مقالة منهجية

عزل خلايا غشائي السلف من دم الحبل السري البشري

DOI:

10.3791/56021

⸱

سبتمبر 14, 2017

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Arkansas

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والهدف من هذا البروتوكول عزل السلف غشائي الخلايا من دم الحبل السري. وتشمل بعض التطبيقات باستخدام هذه الخلايا كالعلامات البيولوجية لتحديد المرضى مع مخاطر القلب والأوعية الدموية، علاج الأمراض الدماغية، وخلق صمام الأوعية الدموية والقلب هندسة الأنسجة بنيات.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وذكرت عشارة والزملاء1أولاً وجود خلايا السلف غشائي (ابكس) في الدم المحيطي ومشاركته في فاسكولوجينيسيس. في وقت لاحق، آخرون توثيق وجود أنواع مماثلة من ابكس التي تنشأ من نخاع العظام2،3. في الآونة الأخيرة، كان يودر وانجرام أظهرت أن ابكس المستمدة من دم الحبل السري احتمال التكاثري أعلى مقارنة بتلك المعزولة من الكبار الطرفية الدم4،،من56. وبصرف النظر عن تورطه في فاسكولوجينيسيس بعد الولادة، كما أظهرت ابكس الوعد كمصدر خلية لإنشاء هندسة الأنسجة والأوعية الدموية والقلب صمام بنيات7،8. مختلف عزل البروتوكولات موجودة، التي تنطوي على الفرز خلية من الخلايا وحيدات النوى (الشركات المتعددة الجنسيات) المستمدة من المصادر المذكورة آنفا مع مساعدة علامات بطانية والمكونة للدم، أو استزراع هذه الشركات المتعددة الجنسيات مع نمو غشائي المتخصصة المتوسطة، أو مزيج من هذه الأساليب9. هنا، نقدم بروتوكولا للعزلة وثقافة ابكس استخدام المتخصصة غشائي المتوسطة وتستكمل مع عوامل النمو، دون استخدام إيمونوسورتينج، متبوعاً بتوصيف الخلايا المعزولة باستخدام النشاف الغربية و إيمونوستينينج.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لقد درسنا العديد من المحققين بخصائص وإمكانيات بشرية ابكس5،،من1011،،من1213. يمكن وصف ابكس كتعميم الخلايا التي لها القدرة على التمسك بالانسجة غشائي في مواقع من نقص، الاسكيمية، والإصابة، أو تشكيل الورم وتسهم في تشكيل هياكل الأوعية الدموية الجديدة4،14. مشاركتها الملحوظة في نيوفاسكولاريزيشن، في شكل فاسكولوجينيسيس بعد الولادة، وقد أدى إلى فهم الفسيولوجيا المرضية لهذه الخلايا واستخدامها في تطبيقات علاجية4،15، 16. قد تبين عدد ابكس في فرد إلى الارتباط مع أمراض القلب والأوعية الدموية9،،من1516،،من1718،19 ،20. أيضا دراسات أخرى متباينة ابكس في النمط الظاهري تنتجها الخلايا الليفية مثل صمام واقترح أنه يمكن استخدام هذه الخلايا لصمامات القلب هندسة الأنسجة7،21.

