Method Article

جهاز التقاط الصور الحية طويلة الأجل لتحسين التلاعب التجريبية من اليرقات الزرد

DOI:

10.3791/56340

⸱

October 27th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Wisconsin-Madison, 2Morgridge Institute for Research, University of Wisconsin-Madison, 3Laboratory for Optical and Computational Instrumentation, University of Wisconsin-Madison, 4Cellular and Molecular Pathology Graduate Program, University of Wisconsin-Madison, 5Department of Medical Microbiology and Immunology, University of Wisconsin-Madison, 6Department of Pediatrics, University of Wisconsin-Madison

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذه المخطوطة في زويدجي (الزرد إصابة والجهاز الفخ للنمو وتصوير)، وهو جهاز مجزأة تهدف إلى توجيه وكبح جماح اليرقات الزرد. ويسمح التصميم ترانسيكشن الذيل وطويلة الأجل جمع الصور مجهرية الفلورية العالية الاستبانة من التئام الجروح والتجديد.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرقة الزرد كائن حي نموذجا هاما لعلم الأحياء التنموي والتئام الجروح. علاوة على ذلك، اليرقة الزرد نظاما قيماً ليعيش تصوير مجهرية ذات الدقة العالية للظواهر البيولوجية الحيوية في المكان والزمان مع القرار الخلوية. بيد أن الطريقة التقليدية لتغليف [اغروس] لتصوير مباشر يمكن أن تعوق التنمية اليرقات ونمو الأنسجة. ولذلك، يصف هذه المخطوطة في زويدجي (الزرد إصابة والجهاز الفخ للنمو وتصوير)، الذي صمم وملفقة كجهاز مستقلة وظيفيا لتوجيه اليرقات للفحص المجهري عالية الدقة مع السماح زعنفة والذيلية ترانسيكشن داخل الجهاز والتنمية اللاحقة الذيل غير المقيد وإعادة النمو. يسمح هذا الجهاز لإصابة وتصوير طويلة الأجل مع الحفاظ على السلامة. نظراً لأن العفن زويدجي 3D مطبوعة، التفصيل عن هندستها تجعل من تعديلها بسهولة للتطبيقات التصوير الزرد المتنوعة. وعلاوة على ذلك، يوفر زويدجي العديد من المزايا، مثل الوصول إلى اليرقة أثناء التجريب لإصابة أو لتطبيق المواد الكاشفة، توازيها التوجه لليرقات متعددة لتصوير مبسطة، وإعادة استخدام الجهاز.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قدرة التجدد الزرد اليرقات دانيو rerio جعلها كائن نموذج مثالي دراسة استجابة الجرح فضلا عن تضميد الجراح وإعادة نمو1،2،،من34. الوصول إلى مجموعة من خطوط الزرد المعدلة وراثيا والشفافية التشريحية الزرد لمواصلة تعزيز فائدتها للدراسات في فيفو الجرح استجابة الأحداث، فضلا عن عمليات التجدد الأطول أجلاً4. دراسة هذه العمليات البيولوجية استخدام الاستبانة fluorescence الوقت الفاصل بين الفحص المجهري لذلك يطالب جهاز الزرد تصوير مباشر الذي يسمح لحركة الحد الأدنى لليرقة الزرد والاستقرار عالية مع الحفاظ على استمرارية. م....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: وضعت تصميم قاعدة زويدجي لليرقات الزرد التي هي من 2 إلى 4 أيام بعد الإخصاب (إدارة الشرطة الاتحادية) واتبع المبادئ التوجيهية "مركز الموارد الحيوانات بحوث" جامعة ويسكونسن-ماديسون-

1-تصميم وطباعة 3D من قوالب

  1. النموذجي PDMS المكون من الجهاز مع الهندسات المطلوبة وسمات في 3D النمذجة البرمجيات 5. إنشاء جمعية لقالب فارغ والجزء PDMS وتوليد قالب سلبي للجزء PDMS عن طريق إنشاء تجويف في قالب المقابلة للجزء بدسم. حفظ القالب كملف.stl للطباعة ثلاثية الأبعاد ( الشكل 2، الخطوة 1.1)-
    ملاحظة: يتوفر ملف بتنسيق (.stl) المجسمة لقالب تصميم المقدمة هنا ( الشكل 1

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الجهاز موائع جزيئية PDMS زويدجي جهاز مستقلة وظيفيا مصممة لاستيعاب المهام الرئيسية الأربعة (المذكورة أدناه) المرتبطة بتصوير لايف والذيلية الزعنفة إصابة الشفاء وإعادة النمو في اليرقات الزرد. واختير PDMS لتصنيع زويدجي لأنها ليست متاحة بسهولة إلا ومعيار الصناعة لتوافق مع الحياة، ولكن أيضا يعمل جيدا في قوالب. بالإضافة إلى ذلك، يجعل PDMS الجهاز القابل لإعادة الاستخدام وخالية من الحواف الصلبة أو الحادة حالما يتم تشكيل الجهاز. زويدجي على وجه التحديد يسمح 1) تحميل اليرقات في الجهاز، وضبط النفس 2) .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وغرض الجهاز زويدجي هو التقاط الفاصل الزمني 3D التصوير بتحقيق الاستقرار وتوجيه الأسماك ضمن المسافة العمل الصغيرة من هدف مجهر عالي الدقة. اجتماع هذه مواصفات التصميم، مع أنها أيضا تحسنا على إعداد التقليدية المستندة إلى أجار للتصوير الحي. هناك ثلاث خطوات حاسمة (أدناه) في تصنيع زويدجي، التي، إذا لم تفعل بشكل صحيح، يمكن أن يسفر عن الأجهزة المعيبة:

إعداد PDMS (الشكل 5 ألف)

لمنع حدوث فقاعات، ديغا في القوالب بعد إضافة PDMS. تحقق من أن كافة الفقا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب تود أن تقر تمويل المشاريع الأولية من معهد مورجريدجي للأبحاث والمختبر الضوئية و "الأجهزة الحاسوبية". نعترف أيضا بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة # R01GM102924 (AH وكوي). خ، دائرة الخدمات الطبية المشتركة، وجمهورية صربسكا، آه وكوي تصور وتصميم الدراسة. خ، ودائرة الخدمات الطبية المشتركة أجرى تجارب جميع مع دعم من DL وعملية كيمبرلي وجمهورية صربسكا. خ، شبيبة، وجمهورية صربسكا، آه وكوي أسهم في كتابة المخطوطة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوي>تصنيع القوالب< / قوي>
Solidworks المهنية البحوث المدمجة 3D النمذجة البرمجياتDassault SystemesSPX0117-01فيشر Unitech
Viper Si2 SLA3D Systems Inc.23200-902شركة 3D Systems Inc.
أكورا 60 راتنج البوليمرالضوئي 3D Systems Inc.24075-902شركة 3D Systems Inc.
الكحول المشوهSunnyside5613735Menards
جهاز ما بعد العلاج بالأشعة فوق البنفسجية3D Systems Inc.23363-101-00شركة أنظمة ثلاثية الأبعاد
قفازات النتريل TouchNTuffAnsell92-600McMaster Carr
220B ، 400B ، 600 حصى T414 ورق صنفرة أزرق bak   ؛نورتون66261139359 ، 54 ، 52
قرص زجاجي من البورسليكات MSC ، قطر 2 بوصةماكماستر كارMIL-G-47033ماكماستر كار
منظف الموجات فوق الصوتيةبرانسون1510R-MTH
كحول فرك الأيزوبروبيل 70٪هيدروكس54845T43ماكماستر كار
10 أوقية كوب بلاستيكي شفافWNAتحفة 557405أمازون
6 "عصا حرفيةPerfect StixCraft WTD-500Amazon
NameCompany Catalog NumberComments
Fabricate zWEDGI PDMS device
Sylgard 184 Silicon elastomeric Kit داو كورنينج4019862Ellworth Adhesives 
حقنة 10 ملبيكتون ديكنسون305219Vitality Medical Inc
مجففبيل آرت ساينسويرF42027-0000أمازون
4 في مشبك قضيب تصعيدبيتسبرغ68974الشحن هاربور
كوينسي لاب إنك.صناعيةعالمية 20GC
Aven549825McMaster-Carr
فوهة مصفاة بالهواء المضغوطInnotechTA-N2-2000FTغرف الأبحاث لمزة
مقعد فراغ ملزمةويلتون توت جروب63500MSC الصناعية
55 مم طبق سفلي زجاجي ؛ 30 مم بئر صغير # 1.5 غطاءزجاجي سيلفيسD60-30-1.5-Nسيلفيس
منظف البلازماهاريك البلازماPDC-001هاريك البلازما
<قوي>الاسمالشركة Catalog NumberComments
Loading Larvae
Pipetteman, P200Gilson F123601
100٪ إيثانول (مخفف إلى 70٪ بالماء قبل الاستخدام)نقل 111000200
فيشربراند13-711-5Aفيشر ساينتفيك
حليب2902887MP بيوميديكال
مزدوج ماء
N-phenylthiorureaSigma-AldrichP7629سيجما ألدريتش
tricaine (ethyl 3-aminobenzoate)C-FINQ-UEويسترن كيميكال
نقطة انصهار منخفضة agaroseSigma-AldrichA0701Sigma-Aldrich
(حاضنة حمام جاف)فيشر Scientific11-718-2فيشر Scientific
E3 عازلة  
طرف ماصة الفتحة الكبيرة ، 200 ميكرومترFisherbrand02-707-134العامة من فيشر ساینتفيك
، 200 ميكرولترفيشربراند21-197-8Eفيشر ساینتميك
# 15 شفرة مشرط   ؛ريشة2976أمازون
25G حقنة إبرةBD BD305122فيشر العلمي
<قوي>الاسم < / قوي >< قوي > الشركة < / قوي> < قوي> رقم الكتالوج < / strong>تعليقات < strong >
imaging < / strong >
inverted المجهر
التصوير ImarisBitplane
فرن مختبر مجموعة ملاقط ماصة فارمكو آبر مجفف خالي الدسم مقطر كتلة حرارية طرف ماصة للأغراض برنامج

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yoo, S. K., Freisinger, C. M., LeBert, D. C., Huttenlocher, A. Early redox, Src family kinase, and calcium signaling integrate wound responses and tissue regeneration in zebrafish. J. Cell Biology. 199 (2), 225-234 (2012).
  2. Kawakami, A., Fukazawa, T., Takeda, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Zebrafish LarvaeWound HealingLive ImagingPDMS Device3D PrintingMultiphoton MicroscopyCollagen Fiber AnalysisTissue RegrowthMicrofluidic ChannelsAgarose Encapsulation

Related Articles