مقالة منهجية

إنشاء مقايسة الاستعمار الرئة لتعميم التصور خلية الورم في أنسجة الرئة

DOI:

10.3791/56761

⸱

يونيو 16, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Trauma Office, Children's National Health System

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نموذج حيوان ضروري لفك دور تعميم الخلايا السرطانية (ريادية) في تعزيز استعمار الرئة أثناء سرطان خبيث. هنا، قمنا بإنشاء وتنفيذها بنجاح في فيفو الاعتداء على وجه التحديد اختبار اشتراط الجمعية فيبرونيكتين البوليمرية (بوليفن) على ريادية لاستعمار الرئة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورم خبيث هو السبب الرئيسي للوفاة من السرطان. دور تعميم الخلايا السرطانية (ريادية) في الترويج لسرطان خبيث، الذي يساهم في الرئة الاستعمار ريادية خطيرة على عمليات المنتشر الرئة المبكر، تم التحقيق بشدة. على هذا النحو، النماذج الحيوانية هي النهج الوحيد الذي يلتقط عملية منهجية كاملة لورم خبيث. نظراً لأن المشاكل تحدث في التصاميم التجريبية السابقة لدراسة إسهامات ريادية للتسرب الأوعية الدموية، قمنا بإنشاء في فيفو الرئة استعمار مقايسة التي طويلة الأجل-الأسفار الخلية-الراسم، كاربوكسيفلوريسسين إستر سوكسينيميديل (CFSE)، تم استخدامه لتسمية الخلايا السرطانية مع وقف التنفيذ، وقد أنجز نضح الرئة لمسح غير تحديداً المحاصرين ريادية قبل إزالة الرئة والتصوير [كنفوكل]، والتقدير الكمي. تم العثور على فيبرونيكتين البوليمرية (بوليفن) اجتمعنا للأسطح لجنة مكافحة الإرهاب التوسط من أجل استعمار الرئة في النهائي إنشاء أنسجة الورم المنتشر. وهنا على وجه التحديد اختبار شرط الجمعية بوليفن على ريادية لاستعمار الرئة والتسرب، أجرينا قصير فحوصات الرئة الاستعمار التي علقت خلايا سرطان الرئة لويس (المسئولية) ستابلي معربا عن الجبهة الوطنية-شرنا (شفن) أو التدافع-شرنا (شسكر) والمسمى مسبقاً مع 20 ميكرو كفسي تم تلقيح عن طريق الوريد في الفئران C57BL/6. أننا نجح في إثبات أن قدرات شفن LLC الخلايا لاستعمار الرئتين الماوس تتضاءل إلى حد كبير بالمقارنة مع الخلايا شسكر LLC. ولذلك، هذه المنهجية القصيرة الأجل قد تطبق على نطاق واسع لإثبات قدرة ريادية داخل الدورة الدموية لاستعمار الرئتين على وجه التحديد.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ورم خبيث هو السبب الرئيسي للسرطان الموت1،2. أدخل على تداول في تعليق الخلايا السرطانية المستمدة من الأنسجة الأولية والبقاء على قيد الحياة مختلف عن التحديات، مثلاً، anoikis، ومحصنة ضد الاعتداءات والأضرار نتيجة لإجهاد القص من ضغط الدم أو القيود هندسية، قبل أن تكون القدرة على استعمار الأجهزة البعيدة، خطوة أساسية في إملاء نجاح خبيث3،4،،من56. ولذلك، قد حاليا تم بذل جهود نشطة في تميز الخلايا السرطانية المتداولة (ريادية) وربط هذه الخصائص مع الورم الخبيث، وورم خبيث، ومعدلات البقاء على قيد الحياة لمرضى السرطان7،8 , 9-منذ عملية سرطان خبيث على وجه التحديد يصور حدثاً في فيفو ، نماذج حيوانية هي النهج الوحيد الذي يلتقط عملية منهجية كاملة لورم خبيث10،11،12 .