لم يتم تحديد خلية معينة الجزيئات السطحية اللازمة لعزل ابكس الواضح بسبب التباين بين التحقيقات4. انضمام الشركات المتعددة الجنسيات إلى مصفوفة معينة، مع التعرض لمجموعة متنوعة من شروط الثقافة، قامت به عدة مجموعات1،17،22،23، مما يوحي بأنه قد ابكس المفترضة عرض خصائص المظهرية مختلفة. هذه الخصائص تشمل الافتقار إلى القدرة فاجوسيتوتيك وتشكيل أنبوب في ماتريجيل، وامتصاص البروتينات الدهنية لوودينسيتي أسيتيلاتيد ديل. كلونوجينيك عالية وإمكانات التكاثري هي اثنين من الخصائص مع ابكس الذي يمكن أن يكون كهنوت5. يمكن أيضا أن تشكل ابكس في المختبر الأنابيب عند كوكولتوريد مع الرئة الجنين البشري الليفية4. تعرف هذه الخلايا للتعبير عن علامات خلية غشائي السطحية وأن أشاطركم بعض علامات المكونة للدم13،،من2425. هي علامات إيجابية أعرب تكون مقبولة على نطاق واسع ابكس فينوتيبينج CD31، CD34، مستقبلات عامل نمو غشائي الأوعية الدموية 2 (VEGFR2)، فون ويليبراند عامل (فوف)، CD133، كادهيرين بطانية ج-كيت، والأوعية الدموية (VE-كادهيرين)4 , 18-الخلايا التي شاركت إكسبريس CD90، CD45، CD14، CD115، أو أكتين العضلات الملساء ألفا (α-SMA) لا تعتبر أن ابكس بسبب قدرتها المحتملة، التكاثري محدودة phagocytose البكتيريا، وعدم القدرة على تشكيل حيثياته البشرية سفن في فيفو4،7. توضح هذه المقالة بروتوكول تعديل لعزل خلايا غشائي السلف من دم الحبل السري البشري دون الحاجة إلى أية خلية الفرز البروتوكولات. لهذه المادة، كنا CD31، CD34، و VEGFR2 كعلامات إيجابية، مع α-SMA كمؤشر سلبي.

في هذا المقال، فإننا نقترح طريقة لعزل واستزراع خلايا غشائي السلف من دم الحبل السري دون الفرز باستخدام الخلية المتخصصة المتوسطة النمو بطانية وتستكمل مع عوامل النمو (اجتماع فريق الخبراء). اجتماع فريق الخبراء هذا يحتوي على عامل نمو الأوعية الدموية غشائي (VEGF) وعامل النمو تنتجها الخلايا الليفية (صندوق الأجيال القادمة)، الذي تعزز البقاء على قيد الحياة وانتشار الهجرة من الخلايا البطانية26. ويشمل أيضا حمض الأسكوربيك، ومسؤول عن الحفاظ على مورفولوجية حصاة كبيرة من الخلايا؛ يشبه الأنسولين عامل النمو-1 (منتدى إدارة الإنترنت-1)، التي تنص على الأوعية والدالة المهاجرة؛ والهيبارين، مما يسبب تحسن الاستقرار الطويل الأمد لعوامل النمو في المتوسط26. عوامل نمو أخرى إضافة إلى متوسط الثقافة غشائي خلية تتضمن مكملات مع عامل نمو البشرة (لو)، مما يساعد في تحفيز تكاثر الخلايا والتمايز الهيدروكورتيزون، الذي محسس الخلايا إلى لو26 . ونحن تبين أن استخدام هذه الوسيلة نمو محددة تعطي أرقام أعلى من ابكس مقارنة بمتوسط القاعدية غشائي (EBM) أو تعديل النسر المتوسطة (دميم دولبيكو).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البحث أجرى على موافقة من جامعة "أركنسو مجلس المراجعة المؤسسية" (الموافقة رقم 16-04-722). وجمعت وحدات دم الحبل السري في سترات الفوسفات الدكستروز (وثيقة البرنامج القطري) الحل في "بنك الدم الحبل أركنسو"، والوحدات التي لا تفي بالحاجة إلى تخزين تم التبرع بها للبحث. كانت وحدات دم الحبل السري المهربة إلى المختبر خلال 24 ساعة جمع في درجات الحرارة المحيطة.

