يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

صنع واختبار واستخدام البوتاسيوم أيون ميكروليكتروديس انتقائية في شرائح أنسجة الدماغ الكبار

12.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57511

⸱

مايو 7, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Physiology, David Geffen School of Medicine, University of California Los Angeles, 2Department of Neurology, David Geffen School of Medicine, University of California Los Angeles, 3Department of Neurobiology, David Geffen School of Medicine, University of California Los Angeles

في هذه المقالة

ملخص

أيونات البوتاسيوم تساهم يستريح إمكانات غشاء الخلايا والخلية ك+ تركيز منظم حاسمة لاستثارة الخلوية. ونحن تصف كيفية جعل ومعايرة واستخدام أحادي القطب ك+-ميكروليكتروديس انتقائية. استخدام هذه الأقطاب يتيح قياس ديناميات تركيز ك+ مقولة كهربائياً في شرائح هيبوكامبال الكبار.

الملخص

أيونات البوتاسيوم تساهم مساهمة كبيرة في إمكانات غشاء يستريح من الخلايا، وذلك، خارج الخلية ك+ تركيز منظم حاسمة لاستثارة الخلية. تغيير تركيزات من خارج الخلية ك+ يؤثر على استثارة الغشاء يستريح المحتملة والخلوية بالتحول في التوازنات بين الدول المغلقة والمفتوحة والمعطل لقنوات أيون تعتمد على الجهد التي تكمن وراء إمكانات العمل بدء والتوصيل. ومن ثم فإنها ذات قيمة لقياس ديناميات ك+ خارج الخلية في الصحة والدول المريضة مباشرة. هنا، نحن تصف كيفية جعل ومعايرة واستخدام أحادي القطب ك+-ميكروليكتروديس انتقائية. قمنا بنشر لهم في شرائح المخ هيبوكامبال الكبار لقياس ديناميات تركيز ك+ مقولة كهربائياً. الاستخدام الحكيم لهذه الأقطاب هو جزء مهم من مجموعة الأدوات اللازمة لتقييم الآليات الخلوية والفيزيائية التي تتحكم في تركيزات ك+ خارج الخلية في الجهاز العصبي.

المقدمة

أحكام تنظم تركيزات أيون البوتاسيوم في الدماغ، وتقلباتها له تأثير قوي على إمكانات غشاء يستريح كافة الخلايا. وفي ضوء هذه الإسهامات الحاسمة، هو هدفا هاما لعلم الأحياء تحديد الآليات الخلوية والفيزيائية الحيوية التي يتم استخدامها لتنظيم محكم تركيز ك+ في الفضاء خارج الخلية في الأجهزة المختلفة ل الجسم1 , 2-شرط هام في هذه الدراسات هو القدرة على قياس تركيزات ك+ بدقة. على الرغم من أن العديد من العناصر التي تسهم في التوازن البوتاسيوم في الدماغ في الدول السليمة والمريضة قد حددت3،،من45، تباطأ التقدم كذلك بسبب الطبيعة المتخصصة إعداد أيون ميكروليكتروديس الانتقائي لقياس البوتاسيوم. أجهزة الاستشعار ميكروليكترودي تمثل المعيار الذهبي لقياس ك+ التركيزات في المختبر، في شرائح الأنسجة و في فيفو.

أحدث النهج ك+ الرصد هي قيد التطوير باستخدام أجهزة الاستشعار البصرية، بيد أن هذه لا يكشف تركيزات البيولوجية ذات الصلة لمجموعة ك+ أو قد لا تم تماما وفحص في النظم البيولوجية، على الرغم من أن النتائج الأولية تبدو واعدة6،،من78. مقارنة بأجهزة الاستشعار البصرية، ميكروليكتروديس محدودة أساسا لقياس نقطة مصدر الأيونات، على الرغم من صفائف القطب يمكن تحسين القرار المكانية9. تركز هذه المقالة على ماسورة واحدة ميكروليكترودي أجهزة الاستشعار لرصد ديناميات ك+ .