تصبح ريادية أنسجة الورم المنتشر من خلال أحداث الخلوية متعددة بما في ذلك استعمار الأجهزة البعيدة1،2. ومع ذلك، لا توفر خبيث الأكثر استخداماً فحوصات13،،من1415 وسيلة لمراقبة لجنة مكافحة الإرهاب استعمار الأجهزة البعيدة. ولذلك، حاجة ملحة في فيفو مقايسة تصميم للتصور الاستعمار لجنة مكافحة الإرهاب. على الرغم من أن عدة في فيفو و السابقين فيفو قصيرة الأجل الرئة الاستعمار وقد تم تصميم الاختبارات ومشاكل وعيوب تظل. على سبيل المثال، بينما البروتينات الفلورية الخضراء (التجارة والنقل)-فحوصات overexpressing ورم الخلايا التي استخدمت في هذه،من2223، ويستغرق وقتاً ستابلي ترانسفيكت واستنساخ الخلايا السرطانية مع كافية شدة الفلورسنت بروتينات فلورية خضراء تحت المجهر. وبالمثل، قد استخدمت تلطيخ عابر للخلايا السرطانية مع الراسم خلية طويل الأجل كفسي ليحل محل الخلايا السرطانية معربا عن التجارة والنقل، ولكنها لا تزال صعوبة في الحكم على ما إذا كانت خلايا السرطان المسمى كفسي مرفقة أو مجرد موجودة داخل المفرج من ال16،الأجهزة البعيدة قصت17.

تم العثور على فيبرونيكتين البوليمرية (بوليفن) المجمعة على أسطح ريادية المساهمة حاسمة في إقامة النهائي للورم المنتشر الأنسجة18،19،،من2021،22 . هنا، نحن إجراء قصير تم تلقيح الرئة الاستعمار فحوصات في أي تعليق لويس خلايا سرطان الرئة (المسئولية) ستابلي معربا عن الجبهة الوطنية-شرنا (شفن) أو التدافع-شرنا (شسكر) والمسمى مسبقاً مع كفسي عن طريق الوريد في الفئران C57BL/6. بعد 2-3 أيام، كانت أول perfused الرئتين الماوس مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لإزالة فاتحة ريادية ضمن المفرج قبل أن يتعرض للفحص المجهري [كنفوكل] والتحديد الكمي لاستعمار الرئة المسئولية. لقد تبين بوضوح أن أعدادا من استعمار الرئة شفن المسئولية والعقيدات الورم خفضت إلى حد كبير بالمقارنة مع شسكر المسئولية، مساندة دور الجمعية بوليفن على ريادية إلى حد كبير في تسهيل الاستعمار ونمو ريادية في الرئتين. دراستنا يستحق مزيدا من التحقيق للدور بوليفن في سرطان خبيث.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أجريت جميع التجارب التي أجريت على الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية لمعهدنا (دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وكلية طب NCKU).

1-إعداد أدوات ووسائط الثقافة وأطباق

  1. قبل البدء في البروتوكولات التجريبية، الحصول على خيوط الجراحة المعقمة، 1 مل الحقن بالإبر ز 26/0.5 سم (لحقن الوريد الذيل)، 3 مل المحاقن مع الإبرة 24 غ/سم 3 (لنضح الرئة)، تعديل النسر وسائط الإعلام (دميم دولبيكو)، التربسين-يدتا الحل (5 التربسين غرام/لتر و 0.53 ملم)، المصل البقري الجنين (FBS) وبرنامج تلفزيوني x 1 (137 مم كلوريد الصوديوم و 2.7 مم بوكل، ملم 10 غ2بو4و 1.8 مم خ2ص4) وأطباق الثقافة 6 سم.