1-"عزل خلايا السلف بطانية" من "دم الحبل السري"

  1. إعداد الكواشف.
    1. و "إعداد اجتماع فريق الخبراء" عن طريق إضافة متوسطة القاعدية غشائي (EBM) إلى 10% مصل بقرى الجنين (FBS) تستكمل مع 20 نانوغرام/مليلتر من مثل الأنسولين عامل النمو (IGF)، وحمض الأسكوربيك ميكروغرام/ملليلتر 1، 5 نانوغرام/مليلتر الماشوب البشري البشرة عامل النمو (رهيجف)، 22.5 ميكروغرام/مل الهيبارين، و 0.5 نانوغرام/مليلتر الأوعية الدموية غشائي عامل النمو (VEGF)، جنبا إلى جنب مع 10 نانوغرام/مليلتر عامل النمو تنتجها الخلايا الليفية البشرية المؤتلف ب (رهفجف-B) و 0.2 ميكروغرام/مل الهيدروكورتيزون 2% البنسلين والستربتوميسين-الجلوتامين. تعقيم المتوسطة الثقافة باستخدام مرشح فراغ غشاء بولييثيرسولفوني (PES) 0.2 ميكرون.
    2. إعداد الفئران الذيل أنا الحل الكولاجين بتركيز 50 ميكروغرام/مل باستخدام حمض الخليك N 0.02. تعقيم هذا الحل باستخدام عامل تصفية حقنه 0.2 ميكرون.
      3. لوحات
    3. معطف قبل 6-جيدا مع 2 مل الفئران استعداد الذيل أنا الكولاجين الحل لكل بئر. مكان لهم في حاضنة الإبقاء على 5% CO 2 و 37 درجة مئوية على الأقل 1 ح قبل البذر.
    4. تمييع حوالي 25 مل دم الحبل السري مع هانكس متوازن الملح الحل (هبس) بتركيز 1:1.
    5. تحضير الإذاعة-المناعية هطول الأمطار الاعتداء المخزن المؤقت (RIPA) باستخدام كلوريد الصوديوم 150 مم 1% X-100 تريتون، ديوكسيتشولاتي الصوديوم 0.5%، 1 مم β-جليسيروفوسفاتي، والحزب الديمقراطي الصربي 0.1% و 50 مم تريس (pH 8.0).
  2. عزل الخلايا السلف غشائي.
    1. كل الحارة إعداد الكواشف في حمام مائي الإبقاء على 37 درجة مئوية قبل عزلة.
    2. إضافة 20 مل كاشف كثافة متوسطة الانحدار إلى أنبوب الطرد مركزي 50 مل.
    3. بعناية الطبقة 20 مل دم الحبل السري المخفف في أنبوب الطرد المركزي الذي يحتوي على كثافة متوسطة متدرجة دون كسر هذه الطبقة بهدف الماصة نحو الجدران الجانبية للأنبوب.
    4. فصل مكونات الدم استناداً إلى هذه الكثافة ( الشكل 1) التي سينتريفوجينج في 800 x ز لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع الفرامل للدوار للطرد المركزي قبالة. عدم الإزعاج من طبقات مختلفة-
    5. إزالة طبقة البلازما بعناية بيبيتينج الخروج من الأنبوب دون الإخلال بخلية أخرى طبقة طبقات حتى طرف الماصة قادرة على الوصول إلى الحركة الوطنية الكوبية (انظر الشكل 1). تجاهل إزالة البلازما.
      ملاحظة: أثناء استخدام ماصة نصائح لإزالة البلازما، ترك طبقة صغيرة من البلازما فوق طبقة الشركات متعددة الجنسيات ( الشكل 1) لتقليل الاضطرابات.
    6. معطف بافي يحتوي على الشركات المتعددة الجنسيات باستخدام حقنه مزودة بإبرة عيار 18 جمع وتحويلها إلى أنبوب جديد للطرد مركزي.
    7. إضافة وحدة تخزين متساوية من EBM إلى جمعها النابذة الشركات المتعددة الجنسيات. هذه الأنابيب في ز 500 x لمدة 10 دقائق في 4 ° جيم تجاهل المادة طافية.
      ملاحظة: بيليه الخلية سوف تظهر باللون الأحمر بسبب وجود خلايا الدم الحمراء/الكريات الحمراء.
      8. إضافة
