 19 , 20 , 22
    ملاحظة: تم تصنيع الشرائح الزجاجية المغلفة بالألومنيوم في شعبة تكنولوجيا الفيلم رقيقة، ومركز أبحاث التكنولوجيا أداة وتطبيق بحوث المختبرات الوطنية، حديقة العلوم هسينشو، تايوان.
    1. حزمة الشرائح المغلفة، وختم الفراغ منها لمنع تشكيل الحسابية، وتبقى مغلقة حتى رد فعل الكهروكيميائية للسطح أنوديزيشن.
  2. أنوديزيشن سطح من الألومنيوم المطلي الشرائح الزجاجية 19 , 20 , 22
    1. تعيين حاضنة درجة الحرارة التي تسيطر على 4 درجة مئوية. إعداد 0.3 M حمض الأكساليك محلول مائي ويبقيه في حمام الثلج. تأخذ كوب 500 مل، إضافة شريط محرض مغناطيسية.
    2. نقل حمض الأكساليك 0.3 M للكأس 500 مل، وثم وضع قضيب طويل البلاتين 10 سم كاثود في الحل. الحفاظ على إثارة (في 300 لفة في الدقيقة) حمض الأكساليك طوال عملية أنوديزيشن.
    3. قم بتشغيل مختبر برمجيات التتبع، انقر فوق الزر "إعداد" ثم "يعمل خيار اكتساح الجهد." تعيين البدء وإيقاف الجهد إلى 25.8 الخامس، عدد من النقاط إلى 100، الامتثال إلى 1، واكتساح التأخير لمرض التصلب العصبي المتعدد 1,200 وانقر فوق "موافق".
    4. المشبك الجانب الزجاج المغلفة بالألومنيوم التي تواجه نحو الكاثود. انقر فوق الزر "تشغيل اختبار". مراقبة القياس الحالي (mA ~ 8-10).
    5. بعد أنوديزيشن السطحية، غسل الشريحة جيدا بالماء المقطر مزدوجة وتطهير الجافة مع غاز النيتروجين وتخزينها ثم في دائرة رطوبة النسبية 30% حتى استخدامها مرة أخرى.
  3. تصنيع ACG جليكان ميكرواري 22
    1. إعداد 100 ميليلتر من جميع جليكانس الفموي الأحادي التكافؤ (I-حادي عشر) في الإثيلين غليكول 10 ملم تركيز منفردة.
    2. تمييع جليكان أعلاه مع المخزن المؤقت للطباعة (80% جليكول و 20% الماء المتأين دي) لجعل 100 ميكرومتر تركيز.
    3. ليجند المتغايرة الدراسة، إعداد 5 ميليلتر من جليكانس الفردية وأنا إلى الحادي عشر، وإلى كل إضافة 5 ميليلتر من الرجل5جلكناك2 (نسبة 1:1).
    4. [ميكروارس] الطباعة قبل الروبوتية دبوس (انظر الجدول للمواد) بترسب 0.6 nL جليكانس المجهز سابقا على ACG الشرائح31.
    5. تخزين الشرائح المطبوعة في مربع جافة رطوبة تسيطر قبل الفحص ملزمة.
  4. تعيين [ابيتوبس] جليكان من فيروس نقص المناعة البشرية-1 على نطاق واسع من تحييد الأجسام المضادة PG9 22
    1. إعداد 1 مل جيش صرب البوسنة الواردة ببست المخزن المؤقت، 3% w/v.
    2. إعداد ميليلتر 70 من PG9 (50 ميكروغرام/مل) في المخزن المؤقت ببست (جيش صرب البوسنة الواردة ببست المخزن المؤقت، 3% w/v).
    3. إعداد ميليلتر 120 من جسم علامة نيون الثانوية حمار الإنسان المضادة "مفتش" (أليكسا فلور 647 مترافق) 50 ميكروغرام/مل في ببست المخزن المؤقت (جيش صرب البوسنة الواردة ببست المخزن المؤقت، 3% w/v) في الظلام.
    4. مزيج جسم الأولية (PG9) وجسم علامة نيون الثانوي بنسبة 1:1 (60 ميليلتر في كل). احتضان خلط الأجسام المضادة لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
    5. تحميل الشريحة ACG إلى غرفة الحضانة الشريحة التي تنقسم إلى 16 بئرا. نقل 100 ميليلتر من خلط الأجسام المضادة إلى الصفيف جليكان واحتضان في 4 درجات مئوية عن ح 16.