2-إعداد واستعادة الخلايا السرطانية في تعليق

  1. إعداد تعديل النسر وسائط الإعلام (دميم العقيمة دولبيكو) التي تحتوي على نسبة 10% أو 20% FBS وطازجة إضافة 2 مم L-الجلوتامين وبرنامج تلفزيوني x 1 0.05% يدتا التربسين.
  2. الثقافة الخلايا في دميم وتستكمل مع 10% FBS في 37 درجة مئوية وتنمو لهم حتى يكون هناك التقاء 70-80% في الطبق الثقافة.
  3. قم بإزالة وسائط الثقافة (دميم) من الأطباق، تليها يغسل اثنين مع 2 مل من برنامج تلفزيوني x 1 العقيمة.
  4. أضف 1 مل من 0.05% يدتا التربسين في الأطباق صورة شاملة تغطي كافة الخلايا. فورا إزالة 800 ميكروليتر من الحل وترك فقط 200 ميكروليتر في الأطباق. احتضان الأطباق في 37 درجة مئوية لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة (تبعاً لنوع الخلية) وانتظر حتى غالبيتهم من الخلايا في حالة تعليق.
  5. أضف 1 مل دميم الطازجة التي تحتوي على 10% FBS مباشرة في الأطباق وقف النشاط الأنزيمي من التربسين وبقوة "الماصة؛" تعليق خلية صعودا وهبوطاً مع ماصة 1000 ميليلتر لإعداد تعليق خلية مفردة.
  6. نقل الخلايا من الطبق إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، وتدور أسفل الخلايا في درجة حرارة الغرفة في 162 س ز لمدة 3 دقائق.
  7. نضح المادة طافية وتدوير ريسوسبيند الورم الخلايا في 1.5 مل دميم الذي يحتوي على 20% FBS ونهاية أكثر من الخلايا في تعليق على 37 درجة مئوية ح 2.
    ملاحظة: إذا كان المتوسط يتحول إلى اللون الأصفر أثناء الاسترداد، تبادل المتوسطة القديمة مع الطازجة المتوسطة التي تحتوي على 20% FBS.

3-الأسفار تلطيخ وتحليل الخلايا السرطانية في تعليق مع إستر سوكسينيميديل "كاربوكسيفلوريسسين" (CFSE)

  1. بعد استعادة خلية في تعليق، عد الأرقام المناسبة خلية قابلة للبقاء مع تريبان الأزرق في نويباور العد الدائرة للمعايرة fluorescence تلطيخ جرعات وذيل لحقن الوريد.
  2. زيادة ونقصان لأسفل الخلايا في ز 162 x في درجة حرارة الغرفة 3 دقيقة وريسوسبيند الخلايا الأعلاف في 1 مل من تعقيم 1 x PBS، متبوعاً بالطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة في 162 س ز لمدة 3 دقائق.
  3. ريسوسبيند الخلايا الأعلاف في 500 ميليلتر من 1 X PBS تحتوي على 10% FBS و 0، 5، 10، 20 أو 40 ميكرومتر كفسي لمعايرة الجرعات، واحتضان تعليق خلية في 37 سج ل 10 دقيقة في الظلام.
  4. وتدور أسفل الخلايا في 162 س ز في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق ريسوسبيند الخلايا الأعلاف مع 4 مل دميم الذي يحتوي على 1% FBS. كرر هذه الخطوة الغسيل ثلاث مرات أكثر. ريسوسبيند الخلايا الأعلاف مع 4 مل دميم وحدها للغسيل نهائياً.
  5. تخضع الخلايا المسماة كفسي للأسفار تنشيط الخلية الفرز التحليل (نظام مراقبة الأصول الميدانية) لقياس كثافة الأسفار من خلية واحدة، أو ذيل حقن الوريد.
    ملاحظة: الاحتفاظ الخلايا على الجليد قبل تنفيذ نظام مراقبة الأصول الميدانية التحليل أو ذيل حقن الوريد.