    8. 5 مل من محلول كلوريد الأمونيوم خلايا الدم الحمراء. احتضان هذا الأنبوب على الجليد مدة 5-10 دقيقة، مع الهز عرضية.
      ملاحظة: يجب توخي الحذر أثناء القيام بهذه الخطوة لا تتجاوز الفترة الزمنية، كما أنها يمكن أن تكون ضارة للشركات المتعددة الجنسيات-
    9. الطرد المركزي هذه الأنابيب في 500 غرام x لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية، وتجاهل المادة طافية. إذا استمرت الكريات الحمراء، كرر الخطوات 1.2.8 و 1.2.9 حتى يتم ملاحظة لا اللون الأحمر في بيليه.
    10. ريسوسبيند بيليه في EGM المعدة واستخدام هيموسيتوميتير الاعتماد الشركات المتعددة الجنسيات-
    11. Aspirate الفئران الذيل أنا المغلفة بالكولاجين لوحة 6-جيدا (من الخطوة 1.1.3) وغسل الآبار ثلاث مرات مع 1 × مخزنة الفوسفات المالحة (PBS).
    12. البذور بيليه الشركات متعددة الجنسيات حراكه في اجتماع فريق الخبراء للوحة الكولاجين بتركيز 1 × 10 7 الشركات المتعددة الجنسيات في كل بئر. ضعه في 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة.
      13. نضح المتوسطة
    13. بعد 24 ساعة، وغسل الآبار مرة واحدة مع اجتماع فريق الخبراء. أضف 3 مل من EGM المتوسطة لكل بئر ووضعه مرة أخرى في 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة.
    14. تجديد اللوحة مع الطازجة EGM المتوسطة كل يوم لمدة 7 أيام. بعد 7 أيام، تغيير المتوسطة EGM يوميا.
    15. استخدام مجهر الحقل مشرق، التقاط صور للوحة 6-جيدا كل يوم لتتبع تقدم مستعمرات الخلايا البطانية. وضع علامة على اللوحة التي تنشأ فيها المستعمرات لتعقب نموها.
      ملاحظة: يستغرق عادة ما بين 5 و 9 أيام للمستعمرات تظهر في الثقافة-
  3. توسيع نطاق خلايا السلف غشائي.
    1. معطف قارورة الثقافة T-25 مع الفئران الذيل أنا الكولاجين (50 ميكروغرام/مل) ووضعه في 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة لمالا يقل عن 60 دقيقة أسبيراتي وتغسل قارورة ثقافة الخليوي T-25 ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x قبل البذر الخلايا.
    2. تريبسينيزي مستعمرات الخلايا البطانية عندما تصل إلى حوالي 3 ملم في الحجم باستخدام 150 ميليلتر من حل يدتا التربسين 0.05% في كل بئر. ضع لوحة 6-جيدا مرة أخرى إلى 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة للحد الأدنى 2-3
    3. اضغط برفق لوحة 6-جيدا لإزاحة الخلايا المرفقة. إضافة 2 مل EGM فورا واستعادة الخلايا في أنبوب الطرد مركزي 15 مل.
    4. عد الخلايا باستخدام هيموسيتوميتير وحساب كثافة البذر الأولية.
      5. أنابيب
    5. تدور النابذة 15 مل في 400 غرام x للحد الأدنى 5 ريسوسبيند بيليه الخلية في اجتماع فريق الخبراء، والبذور قارورة T-25 مع خلايا ~ 500,000. مارك هذا قارورة كمرور 1 ووضع قارورة T-25 مرة أخرى في 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة.
      ملاحظة: يمكن مطلي الخلايا في EBM ودميم مقارنة النمو مع EGM.
    6. لمزيد من الممرات، عندما يصل قارورة التقاء 90%، اتبع الخطوات 1.3.1-1.3.5 وريسيد الخلايا في 10 4 خلايا/سم 2 في قوارير الثقافة خلية T-75 أو T-175. انتقل إلى وصف الخلايا المعزولة (الخطوات 2 و 3)-

