هنا يصف لنا طريقة لوضع نموذج لصغر الرأس التي يسببها فيروس زيكا في الماوس. ويشمل هذا البروتوكول أساليب التطعيم intracerebral الجنينية والأطفال حديثي الولادة، ومرحلة الكبار فيروس زيكا.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إنشاء نماذج الماوس للاضطرابات العصبية التي يسببها فيروس Zika استخدام استراتيجيات حقن Intracerebral: الأجنة والأطفال حديثي الولادة والكبار
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
فيروس زيكا (زيكف) مصفر مستوطنة حاليا في شمال ووسط وجنوب أمريكا. من الثابت الآن أن زيكف يمكن أن يسبب صغر الرأس وتشوهات الدماغ إضافية. ومع ذلك، الآلية الأساسية لأمراض ال زيكف في المخ النامي لا يزال غير واضح. كثيرا ما تستخدم الطرق الجراحية intracerebral في أبحاث علم الأعصاب لمعالجة مسائل حول تطور الدماغ العادية وغير العادية ووظيفة المخ. هذا البروتوكول يستخدم التقنيات الجراحية الكلاسيكية، ووصف الطرق التي تسمح بالمرتبطة زيكف نموذج البشرية الأمراض العصبية في الجهاز العصبي الماوس. بينما نموذج التطعيم الدماغ مباشرة لا الوضع العادي من انتقال الفيروس، يسمح الأسلوب المحققين طرح أسئلة هادفة بشأن النتيجة بعد الإصابة زيكف في المخ النامي. ويصف هذا البروتوكول المراحل الجنينية والمواليد الجدد، والكبار من التطعيم داخل البطيني من زيكف. حالما يتقن، يمكن أن يصبح هذا الأسلوب أسلوب مباشر واستنساخه يستغرق سوى ساعات قليلة لأداء.
المقدمة
صغر الرأس شرط الناجمة عن نمو الدماغ المعيبة تتميز بأقل من متوسط حجم الرأس في الأطفال حديثي الولادة. الأطفال مع صغر الرأس يحمل مجموعة من الأعراض التي يمكن أن تشمل تأخر في النمو والاستيلاء والإعاقة الذهنية، وفقدان السمع، ومشاكل في الرؤية ومشاكل في الحركة والتوازن، بين أمور أخرى، اعتماداً على شدة المرض و تسبب2،،من13. هذا الشرط المتعددة العوامل في طبيعتها، مع عامل الوراثي، والمعدية، والعوامل البيئية المرتبطة بالتسبب في صغر الرأس4،،من56،،من7
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الحيوانات استخدام بروتوكولات اتبع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان في جامعة كاليفورنيا الجنوبية وجامعة جورجيا. يتم تنفيذ أساليب القتل الرحيم للسدود الحوامل والكبار وفقا للبروتوكولات المعتمدة: الخنق ثاني أكسيد الكربون، متبوعاً بخلع عنق الرحم كوسيلة ثانوية لضمان القتل الرحيم. هي euthanized الجراء الوليد بقطع الرأس.
تنبيه: ينطوي البروتوكول التالية على التعامل مع فيروسات المسببة للأمراض. وينبغي اتخاذ الاحتياطات المناسبة أثناء التعامل مع الفيروس. يجب موافقة مسبقة اللجنة المؤسسية المناسبة لاستخدام كافة البروتوكولات.