4-الرئة الاستعمار الإنزيم

  1. إعداد الخلايا المسماة مع 20 ميكرومتر كفسي (الرجوع إلى خطوات 3.1 خلال 3، 4).
    ملاحظة: تقرر جرعة كفسي العامل لوضع العلامات الخلايا السرطانية، استناداً إلى نتائج المعايرة من خلال تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية (أرجع إلى الخطوة 3، 3).
  2. الاحماء الذيول من 4-6 أسابيع-الفئران C57BL/6 القديمة الذكور (6 الفئران) مع مصباح هاليد لمدة 5-10 دقيقة على أساس الماوس بالماوس لتمدد الأوردة ذيل الماوس.
  3. دقة المزيج ونضح الخلايا السرطانية المسمى كفسي مع حقنه 1 مل (26Gx1/2)، تجنب أي فقاعات في تعليق خلية (بكثافة خلية الأخيرة من 5 × 106 خلايا/مل).
  4. حقن بعناية 1 x10 خلايا الورم المسمى كفسي6 في 200 ميليلتر من دميم في السياق ذيل الماوس، الذي يجب أن يودع في ريسترينير ماوس.
    ملاحظة: أثناء الحقن، إذا وضعت الإبرة مباشرة في التجويف الوريد الذيل، ورم الخلايا ينبغي بسهولة تسليم إلى الدورة الدموية دون الحاجة إلى دفع الثابت في المحاقن. إذا كان من الصعب دفع الخلايا السرطانية من خلال، أنهم قد تم حقن خارج السياق الذيل، على الأرجح في الفضاء تحت الجلد.
  5. تقسيم الفئران التي تلقت الخلايا الورم المسمى كفسي عن طريق الوريد إلى مجموعتين: مجموعة واحدة سيخضع نضح الرئة تليها مجهرية [كنفوكل] وسيتم ترك ImageJ الكمي في التحليل الاستعمار الرئة والآخر وحدها إلى 4-5 الاعتداء أسابيع في استعمار الرئة طويلة الأجل.
  6. الساعة 20، 38، أو ح 45، ومع الخلايا السرطانية 1 × 106 حقن الوريد أثناء معايرة تعتمد على دورة وجرعة مرة تخدير الفئران الحاملة للورم مع 50-75 مغ/كغ زوليتيل 50، وهو أنيسثيتيزير سليمة ومقبولة جيدا23.
    ملاحظة: استخدام مرهم البيطرية في العيون للفئران لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
  7. طوليا قطع الجلد والأنسجة تحت الجلد من البطن إلى منطقة الصدر مع المقص الجراحي. فتح التجويف الجنبي بالمقص الجراحي والملقط للكشف تماما عن القلب والرئتين.
    ملاحظة: كن حذراً لتجنب قطع الأوعية الدموية.
  8. التعادل متفوقة الوريد الأجوف (SVC) وأدنى الوريد الأجوف (IVC) بخيوط الجراحة المعقمة لمنع الدفق من نضح الحل خلال نضح الرئة.
  9. قطع جدار البطين الأيسر مع المقص الجراحي لفتح الشق (حوالي 2-4 مم) استنزاف الحل نضح من الرئتين.
  10. حقن 1 x برنامج تلفزيوني في البطين الأيمن مع حقنه 3 مل وإزالة الحل المصفى مع الشفط المستمر خلال نضح الرئة حتى الرئتين بدوره من لون ضارب إلى الحمرة إلى بالي تماما.

5-[كنفوكل] تصوير مجهرية وتحليل الخلايا السرطانية التي استعمرت الرئة

  1. إزالة الرئتين بالي الآن من التجويف الجنبي وفصل الفصوص خمس قطع الأربطة القصبة الهوائية والأنسجة الضامة مع مقص وملقط الجراحة24بعيداً.
  2. إعداد حامل نقالة تشبه الرئة كما هو موضح في الشكل 3 باللف خياطة نايلون حول اثنين من قضبان معدنية لإنتاج نسيج متشابك مع وضع مسافة بين قضبان اثنين لموضع فصوص الرئة. تعيين صاحب الرئة في طبق 6 سم.
    ملاحظة: سيتم استخدام حامل الرئة على استقرار الفصوص الرئة تحت عدسة المجهر [كنفوكل] الهدف.
  3. لودج، وإصلاح الفصوص الرئة على نسيج متشابك من صاحب الرئة. تغطية وترطيب الفصوص الرئة مع 1 x PBS.
  4. الموضوع الطبق 6-سم الثقافة إيواء الفصوص الرئة على حامل الرئة للفحص المجهري [كنفوكل] لالتقاط الصور fluorescence تسجيل الخلايا السرطانية استعمار الرئة.
  5. للتصوير، واستخدام عدسات الهدف (5 س، مبلن، نا: WD 0.1،: 20، الهواء).
  6. قم بتدوير عجلة تصفية لنبأ (الإثارة/الانبعاثات؛ 470-495 نيوتن متر/510-550 نانومتر) واستخدام ليزر 488 نانومتر لإثارة كفسي، لوضوح تصور صور نقاط fluorescence في فصوص الرئة.
  7. قم بتدوير عجلة عامل التصفية إلى R690 (بالنسبة لليزر مايتي HP دبس) لمسح مع 2.0 بيكسل المايكروثانيه المسح الضوئي بسرعة وتحسين الجيش الكرواتي، والكسب، وإزاحة مستويات.
  8. التقاط الصور الفلورية (512 × 512 بكسل) باستخدام برنامج المجهر مع 10 بيكسل المايكروثانيه سرعة المسح الضوئي.
  9. قياس وتحليل الصور المجهرية باستخدام البرمجيات إيماجيج وجرافباد كما هو موضح سابقا21إحصائيا.