2. توصيف "عزل الخلايا باستخدام الغربية النشاف"

  1. إضافة 50-100 ميليلتر من تحلل المخزن المؤقت في كل مرور عند اتباع الخطوات التوسع لتمييز الخلايا المعزولة. تجميع البروتينات من الخلايا تقريبا 500,000 أو أكثر.
  2. "الماصة؛" صعودا وهبوطاً بنشاط لتمزق الخلايا والإفراج عن البروتينات. جمع ونقل المخزن المؤقت إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي.
    3. تدور أنبوب ميكروسينتريفوجي في 500 x ز
  3. ونقل المادة طافية بعناية إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي جديدة. التسمية وتخزين الأنابيب في-80 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل.
  4. تحديد مقدار البروتينات في كل أنبوبة باستخدام أما برادفورد ' s أو اتفاق التعاون الأساسي الاعتداء 27 ، ، من 28 29-
  5. القيام بالغربية النشاف باستخدام إجراءات معيارية 27 ، ، من 28 29. تحليل 5 ميكروغرام من البروتين الكلي للتعبير عن CD31، CD34، VEGFR2، و α-SMA. استخدام α-tubulin لتطبيع البيانات.

3. الفلورة غير المباشرة

  1. Sonicate كوفيرسليبس الزجاج 18 ملم في الإيثانول 50% وتجفيفها. ترك كوفيرسليبس نظيفة في صفيحة 12-جيدا بين عشية وضحاها في هود السلامة الأحيائية مع الأشعة فوق البنفسجية الخفيفة في تعقيم لهم.
    2. معطف
  2. كوفيرسليبس مع 50 & #181؛ غ/مل من الفئران الذيل أنا الكولاجين ونقل اللوحة إلى 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة لمالا يقل عن 60 دقيقة
  3. اعقلوها الكولاجين وإضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني 1 x إلى لوحة 12-جيدا أن يغسل في كوفيرسليبس. نضح PBS 1 x وكرر مرتين.
  4. 250,000 البذور المستزرعة ابكس في كل بئر ومكان مرة أخرى في 37 درجة مئوية، 5% CO 2 حاضنة لمدة 3 أيام على الأقل قبل تنفيذ إيمونوستينينج-
    5. أغسل
  5. لوحة 3 مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x. أضف 1 مل ميثانول المثلج لكل بئر واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة إصلاح الخلايا.
  6. الاضطلاع إيمونوستينينج استخدام بروتوكول قياسي 27 ، ، من 28 29. استخدام الأجسام المضادة في تخفيف تلك المناسبة (مثلاً، CD31 (01:20)، CD34 (01:50)، α-SMA (1: 100)، و VEGFR2 (01:50))-
  7. التقاط صور كوفيرسليبس إيمونوستينيد استخدام مجهر ابيفلوريسسينسي-

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العزلة والتوسع في السلف غشائي الخلايا:
ويرد تخطيطي (الشكل 1) يصور البروتوكول عموما. طبقات مكونات الدم المختلفة لوحظت عقب كثافة الطرد المركزي التدرج من دم الحبل السري البشري مع المتوسطة الكثافة المتدرجة. عند البذر الشركات المتعددة الجنسيات على لوحات المعالجة بالكولاجين، لوحظ ثمرة المستعمرات أولاً بين 5 أيام و 7 (الشكل 2أ). هذه المستعمرات استمرت في النمو، وكان خلية على شكل شوكي مورفولوجيا (

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كما ذكر آنفا، تمتلك ملتصقة ابكس مورفولوجيا حصاة كبيرة. تقدم لدينا الشركات المتعددة الجنسيات معزولة من مستعمرة خلية على شكل محور الدوران (الشكل 2أ-2D) في المراحل الأولى إلى مستعمرة حصاة كبيرة (الشكل 2ه-2F) على مدى فترة مدتها عشرة أيام في الثقافة. ابكس قد وصفت بشكل مختلف من مجموعات بحثية مختلفة، أي كالراحل السلف غشائي الخلايا10، مستعمرة غشائي تشكيل خلايا5، أو السلف غشائي الخلايا

