Method Article

استخراج عينة والمتزامن كوانتيتيشن الكروماتوغرافي ميتوتريكسات وج ميتوميسين عقب تسليم تركيبة المخدرات في جسيمات نانوية للفئران الحاملة للورم

DOI:

10.3791/56159

⸱

October 5th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmaceutical Sciences, University of Toronto, 2Departments of Medical Biophysics and Radiation Oncology, University of Toronto, Ontario Cancer Institute, University Health Network

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويصف هذا البروتوكول عملية تحليلية فعالة ومريحة لاستخراج عينة والتصميم المتزامن لأدوية متعددة، ميتوتريكسات (دوكس)، ميتوميسين ج (MMC) والمستقلب دوكس سامة القلب، دوكسوروبيسينول (DOXol)، في البيولوجية عينات من طراز ورم الثدي السريري التعامل مع الصياغات نانوحبيبات من تركيبة المخدرات التآزري.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الجمع بين العلاج الكيميائي يستخدم بشكل متكرر في العيادة لعلاج السرطان؛ ومع ذلك، قد تحد من الآثار الضارة المرتبطة بأنسجة طبيعية لها فائدة علاجية. لقد ثبت تركيبة على أساس نانوحبيبات المخدرات للتخفيف من حدة المشاكل التي تواجهها في الجمع بين العلاج بالعقاقير مجاناً. دراساتنا السابقة قد أظهرت أن المزيج من اثنين من العقاقير السرطان، ميتوتريكسات (دوكس) و mitomycin C (MMC)، وأنتج تأثير تآزري ضد كلا الفاري وخلايا سرطان الثدي البشرية في المختبر. تجاوز دوكس و MMC دهن البوليمر المشترك تحميل الهجين جسيمات نانوية (دمبلن) efflux مختلف الناقل المضخات التي تضفي مقاومة عصيات وأظهرت فعالية معززة في نماذج ورم الثدي. بالمقارنة مع أشكال الحلول التقليدية، مثل كفاءة متفوقة دمبلن يعزى إلى الدوائية متزامنة دوكس و MMC والمخدرات داخل الخلايا زيادة التوافر البيولوجي داخل الخلايا السرطانية التي مكنت من nanocarrier زلوتي.

تقييم الدوائية والبيولوجية-توزيع المشترك التي تديرها دوكس و MMC في حل الحرة وأشكال نانوحبيبات، طريقة بسيطة وفعالة لتحليل المخدرات متعددة باستخدام عكس المرحلة عالية الأداء اللوني السائل ([هبلك]) كان البلدان المتقدمة النمو. خلافا لأساليب سبق الإبلاغ عنها تحليل دوكس أو MMC منفردة في البلازما، هذا الأسلوب [هبلك] جديدة قادرة على كوانتيتاتي في نفس الوقت دوكس، MMC والمستقلب رئيسي دوكس سامة القلب، دوكسوروبيسينول (DOXol)، في مصفوفات البيولوجية المختلفة ( مثلاً، الدم كله وورم الثدي والقلب). مزدوج مسبار ماصة الفلورسنت والأشعة فوق البنفسجية. 4-ميثيلومبيليفيروني (4-مو) استخدمت كمعيار داخلي (هو) للكشف عن خطوة واحدة لتحليل المخدرات متعددة مع الكشف عن مختلف الأطوال الموجية. تم بنجاح تطبيق هذا الأسلوب لتحديد تركيزات دوكس و MMC ألقاها النهج نانوحبيبات والحل في كل الدم والأنسجة المختلفة في نموذج مورين ورم الثدي أورثوتوبيك. الطريقة التحليلية المقدمة أداة مفيدة لتحليل ما قبل السريرية للتسليم على أساس نانوحبيبات تركيبات العقاقير.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العلاج الكيميائي طريقة معالجة الأولية للعديد من أنواع السرطان ومع ذلك فإنه كثيرا ما يرتبط مع آثار سلبية شديدة وفعالية محدودة بسبب مقاومة المخدرات وسائر العوامل1،2،3. لتحسين نتائج العلاج الكيميائي، طبقت نظم الجمع بين المخدرات في عيادة استناداً إلى اعتبارات مثل السمية غير متداخلة، آليات مختلفة لعمل المخدرات، والمخدرات غير عبر المقاومة4،5 , 6-في التجارب السريرية، ولوحظ معدل استجابة ورم أفضل كثيرا ما تستخدم في نفس الوقت تدار تركيبات المخدرات مقارنة بنظام متسلسل المخدرات تسليم

