مقالة منهجية

الكشف عن "البروتين التعريب سوبسيلولار الأخضر Fluorescence علامات البروتين" و 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي تلطيخ في ايليجانس كاينورهابديتيس

DOI:

10.3791/57914

⸱

يوليو 30, 2018

 ,  , 
1Department of Science, Borough of Manhattan Community College/CUNY

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يوضح كيفية تعقب إزفاء بروتين النووي تحت الإجهاد الحراري باستخدام بروتين انصهار بروتين (بروتينات فلورية خضراء) فلورية خضراء كعلامة 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) وتلطيخ. DAPI تلطيخ البروتوكول بسرعة ويحافظ على إشارات التعريب سوبسيلولار البروتين والتجارة والنقل.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا البروتوكول، بروتين انصهار بروتين (بروتينات فلورية خضراء) فلورية خضراء و 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) تلطيخ تستخدم لتعقب التغييرات التعريب سوبسيلولار البروتين؛ على وجه الخصوص، يؤكد إزفاء نووية تحت حرارة الشرط. تتفاعل البروتينات إشارات في المقابل إلى الخارجية والداخلية. إنشاء إليه مشتركة لتغيير به التعريب سوبسيلولار. توضح هذه المقالة بروتوكول لتتبع البروتين التعريب التي لا تتطلب جسم أو وضع العلامات المشعة أو مجهر [كنفوكل]. في هذه المقالة، يتم استخدام بروتينات فلورية خضراء للوسم أكسل-1 البروتين المستهدف في C. ايليجانس، عضو الأسرة كلوريد البروتينات (كليكس) قناة داخل الخلايا، بما في ذلك CLIC4 الثدييات. خط المعدلة وراثيا متعدية متكامل أكسل-1::gfp (مع أحد المروجين وتسلسل جين كامل) أنشئت γ-الإشعاع والتحول، وثابت يعبر عن الجينات و التجارة والنقل. وأظهرت البحوث التي أجريت مؤخرا أن أكسل 1::GFP عند الإجهاد الحراري، عدم الأكسدة، يتراكم في النواة. تداخل إشارة بروتينات فلورية خضراء مع هيكل النوى و DAPI إشارات تؤكد التغييرات التعريب سوبسيلولار أكسل-1 تحت الضغط. هذا البروتوكول يقدم طريقتين تثبيت مختلفة لتلوين DAPI: التثبيت الإيثانول والاسيتون التثبيت. البروتوكول المصبوغة DAPI الواردة في هذه المادة بسرعة وكفاءة ويحافظ على إشارة بروتينات فلورية خضراء والتغييرات التعريب سوبسيلولار البروتين. هذا الأسلوب يتطلب إلا مجهر الأسفار مع نومارسكي وعامل تصفية فيتك وعامل تصفية DAPI. ومناسبة لإعداد مختبر صغير والبحث الجامعي والبحوث طالب مدرسة ثانوية وفصول دراسية في مجال التكنولوجيا الأحيائية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تغيير التعريب سوبسيلولار البروتين إليه مشتركة استجابة لإشارات داخلية أو خارجية مثل الإجهاد الحراري، والمجاعة، والأكسدة، المبرمج، الفسفرة البروتين وغيرها. على سبيل المثال، يحفز الإجهاد الحراري عضو فوكسو DAF-16 النووية إزفاء1،2، والبروتين BCL-2 برو-apoptotic محاولة translocates إلى الميتوكوندريا عند وفاة تلقي الإشارات3،4. وتتوفر تقنيات مختلفة للكشف عن هذه التغييرات. مزيج من النشاف الغربية وعزل المتحلل هياكل سوبسيلولار (مثلاً، الميتوكوندريا أو الأنوية) يمكن أيضا تحقيق الهدف3. بيد أنه يتطلب جسم معين ضد بروتين الفائدة. وهكذا، يصبح جسم راسخة مفتاح النجاح. نهج بديل يتمثل في تسمية مختلف الهياكل سوبسيلولار أو العضيات مع علامات مختلفة مثل مشري والأسفار الصفراء البروتين (يفب)، البروتينات الفلورية الخضراء (التجارة والنقل) والبروتين الأحمر الفلورية (RFP)، وفي الوقت نفسه تسمية البروتين من الفائدة مع علامات أخرى. ثم، مراقبة لهم تحت مجهر [كنفوكل] إلى ترجمة أهداف5،6. النظائر المشعة خيار بديل لوسم البروتينات المستهدفة وثم كشف عن التعريب سوبسيلولار7. ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب التدريب السليم والتعامل مع النفايات المشعة. تحت ظروف مثل الافتقار إلى جسم معين، وعدم وجود علامة السليم، أو [سكرسنس] معدات مثل مجهر [كنفوكل]، يحتاج نهج بديل النظر. لتحديد إزفاء بروتين النووي، أنها جذابة لتسمية البروتينات المستهدفة فقط مع علامة ووصمة عار الأنوية مع الكاشف الكيميائي 4 ', 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) منذ هذا يتطلب إلا مجهر الأسفار عادية.