    6. بيبيت من خلط الأجسام المضادة. إزالة غرفة الحضانة الشريحة.
    7. تغسل الشريحة الأولى في ببست المخزن المؤقت (PBS و 0.05% توين-20)، متبوعاً بالماء المتأين الشطب وتدور الجافة في 2,000 س ز.
    8. فتح برنامج تحليل الصورة ميكرواري (انظر الجدول للمواد). قم بإدراج شريحة مع ميزات أراييد إلى الأسفل.
    9. انقر فوق القائمة "إعدادات"، وتعيين دقة الصورة إلى 5 ميكرومتر كل بكسل، والطول الموجي في 635 نانومتر مع PMT450 والطاقة إلى 100%.
    10. انقر فوق الزر "مسح" لبدء التصوير في الشريحة.
    11. انقر فوق رمز "ملف" لحفظ الصورة مسح تنسيق tif.
    12. إجراء تحليل للصورة باتباع دليل المستخدم البرنامج32.
    13. حساب مجموع شدة الأسفار وتوضيح استخدام البرمجيات33 ومعالجة الصور (انظر الجدول للمواد).
      ملاحظة: هنا، يعرض خطأ متوسط النسبة المئوية لكافة نقاط البيانات حسب مجالات الخطأ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد في الشكل 1استراتيجية العلاج الكيماوي الانزيمية وحدات لتركيب مجموعة واسعة من N-جليكانس. الاستراتيجية تستند إلى حقيقة أن التنوع يمكن أن تنشأ في بداية بتوليف الكيماوي الانزيمية الوحدات الهامة الثلاث، تليها مانوسيليشن α-محددة في 3-س 6 و/أوO موقف بقايا يطلق المشتركة تريساكتشاريدي الأساسية من N-جليكانس. وبالنظر إلى تنوع الهيكلية ثنائي-ثلاثي وهياكل-جليكان نوع معقد تترا أنتيناري ن، اعتقدنا أن استخدام مجموعة من المانحي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فئة من بنابس فيروس نقص المناعة البشرية-1 بما في ذلك PG9، PG16، و 128 بجتس، 141-145 أفيد بأن تكون قوية للغاية في تحييد 70-80% من تعميم يعزل فيروس نقص المناعة البشرية-1. [ابيتوبس] من هذه بنابس هي المحافظة عاليا بين متغيرات المجموعة بأكملها فيروس نقص المناعة البشرية-1 م، ذلك أنها قد دليل تصميم إيمونوجين فعالية لقاح لفيروس نقص المناعة البشرية للحصول على تحييد الأجسام المضادة23،24،25 . كجزء من جهودنا المستمرة للتعرف جليكان [ابيتوبس] ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون رقيقة شعبة تكنولوجيا السينما ومركز بحوث التكنولوجيا أداة (إيترك) وتطبيق بحوث المختبرات الوطنية، حديقة العلوم هسينشو، تايوان. هذا العمل كان يدعمه "المجلس الوطني للعلوم" (منحة لا. معظم الوثيقة 105-0210-01-13-01) وسينيكا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حمض الخليكسيجما ألدريتش64197
أسيتونيتريلسيجما ألدريتش75058
أنهيدريد الخليكسيجما ألدريتش108247
كبريتات المغنيسيوم اللامائيةسيجما ألدريتش7487889
البورون ثلاثي فلوريد إيثيل إيثراتسيجما ألدريتش109637
ألبومين مصل الأبقارسيجما ألدريتش9048468
Bio-Gel P2 بولي أكريلاميدبيوراد 1504118
مكرر (سيكلوبنتادينيل) هافنيوم (IV) ثنائي كلوريدسيجما ألدريتش12116664
بيتا ؛ -1 ، 4 ترانسفيرازيل Galactosyl من حليب الأبقارSigma Aldrich48279
تقنية BioDot Cartesion مع دبوس آلي SMP3 (دبابيس اكتشاف دقيقة الشبح)Arrayit
السيريوم الأمونيوم موليبداتTCIC1794
نترات الأمونيوم السيريومسيجما ألدريتش16774213
شريحة زجاجية نظيفة   ؛Schott 
Cytidine-5 & prime ؛ -monophospho-N-acetylneuraminic acidSigma Aldrich3063716
الكلوروفورم المنزوعSigma Aldrich865496
الحمار IgG المضاد للإنسان (Alexa Fluor647 المترافقJackson Immuno Research ، الولايات المتحدةالأمريكية 709605098
ثنائي كلورو الميثانSigma Aldrich75092
ثنائي إيثيل أمينو كبريت ثلاثي فلوريدسيجما ألدريتش38078090
ثنائي ميثيل فورماميدسيجما ألدريتش68122