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه المواد ويستند إلى العمل المدعوم من "المؤسسة الوطنية للعلوم" تحت "رقم المنحة" CMMI 1452943 وكلية يكرم جامعة اركنساس. ونود أيضا أن نعترف "بنك الدم الحبل أركنسو" لتزويدنا بوحدات دم الحبل السري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>أ) للعزل والاستزراع < / قوي >
EGM-2 BulletKitLonzaCC-3162يأتي هذا المنتج مع جميع عوامل النمو اللازمة لصنع Endothelial Growth Medium
Fetal Bovine SerumThermofisher Scientific26140079
Pencillin-Streptomycin-Glutamine (100x)Thermofisher Scientific10378016
Ficoll-PaqueGE Heatlhcare17-1440-02
الملح المتوازن من هانكThermofisher Scientific14170-112
تقنيات الخلايا الجذعيةلكلوريد الأمونيوم7850
1x عازلة الفوسفاتملحي Thermofisher Scientific14190250
ذيل الفئران I الكولاجينCorning354236
حمض الخليك الجليديأمريسكو0714-500 مل
0.05٪ تريبسين-EDTAثيرموفيشر علمي25300054
عازلة HEPESThermofisher Scientific15630080
Dulbecco's Modified Eagle'sThermofisher ScientificScientific 10566-016
B) الأجسام المضادة ومحللات الخلايا < / قوية>
CD31 Abcamab283641:250 التخفيف   للنشاف الغربي
CD34سانتا كروز التكنولوجيا الحيويةsc-70451:100 التخفيف للنشاف الغربي
&alpha ;-SMAabcamab56941:100 التخفيف للنشاف الغربي
& -tubulinabcamab72911: 2,500 التخفيف للنشاف الغربي
VEGFR2abcamsc5041: 100 تخفيف للنشاف الغربي
الوريد السري البشري للخلايا البطانية سانتاكروز التكنولوجيا الحيويةsc24709   ؛
الخلايا الخلالية للصمامخط الخلايا الأولية المزروعة من المختبر الخاص وتحللها باستخدام RIPA buffer
C) النشاف الغربي والتلوين المناعي < / قوي >
10x Tris / Glycine / SDS عازلةBiorad161-0772تستخدم كمخزن مؤقت
للتشغيل 10x Tris / GlycineBuffer Biorad161-0771تستخدم كمخزن مؤقت للنقل
غشاء نقل Immobilon-FLMerck MilliporeIPFL0010هذا غشاء نقل PVDF يحتوي على 45 & micro ؛ حجم المسام م ومذكور في البروتوكول باسم غشاء اللطخة الغربية
4x عازلة عينة LaemmliBiorad161-0747
2-mercaptoethanolBiorad161-0710
10٪ Criterion TGX جل مسبقة الصبBiorad5671033
إطالة الذهب المضاد للتلاشيThermofisher ScientificP36930يستخدم لتركيب أغطية ملطخة بالمناعة للتخزين طويل الأجل
الميثانولVWR التحليليBDH1135-4LP
محلول محلول محللة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Asahara, T., et al. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275 (5302), 964-967 (1997).
  2. Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J Clin Invest. 105 (1), 71-77 (2000).
  3. Shi, Q., et al. Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells. Blood. 92 (2), 362-367 (1998).
  4. Hirschi, K. K., Ingram, D. A., Yoder, M. C. Assessing identity, phenotype, and fate of endothelial progenitor cells. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (9), 1584-1595 (2008).
  5. Ingram, D. A., et al. Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood. 104 (9), 2752-2760 (2004).
  6. Yoder, M. C., et al. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood. 109 (5), 1801-1809 (2007).
  7. Sales, V. L., et al. Transforming growth factor-beta1 modulates extracellular matrix production, proliferation, and apoptosis of endothelial progenitor cells in tissue-engineering scaffolds. Circulation. 114, 1 Suppl 193-199 (2006).
  8. Sales, V. L., et al. Endothelial Progenitor Cells as a Sole Source for Ex Vivo Seeding of Tissue-Engineered Heart Valves. Tissue Eng Pt A. 16 (1), 257-267 (2010).
  9. Liew, A., Barry, F., O'Brien, T. Endothelial progenitor cells: diagnostic and therapeutic considerations. Bioessays. 28 (3), 261-270 (2006).
  10. Hur, J., et al. Characterization of two types of endothelial progenitor cells and their different contributions to neovasculogenesis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (2), 288-293 (2004).