إيمونولابيلينج C. ايليجانس مع الأجسام المضادة صعبة بسبب نفاذية منخفضة قشر البيض أو بشرة collagenous المحيطة بالحيوان. وفي الوقت نفسه، نظراً للبروتينات C. ايليجانس متباينة إلى حد كبير من تلك أورثولوجس الفقاريات، تقديم عدد قليل من الشركات التجارية C. ايليجانس بمنتجات محددة. من الصعب لمختبر صغير لتوليد الأجسام المضادة C. ايليجانس لأنفسهم. الباحثين في المجتمع غالباً ما تستخدم البروتينات المعلمة كعلامات لإظهار تعبير بروتين التعريب أو الجينات. يستخدم هذا المقال أكسل 1::GFP كمثال لتعقب إزفاء بروتين النووي تحت ضغط الحرارة8. متعدية الجنسيات متكامل أكسل 1::gfp في جينوم الحيوان يستخدم ستابلي التعبير عن الجينات مع الانصهار بروتينات فلورية خضراء . وأظهرت الأبحاث أن أكسل-1 هو المعرب عنها في الأمعاء وجدار الجسم العضلات وغيرها من الهياكل سوبسيلولار8. هذا البروتوكول يوضح كيفية مزامنة الديدان إلى المرحلة الرابعة اليرقات (L4)، أداء الإجهاد الحرارة التجربة، وسلوك تلطيخ DAPI، تثبيت الإيثانول والاسيتون التثبيت، وتصوير تحت مجهر فلورية عادية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-الحلول

  1. لوحات NGM
    1. في قارورة Erlenmeyer ل 2، إضافة 3 غرام من كلوريد الصوديوم، ز 17 من أجار، 2.5 g من ببتون، ومل 975 درهم2سين غطاء فم قارورة مع رقائق الألومنيوم. اﻷوتوكﻻف قارورة للحد الأدنى 50 بارد عليه لمدة 20 – 30 دقيقة.
    2. قم بإضافة حلول المعقم: 1 مل كاكل م 12، 1 مل 5 ملغ/مل الكولسترول في الإيثانول، 1 مل 1 م MgSO4، و 25 مل م 1 مشرف4 (pH 6.0) المخزن المؤقت. دوامة والحلول لمزجها جيدا.
    3. استخدام موزع سائلة، الاستغناء عن حل NGM لوحات بيتري 60 ملم. تعبئة كامل لوحات 2/3 لاجار. تخزينها في حاوية الغلق عند 4 درجة مئوية لاستخدامها في المستقبل.
  2. 1 M مشرف4 المخزن المؤقت (pH 6.0)
    1. حل 10.83 ز خ2ص4 و 3.56 ز ك2هبو4 في dH2س، ثم ضبط الحجم الكلي إلى 100 مل. اﻷوتوكﻻف الحل لمدة 15 دقيقة.
  3. M9
    1. حل ز 3 خ2ص4، ز 6 غ2هبو4و 5 غ من كلوريد الصوديوم في dH2س، أضف 1 مل من 1 م MgSO4، وضبط الحجم الكلي للأم 1
  4. DAPI 10 ميكروغرام/مل
    1. أضف 1 ميليلتر من 10 ملغ/مل DAPI إلى ميليلتر 999 درهم2o.
  5. كحول 95% (v/v)
    1. قياس 95 مل كحول 100% وإضافة الماء المقطر ضبط حجم الصوت إلى 100 مل.
  6. الأسيتون 30% (v/v)
    1. إضافة 30 مل الأسيتون إلى dH2س وضبط الحجم الكلي إلى 100 مل.

2. الإجهاد الحراري

  1. إنشاء خط صفيف اكستراتشروموسومال مع بنية متعدية الجينات الهدف9،10. وبدلاً من ذلك، الحصول على هذه الخطوط من مركز كاينورهابديتيس علم الوراثة (كجك)، الذي من موارد عامة للبحوث C. ايليجانس ، أو من مختبر أبحاث منشورة سابقا.
  2. دمج الخطوط اكستراتشروموسومال في الجينوم بتعريض الديدان ل الإشعاع γ راد 3,8009. ثم، حدد أسطر ستابلي أعرب حيث أن كل الحيوانات وتعرب عن بروتين علامة مثل التجارة والنقل أو الاسطوانة.
  3. لإزالة الطفرات التي تم إنشاؤها أثناء الإشعاع، التهجين خطوط على الأقل 2 x. استخدام هذا الخط المحورة وراثيا للكشف عن التغييرات نمط التعبير البروتين تحت الضغط.
  4. إعداد لوحات دودة NGM كما هو موضح في الخطوة 1، 1. متتالية استنساخ OP50 والثقافة البكتيريا في السائل LB مرق بين عشية وضحاها. بذور الثقافة لوحات NGM مع OP50 السائلة واحتضان اللوحات في حاضنة 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها أن ينمو حشيش بكتيريا كمصدر لغذاء للديدان. أن تهدئة اللوحات في درجة حرارة الغرفة على الأقل 30 دقيقة قبل الاستخدام.
  5. تنمو السطر المعدلة وراثيا في 20 درجة مئوية دون المجاعة على الأقل 2 أجيال قبل فحص الإجهاد الحرارة.
  6. اختيار 8 – 10 صغار البالغين جرابيد (الرحم مليئة بالبيض) إلى لوحة دودة جديدة، ثم السماح لهم وضع البيض لحوالي 3-5 ح وإزالة جميع البالغين من اللوحات.
  7. لمزامنة الديدان، اسمحوا البيض تفقس وتنمو اليرقات لما يقرب من 48 ساعة إلى المرحلة الرابعة (L4) اليرقات. دراسة هيكلها الفرج (بنية هالفمون) لتحديد المرحلة (الشكل 1)، السهم) L411.
  8. وضع لوحات الدودة مع اليرقات L4 في حاضنة 35 درجة مئوية ح 2 – 5 تحقيقا للإجهاد الحراري. وضع مقياس حرارة في الحاضنة لقياس درجة الحرارة بدقة.

3-DAPI تلطيخ

  1. تثبيت الإيثانول
    1. إضافة 10 ميليلتر من المخزن المؤقت M9 في وسط شريحة الزجاج.
    2. اختيار الديدان صدمة الحرارة من الخطوة 2.8 ووضعها في المخزن المؤقت M9 على الشريحة الزجاجية.
      1. وبدلاً من ذلك، يغسل اللوحة مع M9 والطرد المركزي أنه في 1,000 س ز لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وتجاهل المادة طافية. إضافة الديدان إلى الشريحة الزجاجية.
    3. استخدام أنسجة لينة لاستنزاف أي سائل الزائدة. مشاهدة هذه الخطوة تحت مجهر تشريح.
    4. إضافة 10 ميليلتر من الكحول 95% على الديدان والسماح لهم بالهواء الجاف. مشاهدة العملية تحت مجهر تشريح، ولا تدع الحيوانات الحصول على الجاف للغاية. فورا بعد الإيثانول قد تبخرت من الحيوانات، تابع إلى الخطوة التالية.
      ملاحظة: الإيثانول يتبخر بسرعة كبيرة.
    5. كرر الخطوة 3.1.4 مرتين حيث أن الديدان هي ثابتة.
      ملاحظة: من الطبيعي للحيوانات لتبدو أكثر قتامة ومشوهة.
    6. إضافة 10 ميليلتر من DAPI (10 ميكروغرام/مل) للديدان. غطاء لهم ساترة على الفور وختم الشريحة مع جل طلاء الأظافر الشفاف.
    7. عرض الحيوانات بعد حوالي 10 دقيقة في مجهر الأسفار.
  2. تثبيت الأسيتون (نهج بديل)
    1. يغسل لوحة صدمة الحرارة من الخطوة 2.8 مع M9 والطرد المركزي أنه في 1,000 س ز لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وتجاهل المادة طافية. أغسل بيليه مع 1 مل من dH2س وجمع بيليه، وتجاهل المادة طافية.
    2. إضافة 400 ميليلتر من الأسيتون 30% عن 15 دقيقة للطرد المركزي في 1,000 س ز لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتجاهل المادة طافية. استخدم ميليلتر 500 درهم2س لغسل الحيوانات 2 x. تجاهل المادة طافية.
    3. إضافة 200 ميليلتر من DAPI (10 ميكروغرام/مل)، أو 4 × حجم الديدان مجموع، في أنبوب لمدة 15 دقيقة.
    4. الطرد المركزي في 1,000 س ز لمدة 1 دقيقة وتجاهل المادة طافية. أغسل بيليه 2 x مع ميليلتر 500 درهم2أولمبيك وضع الديدان على الشرائح الزجاجية وغطاء لهم مع كوفيرسليبس وختم الشريحة مع جل طلاء الأظافر شفافة ومراقبة الحيوانات تحت مجهر الأسفار.

4-المجهري التصوير

  1. قم بتشغيل مصدر ضوء الأشعة فوق البنفسجية ومجهر الأسفار. قم بتشغيل جهاز الكمبيوتر متصلاً بالمجهر.
  2. تحميل الشريحة المجهر الأسفار. استخدام عدسة هدف طاقة منخفضة (10 X) لتحديد موقع الديدان، وزيادة قوة التكبير إلى 400 X، والتركيز على العينة.
  3. فتح البرامج المتوفرة مع المجهر. انقر على "شراء" في القائمة؛ انقر فوق "الكاميرا" وحدد الكاميرا متصلة بالمجهر؛ وهذا ما يسمح الكاميرا المختارة للتواصل مع البرنامج.
    ملاحظة: قد تختلف مجاهر مختلفة في العملية.
  4. تحت نفس "حيازة" وانقر على "شراء متعددة الأبعاد". وهذا يفتح نافذة ملاحة "اقتناء متعددة الأبعاد" جديدة. انقر فوق الزر "المتعددة"، وسوف تظهر جميع القنوات المتاحة.
  5. اختر اللون الأزرق والأخضر DIC (التباين التدخل التفاضلية) لمراقبة العينة. في الإطار التنقل "اقتناء متعددة الأبعاد"، ترك في "الأزرق-DAPI" "الأخضر-التجارة والنقل" و "غراي-دبي"، قنوات "نومارسكي"؛ انقر بالزر الأيمن على قنوات أخرى، مثل "الأحمر-والرودامين" و "حقل أبيض مشرق"، لإغلاقها.
  6. أولاً، قياس زمن التعرض لكل قناة:
    1. Left-click القناة "الأزرق-DAPI" لتحديده ثم انقر فوق "مقياس" من أجل التقاط صورة حية تحت القناة DAPI مع وقت التعرض الآلي. سوف تظهر نافذة جديدة مع صورة حية.
    2. على الجانب الأيسر من إطار الصورة الحية، يدوياً ضبط وقت التعرض إذا لزم الأمر لجعل الصورة كما هو مطلوب.
    3. وأخيراً، انقر على ''موافق "في نافذة الصورة الحية. يؤدي هذا إلى تعيين وقت التعرض تحت القناة DAPI.
  7. كرر الخطوة 4، 6 قنوات أخرى، "أخضر-التجارة والنقل" و "غراي--مدينة دبي للإنترنت"، "نومارسكي"، إعداد أوقات التعرض لتلك القنوات.
  8. في الإطار التنقل "اقتناء متعددة الأبعاد"، انقر فوق "ابدأ" لجمع الصور 3 تحت 3 قنوات مختلفة في النظام (انظر أعلاه) مع أوقات التعرض المحددة كمجموعة تلقائياً.
  9. لحفظ الملف، انتقل إلى القائمة الرئيسية، انقر على "ملف" ثم على "حفظ باسم". إدخال اسم الملف واسم المجلد. حفظ الملف كتنسيق ملف افتراضي للحفاظ على معلومات التصوير مفصلة للرجوع إليها في المستقبل.
  10. لتصدير الملف بتنسيقات أخرى:
    1. الذهاب إلى "ملف" ثم انقر فوق "تصدير". سيؤدي هذا إلى فتح نافذة إعدادات تصدير.
    2. تعيين اسم الملف والمجلد. تحقق من "إنشاء مجلد مشروع" لأفضل تنظيم البيانات. البرنامج أيضا يسمح للمستخدم بتحديد خيارات أخرى 4: "إنشاء دمج الصور"، "استخدام الألوان للصور لقناة"، "استخدام أسماء قناة"، و "الصورة ممزوج فقط".
    3. اختر نوع ملف المطلوب من القائمة المنسدلة، مثل "معرض طرابلس" و "السجناء"، "مديرية الأمن العام"، أو "JPG" وأنواع أخرى. ثم انقر فوق "ابدأ" للتصدير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كلوريد قناة داخل الخلايا البروتينات (انقر) هي بروتينات متعددة الوظائف التي هي الغاية حفظت عبر الأنواع12. ويبين الكثير من البحوث أن كليكس تنظيم الإجهاد الخلوية، أوتوفاجي، المبرمج، التسرطن، والأوعية، والاستجابة المناعية الفطرية بلعم في نظام الثدييات13،،من1415،16 ،17. هناك اثنين انقر homologs في C. ايل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقدم هذه المقالة طريقة سريعة وفعالة للتحقق من التغييرات البروتين سوبسيلولار من السيتوبلازم إلى النواة. وأبدى تعبير البروتين بدمج التجارة والنقل، بينما تم التحقق من بنية نواة طريق DAPI تلطيخ (الشكل 3). منذ إيمونوستينينج C. ايليجانس البروتينات التحدي، معظم C. ايليجانس البروتين تعريب سوبسيلولار تتميز بوضع علامات عليها مع البروتينات علامة مثل التجارة والنقل، لآز، مشري، وآخرون،من1819 , 20

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بإعلان.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتم الحصول على سلالات C. ايليجانس المستخدمة في هذه الدراسة من مركز علم الوراثة كاينورهابديتيس، الذي يدعمه "المعاهد الوطنية للصحة"-مكتب برامج البنية التحتية البحثية (P40 OD010440). هذا العمل كان يدعمها في المعاهد الوطنية للصحة: 1R03AG048578-01 يونيو ليانغ، جامعة مدينة نيويورك-ككرج 1501 إلى يونيو ليانغ، ومجلس السلام والأمن-جامعة مدينة نيويورك 66184-00 44 و 45 67248-00 إلى يونيو ليانغ. ونحن نشكر كاثي سافاج--دان يرجى تقاسم الفضاء المختبر لها. وقد جمعت جميع الأسفار الصور في "المرافق الأساسية كلية كوينز". ونحن نشكر وليام ج. رايس لتعليقاته على المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
يعمل DAPIBiotium40043، كل من Hoechst 33258 و Hoechst 33342 ، بشكل جيد
OP50 ، OP50،OP50، https://cgc.umn.edu/
مركز Caenorhabditis Genetics (CGC)، https://cgc.umn.edu/
Kim Wipe، Kim Wipe ، شركةالأنسجة الرخوة
Zeiss & nbsp ؛ AX10Zeissالمجهر الفلوري
Axiovision Rel 4.8Zeissالمجهر البرمجيات
AxioCam MR Rev3Zeissالكاميرا الرقمية
حاضنة 
جهاز
جل طلاء
شفاف 60 مم أطباق
زجاجية
أغطية زجاجية
1-20 & مايكرو ؛ L ماصة
20-200 وميكرو ؛ L ماصة
200-1000 & مايكرو; L ماصة
1-200 & مايكرو; L نصائح
200-1000 & micro; L نصائح
1.5 مل أنابيب
الدقيقة اختيار دودة
Kimberly-Clark ، طرد مركزي صغيرأظافربتري شرائح الماصةالماصةالطرد المركزي الأسلاك البلاتينية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Essers, M. A., et al. FOXO transcription factor activation by oxidative stress mediated by the small GTPase Ral and JNK. The EMBO Journal. 23 (24), 4802-4812 (2004).
  2. Oh, S. W., et al. JNK regulates lifespan in Caenorhabditis elegans by modulating nuclear translocation of forkhead transcription factor/DAF-16. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (12), 4494-4499 (2005).
  3. Gross, A., et al. Caspase cleaved BID targets mitochondria and is required for cytochrome c release, while BCL-XL prevents this release but not tumor necrosis factor-R1/Fas death. The Journal of Biological Chemistry. 274 (2), 1156-1163 (1999).
  4. Doerflinger, M., Glab, J. A., Puthalakath, H. BH3-only proteins: a 20-year stock-take. The FEBS Journal. 282 (6), 1006-1016 (2015).
  5. Mayorova, T. D., et al. Cells containing aragonite crystals mediate responses to gravity in Trichoplax adhaerens (Placozoa), an animal lacking neurons and synapses. PLoS One. 13 (1), e0190905(2018).
  6. Terron-Camero, L. C., Molina-Moya, E., Sanz-Fernandez, M., Sandalio, L. M., Romero-Puertas, M. C. Detection of reactive oxygen and nitrogen species (ROS/RNS) during hypersensitive cell death. Methods in Molecular Biology. , 97-105 (2018).
  7. Pedrazzini, E., Vitale, A. Protein biosynthesis and maturation in the ER. Methods in Molecular Biology. , 179-189 (2018).
  8. Liang, J., Shaulov, Y., Savage-Dunn, C., Boissinot, S., Hoque, T. Chloride intracellular channel proteins respond to heat stress in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 12 (9), e0184308(2017).
  9. Evans, T. C. Transformation and microinjection. Wormbook. , edited by The C. elegans Research Community (2006).
  10. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods in Cell Biology. 48, 451-482 (1995).
  11. Yochem, J. Nomarski images for learning the anatomy, with tips for mosaic analysis. Wormbook. , edited by The C. elegans Research Community (2006).
  12. Dulhunty, A., Gage, P., Curtis, S., Chelvanayagam, G., Board, P. The glutathione transferase structural family includes a nuclear chloride channel and a ryanodine receptor calcium release channel modulator. The Journal of Biological Chemistry. 276 (5), 3319-3323 (2001).
  13. Suh, K. S., Malik, M., Shukla, A., Yuspa, S. H. CLIC4, skin homeostasis and cutaneous cancer: surprising connections. Molecular Carcinogenesis. 46 (8), 599-604 (2007).
  14. Yao, Q., Qu, X., Yang, Q., Wei, M., Kong, B. CLIC4 mediates TGF-beta1-induced fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation in ovarian cancer. Oncology Reports. 22 (3), 541-548 (2009).
  15. Ronnov-Jessen, L., Villadsen, R., Edwards, J. C., Petersen, O. W. Differential expression of a chloride intracellular channel gene, CLIC4, in transforming growth factor-beta1-mediated conversion of fibroblasts to myofibroblasts. The American Journal of Pathology. 161 (2), 471-480 (2002).
  16. He, G., et al. Role of CLIC4 in the host innate responses to bacterial lipopolysaccharide. European Journal of Immunology. 41 (5), 1221-1230 (2011).
  17. Zhong, J., et al. Inhibition of CLIC4 enhances autophagy and triggers mitochondrial and ER stress-induced apoptosis in human glioma U251 cells under starvation. PLoS One. 7 (6), e39378(2012).
  18. Liang, J., et al. The Caenorhabditis elegans schnurri homolog sma-9 mediates stage- and cell type-specific responses to DBL-1 BMP-related signaling. Development. 130 (26), 6453-6464 (2003).
  19. Leopold, L. E., Heestand, B. N., Seong, S., Shtessel, L., Ahmed, S. Lack of pairing during meiosis triggers multigenerational transgene silencing in Caenorhabditis elegans. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (20), E2667-E2676 (2015).
  20. Schultz, R. D., Bennett, E. E., Ellis, E. A., Gumienny, T. L. Regulation of extracellular matrix organization by BMP signaling in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 9 (7), e101929(2014).
  21. Matus, D. Q., et al. Invasive cell fate requires G1 cell-cycle arrest and histone deacetylase-mediated changes in gene expression. Developmental Cell. 35 (2), 162-174 (2015).
  22. Reddy, K. C., Villeneuve, A. M. C. elegans HIM-17 links chromatin modification and competence for initiation of meiotic recombination. Cell. 118 (4), 439-452 (2004).
  23. Ames, K., et al. A non-cell-autonomous role of BEC-1/BECN1/Beclin1 in coordinating cell-cycle progression and stem cell proliferation during germline development. Current Biology. 27 (6), 905-913 (2017).
  24. Pekar, O., et al. Linking the environment, DAF-7/TGFbeta signaling and LAG-2/DSL ligand expression in the germline stem cell niche. Development. 144 (16), 2896-2906 (2017).
  25. Schvarzstein, M., et al. DNA helicase HIM-6/BLM both promotes MutSgamma-dependent crossovers and antagonizes MutSgamma-independent interhomolog associations during caenorhabditis elegans meiosis. Genetics. 198 (1), 193-207 (2014).
  26. Flemming, A. J., Shen, Z. Z., Cunha, A., Emmons, S. W., Leroi, A. M. Somatic polyploidization and cellular proliferation drive body size evolution in nematodes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (10), 5285-5290 (2000).
  27. Nagamatsu, Y., Ohshima, Y. Mechanisms for the control of body size by a G-kinase and a downstream TGFbeta signal pathway in Caenorhabditis elegans. Genes to Cells. 9 (1), 39-47 (2004).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GFP DAPI

مقالات ذات صلة