مقالة منهجية

تحريض لويحات تصلب الشرايين من خلال تنشيط مستقبلات مينيرالوكورتيكويد في الفئران الابوليبوبروتين ه التي تفتقر إلى

DOI:

10.3791/58303

⸱

سبتمبر 26, 2018

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Cardiovascular Endocrinology, IRCCS San Raffaele Pisana, Rome, Italy, 2Department of Human Sciences and Promotion of the Quality of Life, San Raffaele Roma Open University, Rome, Italy

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف لنا وضع بروتوكول للحث على تصلب الشرايين في جذر الابهر الذين--/-- الفئران التي تتغذى على نظام غذائي atherogenic، من خلال إصدار مستمر من الدوستيرون. ويرد أيضا أساليب لتحديد خصائص تكوين اللوحة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصلب الشرايين هو سبب استجابة التهابات مزمنة التي تؤثر على بطانة الأوعية الدموية وروجت عدة عوامل مثل ارتفاع ضغط الدم، ودسليبيدميا، ومرض السكري. وحتى الآن، هناك أدلة لدعم دور لتعميم الدوستيرون كعامل خطر لتطوير مرض القلب والأوعية الدموية. تم إنشاؤها نماذج الماوس المحورة وراثيا دراسة العمليات الجزيئية والخلوية، مما يؤدي إلى تصلب الشرايين. في هذه المخطوطة، يصف لنا بروتوكول الذي يستفيد من التسريب المستمر الدوستيرون في الفئران الذين-/- ويولد لويحات تصلب الشرايين في جذر الابهر بعد 4 أسابيع من العلاج. ولذلك، نحن، توضيح طريقة للقياس الكمي وتوصيف للآفات تصلب الشرايين على مستوى جذر الاورطي. تمثل القيمة المضافة لضخ الدوستيرون جيل آفات تصلب الشرايين الغنية بالدهون والخلايا الملتهبة بعد 4 أسابيع من العلاج. يصف لنا بالتفصيل الإجراءات المصبوغة التحديد الكمي لمحتوى الدهن وبلعم داخل اللوحة. جدير بالذكر أن في هذا البروتوكول، نقوم بقلب تضمين الأنسجة في أكتوبر من أجل الحفاظ على أنتيجينيسيتي أنسجة القلب وتيسير إمكانية الكشف عن المستضدات للفائدة. تحليل النمط الظاهري اللوحة يمثل نهجاً صحيحاً لدراسة الفسيولوجيا المرضية للتنمية تصلب الشرايين وتحديد الأهداف الدوائية رواية لتطوير الأدوية المضادة أثيروجينيك.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصلب الشرايين أحد الأسباب الرئيسية للوفيات والإصابة بالأمراض في جميع أنحاء العالم1. ويتميز بدولة التهاب مزمن حيث تكون الأوعية الدموية تسلل الدهون والكريات البيضاء التي تحدد تشكيل لويحات تصلب الشرايين. معظم الأحداث القلبية الحادة المرتبطة بأحداث الخثاريه بسبب تمزق اللوحة. يتم تعريف "الضعيفة" لويحات المعرضة للتمزق وتتميز بزيادة تسلل الكريات البيضاء برو التحريضية، ونواة نخرية، و كاب ليفية رقيقة2. في العقود الماضية، وقد أوضحت الدراسات السريرية والتجريبية الفسيولوجيا المرضية المعقدة للمرض. وتستخدم عدة نماذج حيوانية للتحقيق في الآليات الجزيئية التي تشارك في تنظيم دورات تعريفية لتصلّب الشرايين3. حاليا، هو الماوس الأنواع الأكثر استخداماً لدراسة تصلب الشرايين وعلى الرغم من بعض الاختلافات إبلاغها الموجودة في الفيزيولوجيا المرضية، بالمقارنة مع البشر. على وجه الخصوص، تعميم الكولسترول يتكون أساسا من البروتينات الدهنية الكثافة (مع خصائص أنتياثيروجينيك) في نماذج الماوس، بينما البشر تعميم الكولسترول أساسا هو نقل ك low-density البروتينات الدهنية (LDL)، ربما تمثل السبب الرئيسي لماذا لا تتطور الفئران البرية من نوع تصلب الشرايين عفوية4. وعلاوة على ذلك، الفئران نوع البرية عموما مقاومة لامتصاص الكولسترول من الغذاء، بينما البشر تستوعب حوالي 50% من الكولسترول الغذائي4. للتغلب على هذه القيود، تم إنشاؤها عدة نماذج الماوس المعدلة وراثيا. وتستخدم على نطاق واسع الابوليبوبروتين ه – نقص الماوس (الذين−/−) والماوس – تفتقر إلى مستقبلات LDL (لدلر−/−). على حمية عالية الدهون ارتفاع الكولسترول، الفئران− −/الذين وضع اللوحة أكثر سرعة بالمقارنة مع الفئران−−/لدلر، ومن لهذا السبب، يتم استخدام الفئران− −/الذين أكثر انتشارا من أن لدلر−/−الفئران5،6. الفئران− −/الذين وضع الآفات في أي مرحلة من تصلب الشرايين، وهي مماثلة لتلك التي لوحظت في البشر، وعلى الرغم من أن لا تظهر لويحات الماوس النمط الظاهري غير مستقرة7. عموما، الذين−/− الفئران عفويا تطوير تصلب الشرايين وهو التعجيل بهذه العملية مع النظام غذائي غربي3. ويمكن تقييم شدة تصلب الشرايين على مستوى الشريان براتشيوسيفاليك، السباتي، الرئتين، والفخذ و جذر الاورطي6. على وجه الخصوص، يمثل جذر الاورطي موقع تشريحي عرضه لتطوير الآفات تصلب الشرايين في الفئران. ولهذا السبب، ممارسة شائعة لتقييم تشكيل لويحات تصلب الشرايين في هذه المنطقة.