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ووافقت "الحيوانات رعاية اللجنة لجامعة الشبكة الصحية" في معهد السرطان أونتاريو جميع التجارب على الحيوانات ثم تجري وفقا "المجلس الكندي للمبادئ التوجيهية لرعاية الحيوان"-

1-"إعداد العينات البيولوجية"

  1. جمع الدم كله، الأجهزة الرئيسية، والثدي ورم في نقاط زمنية محددة سلفا بعد الإدارة في الوريد (رابعا) التي تحتوي على المخدرات تركيبات (مثلاً، دمبلن، دوكس الاسمافرون)
    1. حقن رابعا ماوس الحاملة لورم الثدي بصيغة معدّة التي تحتوي على المخدرات-
    2. تخدير الماوس في نقاط زمنية معينة (مثلاً، 15 دقيقة) بإعطاء هنالك 2% إيسوفلوراني في غرفة مغلقة.
    3. وضع الماوس أنيسثيتيزيد على ظهرها وتضع انفها من ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم الكشف عن المخدرات السرطان اثنين، دوكس و MMC، فضلا عن المستقلب دوكس، DOXol، في نفس الوقت دون أي تدخل البيولوجية بالشرط [هبلك] التدرج تطبق نفس استخدام 4-مو دربهم للأسفار وكاشفات الأشعة فوق البنفسجية على السواء. دوكس، MMC، DOXol و 4-مو كان جيدا المنفصلة عن بعضها البعض مع الاحتفاظ بأوقات دقيقة 5.7 ل MMC، 10.4 دقيقة ل DOXol، 10.9 دقيقة ل 4-مو، ودقيقة 11.1 دوكس (الشكل 2). وأظهر كل دواء في كل الدم والأنسجة المختلفة الخطي تركيز مع معاملات الارتباط (ص