6-طويلة الأجل فحوصات الاستعمار الرئة

ملاحظة: تكرار الخطوات من 4.1 من خلال 4.5.

  1. التضحية الفئران بعد تلقيح خلايا الورم لمدة 4-5 أسابيع وإصلاح على الرئتين ب السوائل بوين في25 للأيام 1 إلى 2.
  2. قياس وتحليل إحصائيا العقيدات الورم من الرئتين الفئران مع البرمجيات21.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قبل إجراء الفحص الاستعمار الرئة في فيفو كما هو موضح في الشكل 1A اختبار ما إذا كان يتوسط بوليفن على الخلايا السرطانية مع وقف التنفيذ الاستعمار الرئة و/أو التسرب في تيسير ورم خبيث، ونحن أولاً معاير مختلفة تركيزات كفسي، مجمع فلورسنت نفاذية الخلية وتساهمي يرتبط داخل الخلايا المحتوية على أمين جزيئات26،27 في الخلايا السرطانية مع وقف التنفيذ ويبقى في الخلايا لفترة طويلة من الزمن. ووجدنا أن ورم الخلا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جنبا إلى جنب مع طويلة الأجل الرئة الاستعمار فحوصات، على المدى القصير المنهجية المتبعة ونحن هنا لتقييم الاستعمار في فيفو الرئة بريادية في الأجهزة البعيدة كشفت بوضوح ويميز الدور المحدد لتجميعها في ريادية في استعمار بوليفن الرئتين، مما أدى بعد ذلك إلى التسرب وعمليات المنتشر18،19،،من2021. على الرغم من أن تسمية الخلايا مع تعقب خلية طويل الأجل كفسي سمح لنا بتتبع ريادية حقن الوريد لمدة تصل إل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب أود أن أشكر الدكتور تشانغ مينغ-مين والسيدة تشنغ هسين-يا لتقديم الدعم التقني لهم. هذا العمل كان تدعمها وزارة العلوم والتكنولوجيا في تايوان (معظم-103-2325-ب-006-009، ومعظم-104-2325-ب-006-001، معظم-105-2325-ب-006-001، و MOST-106-2320-B-006-068-MY3) ووزارة الصحة والرعاية الاجتماعية (MOHW106-TDU-ب-211-144004). نحن ممتنون أيضا للدعم من "مختبر البحوث الأساسية" لكلية الطب، جامعة تشينغ كونغ الوطنية، مجهر [كنفوكل] فوتون متعددة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>المادة
ألبومين مصل الأبقار ( BSA)Cyrusbioscience (تايبيه ، تايوان)101-9048-46-8
Bouin's FluidMCC (شركة كيميائية طبية) / POISON456-A-1GL
CFSE Proliferation Dyeebiosciences65-0850-85الاسم الكامل: Carboxyfluorescein succinimidyl ester
Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM)   ؛(جيبكو) ThermoFisher Scientific12100-061
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)Cyrusbioscience (تايبيه ، تايوان)101-6381-92-6لمحلول التربسين EDTA المحضر (التركيز النهائي: 0.53 ملي مولار)   ؛
مصل الأبقار الجنيني (FBS)(جيبكو) ThermoFisher Scientific10437-028
سرطان الرئة لويس (LLC)ATCC ، ماناساس ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكيةCRL-1642
L-Glutamine ، USP & nbsp ؛(جيبكو) ThermoFisher Scientific21051-024
كلوريد البوتاسيوم (KCl)Cyrusbioscience (تايبيه ، تايوان)101-7447-40-7للمحضر 1X PBS (التركيز النهائي: 2.7 ملي مولار)
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة (KH2< / sub>PO4< / sub>)Cyrusbioscience (تايبيه ، تايوان)101-7778-77-0للمحضر 1X PBS (التركيز النهائي: 1.8 ملي مولار)
الصوديوم كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم)Cyrusbioscience (تايبيه ، تايوان)101-7647-14-5المحضر 1X PBS (التركيز النهائي: 137 ملم)
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة (Na 2< / sub>HPO4< / sub>)Cyrusbioscience (تايبيه ، تايوان)101-10039-32-4للمحضر 1X PBS (التركيز النهائي: 10 ملم) Trypan
BlueSigma AldrichT61460.5 جم مزيج مع 100 مل 1X PBS
التربسينسيجما ألدريتشT4799لمحلول التربسين EDTA المحضر (التركيز النهائي: 5 جم / لتر)
Zoletil 50Virbacللتخفيف مع 1X PBS & nbsp ؛
<قوي>الاسم<قوي>الشركة رقم الكتالوجتعليقات
Equipment
Tabletop الطرد المركزي 2420KUBOTA Co.2420
طبق ثقافة (6 سم)شركة Wuxi NEST للتكنولوجيا الحيوية705001
حقنة يمكن التخلص منها (بإبرة) شركةPerfect Medical Industry Co.24 جم / 3 سم ؛ 3 مل و 26 جم / 0.5 سم ؛ 1 مل
خلاط نهاية على نهايةC.T.I YOUNG CHENNTS-20لاستعادة الخلايا العالقة   ؛
FACSCalibur (FACS)BD Biosciences
FallpsDimeda10.102.14
Forma Direct Heat CO2< / sub> حاضنةThermo Fisher Scientific Inc.HEPA CLASS 100
مصفاة الفأر (مقعد أسطواني 15-30 جم)Stoelting51338
مجهر متحد البؤر متعدد الفوتون BX61WIأوليمبوسFV1000MPE
غرفة العد نيوباورMarienfeld-Superior640010
مقص جراحيDimeda08.370.11
خيوط جراحية  خيوط يونيك الجراحية MFG.رقم 0034حرير أسود مضفر ؛ غير قابل للامتصاص (25 ياردة ؛ USP 4/0)
1.5 مل أنبوب الطرد المركزي الدقيقWuxi NEST Biotechnology Co.615001
15 مل أنبوب Greinerbio-one188271
Compact