أسيتات الإيثيلسيجما ألدريتش141786
حضانة الشرائح
ملح ثنائي الصوديوم ديفوسفو-ب-L-fucose سيجما ألدريتش15839700
مختبر التتبع 2.0 البرمجيات القسم 4 من بروتوكول
قارئ GenePix Pro 4300A (تحليل صور المصفوفات الدقيقة)الجزيئية
برنامج GraphPad Prism (معالجة الصور) GraphPadSoftware، Inchttp://www.graphpad.com/guides/prism/6/user-guide/
هيدروكسيد الليثيومسيجما ألدريتش1310652
كلوريد المنغنيزسيجما ألدريتش7773015
الميثانولسيجما ألدريتش67561
N-بوتانولسيجما ألدريتش71363
حمض الأكساليكأكروس 144627
هيدروكسيد البلاديومسيجما ألدريتش12135227
فوسفات مخزن محلولملحي حراري فيشر علمي   ؛10010023
بيريدينسيجما ألدريتش110861
بي تولوين حمض السلفونيك أحادي الهيدراتسيجما ألدريتش773476
الفضة تريفلاتسيجما ألدريتش2923286
بيكربونات الصوديومسيجما ألدريتش144558
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتش7647145
الصوديوم كربونات الهيدروجينسيجما ألدريتش144558
ميثوكسيد الصوديوم   ؛سيجما ألدريتش124414
كبريتات الصوديومسيجما ألدريتش7757826
تولوين سيجما ألدريتش108883
تريس عازلة AmrescoN / Aدرجة فائقة
Tween-20Amresco9005645
يوريدين ثنائي فوسفات الجالاكتوز (UDP-galactose)سيجما ألدريتش137868521
غرف العضوية 107211 FAST الإطار سيجما ألدريتش جوانوزين 5 '-الأجهزة www.moleculardevices.comعضوي النقاء

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kim, P. J., Lee, D. Y., Jeong, H. Centralized modularity of N-linked glycosylation pathways in mammalian cells. PloS one. 4, e7317(2009).
  2. Townsley, S., Li, Y., Kozyrev, Y., Cleveland, B., Hu, S. L. Conserved Role of an N-Linked Glycan on the Surface Antigen of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Modulating Virus Sensitivity to Broadly Neutralizing Antibodies Against the Receptor and Coreceptor Binding Sites. J.virol. 90, 829-841 (2015).
  3. Wang, Z., et al. A General Strategy for the Chemoenzymatic Synthesis of Asymmetrically Branched N-Glycans. Science. 341, 379-383 (2013).
  4. Li, L., et al. Efficient Chemoenzymatic Synthesis of an N-glycan Isomer Library. Chem Sci. 6, 5652-5661 (2015).
  5. Pritchard, L. K., Harvey, D. J., Bonomelli, C., Crispin, M., Doores, K. J. Cell- and Protein-Directed Glycosylation of Native Cleaved HIV-1 Envelope. J.Virol. 89, 8932-8944 (2015).
  6. Behrens, A. J., et al. Composition and Antigenic Effects of Individual Glycan Sites of a Trimeric HIV-1 Envelope Glycoprotein. Cell Rep. 14, 2695-2706 (2016).
  7. Barouch, D. H. Challenges in the development of an HIV-1 vaccine. Nature. 455, 613-619 (2008).
  8. Horiya, S., MacPherson, I. S., Krauss, I. J. Recent Strategies Targeting HIV Glycans in Vaccine Design. Nat Chem Bio. 10, 990-999 (2014).
  9. Wang, L. X. Synthetic carbohydrate Antigens for HIV Vaccine Design. Curr Opin Chem Biol. 17, 997-1005 (2013).
  10. Tian, J., et al. Effect of Glycosylation on an Immunodominant Region in the V1V2 Variable Domain of the HIV-1 Envelope gp120 Protein. PLoS Comput Biol. 12, e1005094(2016).
  11. Geyer, H., Holschbach, C., Hunsmann, G., Schneider, J. Carbohydrates of human Immunodeficiency Virus. Structures of Oligosaccharides Linked to the Envelope Glycoprotein 120. The J Bio Chem. 263, 11760-11767 (1988).