في هذا العمل، نحن تقرير مفصل إجراءات التدرجي لجعل ك+ ميكروليكتروديس انتقائية، باستخدام ionophore بوتاسيوم المستندة إلى فالينوميسين التي تسمح بانتقائية للغاية (104 إضعاف ك+ إلى الانتقائية نا+ ) ك+ الحركة عبر أغشية10. ببتيد طبيعيا، فالينوميسين بمثابة مسام نفاذية ك+ وييسر تدفق ك+ إلى أسفل التدرج اللوني الكهروكيميائية. ونحن أيضا وصف كيفية معايرة الأقطاب، كيفية تخزينها واستخدامها، وأخيراً كيفية نشرها لقياس ديناميات تركيز ك+ في شرائح المخ هيبوكامبال الحاد من الفئران الكبار. استخدام أقطاب هذه جنبا إلى جنب مع الفئران المعدلة وراثيا التي تفتقر إلى قنوات أيون المحددة المقترحة لتنظيم خارج الخلية ك+ حيوية ينبغي أن تكشف عن الآليات الخلوية المستخدمة من قبل الجهاز العصبي للتحكم بتركيز ك المحيطة + في الوسط خارج الخلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

جميع التجارب على الحيوانات وأجريت وفقا "المعهد الوطني للدليل الصحي" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ووافقت عليها "لجنة البحوث الحيوانية" المستشار في جامعة كاليفورنيا، لوس أنجلوس. تم إيواء جميع الفئران مع تتوفر الأغذية والمياه libitum الإعلانية في بيئة ضوء الظلام ح 12. جميع الحيوانات صحية مع لا تغييرات سلوكية واضحة، ولم يشاركوا في الدراسات السابقة، وضحى بها أثناء دورة خفيفة. تم جمع البيانات لإجراء التجارب من الفئران الكبار (6-8 أسابيع من العمر لجميع التجارب).