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Massague, J., Obenauf, A. C. Metastatic colonization by circulating tumour cells. Nature. 529 (7586), 298-306 (2016).
  2. Lambert, A. W., Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. Emerging Biological Principles of Metastasis. Cell. 168 (4), 670-691 (2017).
  3. Mohme, M., Riethdorf, S., Pantel, K. Circulating and disseminated tumour cells - mechanisms of immune surveillance and escape. Nat Rev Clin Oncol. 14 (3), 155-167 (2017).
  4. Steinert, G., et al. Immune escape and survival mechanisms in circulating tumor cells of colorectal cancer. Cancer Res. 74 (6), 1694-1704 (2014).
  5. Mahauad-Fernandez, W. D., Okeoma, C. M. Cysteine-linked dimerization of BST-2 confers anoikis resistance to breast cancer cells by negating proapoptotic activities to promote tumor cell survival and growth. Cell Death Dis. 8 (3), e2687(2017).
  6. Maheswaran, S., Haber, D. A. Circulating tumor cells: a window into cancer biology and metastasis. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 96-99 (2010).
  7. Yu, M., et al. RNA sequencing of pancreatic circulating tumour cells implicates WNT signalling in metastasis. Nature. 487 (7408), 510-513 (2012).
  8. Adams, D. L., et al. Mitosis in circulating tumor cells stratifies highly aggressive breast carcinomas. Breast Cancer Res. 18 (1), 44(2016).
  9. Baccelli, I., et al. Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in a xenograft assay. Nat Biotechnol. 31 (6), 539-544 (2013).
  10. Malladi, S., et al. Metastatic Latency and Immune Evasion through Autocrine Inhibition of WNT. Cell. 165 (1), 45-60 (2016).
  11. Spiegel, A., et al. Neutrophils Suppress Intraluminal NK Cell-Mediated Tumor Cell Clearance and Enhance Extravasation of Disseminated Carcinoma Cells. Cancer Discov. 6 (6), 630-649 (2016).
  12. Pattabiraman, D. R., et al. Activation of PKA leads to mesenchymal-to-epithelial transition and loss of tumor-initiating ability. Science. 351 (6277), aad3680(2016).
  13. van der Weyden, L., et al. Genome-wide in vivo screen identifies novel host regulators of metastatic colonization. Nature. 541 (7636), 233-236 (2017).
  14. Obenauf, A. C., et al. Therapy-induced tumour secretomes promote resistance and tumour progression. Nature. 520 (7547), 368-372 (2015).
  15. Genovese, G., et al. Synthetic vulnerabilities of mesenchymal subpopulations in pancreatic cancer. Nature. 542 (7641), 362-366 (2017).
  16. von Horsten, S., et al. Stereological quantification of carboxyfluorescein-labeled rat lung metastasis: a new method for the assessment of natural killer cell activity and tumor adhesion in vivo and in situ. J Immunol Methods. 239 (1-2), 25-34 (2000).
  17. Reymond, N., et al. Cdc42 promotes transendothelial migration of cancer cells through beta1 integrin. J Cell Biol. 199 (4), 653-668 (2012).
  18. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Elble, R. C., Pauli, B. U. Lung endothelial dipeptidyl peptidase IV promotes adhesion and metastasis of rat breast cancer cells via tumor cell surface-associated fibronectin. J Biol Chem. 273 (37), 24207-24215 (1998).
  19. Huang, L., et al. Protein kinase Cepsilon mediates polymeric fibronectin assembly on the surface of blood-borne rat breast cancer cells to promote pulmonary metastasis. J Biol Chem. 283 (12), 7616-7627 (2008).
  20. Chang, Y. H., et al. Secretomic analysis identifies alpha-1 antitrypsin (A1AT) as a required protein in cancer cell migration, invasion, and pericellular fibronectin assembly for facilitating lung colonization of lung adenocarcinoma cells. Mol Cell Proteomics. 11 (11), 1320-1339 (2012).
  21. Wang, Y. J., et al. Pterostilbene prevents AKT-ERK axis-mediated polymerization of surface fibronectin on suspended lung cancer cells independently of apoptosis and suppresses metastasis. J Hematol Oncol. 10 (1), 72(2017).
  22. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Pauli, B. U. A novel consensus motif in fibronectin mediates dipeptidyl peptidase IV adhesion and metastasis. J Biol Chem. 278 (27), 24600-24607 (2003).
  23. Hsu, Y. Y., et al. Thrombomodulin is an ezrin-interacting protein that controls epithelial morphology and promotes collective cell migration. FASEB J. 26 (8), 3440-3452 (2012).
  24. Arlt, M. J., Born, W., Fuchs, B. Improved visualization of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ perfusion of lung tissue and X-Gal staining of lacZ-tagged tumor cells. J Vis Exp. (66), e4162(2012).
  25. Shi, Y., Parhar, R. S., Zou, M., Al-Mohanna, F. A., Paterson, M. C. Gene therapy of melanoma pulmonary metastasis by intramuscular injection of plasmid DNA encoding tissue inhibitor of metalloproteinases-1. Cancer Gene Ther. 9 (2), 126-132 (2002).
  26. Parish, C. R. Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies. Immunol Cell Biol. 77 (6), 499-508 (1999).
  27. Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Nat Protoc. 2 (9), 2049-2056 (2007).
  28. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  29. Itkin, T., et al. Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis. Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).
  30. Jiang, M., Qin, C., Han, M. Primary breast cancer induces pulmonary vascular hyperpermeability and promotes metastasis via the VEGF-PKC pathway. Mol Carcinog. 55 (6), 1087-1095 (2016).
  31. Aceto, N., et al. Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis. Cell. 158 (5), 1110-1122 (2014).
  32. Zheng, Y., et al. Expression of beta-globin by cancer cells promotes cell survival during blood-borne dissemination. Nat Commun. 8, 14344(2017).
  33. Chen, X., et al. Retinoic acid facilitates inactivated transmissible gastroenteritis virus induction of CD8(+) T-cell migration to the porcine gut. Sci Rep. 6, 24152(2016).
  34. Saranchova, I., et al. Discovery of a Metastatic Immune Escape Mechanism Initiated by the Loss of Expression of the Tumour Biomarker Interleukin-33. Sci Rep. 6, 30555(2016).
  35. Ahmed, M., et al. An Osteopontin/CD44 Axis in RhoGDI2-Mediated Metastasis Suppression. Cancer Cell. 30 (3), 432-443 (2016).
  36. Hoffman, R. M. In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins. Cell Death Differ. 9 (8), 786-789 (2002).
  37. Mendoza, A., et al. Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung. J Clin Invest. 120 (8), 2979-2988 (2010).
  38. Meacham, C. E., Morrison, S. J. Tumour heterogeneity and cancer cell plasticity. Nature. 501 (7467), 328-337 (2013).
  39. Wagenblast, E., et al. A model of breast cancer heterogeneity reveals vascular mimicry as a driver of metastasis. Nature. 520 (7547), 358-362 (2015).
  40. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nat Rev Cancer. 9 (4), 274-284 (2009).
  41. Ragelle, H., et al. Chitosan nanoparticles for siRNA delivery: optimizing formulation to increase stability and efficiency. J Control Release. 176, 54-63 (2014).
  42. Chu, V. T., et al. Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells. Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).
  43. Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis. Nat Rev Cancer. 11 (7), 512-522 (2011).
  44. Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nat Rev Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
  45. Sanchez-Laorden, B., et al. BRAF inhibitors induce metastasis in RAS mutant or inhibitor-resistant melanoma cells by reactivating MEK and ERK signaling. Sci Signal. 7 (318), ra30(2014).
  46. Torchiaro, E., et al. Peritoneal and hematogenous metastases of ovarian cancer cells are both controlled by the p90RSK through a self-reinforcing cell autonomous mechanism. Oncotarget. 7 (1), 712-728 (2016).
  47. Wan, J., et al. Establishment of monoclonal HCC cell lines with organ site-specific tropisms. BMC Cancer. 15, 678(2015).
  48. Ye, Y., Liu, S., Wu, C., Sun, Z. TGFbeta modulates inflammatory cytokines and growth factors to create premetastatic microenvironment and stimulate lung metastasis. J Mol Histol. 46 (4-5), 365-375 (2015).
  49. Morales, M., et al. RARRES3 suppresses breast cancer lung metastasis by regulating adhesion and differentiation. EMBO Mol Med. 6 (7), 865-881 (2014).
  50. Stone, J. P., et al. Mechanical removal of dendritic cell-generating non-classical monocytes via ex vivo lung perfusion. J Heart Lung Transplant. 33 (8), 864-869 (2014).
  51. Vettorazzi, S., et al. Glucocorticoids limit acute lung inflammation in concert with inflammatory stimuli by induction of SphK1. Nat Commun. 6, 7796(2015).
  52. Urade, Y., Yoshida, R., Kitamura, H., Hayaishi, O. Induction of indoleamine 2,3-dioxygenase in alveolar interstitial cells of mouse lung by bacterial lipopolysaccharide. J Biol Chem. 258 (10), 6621-6627 (1983).
  53. Hong, G., et al. Through-skull fluorescence imaging of the brain in a new near-infrared window. Nat Photonics. 8 (9), 723-730 (2014).
  54. Liu, Q., Guo, B., Rao, Z., Zhang, B., Gong, J. R. Strong two-photon-induced fluorescence from photostable, biocompatible nitrogen-doped graphene quantum dots for cellular and deep-tissue imaging. Nano Lett. 13 (6), 2436-2441 (2013).
  55. Peti-Peterdi, J., Burford, J. L., Hackl, M. J. The first decade of using multiphoton microscopy for high-power kidney imaging. Am J Physiol Renal Physiol. 302 (2), F227-F233 (2012).
  56. Duda, D. G., et al. Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (50), 21677-21682 (2010).
  57. Gupta, G. P., et al. Mediators of vascular remodelling co-opted for sequential steps in lung metastasis. Nature. 446 (7137), 765-770 (2007).
  58. Kosaka, N., et al. Neutral sphingomyelinase 2 (nSMase2)-dependent exosomal transfer of angiogenic microRNAs regulate cancer cell metastasis. J Biol Chem. 288 (15), 10849-10859 (2013).
  59. Hoshino, A., et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).
  60. Jaskelioff, M., et al. Telomerase deficiency and telomere dysfunction inhibit mammary tumors induced by polyomavirus middle T oncogene. Oncogene. 28 (48), 4225-4236 (2009).
  61. Si, L. L., Lv, L., Zhou, W. H., Hu, W. D. Establishment and identification of human primary lung cancer cell culture in vitro. Int J Clin Exp Pathol. 8 (6), 6540-6546 (2015).
  62. Weng, D., et al. Metastasis is an early event in mouse mammary carcinomas and is associated with cells bearing stem cell markers. Breast Cancer Res. 14 (1), R18(2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

CFSE C57BL 6

مقالات ذات صلة