  12. Lee, J. H., Ozorowski, G., Ward, A. B. Cryo-EM Structure of A Native, Fully Glycosylated, Cleaved HIV-1 Envelope Trimer. Science. 351, 1043-1048 (2016).
  13. Lonardi, E., Balog, C. I., Deelder, A. M., Wuhrer, M. Natural GlycanMicroarrays. Expert Rev Proteomics. 7, 761-774 (2010).
  14. Paulson, J. C., Blixt, O., Collins, B. E. Sweet Spots in Functional Glycomics. Nat. Chem. Bio. 2, 238-248 (2006).
  15. Dotsey, E. Y., et al. A High Throughput Protein Microarray Approach to Classify HIV Monoclonal Antibodies and Variant Antigens. PLoS One. 10, e0125581(2015).
  16. Wu, C. Y., Liang, P. H., Wong, C. H. New Development of Glycan Arrays. Org Biomol Chem. 7, 2247-2254 (2009).
  17. Scurr, D. J., et al. Surface Characterization of Carbohydrate Microarrays. Langmuir. 26, 17143-17155 (2010).
  18. Blixt, O., et al. Printed Covalent Glycan Array for Ligand Profiling of Diverse Glycan Binding Proteins. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 17033-17038 (2004).
  19. Chang, S. H., et al. Glycan Array on Aluminum Oxide-Coated Glass Slides Through Phosphonate Chemistry. J. Am. Chem. Soc. 132, 13371-13380 (2010).
  20. Tseng, S. Y., et al. Preparation of Aluminum Oxide-Coated Glass Slides for Glycan Microarrays. ACS Omega. 1, 773-783 (2016).
  21. Shivatare, S. S., et al. Efficient Convergent Synthesis of Bi-, Tri-, and Tetra-Antennary Complex Type N-Glycans and Their HIV-1 Antigenicity. J. Am. Chem. Soc. 135, 15382-15391 (2013).
  22. Shivatare, S. S., et al. Modular synthesis of N-Glycans and Arrays for the Hetero-Ligand Binding Analysis of HIV Antibodies. Nat Chem. 8, 338-346 (2016).
  23. McLellan, J. S., et al. Structure of Hiv-1 gp120 V1/V2 Domain with Broadly Neutralizing Antibody PG9. Nature. 480, 336-343 (2011).
  24. Julien, J. P., et al. Asymmetric Recognition of the HIV-1 Trimer by Broadly Neutralizing Antibody PG9. Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 4351-4356 (2013).
  25. Willis, J. R., et al. Long Antibody HCDR3s from HIV-Native Donors Presented on a PG9 Neutralizing Antibody Background Mediate HIV Neutralization. Proc Natl Acad Sci U S A. 113, 4446-4451 (2016).
  26. JoVE Science Education Database. Essentials of Organic Chemistry. Performing 1D Thin Layer Chromatography. JoVE. , Cambridge, MA. (2017).
  27. de Castro, M. D., et al. A useful approach to the automation of analytical processes? J Automat Chem. 12, 267-279 (1990).
  28. JoVE Science Education Database. Essentials of Organic Chemistry. Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Spectroscopy. JoVE. , Cambridge, MA. (2017).
  29. JoVE Science Education Database. Essentials of Analytical Chemistry. Introduction to Mass Spectrometry. JoVE. , Cambridge, MA. (2017).
  30. Tseng, S. Y., et al. Preparation of Aluminum Oxide-Coated Glass Slides for Glycan Microarrays. ACS Omega. 1 (5), 773-783 (2016).
  31. Blixt, O., et al. Printed covalent glycan array for ligand profiling of diverse glycan binding proteins. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 17033-17038 (2004).
  32. GenePix Pro 6.0 Microarray Acquisition and Analysis Software for GenePix Microarray Scanners User’s Guide & Tutorial. , Axon Instruments/ Molecular Devices Corp. Sunnyvale, CA. (2017).
  33. GraphPad Prism version 6.01 for Windows. GraphPad Software. , La Jolla California USA. Available from: http://www.graphpad.com/guides/prism/6/user-guide/ (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

N glycan ArrayGlycan MicroarrayAluminum Oxide GlassHeteroligand BindingPG9 AntibodyMass SpectrometrySurface AnodizationGlycan Synthesis

مقالات ذات صلة