1-إعداد ميكروليكتروديس انتقائية ك+

  1. سيلانيزيشن زجاج البورسليكات
    1. إزالة الشعيرات الدموية الزجاج كافية من التعبئة والتغليف، ووضع في أنبوب 50 مل مخروطية. ملء أنبوب مخروطي إلى أعلى مع أقطاب HCl. يغسل م 1 مع الانفعالات لطيف في HCl بين عشية وضحاها، أو على الأقل لمدة 6 ساعات.
    2. شطف بإيجاز الشعيرات الدموية مع الإيثانول 70% وثم جاف تماما عند 100-120 درجة مئوية لمدة 6-8 ساعات. تخزين الشعيرات الدموية غسلها في حاويات مع كبريتات الكالسيوم اللامائية ديسيككانت لمدة 4 أسابيع قبل استخدامها مرة أخرى.
    3. قبل سيلانيزيشن، سحب الشعيرات الدموية لنصيحة خير استخدام ساحبة ميكروليكترودي. ميكروليكتروديس التي نستخدمها حوالي 2-5 ميكرون في القطر. دائماً معالجة الشعيرات الدموية غسلها بقفازات والزيوت من الجلد يمكن أن تتداخل مع سيلانيزيشن.
    4. ضع ميكروليكتروديس في حاوية زجاج حيث أن أقطاب كهربائية مرتفعة من أسفل لمنع الكسر تلميح. إصلاح ميكروليكتروديس للحاوية باستخدام الشريط أوتوكلافابل أو شريط لاصق مماثلة.
    5. إزالة ما يقرب من 0.5 مل من محلول سيلانيزيشن 5% ديتشلوروديميثيلسيلاني (دس) من الحاوية الخاصة به باستخدام الأسلوب استبدال النيتروجين (انظر الشكل 2). ملء بالون بغاز النيتروجين وإرفاقه حقنه أو الأنبوب والإبرة البالون. أدخل الإبرة في الحاوية دس حين وضع دس في محقن منفصل عن طريق إبرة أطول.
    6. تطبيق الحل سيلانيزيشن دروبويسي إلى نصائح الماصات وتغطي فورا. مكان الحاوية عقد ميكروليكتروديس مع الحل سيلانيزيشن في فرن مختبر المعالجون مسبقاً (170-180 درجة مئوية) لمدة 10-12 ساعة أو 200-220 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة
    7. وبعد التفريخ، إيقاف تشغيل الفرن ثم قم بإزالة اللوحة من الفرن. كن حذراً عند إزالة اللوحة من الحاضنة، كما أنها ساخنة للغاية. وضع اللوحة على مقاعد البدلاء في درجة حرارة الغرفة لمدة 10-15 دقيقة للسماح للأواني الزجاجية لتبريد.
    8. إزالة ميكروليكتروديس من اللوحة (باستخدام شفرة حلاقة أو شفرة المبضع بقص الشريط) ووضعها في وعاء محكم معبأ المجففة. يمكن استخدام ميكروليكتروديس سيلانيزيد التي تبقى خالية من الرطوبة لتصل إلى 1 الأسبوع التالي سيلانيزيشن.
  2. فتيلة أقطاب كهربائية
    1. إعداد حل أسهم من ك+ ionophore كوكتيل: 5% w/v فالينوميسين، 93% v/v 1، 2-ثنائي ميثيل-3-النيترو بنزين، والبوتاسيوم 2% w/v tetrakis(4-chlorophenyl) بورات11. هذا الحل لون أصفر باهت. تبقى في وعاء محكم الإغلاق، ومبهمة في درجة حرارة الغرفة. إذا المخزنة بشكل صحيح هذا الحل يمكن أن تستمر عدة أشهر.
    2. إعداد حل أسهم من 10 ملم حبيس مخزنة 300 مم كلوريد الصوديوم عند الأس الهيدروجيني 7.4. إصلاح مسرى إلى المشبك والردم مع كلوريد الصوديوم مخزنة بشكل مؤقت باستخدام تلميح ميكروفيل ز 28 متصلاً بحقنه. ويلاحظ أن المحلول الملحي قد وصلت إلى نهاية الحافة ميكروليكترودي. التأكد من أن ميكروليكترودي خالية من الفقاعات الكبيرة التي يمكن أن تتداخل مع تدفق التيار.
    3. كسر غيض مسرى إلى حوالي 10-20 ميكرومتر على نطاق واسع، استخدام الجانب حادة مشرط أو شفرة حلاقة.
    4. استخدام ميكروبيبيتي، تطبيق المعالجة تجميعية صغيرة (~0.1 ميليلتر) من إيونوفوري ك+ قرب غيض من ميكروليكترودي. إذا تم بشكل صحيح سيلانيزيد سيتم استيعاب الحبرية في تلميح كسر مسرى. تعبئة مسرى إلى 1-2 ملم مع إيونوفوري ك+ ، وإزالة الزائدة باستخدام المناديل الورقية.

2-معايرة ميكروليكتروديس انتقائية ك+

  1. تحضير محاليل المعايرة
    1. إعداد حلول لتركيزات مختلفة من بوكل في السائل الدماغي النخاعي الاصطناعية الاسموليه متساوية (قام) بالاستعاضة عن كلوريد الصوديوم مع بوكل. كنا 0، 1، 1، 4، 5، 10 و 100 ملم ك+ قام، للمعايرة من أقطاب كهربائية. وترد في الجدول 1وصفات لهذه الحلول المعايرة.
المادة الكيميائيةميغاواطمم النهائيمم 0.1 [K +]1 ملم [K +]4.5 مم [K +]10 ملم [K +]100 ملم [K +]
(g/mol)
كلوريد الصوديوم58.44ويختلفز 1.51ز 1.50ز 1.44ز 1.4ز 0.345
بوكلالأسهم م 1ويختلف20 ميليلتر200 ميليلترميليلتر 9002 مل20 مل
كاكل2 الأسهم م 12400 ميليلتر
مجكل2 الأسهم م 11200 ميليلتر
نة2بو4 119.981.2ز 0.29
NaHCO3 84.0126ز 0.437
د-الجلوكوز180.1610ز 0.360
المياهq.s. 200 مل