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مقارنة مع أخرى طرق الكروماتوغرافي التي تمكن من الكشف عن نوع واحد من المخدرات في وقت واحد، هذا البروتوكول [هبلك] قادرة على كوانتيتاتي في وقت واحد ثلاثة مجمعات المخدرات (دوكس و MMC و DOXol) في المصفوفة البيولوجية نفسها دون الحاجة إلى تغيير مرحلة الجوال. هذا أسلوب إعداد وتحليل قد طبقت بنجاح لتحديد الدوائية والحيوية-توزيع منظومات إيصال المخدرات على أساس نانوحبيبات اثنين (أي، الاسمافرون دوكس ودمبلن)22. نظراً لجسيمات نانوية سي إطالة الدورة الدموية الجهازية من المخدرات محملة أسفر عن ترك.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب قد لا يوجد تضارب المصالح المالية وتضارب المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب الاعتراف بامتنان منحة معدات من العلوم الطبيعية والبحوث الهندسية (مقدمة) المجلس من كندا [هبلك]، منحة تشغيلية من المعهد الكندي للبحوث الصحية (استوفوا) وأبحاث سرطان الثدي الكندية (كبكر) التحالف إلى وو X.Y.، ومنحة جامعة تورنتو إلى تشانغ R.X. وت. تشانغ.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
دوكسوروبيسين Polymed Theraeutics111023المخدرات المضادة للسرطان
Mitomycin CPolymed Theraeutics060814الدواء المضاد للسرطان
Doxorubicinol (DOXol) TorontoResearch ChemicalsD558020مستقلب ملح الصوديوم DOX
4-Methylumbelliferone   ؛Sigma-AldrichM1508المعيار الداخلي
حمض الميريستيكسيجما-ألدريتش544-63-8   مواد للجسيمات النانوية الهجينة متعددة الدهون
بولي أوكسي إيثيلين (100)طيفM1402مواد للجسيمات النانوية الهجينة متعددة الدهون
البولي أوكسي إيثيلين (40) ستيراتسيجما ألدريتشP3440مواد للجسيمات النانوية الهجينة متعددة الدهون
بلورونيك F68 (PF68)BASF Corp.9003-11-6مواد للجسيمات النانوية الهجينة متعددة الدهون
بالموجات فوق الصوتية (UP100H)Hielscher ، تقنية الموجات فوق الصوتيةNAإعداد الجسيمات النانوية
حمام مائي (ISOTEMP 3016HS)الجسيمات النانويةفيشر Scientific
NA دوكسوروبيسين شحمي   ؛ (كايليكس)Janssenتم شراؤها من صيدلية مستشفى الأميرة مارغريتتركيبة الجسيمات النانوية المعتمدة سريريا  
الميثانولكاليدون للكيماويات6701-7-40HPLC تكوين المرحلة المتنقلة
HPLC الدرجة H2< / sub>< / span>O< / span>Caledon Chemicals8801-7-40HPLC تكوين المرحلة المتنقلة
HPLC Acetonitrile   ؛كاليدون للكيماويات1401-7-40HPLC تكوين المرحلة المتنقلة
حمض ثلاثي فلورو أسيتيكسيجما ألدريتش302031تكوين المرحلة المتنقلة HPLC
0.45 & mu ؛ م نايلون غشاء مرشح ورقةواتمانWHA7404004HPLC إعداد المرحلة المتنقلة
1cc المحاقن البلاستيكيةبيكتون وديكنسون وشركاه2606-309659حقن العلاج
5cc محاقن بلاستيكيةبيكتون وديكنسون وشركاه2608-309646مجموعات الأنسجة
30G 1/2 إبربيكتون وديكنسون وشركاهحقن العلاج 305106
25G 5/8 إبرBecton و Dickinson and Company305122مجموعات الأنسجة
معقمة 0.9٪ محلول ملحيجامعة تورنتو هاوس ماركة1011نضح الأنسجة
13 مل أنبوب مخروطي مستدير القاع   ؛سارستيدت62.515.006بروليبرولين ، تجانس الأنسجة
ألفا الحد الأدنى من الوسط الأساسي (MEM)   ؛جيبكو12571063خلية متوسطة
1 × عازلة الفوسفاتملحي جيبكو10010023تجانس الأنسجة
تريتون X-100سيجما ألدريتشX100-100 ملتجانس الأنسجة
حمض الفورميككاليدون للكيماويات1/5/3840ضبط درجة الحموضة لمذيب الاستخراج
أنابيب بلاستيكية مرشوشة هيبارين الصوديومبيكتون وديكنسون وشركاه367878التحليلي لجمع
الدم Sartorius CPA225D
مقاييس الأس الهيدروجيني NA   ؛فيشر ساينتفيك13-637-671أكومت BASIC
Vortex MixterFisher Scientific02-215-365عينات دوامة بالسرعة المطلوبة
1.5 مل & nbsp ؛ أنبوب الطرد المركزيالدقيق Fisherbrand2043-05408129Prolyprolene
Model 1000 الخالطفيشر Scientific08-451-672مركزي لتجانس الأنسجة
5702REppendorf5702Rتحضير الاستخراج
نظام المبخر المسخنGlas-ColNAإعادة تشكيل عينة
HPLC برغي الخيط قواريرDIKMA5320حقن عينة HPLC
قبعات برغي HPLC مع PTFE أبيض سيليكون الحاجزDIKMA5325حقن عينة
HPLC إدراج البولي بروبيلين    Agilent Technologies5182-0549الحد الأقصى للحجم 250 و mu ؛ ل ، حقن عينة HPLC
Xbridge C18< / sub>< / span > Column< / span >Waters Corporation186003117تحليل الأدوية
مضخة التدرج   ؛Waters CorporationW600تحليل المخدرات
أخذ العينات التلقائيةWaters CorporationW2707تحليل المخدرات
كاشف صفيف الثنائي الضوئي  Waters CorporationW2998تحليل الأدوية
Multi & lambda ؛ كاشف الفلور   ؛Waters CorporationW2475تحليل المخدرات
EMPOWER 2Waters CorporationNAبرنامج تحليل البيانات
العالم MicromathNAتحليل الحرائك الدوائية
أنثى Balb / c الفئرانمختبر جاكسون001026في الجسم الحي
EMT6 / WT خلايا سرطان الثديالمقدمة من الدكتور إيان تانوك ؛ معهد أونتاريو للسرطانNAفي الجسم الحي
ستيرات إعداد من HPLC تصنيف محلول ميزان الوزن جهاز طرد

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Holohan, C., Van Schaeybroeck, S., Longley, D. B., Johnston, P. G. Cancer Drug Resistance: An Evolving Paradigm. Nat. Rev. Cancer. 13 (10), 714-726 (2013).
  2. Szakacs, G., Paterson, J. K., Ludwig, J. A., Booth-Genthe, C., Gottesman, M. M. Targeting Multidrug Resistance in Cancer. Nat Rev Drug Discov. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Doxorubicin Mitomycin CHPLC QuantitationDrug Combination AnalysisNanoparticle Drug DeliveryReverse Phase HPLCBiological Matrix ExtractionInternal Standard MethodSimultaneous Drug DetectionPharmacokinetics StudyTumor Tissue Analysis

Related Articles