1-الجنينية تلقيح Intracerebral فيروس Zika
- للتزاوج الحوامل موقوت، تنظر ظهر اليوم بعد التزاو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تظهر الصور التمثيلية لأساليب عملنا حقن التطعيم زيكف الدماغ الجنينية في المخططات التي تصور حقن إينتراسيريبرال (الشكل 1A) وداخل الرحم وحقن إينترابلاسينتال (الشكل 1B)، التي توضح ينبغي أن ينظر إلى طريقة السد الحوامل والأجنة، والموجهة لعملية جراحية (بروتوكول التطعيم الجنينية). الشكل 2 ألف معارض الإصابة زيكف (MEX1-44) (إيمونوستاينيد مع الجسم ضد مستضد المجموعة مصفر، أخضر) في قشرة الدماغ E18.5. Pax6 (أحمر) ت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الموصوفة هنا أسلوب التطعيم إينتراسيريبرال زيكف في مراحل الأجنة والأطفال حديثي الولادة والكبار لتحقيق الأضرار التي يسببها زيكف في نمو الدماغ. بينما مباشرة، وهناك بعض الاعتبارات التي ينبغي أن المحققين لضمان نوعية الدراسة وسلامة الأشخاص المعنيين.
DENV ارتباطاً وثيقا زيكف في جنس مصفر. DENV لا يرتبط سببياً باضطرابات الدماغ طب الأطفال في البشر. DENV2 يمكن أن تصيب بنجاح وتكرار في الدماغ باستخدام طريقة التطعيم الجنينية (~ 1 ميليلتر من 3.4 × 105 مليلتر TCID50) (الشكل 2D<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
الكتاب يود أن ينوه الدكتور عبد اللطيف بينريس في جامعة روتشستر للإرشاد والمناقشات ذات الصلة بتعلم الكبار الجراحية وتقنيات الوليد. الكتاب تود أيضا أن نعترف بالدكتور جيمس لودرديل في UGA لاستخدام معدات ستيريوتاكسيك والمناقشات المتعلقة بإعداد المنهجية لهذا الأسلوب، والنهوض بمؤسسة بحوث كلية العلماء (الأقواس) لما الدعم ودعمنا المعاهد الوطنية للصحة (NINDS المنح R01NS096176-02، R01NS097231-01 و F99NS105187-01).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
محرك
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مرن رمح الحفر معلق محرك | Leica | 39416001 | |
| Stereotax | Kopf | 04557R | |
| Micro4 Micro4 Microsyringe Pump | Controller WPI | SYS-MICRO4 | |
| UMP3 UltraMicroPump | WPI | UMP3 | |
| Modulamp | Schott-Luer-lock | ||
| tubing (مقياس 19) | هاميلتون | 90619 | |
| نقطة الانصهار الشعرية | Kimble | 34500-99 | إبرة زجاجية |
| Fluoro-Max: مجهرية فلورية حمراء | Thermo Scientific | R25 | بدون تخفيف ؛ استخدم لحقن الممارسة |
| 10 وميكرو ؛ L ، موديل 1701 LT SYR | Hamilton | 80001 | للتلقيح الجنيني |
| 10 & micro ؛ L ، موديل 1701 RN SYR ، صغير قابل للإزالة NDL ، 26 ثانية GA ، 2 بوصة ، نمط النقطة 2 | هاميلتون | 80030 | لحديثي الولادة / البالغين |
| 4-0 خيوط Ethilon Nylon | Ethicon-Mineral | ||
| Oil | VWR-micropipette | ||
| مجتذب | أدوات Sutter Instruments | P-1000 | |
| مطحنة ماصة دقيقة | Narishige | EG-44 | |
| Fastgreen FCF Dye | حقن Sigma | F7252 | بنسبة 0.5٪ |
| صبغة <قوية >أجسام مضادة < / قوية > | |||
| الفيروسات فلافي مجموعة الأجسام المضادة | للمستضد Millipore | MAB10216 | مللي ثانية IgG2a 1: 400 (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 2< / قوي> ، <فئة قوية = "xfig" >الشكل 3< / قوي>) |
| Pax6 | DBHB | Pax6-s | ms IgG1 1:20 |
المراجع
- Dreher, A. M., et al. Spectrum of Disease and Outcome in Children with Symptomatic Congenital Cytomegalovirus Infection. J of Pediatr. 164 (4), 855-859 (2014).
- Lanzieri, T. M., et al. Long-term outcomes of children wit....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