الجدول 1. حلول معايرة البوتاسيوم

  1. ميكروليكترودي المعايرة
    1. فقاعة كل الحلول مع 95% O25% CO2 لمدة 20 دقيقة على الأقل قبل البدء بالتجربة. تبدأ بيرفوسينج الحمام مع 4.5 ملم [ك+] قام بمعدل 3 مل في الدقيقة الواحدة. ضع مسرى انتقائية ك+ إلى حامل القطب يعلق على هيدستاجي القطب على المناور. هذا هيدستاجي متصل بمكبر للصوت مناسب. إدراج تلميح مسرى بيرفوساتي حمام.
    2. ضمان مسرى الأرض Ag/AgCl هو حمم في نفس الحل، وأن التدفق مطرد. تطبيق حلول المعايرة بطريقة تدريجية وتسجيل التغييرات المحتملة في المتوسط عبر الحافة قطب كهربائي. الانتظار لامكانيتها في تلميح قطب كهربائي للتوصل إلى قيمة ثابتة قبل التحول إلى الحل التالي
    3. قياس تغير الجهد ثابت الدولة استجابة لتطبيق حلول المعايرة على طرف القطب. التأكد من أن الميل للاستجابة القطب 52 على الأقل ولا يزيد عن 58 أم كل تغيير سجل في [ك+].

3-إعداد شرائح المخ هيبوكامبال الحادة

  1. إعداد الحلول شريحة
    1. إعداد 500 مل السكروز قطع الحل تتألف من: السكروز 194 مم، 30 مم كلوريد الصوديوم، 4.5 مم بوكل، 10 ملم د-الجلوكوز، 1 مم مجكل2، 1.2 مم نة2ص4، و ناكو 26 مم3، موسم 290-300، مشبعة مع 95% O2 و 5% CO2.
    2. إعداد 1-2 لترات من تسجيل الحل (قام) تتألف من: 124 كلوريد الصوديوم، 4.5 مم بوكل، 1 مم مجكل2، 10 ملم د-الجلوكوز، 2 مم كاكل2، 1.2 مم نة2بو4، و 26 ملم ناكو3؛ الرقم الهيدروجيني 7.3-7.4 (بعد السطح)، موسم 290-300، مشبعة مع 95% O2 و 5% CO2. ملء كوب يحتوي على غرفة حامل شريحة الدماغ مع تسجيل الحل وإبقائه في 32-34 درجة مئوية. ملء قاعة فيبرتوم مع طين الماء المثلج.
  2. إعداد شريحة الحادة
    1. تخدير عميق ماوس بوضعه في جرة بيل بريتشارجيد مع إيسوفلوراني 2-3 مل. تحقق منعكس قرصه أخمص القدمين، وإذا كان غير المستجيبة، قطع رأس سريعاً باستخدام زوج من مقص حاد أو المقصلة كما يتطلب البروتوكول الخاص بك الحيوانات.
    2. جعل شق 2-3 سم باستخدام المقص من الجزء والذيلية من الجمجمة إلى قطع فروة الرأس على طول خط الوسط. بينما يدوياً تراجعه فروة الرأس، جعل اثنين 1 سم شقوق أفقية من ماغنوم ثقبة على طول جانبي الجمجمة. ثم، باستخدام مقص غرامة، قطع شق طول الجمجمة، على طول خط الوسط من الجزء الخلفي الجمجمة إلى الآنف.
    3. استخدام الملقط غرامة إدراجها قرب خط الوسط، تتراجع الجمجمة قطعي في جزأين. استخراج المخ الماوس من الجمجمة واستخدام شفرة لإزالة المخيخ والمصابيح شمي، التي تقع على التوالي في أجزاء الدماغ والذيلية وروسترال. يمكن تحديد هذه التشققات الكبيرة، التي فصلها عن القشرة.
    4. جبل كتلة الدماغ على الدرج فيبرتوم استخدام سوبر الغراء. ملء علبة فيبرتوم مع الحل قطع الجليد الباردة.
    5. قص مقاطع الأنسجة على متن الطائرة الاكليلية في 300 ميكرون سمك. وعادة ما يمكن جمعها 6 شرائح هيبوكامبال الاكليلية.
    6. بعد أن يتم قطع كل قسم، نقل على الفور الشرائح إلى الشريحة عقد الكأس استعد 32-34 درجة مئوية. إبقاء الأبواب في درجة الحرارة هذه لمدة 20 دقيقة قبل إزالة الكأس التي تحتوي المقاطع ومكان هذا في درجة حرارة الغرفة قبل تسجيل 20-30 دقيقة على الأقل.

4-قياس ديناميات كهربائياً مقولة ك+

  1. إعداد إعداد شريحة
    1. بلطف ضع شريحة الدماغ في الحمام باستخدام ماصة باستور ولطف أنه عقد في مكان مع قيثارة البلاتين مع سلاسل النايلون.
    2. ضمان النصائح من ثنائي القطب الكهربائي محفزة موازية لبعضها البعض وهي المستوى مع طائرة الشريحة. ببطء، على مدى 6-7 ثوان، إدراج الأقطاب CA3 الطبقة رادياتوم حوالي 40-50 ميكرون العميق لحفز شافر ضمانات إضافية. في المقاطع الاكليلية، CA3 يمكن تقريبا التعرف كجزء جانبية الحصين السليم إلى طبقة الخلايا الحبيبية في جينو هيبوكامبال، مع رادياتوم الطبقة الوقوع الآنسي والبطني إلى طبقة الخلايا الهرمية.
    3. إدراج بعناية ك+-القطب الانتقائي في CA1 الطبقة رادياتوم ما يقرب من 50 ميكرومتر العميقة، عن طريق خفض الكهربائي ببطء على مدى ما يقرب من 3-4 ثوان. تتيح إمكانات لتحقيق الاستقرار عبر مسرى قبل تطبيق التحفيز على الشريحة: وهذا عادة ما يستغرق 5 إلى 10 دقائق. إذا كانت الشريحة معارض عفوية تجاهل التغييرات في الخلية ك+ ثم وكرر هذه العملية مع شريحة جديدة.
  2. التدبير آثار إطلاق سراح ك+
    1. تطبقه يدوياً كئيبة على الزناد على مشجعا أثناء رقمياً تسجيل استجابات القطارات للتحفيز الكهربائي (8 البقول). تطبيق التحفيز في 10 هرتز و 1 عرض النبض مرض التصلب العصبي المتعدد، بدءاً من 10 السعة التحفيز µA.
    2. تطبيق زيادة تحفيز ستريك بعامل 2 حتى يتم اكتشاف حالة من سعة استجابة ك+ الحد أقصى. إذا كنت لا ترى أي استجابة، نقل موضع مسرى ك+ أقرب إلى موقع التحفيز في 100 ميكرومتر في زيادات
    3. تحديد السعة التحفيز التي تنتج نصف الاستجابة القصوى. في تجربتنا، هذا بين 40-160 µA، اعتماداً على نوعية إعداد وسن الحيوان، والمسافة بين أقطاب التحفيز والقطب الانتقائي ك+ .
    4. في نفس الشريحة، استخدام سعة حافز في خطوة واحدة أقل من السعة التي تنتج نصف الاستجابة القصوى (مثلاً إذا كان ينتج 80 µA رد النصف الأعلى، استخدم 40 µA) تطبيق القطارات حافزا لزيادة عدد النبضات. في البداية، وقد استخدمنا القطارات من البقول 1، 2، 4، 8، 16، 32، 64 و 128.
    5. للتأكد من أن يتم بإطلاق إمكانات عمل حمام الضمانات شافر حفزت كهربائياً وساطة إشارات ك+ ، تطبيق 0.5 ميكرومتر ت في قام لمدة 10 دقائق وكرر البروتوكول التحفيز. ينبغي أن تراعي أية استجابات مقولة.
    6. بعد الانتهاء من هذه التجربة شريحة، تأكيد مسرى حافظت على ريسبونسيفيتي بإعادة معايرة مسرى في حلول المعايرة وضمان الاستجابة قد انحرفت ليس بأكثر من 10% من المعايرة الأولية

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

للقياس الانتقائي لخارج الخلية ك+، نحن على استعداد ميكروليكتروديس الأيوني الانتقائي مغطاة بطبقة مسعور من خلال سيلانيزيشن لتنظيف البورسليكات الزجاج الماصات (الشكل 1A). ويتيح هذا الطلاء إيونوفوري ك+ التي تحتوي على فالينوميسين للراحة في غيض مسرى والسماح فقط ك+ في الجريان داخل فتحه ضيقة على طرف القطب (الشكل 1B). بعد فتيلة الأقطاب مع المحلول الملحي تردم وإيونوفوري ك+ ، يمكن أن يكون اختبار أقط...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الأسلوب الذي يصف لنا هنا قد سمح لنا تقييم ديناميات ك+ استجابة للتحفيز الكهربائي للضمانات شافر في شرائح هيبوكامبال الحاد من الفئران الكبار. لدينا طريقة لإعداد ك+ ميكروليكتروديس أيون انتقائية مماثلة للإجراءات الموصوفة في وقت سابق12،13،،من1415. ومع ذلك، هذا الأسلوب مزايا أكثر من تكوينات بديلة القطب حيث أنها سريعة وغير معقدة لإعداد ميكروليكتروديس ك+ انتقائية. بعد مع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

وأيد المختبر كاخ MH104069 المعاهد الوطنية للصحة. مختبر مودي أيده NS030549 المعاهد الوطنية للصحة. بفضل J.C.O. Grant(NS058280) التدريب رقائق العصبية في المعاهد الوطنية للصحة T32.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
VibratomeDSKMicroslicer Zero 1
الماوس: C57BL / 6NTac الفئران الفطريةTaconicStock # B6
المجهرأوليمبوسBX51
مجتذب القطبالكهربائي SutterP-97
Ag / AgCl الحبيبات الأرضيةWPI EP2
pCLAMP10.3الأجهزة الجزيئيةn / a
مخصص microfil 28G تلميحأدوات الدقة العالميةCMF28G
قضيب التنغستنأنظمة EM716000
أقطاب كهربائية محفزة ثنائية القطبFHCMX21XEW (T01)
عازل التحفيزأدوات الدقة العالميةA365
العشب S88 محفزأدوات العشب شركةS88
ماصات زجاجية من البورسليكات أدواتالدقة العالمية1B150-4
A إلى D لوحةDigidata 1322AAxon Instruments
مضخم إشارةMulticlamp 700A أو 700BAxon Instruments
HeadstageCV-7B Cat 1Axon Instruments
Patch ComputerDellN / A
Sodium ChlorideSigmaS5886
كلوريد البوتاسيومسيجماP3911
هيبسسيجماH3375
بيكربونات الصوديومسيجماS5761
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدةسيجماS0751
D-الجلوكوزسيجماG7528
كلوريد الكالسيومسيجما21108
كلوريد المغنيسيومسيجماM8266
فالينومايسينسيجماV0627-10mg
1،2-dimethyl-3-nitrobenzeneSigma40870-25ml
رباعي البوتاسيوم (4-chlorophenyl) بوراتSigma60591-100mg
5٪ ثنائي ميثيل ثنائي كلوروسيلان في heptaneSigma85126-5ml
TTXCayman شركة كيماويات14964
حمض الهيدروكلوريكسيجماH1758-500 مل السكروز
سيجماS9378-5 كجم
ماصة مناور دقيقةسوترMP-285 / ROE-200 / MPC-200
عدسة موضوعيةأوليمبوسبلانكAPO 10xW

المراجع

  1. McDonough, A. A., Youn, J. H. Potassium homeostasis: The knowns, the unknowns, and the health benefits. Physiol Bethesda Md. 32 (2), 100-111 (2017).
  2. Hille, B. Ion channels of excitable membranes. , Sinauer. Sunderland, MA. 507(2001).
  3. Kofuji, P., Ceelen, P., Zahs, K. R., Surbeck, L. W., Lester, H. A., Newman, E. A. Genetic inactivation of an inwardly rectifying potassium channel (Kir4.1 subunit) in mice: Phenotypic impact in retina. J Neurosci. 20 (15), 5733-5740 (2000).
  4. Sibille, J., Dao Duc, K., Holcman, D., Rouach, N. The neuroglial potassium cycle during neurotransmission: role of Kir4.1 channels. PLoS Comput Biol. 11 (3), e1004137(2015).
  5. Tong, X., et al. Astrocyte Kir4.1 ion channel deficits contribute to neuronal dysfunction in Huntington's disease model mice. Nat Neurosci. 17 (5), 694-703 (2014).
  6. Datta, D., Sarkar, K., Mukherjee, S., Meshik, X., Stroscio, M. A., Dutta, M. Graphene oxide and DNA aptamer based sub-nanomolar potassium detecting optical nanosensor. Nanotechnology. 28 (32), 325502(2017).
  7. Bandara, H. M. D., et al. Palladium-Mediated Synthesis of a Near-Infrared Fluorescent K+ Sensor. J Org Chem. 82 (15), 8199-8205 (2017).
  8. Depauw, A., et al. A highly selective potassium sensor for the detection of potassium in living tissues. Chem Weinh Bergstr Ger. 22 (42), 14902-14911 (2016).
  9. Machado, R., et al. Biofouling-Resistant Impedimetric Sensor for Array High-Resolution Extracellular Potassium Monitoring in the Brain. Biosensors. 6 (4), (2016).
  10. Rose, M. C., Henkens, R. W. Stability of sodium and potassium complexes of valinomycin. Biochim Biophys Acta BBA - Gen Subj. 372 (2), 426-435 (1974).
  11. Ammann, D., Chao, P., Simon, W. Valinomycin-based K+ selective microelectrodes with low electrical membrane resistance. Neurosci Lett. 74 (2), 221-226 (1987).
  12. Amzica, F., Steriade, M. Neuronal and glial membrane potentials during sleep and paroxysmal oscillations in the neocortex. J Neurosci. 20 (17), 6648-6665 (2000).
  13. Amzica, F., Steriade, M. The functional significance of K-complexes. Sleep Med Rev. 6 (2), 139-149 (2002).
  14. MacVicar, B. A., Feighan, D., Brown, A., Ransom, B. Intrinsic optical signals in the rat optic nerve: role for K(+) uptake via NKCC1 and swelling of astrocytes. Glia. 37 (2), 114-123 (2002).
  15. Chever, O., Djukic, B., McCarthy, K. D., Amzica, F. Implication of Kir4.1 channel in excess potassium clearance: an in vivo study on anesthetized glial-conditional Kir4.1 knock-out mice. J Neurosci. 30 (47), 15769-15777 (2010).
  16. Hall, D. G. Ion-selective membrane electrodes: A general limiting treatment of interference effects. J Phys Chem. 100 (17), 7230-7236 (1996).
  17. Haack, N., Durry, S., Kafitz, K. W., Chesler, M., Rose, C. R. Double-barreled and Concentric Microelectrodes for Measurement of Extracellular Ion Signals in Brain Tissue. J Vis Exp. (103), e53058(2015).
  18. Larsen, B. R., MacAulay, N. Kir4.1-mediated spatial buffering of K(+): Experimental challenges in determination of its temporal and quantitative contribution to K(+) clearance in the brain. Channels Austin Tex. 8 (6), 544-550 (2014).
  19. Mei, L., et al. Long-term in vivo recording of circadian rhythms in brains of freely moving mice. Proceedings of the National Academy of Sciences. 115, 4276-4281 (2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تحضير شرائح الدماغالتسجيل الفيزيولوجي الكهربائيقياس البوتاسيوم خارج الخلويتصنيع القطب الكهربائي الدقيقمعايرة حامل الأيوناتتحفيز شرائح الحصينتفعيل جانبيات شافرتحليل معادلة نيرنستتطبيق تيت رودوتوكسين (TTX)
صنع واختبار واستخدام البوتاسيوم أيون ميكروليكتروديس انتقائية في شرائح أنسجة الدماغ الكبار
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.