يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الكشف عن الفيروسات من بيوايروسولس استخدام الراتنجات التبادل شاردة

7.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/58111

⸱

أغسطس 22, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1High Plains Intermountain Center for Agricultural Health and Safety, Department of Environmental and Radiological Health Sciences, Colorado State University, 2National Wildlife Research Center, Wildlife Services, Animal and Plant Health Inspection Service, United States Department of Agriculture, 3Western Sydney University, 4Leprino Foods, Inc, 5Department of Food Science and Agricultural Chemistry, McGill University, 6Department of Mechanical Engineering, Colorado State University, 7Department of Animal Science, University of Wyoming

في هذه المقالة

ملخص

تبادل شاردة الأسلوب القائم على راتنج، تتكيف مع سائل يدل بيوايروسول المستندة إلى اصطدام لأخذ العينات من الفيروسات. عندما يقترن مع الكشف الجزيئي المصب، الأسلوب يسمح للكشف عن الفيروسات من بيوايروسولس سهلة وحساسة.

الملخص

هذا البروتوكول يوضح أسلوب أخذ عينات بيوايروسول مخصصة للبحث عن الفيروسات. في هذا النظام، مقرونة بأجهزة جمع العينات السائلة الهواء المستندة إلى اصطدام لتركيز فعال من الفيروسات مشحونة سلبا على راتنج تبادل شاردة من بيوايروسولس. وهكذا، الراتنج بمثابة خطوة إضافية تركز في سير العمل بيوايروسول أخذ العينات. ثم يتم استخراج الحمض النووي من الجسيمات الفيروسية مباشرة من راتنج تبادل شاردة، مع مناسبة للتحليلات الجزيئية العينة الناتجة عن ذلك. علاوة على ذلك، يصف هذا البروتوكول غرفة بيوايروسول المواصفات قادرة على توليد بيوايروسولس محملة بالفيروس ضمن مجموعة متنوعة من الظروف البيئية، والسماح للرصد المستمر للمتغيرات البيئية مثل درجة الحرارة والرطوبة، سرعة الرياح، وتركيز الهباء الجوي الشامل. والميزة الرئيسية لاستخدام هذا البروتوكول هو زيادة الحساسية للكشف عن الفيروس، حسب تقييمها عن طريق مقارنة مباشرة إلى مرطام سائلة تقليدية غير معدلة. وتشمل المزايا الأخرى القدرة على التركيز الفيروسات مشحونة سلبا المتنوعة، منخفضة التكلفة من راتنج تبادل شاردة (~$0.14 كل عينة)، وسهولة الاستخدام. عجز هذا البروتوكول لتقييم العدوى جسيمات الفيروسية تمتز الراتنج من عيوبها، ويحتمل أن تكون الحاجة إلى الاستفادة المثلى من المخزن المؤقت العينات السائلة المستخدمة داخل مرطام.

المقدمة

والغرض من هذا الأسلوب توفير منبر أخذ عينات بيوايروسول حساسة للغاية لتسهيل الكشف الجزيئي للفيروسات مشحونة سلبا من بيوايروسولس. الكائنات الحية الدقيقة، بما في ذلك الجسيمات الفيروسية، يمكن أن يعيش في بيوايروسولس لفترات طويلة من الزمن1. بيوايروسولس يمكن السفر عبر مسافات طويلة نسبيا والحفاظ على الاستمرارية والعدوى، كما يدل على ذلك تفشي المرض المهلك التي نشأت من أبراج تقع على بعد 6 كم من الأفراد المتضررين التبريد الصناعي و أسفرت عن وفاة 182. يمكن أن يحدث في إعدادات متعددة الإرسال غير المباشر للفيروسات إلى البشر بوساطة من بيوايروسولس ولقد أظهر تفشي نوروفيروس في المدارس والمطاعم3،4. وبالمثل، يمكن أن يحدث انتقال بيوايروسول من الفيروسات في إعدادات الزراعية كما هو الحال في مزارع الدواجن والخنازير، مع هذا الطريق انتقال حيث تعتبر عاملاً رئيسيا في انتقال الفيروسات بين مرافق الإنتاج5، 6 , 7 , 8 , 9.