  11. Ingram, D. A., Caplice, N. M., Yoder, M. C. Unresolved questions, changing definitions, and novel paradigms for defining endothelial progenitor cells. Blood. 106 (5), 1525-1531 (2005).
  12. Melero-Martin, J. M., et al. In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells. Blood. 109 (11), 4761-4768 (2007).
  13. Melero-Martin, J. M., Bischoff, J. Chapter 13. An in vivo experimental model for postnatal vasculogenesis. Methods Enzymol. 445, 303-329 (2008).
  14. Yoder, M. C. Human endothelial progenitor cells. Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (7), 006692(2012).
  15. Siddique, A., Shantsila, E., Lip, G. Y. H., Varma, C. Endothelial progenitor cells: what use for the cardiologist. J Angiogenes Res. 2 (6), (2010).
  16. Camci-Unal, G., et al. Surface-modified hyaluronic acid hydrogels to capture endothelial progenitor cells. Soft Matter. 6 (20), 5120-5126 (2010).
  17. Hill, J. M., et al. Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk. N Engl J Med. 348 (7), 593-600 (2003).
  18. Young, P. P., Vaughan, D. E., Hatzopoulos, A. K. Biologic properties of endothelial progenitor cells and their potential for cell therapy. Prog Cardiovasc Dis. 49 (6), 421-429 (2007).
  19. Mehta, J. L., Szwedo, J. Circulating endothelial progenitor cells, microparticles and vascular disease. J Hypertens. 28 (8), 1611-1613 (2010).
  20. Nevskaya, T., et al. Circulating endothelial progenitor cells in systemic sclerosis are related to impaired angiogenesis and vascular disease manifestations. Ann Rheum Dis. 66, 67-67 (2007).
  21. Cebotari, S., et al. Clinical application of tissue engineered human heart valves using autologous progenitor cells. Circulation. 114, 1 Suppl 132-137 (2006).
  22. Ito, H., et al. Endothelial progenitor cells as putative targets for angiostatin. Cancer Res. 59 (23), 5875-5877 (1999).
  23. Vasa, M., et al. Increase in circulating endothelial progenitor cells by statin therapy in patients with stable coronary artery disease. Circulation. 103 (24), 2885-2890 (2001).
  24. Wu, X., et al. Tissue-engineered microvessels on three-dimensional biodegradable scaffolds using human endothelial progenitor cells. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (2), 480-487 (2004).
  25. Boyer, M., et al. Isolation of endothelial cells and their progenitor cells from human peripheral blood. J Vasc Surg. 31 (1), Pt 1 181-189 (2000).
  26. Huber, B., Czaja, A. M., Kluger, P. J. Influence of epidermal growth factor (EGF) and hydrocortisone on the co-culture of mature adipocytes and endothelial cells for vascularized adipose tissue engineering. Cell Biol Int. 40 (5), 569-578 (2016).
  27. Sturdivant, N. M., Smith, S. G., Ali, S. F., Wolchok, J. C., Balachandran, K. Acetazolamide Mitigates Astrocyte Cellular Edema Following Mild Traumatic Brain Injury. Sci Rep. 6, 33330(2016).
  28. Lam, N. T., Muldoon, T. J., Quinn, K. P., Rajaram, N., Balachandran, K. Valve interstitial cell contractile strength and metabolic state are dependent on its shape. Integr Biol (Camb). 8 (10), 1079-1089 (2016).
  29. Tandon, I., et al. Valve interstitial cell shape modulates cell contractility independent of cell phenotype. J Biomech. 49 (14), 3289-3297 (2016).
  30. Cockshell, M. P., Bonder, C. S. Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells. Bio-Protocol. 6 (7), (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة