Method Article

صنع واختبار واستخدام البوتاسيوم أيون ميكروليكتروديس انتقائية في شرائح أنسجة الدماغ الكبار

DOI:

10.3791/57511

⸱

May 7th, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Physiology, David Geffen School of Medicine, University of California Los Angeles, 2Department of Neurology, David Geffen School of Medicine, University of California Los Angeles, 3Department of Neurobiology, David Geffen School of Medicine, University of California Los Angeles

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أيونات البوتاسيوم تساهم يستريح إمكانات غشاء الخلايا والخلية ك+ تركيز منظم حاسمة لاستثارة الخلوية. ونحن تصف كيفية جعل ومعايرة واستخدام أحادي القطب ك+-ميكروليكتروديس انتقائية. استخدام هذه الأقطاب يتيح قياس ديناميات تركيز ك+ مقولة كهربائياً في شرائح هيبوكامبال الكبار.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أيونات البوتاسيوم تساهم مساهمة كبيرة في إمكانات غشاء يستريح من الخلايا، وذلك، خارج الخلية ك+ تركيز منظم حاسمة لاستثارة الخلية. تغيير تركيزات من خارج الخلية ك+ يؤثر على استثارة الغشاء يستريح المحتملة والخلوية بالتحول في التوازنات بين الدول المغلقة والمفتوحة والمعطل لقنوات أيون تعتمد على الجهد التي تكمن وراء إمكانات العمل بدء والتوصيل. ومن ثم فإنها ذات قيمة لقياس ديناميات ك+ خارج الخلية في الصحة والدول المريضة مباشرة. هنا، نحن تصف كيفية جعل ومعايرة واستخدام أحادي القطب ك+-ميكروليكتروديس انتقائية. قمنا بنشر لهم في شرائح المخ هيبوكامبال الكبار لقياس ديناميات تركيز ك+ مقولة كهربائياً. الاستخدام الحكيم لهذه الأقطاب هو جزء مهم من مجموعة الأدوات اللازمة لتقييم الآليات الخلوية والفيزيائية التي تتحكم في تركيزات ك+ خارج الخلية في الجهاز العصبي.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أحكام تنظم تركيزات أيون البوتاسيوم في الدماغ، وتقلباتها له تأثير قوي على إمكانات غشاء يستريح كافة الخلايا. وفي ضوء هذه الإسهامات الحاسمة، هو هدفا هاما لعلم الأحياء تحديد الآليات الخلوية والفيزيائية الحيوية التي يتم استخدامها لتنظيم محكم تركيز ك+ في الفضاء خارج الخلية في الأجهزة المختلفة ل الجسم1 , 2-شرط هام في هذه الدراسات هو القدرة على قياس تركيزات ك+ بدقة. على الرغم من أن العديد من العناصر التي تسهم في التوازن البوتاسيوم في الدماغ في الدول السليمة والمريضة قد حددت3،،من45، تباطأ التقدم كذلك بسبب....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع التجارب على الحيوانات وأجريت وفقا "المعهد الوطني للدليل الصحي" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ووافقت عليها "لجنة البحوث الحيوانية" المستشار في جامعة كاليفورنيا، لوس أنجلوس. تم إيواء جميع الفئران مع تتوفر الأغذية والمياه libitum الإعلانية في بيئة ضوء الظلام ح 12. جميع الحيوانات صحية مع لا تغييرات سلوكية واضحة، ولم يشاركوا في الدراسات السابقة، وضحى بها أثناء دورة خفيفة. تم جمع البيانات لإجراء التجارب من الفئران الكبار (6-8 أسابيع من العمر لجميع التجارب).

1-إعداد ميكروليكتروديس انتقائية ك+

  1. سيلانيزيشن زجاج البورسليكات
    1. إزالة الشعيرات الدموية الزجاج كافية من التعبئة والتغليف، ووضع في أنبوب 50 مل مخر....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

للقياس الانتقائي لخارج الخلية ك+، نحن على استعداد ميكروليكتروديس الأيوني الانتقائي مغطاة بطبقة مسعور من خلال سيلانيزيشن لتنظيف البورسليكات الزجاج الماصات (الشكل 1A). ويتيح هذا الطلاء إيونوفوري ك+ التي تحتوي على فالينوميسين للراحة في غيض مسرى والسماح فقط ك+ في الجريان داخل فتحه ضيقة على طرف القطب (الشكل 1B). بعد فتيلة الأقطاب مع المحلول الملحي تردم وإيونوفوري ك+ ، يمكن أن يكون اختبار أقط.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأسلوب الذي يصف لنا هنا قد سمح لنا تقييم ديناميات ك+ استجابة للتحفيز الكهربائي للضمانات شافر في شرائح هيبوكامبال الحاد من الفئران الكبار. لدينا طريقة لإعداد ك+ ميكروليكتروديس أيون انتقائية مماثلة للإجراءات الموصوفة في وقت سابق12،13،،من1415. ومع ذلك، هذا الأسلوب مزايا أكثر من تكوينات بديلة القطب حيث أنها سريعة وغير معقدة لإعداد ميكروليكتروديس ك+ انتقائية. بعد مع.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد المختبر كاخ MH104069 المعاهد الوطنية للصحة. مختبر مودي أيده NS030549 المعاهد الوطنية للصحة. بفضل J.C.O. Grant(NS058280) التدريب رقائق العصبية في المعاهد الوطنية للصحة T32.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
VibratomeDSKMicroslicer Zero 1
الماوس: C57BL / 6NTac الفئران الفطريةTaconicStock # B6
المجهرأوليمبوسBX51
مجتذب القطبالكهربائي SutterP-97
Ag / AgCl الحبيبات الأرضيةWPI EP2
pCLAMP10.3الأجهزة الجزيئيةn / a
مخصص microfil 28G تلميحأدوات الدقة العالميةCMF28G
قضيب التنغستنأنظمة EM716000
أقطاب كهربائية محفزة ثنائية القطبFHCMX21XEW (T01)
عازل التحفيزأدوات الدقة العالميةA365
العشب S88 محفزأدوات العشب شركةS88
ماصات زجاجية من البورسليكات أدواتالدقة العالمية1B150-4
A إلى D لوحةDigidata 1322AAxon Instruments
مضخم إشارةMulticlamp 700A أو 700BAxon Instruments
HeadstageCV-7B Cat 1Axon Instruments
Patch ComputerDellN / A
Sodium ChlorideSigmaS5886
كلوريد البوتاسيومسيجماP3911
هيبسسيجماH3375
بيكربونات الصوديومسيجماS5761
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدةسيجماS0751
D-الجلوكوزسيجماG7528
كلوريد الكالسيومسيجما21108
كلوريد المغنيسيومسيجماM8266
فالينومايسينسيجماV0627-10mg
1،2-dimethyl-3-nitrobenzeneSigma40870-25ml
رباعي البوتاسيوم (4-chlorophenyl) بوراتSigma60591-100mg
5٪ ثنائي ميثيل ثنائي كلوروسيلان في heptaneSigma85126-5ml
TTXCayman شركة كيماويات14964
حمض الهيدروكلوريكسيجماH1758-500 مل السكروز
سيجماS9378-5 كجم
ماصة مناور دقيقةسوترMP-285 / ROE-200 / MPC-200
عدسة موضوعيةأوليمبوسبلانكAPO 10xW

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McDonough, A. A., Youn, J. H. Potassium homeostasis: The knowns, the unknowns, and the health benefits. Physiol Bethesda Md. 32 (2), 100-111 (2017).
  2. Hille, B. Ion channels of excitable membranes. , Sinauer. Sunderland, MA. 507(2001).
  3. Kofuji, P., Ceelen, P., Zahs, K. R., Surbeck, L. W., Le....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Potassium Ion Selective MicroelectrodesBrain Slice PreparationElectrophysiological RecordingExtracellular Potassium MeasurementMicroelectrode FabricationIonophore CalibrationHippocampal Slice StimulationSchaffer Collateral ActivationNernst Equation AnalysisTTX Application

Related Articles