فعالة لأخذ العينات من بيوايروسولس محملة بالفيروس يسمح للتحسين في التشخيص السريع والتأهب لمنع اندلاع، كما هو مبين في المظاهرات في أي إتش 5 أسواق الإنفلونزا تم الكشف عن فيروسات من بيوايروسولس في الحيوانات الحية في الصين الولايات المتحدة10،11. تقنيات أخذ العينات بيوايروسول الحالية تنطوي على عدد من المبادئ التقاط الجسيمات مختلفة، ويمكن تصنيف على نطاق واسع في إيمبينجيرس، والأعاصير، والرواطم، والمرشحات12. وخارج نطاق هذا البروتوكول استفاضة وتغطي جميع مزايا وعيوب هذه المنابر لأخذ عينات فيروسات من بيوايروسولس؛ ومع ذلك، يمكن القول بأن غالبية هذه الأجهزة أخذ العينات لا يكون قد تم تحسين المجموعة من الفيروسات و bacteriophages13. وعلاوة على ذلك، العدوى الفيروسية الجسيمات تتأثر سلبيا غالباً، مع السائل إيمبينجيرس نظرت إلى الحفاظ على العدوى الفيروسية أكثر فعالية من أخذ عينات من الأجهزة مثل الرواطم أو مرشحات الصلبة14. ومع ذلك، عيب واحد من اصطدام السائل هو تأثير تمييع الهدف، الذي يحدث بسبب فيروسات يتم جمعها بكميات كبيرة نسبيا (عادة مل إيه تو زيرو) من السائل في وعاء جمع. عيب هام آخر ينطوي على كفاءة دون المستوى الأمثل من إيمبينجيرس السائلة تركيز جسيمات < 0.5 ميكرومتر في الحجم15. ومع ذلك، يمكن تحسين القبض على كفاءة هذه الأجهزة قبل التثبيت في مصفوفات الصلبة، التثبيت يمكن أن يعزز الحفاظ على الأحماض النووية الفيروسية والعدوى الفيروسية16،17.

وقد أثبتنا سابقا أن راتنج تبادل شاردة أداة فعالة لالتقاط وتركيز للفيروسات من مصفوفات السائل، بما في ذلك bacteriophages والجيش الملكي النيبالي وفيروس التهاب الكبد الوبائي أ، إتش البشري وفيروس الروتا18،19 ،20. كما حددتها الشركة المصنعة، راتنج تبادل شاردة المستخدمة في هذا العمل راتنج تبادل البوليستيرين شاردة قاعدة قوية ماكروريتيكولار فيها أمين رباعي فونكتيوناليزيد المجموعات جاذبية التوسط والقبض على الأنيونات في متوسط سائل21 . ونتيجة لذلك، يتوقع راتنج تبادل شاردة التقاط الفيروسات مع رسوم السطحية الصافية سلبية، بما في ذلك العديد من الفيروسات المعوية، وفيروسات الإنفلونزا وفيروسات أخرى ذات صلة بالصحة العامة والحيوانية.

البروتوكول الحالي ينطوي على إضافة راتنج تبادل شاردة إلى مرطام سائلة. في هذا النظام، الراتنج بمثابة خطوة تركز ثانوي للجسيمات الفيروسية في السائل مرطام. يمكن ثم التيد الأحماض النووية مباشرة بكميات صغيرة، توفير عينة مركزة للتحليلات الجزيئية. وهكذا، والميزة الرئيسية لهذا الأسلوب هو التحسن الذي طرأ على حساسية الكشف عن الفيروس، أساسا من خلال تخفيض حجم العينة. بالإضافة إلى ذلك، بسبب الاستيلاء غير محدد الأصيل المشحون سلبا على فيروسات، الأسلوب المرجح المطبقة للكشف عن عدد كبير من الفيروسات للفائدة. ويتجلى الأسلوب هنا، لسلالات لقاح من نوع A وفيروسات الإنفلونزا نوع B و coliphage فرنا MS2 (MS2). بعد اكتشاف هذه الفيروسات باستخدام فحوصات بكر qRT القياسية كما هو موضح سابقا22. لا ينبغي أن تتوقع المستخدم نقطة النهاية تواجه صعوبات في أداء هذا الأسلوب، لأن إدخال تعديلات على القائمة حاليا لا تشكل معدات اختلالات كبيرة في تدفق التقليدية بيوايروسول أخذ العينات والتحليل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-الإعداد لقاعة بيوايروسول (انظر الشكل 2)

  1. قبل تحميل إيمبينجيرس السائل مع 20 مل من 0.01 م الفوسفات مخزنة المالحة، درجة الحموضة 7.5 (PBS).
    1. إضافة 0.5 غ راتنج تبادل شاردة وتعليق ضمن برنامج تلفزيوني واحد من إيمبينجيرس السائلة، مع مرطام سائل آخر كعنصر تحكم.
  2. موقف إيمبينجيرس السائلة بالتوازي داخل الدائرة بيوايروسول باستخدام المشبك تقف مع مداخل الأيروسول التي تواجه البخاخات.
    ملاحظة: انظر الشكل 2 لمزيد من التفاصيل.
  3. شارك موقع رصد الهباء الجوي المباشر-قراءة قرب إيمبينجيرس السائلة لقياس تركيز الشامل (مغ/م3) بيوايروسول.
  4. مواقع مشتركة إضافية مباشرة-قراءة الأجهزة (جودة الهواء في الأماكن المغلقة مراقب والحرارية شدة الريح) قرب إيمبينجيرس السائلة لرصد المتغيرات البيئية، مثل درجة الحرارة والرطوبة النسبية والرياح بسرعة، داخل قاعة بيوايروسول.
  5. تشغيل مراوح محورية في زوايا قاعة بيوايروسول لتسهيل خلط من الهباء الجوي.
    ملاحظة: مراوح محورية تشغيل بسرعة ثابتة وغير قابلة للتعديل.

2-نموذج "تجارب بيوايروسوليزيشن" (انظر الشكل 3)

  1. أداء تسلسلي، تخفيف إذ لقاح MS2 عاثية والإنفلونزا للتركيزات المطلوبة في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS).
    ملاحظة: تستخدم لإظهار الأسلوب هنا، 103.5 فو/مل من نوع A و B الإنفلونزا فيروس اللقاح السلالات و 105 بفو/مل عاثية MS2. لتحديد التتر لقاح، نشر في الإشريكيّة القولونية HS (بفامب) R bacteriophages وتعداد كما هو موضح سابقا20. اللقاح التجاري يحتوي على كميات معروفة من أربع سلالات فيروس الإنفلونزا الموهنة الحية، وهما نوع من فيروسات إنفلونزا وفيروسات الإنفلونزا نوع B اثنين، المعرب عنها في وحدات التركيز الفلورسنت أو فو.
  2. إعداد لقاح داخل الوعاء الزجاج للبخاخات اصطدام طائرة 6 عن طريق إنشاء المعلقات المطلوب تركيزات الجسيمات الفيروسية في 100 مل من برنامج تلفزيوني وتثبيت داخل قاعة مخصصة بيوايروسول.
  3. بدء القياس لقياس المتغيرات داخل قاعة بيوايروسول، مثل درجة الحرارة والرطوبة النسبية %، تركيز ثاني أكسيد الكربون، والرياح والسرعة (تم إنشاؤها باستخدام مروحة محورية). استخدام جهاز عرض الهباء الجوي المباشر للقراءة لتعقب التركيز الشامل داخل الدائرة بيوايروسول وتحقيق الاتساق داخل وبين المحاكمات.
  4. ختم الدائرة بيوايروسول وتطهير لمدة 10 دقيقة مع تصفية هيبا الهواء.
  5. تسليم الجوية التي تمت تصفيتها، والمجففة للبخاخات العاملة على 6.9 الجيش الشعبي الكوري.
  6. توليد تركيز هدف من بيوايروسولس الفيروسية (عن طريق البخاخات) في كل دائرة بيوايروسول للمحاكمة. لهذه التظاهرة، يتم إنشاء بيوايروسولس بتركيز من 5 مغ/م3 .
  7. متى تم التوصل إلى تركيز الهدف الشامل للأيروسول، وقف نيبوليزاتيون.
  8. تعمل مضخة هواء لأخذ عينات لكل مرطام السائلة التي قد تم معايرة إلى معدل تدفق من 12.5 لتر/دقيقة معايرة سلوك استخدام معيار تدفق أساسي قبل وبعد كل حدث أخذ العينات لضمان الاتساق في أخذ عينات من وحدة التخزين. تمييع إمدادات الهواء استخدام خط هيبا تصفيتها يقع بالقرب من البخاخات والإبقاء على الضغط المستمر في الدائرة.
  9. نشاط عينة جو الغرفة بيوايروسول لمدة 40 دقيقة لتحقيق وحدة تخزين عينات من 500 لتر كل عينة.
    ملاحظة: أخذ العينات لمدة 40 دقيقة في 12.5 لتر في الدقيقة مع مضخات اثنين في نفس الوقت يسمح لأخذ العينات من 1,000 L بيوايروسول. وهكذا، عند الانتهاء من هذه التجربة، يتوقع أن غالبية الهواء الموجودة في قاعة بيوايروسول تم أخذ عينات وتطلق في البيئة عن طريق نظام HEPA تصفيتها. ويدل على ذلك الانخفاض في تركيز الجسيمات. تجربة ما بعد، وهي تطهير الأسطح مع 10% إيثانول التبييض و 70% الأسر المعيشية. تستخدم المؤشرات في هذه المظاهرة؛ ومع ذلك، إذا معروفة تستخدم الكائنات المسببة للأمراض في هذا النظام، قد تنفيذ تدابير السلامة البيولوجية الإضافية حسب الحاجة.

3. استخراج الحمض النووي وكشف قرت-بكر

  1. عزل الأحماض النووية مباشرة من راتنج تبادل شاردة، والقيام، لأغراض المقارنة، من السائل المستخدمة داخل إيمبينجيرس السائلة. في هذا المثال، يتم وصف إجراء عزل الحمض النووي الريبي، ولكن يمكن أن تستخدم بروتوكول مماثل لفيروسات الحمض النووي.
    1. عزل الحمض النووي من راتنج تبادل شاردة.
      1. نقل جميع السائلة المحتوية على راتنج تبادل شاردة من مرطام السائل إلى أنبوب مخروطي عقيمة 50 مل.
      2. تسمح الراتنج لتسوية، وصب العينة السائلة من راتنج تبادل شاردة ببطء. استخدام تلميح ماصة 1 مل إلى إزالة كل من السائل المتبقي من راتنج تبادل شاردة.
      3. من مجموعة مواد عزل الحمض النووي الريبي فيروسية، إضافة ميليلتر 560 من تحلل الفيروسية مخزن يحتوي على الناقل الجيش الملكي النيبالي مباشرة إلى راتنج تبادل شاردة واحتضان لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع خلط الدوري.
      4. استخدام تلميح ماصة 1 مل، نقل الفيروسية ليستي (المخزن المؤقت تحلل الفيروسية) معقم 1.5 مل مخروطية أنبوب والمضي قدما في الجيش الملكي النيبالي عزلة من عزل الحمض النووي الريبي فيروسية باستخدام كيت (انظر الجدول للمواد) وفقا لإرشادات الشركة المصنعة، باستثناء هو التيد أن الجيش الملكي النيبالي في إجمالي حجم 60 ميليلتر من شطف المخزن المؤقت.
    2. عزل الحمض النووي من إيمبينجيرس السائلة.
      1. "الماصة؛" ميليلتر 140 عينة السائل في أنبوب معقم 1.5 مل مخروطية وأداء عزل الحمض النووي الريبي باستخدام طقم عزل الحمض النووي الريبي الفيروسية وفقا لإرشادات الشركة المصنعة، باستثناء التينج الجيش الملكي النيبالي في إجمالي حجم 60 ميليلتر من شطف المخزن المؤقت.
        ملاحظة: ميليلتر 140 هو حجم العينة الحد الأقصى الذي يمكن معالجته مع عدة عزل الحمض النووي الريبي الفيروسية المحددة المستخدمة هنا في تحضير خطوة واحدة.
  2. أداء qRT-PCR للكشف عن MS2 والإنفلونزا والفيروسات ب كما هو موضح سابقا23،24. في هذا العرض التوضيحي، تستخدم 5 ميليلتر من الحمض النووي الواتس qRT-PCR.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يوضح الشكل 1 المبدأ الكامن وراء القبض على أساس التهمة من الفيروسات من بيوايروسولس عن طريق إدراج راتنج في إيمبينجيرس على أساس سائل. ويبين الشكل 2 إعداد قاعة بيوايروسول المواصفات. الشكل 3 يوضح الخطوات المتبعة في إعداد التجربة هباء واتخاذ تدابير لضمان مراقبة الجودة. ويبين الشكل 4 منحنيات التضخيم بكر qRT الكشف عن الفيروسات مشحونة سلبا على القبض على من بيوايروسولس. ويبين

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويحدد هذا البروتوكول طريقة لالتقاط الفيروسية حساسة من بيوايروسولس باستخدام إيمبينجيرس السائلة المعدلة. هو الأسلوب الأمثل للكشف والتحديد الكمي للحمل الفيروسي في بيوايروسولس. تعديل محددة أثبتت هنا ينطوي على إضافة راتنج تبادل شاردة للسائل الواردة ضمن مرطام سائلة مشتركة. تم تطوير هذا الأسلوب لبساطته في تجهيز عينات المصب، بينما تقنيات تجهيز عينة أخرى مثل الطرد المركزي والترشيح، والأساليب المستندة إلى هطول الأمطار لا توفر مثل هذه ميزة. يتم استخراج أحماض النووية مباشرة من الراتنج، تنتفي الحاجة إلى التيونس كبيرة الحجم ومتعددة ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

كان يؤيد هذا العمل بتمويل من مركز السيطرة على الأمراض/هي مركز Intermountain سهول عالية للصحة الزراعية والسلامة (5U54OH008085) وبرنامج كولورادو اكتشاف منح تقييم العلوم البيولوجية (14BGF-16).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الإشريكية القولونية < / em> العاثية البكتيرية MS2 (ATCC 15597-B1)مجموعةالثقافة من النوع الأمريكيATCC 15597-B1
FluMist QuadrivalentAstraZenecaContact الشركة المصنعةللمكونات الفيروسية لهذا اللقاح عرضة للتغيير على أساس سنوي
CFX96 Touch Real-Time PCR Detection SystemBio-Rad1855195
Primers والمجساتتقنيات الحمض النووي المتكاملةNA
0.2 & micro; زجاجات بيركس معقمة من الفلترNANA
1 لتر أو ما يعادلهامن ماصة NANA
1 مل
1 مل ماصةNANA
50 مل أنابيب مصليةNA
PCR
NA NA Pipet-aid أو ما يعادلهاNANA NA
QIAamp الفيروسي الحمض النووي الريبي الصغير كيتQiagen52904
QuantiTect Probe RT-PCR KitQiagen204443
Amberlite IRA-900 كلوريد شكلSigma-Aldrich216585-500G
فوسفات محلولمخزن سيجما ألدريتشP5368-10PAK
المياه (درجة البيولوجيا الجزيئية)سيجما ألدريتشW4502-1L
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة Eppendorf DNA LoBindThermoFisher13-698-791
Falcon 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية   ؛ThermoFisher14-432-22
Falcon أنابيب الطرد المركزي من مادة البولي بروبيلينThermoFisher05-538-62
SuperScript III Platinum طقم qRT-PCR بخطوة واحدة مع ROXThermoFisher11745100
SKC Biosampler 20 مل ، مجموعة زجاجية مكونة من 3 قطعSKC Inc.225-9593
مضخات عينة Vac-u-GoSKC Inc.228-9695
البخاخات المكثفة (6 نفاثات)شركة BGI Inc.
HEPA كبسولةPALL12144
Q-TRAK مراقبة جودة الهواء الداخلي 8554TSI Inc.NA
Alnor مقياس سرعة الريح الحراري AVM440-ATSI Inc.NA
SidePak AM510 جهاز مراقبة الهباء الجوي الشخصيTSI Inc.غرفة الهباء الجوي الحيوي NA
NA
NA NA NA ملحي NA

المراجع

  1. Pirtle, E. C., Beran, G. W. Virus survival in the environment. Revue scientifique et technique (International Office of Epizootics). 10 (3), 733-748 (1991).
  2. Nguyen, T. M., et al. A community-wide outbreak of legionnaires disease linked to industrial cooling towers--how far can contaminated aerosols spread? The Journal of Infectious Diseases. 193 (1), 102-111 (2006).
  3. Marks, P. J., et al. Evidence for airborne transmission of Norwalk-like virus (NLV) in a hotel restaurant. Epidemiology and Infection. 124 (3), 481-487 (2000).
  4. Marks, P. J., et al. A school outbreak of Norwalk-like virus: Evidence for airborne transmission. Epidemiology and Infection. 131 (1), 727-736 (2003).
  5. Corzo, C. A., Culhane, M., Dee, S., Morrison, R. B., Torremorell, M. Airborne detection and quantification of swine influenza a virus in air samples collected inside, outside and downwind from swine barns. PLoS One. 8 (8), e71444(2013).
  6. Anderson, B. D., et al. Bioaerosol sampling in modern agriculture: A novel approach for emerging pathogen surveillance. The Journal of Infectious Diseases. 214 (4), 537-545 (2016).
  7. Hietala, S. K., Hullinger, P. J., Crossley, B. M., Kinde, H., Ardans, A. A. Environmental air sampling to detect exotic Newcastle disease virus in two California commercial poultry flocks. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 17 (2), 198-200 (2005).
  8. Jonges, M., et al. Wind-mediated spread of low-pathogenic avian influenza virus into the environment during outbreaks at commercial poultry farms. PLoS One. 10 (5), e0125401(2015).
  9. Otake, S., Dee, S. A., Jacobson, L., Torremorell, M., Pijoan, C. Evaluation of aerosol transmission of porcine reproductive and respiratory syndrome virus under controlled field conditions. The Veterinary Record. 150 (26), 804-808 (2002).
  10. Wu, Y., et al. Aerosolized avian influenza A (H5N6) virus isolated from a live poultry market, China. The Journal of Infection. 74 (1), 89-91 (2017).
  11. Choi, M. J., et al. Live animal markets in Minnesota: A potential source for emergence of novel influenza A viruses and interspecies transmission. Clinical Infectious Diseases. 61 (9), 1355-1362 (2015).
  12. Haig, C. W., Mackay, W. G., Walker, J. T., Williams, C. Bioaerosol sampling: Sampling mechanisms, bioefficiency and field studies. The Journal of Hospical Infection. 93 (3), 242-255 (2016).
  13. Anderson, B. D., Lednicky, J. A., Torremorell, M., Gray, G. C. The use of bioaerosol aampling for airborne virus surveillance in swine production facilities: A mini review. Frontiers in Veterinary Science. 4, 121(2017).
  14. Verreault, D., Moineau, S., Duchaine, C. Methods for sampling of airborne viruses. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 72 (3), 413-444 (2008).
  15. Hogan, C. J. Jr Sampling methodologies and dosage assessment techniques for submicrometre and ultrafine virus aerosol particles. Journal of Applied Microbiology. 99 (6), 1422-1434 (2005).
  16. Yu, K. -P., Chen, Y. -P., Gong, J. -Y., Chen, Y. -C., Cheng, C. -C. Improving the collection efficiency of the liquid impinger for ultrafine particles and viral aerosols by applying granular bed filtration. Journal of Aerosol Science. 101, 133-143 (2016).
  17. Perez-Mendez, A., et al. Evaluation of a simple and cost effective filter paper-based shipping and storage medium for environmental sampling of F-RNA coliphages. J Virol Methods. 194 (1-2), 60-66 (2013).
  18. Chandler, J. C., et al. Field-based evaluation of a male-specific (F+) RNA coliphage concentration method. Journal of Virological Methods. 239, 9-16 (2017).
  19. Perez-Mendez, A., Chandler, J. C., Bisha, B., Goodridge, L. D. Concentration of enteric viruses from tap water using an anion exchange resin-based method. Journal of Virological Methods. 206, 95-98 (2014).
  20. Perez-Mendez, A., Chandler, J. C., Bisha, B., Goodridge, L. D. Evaluation of an anion exchange resin-based method for concentration of F-RNA coliphages (enteric virus indicators) from water samples. Journal of Virological Methods. 204, 109-115 (2014).
  21. Kammerer, J., Carle, R., Kammerer, D. R. Adsorption and ion exchange: Basic principles and their application in food processing. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (1), 22-42 (2011).
  22. Chandler, J. C., et al. A method for the improved detection of aerosolized influenza viruses and the male-specific (F+) RNA coliphage MS2. Journal of Virological Methods. 246, 38-41 (2017).
  23. Friedman, S. D., Cooper, E. M., Calci, K. R., Genthner, F. J. Design and assessment of a real time reverse transcription-PCR method to genotype single-stranded RNA male-specific coliphages (Family Leviviridae). Journal of Virological Methods. 173 (2), 196-202 (2011).
  24. Selvaraju, S. B., Selvarangan, R. Evaluation of three influenza A and B real-time reverse transcription-PCR assays and a new 2009 H1N1 assay for detection of influenza viruses. Journal of Clinical Microbiology. 48 (11), 3870-3875 (2010).
  25. Cademartiri, R., et al. Immobilization of bacteriophages on modified silica particles. Biomaterials. 31 (7), 1904-1910 (2010).
  26. Michen, B., Graule, T. Isoelectric points of viruses. Journal of Appled Microbiology. 109 (2), 388-397 (2010).
  27. Turgeon, N., Toulouse, M. J., Martel, B., Moineau, S., Duchaine, C. Comparison of five bacteriophages as models for viral aerosol studies. Applied and Environmental Microbiology. 80 (14), 4242-4250 (2014).
  28. Vergara, G. G., et al. Evaluation of FRNA coliphages as indicators of human enteric viruses in a tropical urban freshwater catchment. Water Research. 79, 39-47 (2015).
  29. Tung-Thompson, G., Libera, D. A., Koch, K. L., de Los Reyes, F. L. 3rd, Jaykus, L. A. Aerosolization of a human norovirus surrogate, bacteriophage MS2, during simulated vomiting. PLoS One. 10 (8), e0134277(2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

جمع الهباء الجوي الحيويالكشف عن الفيروساتالمصيدة السائلةاستخلاص الحمض النوويالكشف بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)غرفة الهباء الجوي الحيويالرصد البيئيالتركيز الفيروسيالعاثية MS2
الكشف عن الفيروسات من بيوايروسولس استخدام الراتنجات التبادل شاردة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.