لقد بينت دراسات عديدة أن الدوستيرون المتورطة في تطوير تصلب الشرايين8،،من910. ضخ الدوستيرون في الفئران− −/الذين تغذت atherogenic يسرع تطوير جذر الاورطي آفات تصلب الشرايين الذي يحفز تشكيل اللوحة ملتهبة والغنية بالدهون10.

وباختصار، نحن وصف بروتوكول بما في ذلك ضخ الدوستيرون، atherogenic حمية تغذية، والتضمين من أنسجة القلب، والتقدير الكمي وتوصيف للآفات تصلب الشرايين في الفئران الذين-/ . هذا الإجراء يعزز تشكيل لويحات تصلب الشرايين الملتهبة، والغنية بالدهون كفاءة، ويمثل نموذجا قيماً لدراسة أثيروجينيسيس.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على الدراسة بالمعاهد الوطنية الإيطالية للرعاية الصحية واستخدام اللجان، إذن رقم 493/2016-العلاقات العامة. وقد أجريت جميع الإجراءات للمبادئ التوجيهية "الاتحاد الأوروبي" لاستخدام الحيوانات التجريبية (التوجيه الأوروبي، 2010/63/رق).

ملاحظة: غرس تحت الجلد من ناضح مينيبومب التي تحتوي على المركبات (الإيثانول في المحلول الملحي) أو الدوستيرون (240 ميكروغرام · كجم-1 · د-1) في الأسبوع 8-10-الفئران الذكور القديمة قاصرة للجينات الذين . في العام، 8-10 الأسبوع-القديمة الذكور الذين−/− الفئران تزن حوالي 25-26 ز.

1-تذويب الدوستيرون

  1. حل 5 ملغ مسحوق الدوستيرون في 1 مل إيثانول المطلقة.
  2. إضافة 56.7 ميليلتر من الدوستيرون (الذائبة في الإيثانول) إلى 68.3 ميليلتر من المحلول الملحي بغية الحصول على تركيز 2.27 ميكروغرام/ميليلتر. ملء مينيبومبس ناضح كامل تماما مع 125 ميليلتر لهذا الحل (السعة القصوى لكل مينيبومب هو 125 ميليلتر).
  3. استخدم معدل تدفق مينيبومب 0.11 ميليلتر/ساعة؛ ولذلك ميليلتر 2.64 الحل هو الإفراج عن كل حاء 24 إعطاء كل الفأر حوالي 6 ميكروغرام · د-1 من الدوستيرون لمدة 28 يوما.

2. ملء المضخة ناضح وغرس

ملاحظة: يتم توفير مضخات في جزأين منفصلين: الهيئة الرئيسية للمضخة ومنظم التدفق.

  1. ملء والتعامل مع مينيبومبس استخدام القفازات الجراحية.
    ملاحظة: زيوت الجلد قد تتداخل مع أداء مينيبومبس. يجب تنفيذ الخطوات التالية في غطاء الاندفاق الصفحي عقيمة.
  2. إرفاق أنبوب الملء (المتوفرة مع مينيبومبس) بحقنه 1 مل ووضع الحل الدوستيرون أو مركبة.
    ملاحظة: من المهم تجنب ترك الهواء داخل المحاقن بينما يسفط الحلول من أنبوب لمنع تكوين فقاعات الهواء إلى المضخة.
  3. إدراج أنبوب الملء من خلال الثقب في الجزء العلوي من مينيبومب حتى يمكن أن تذهب أي مكان آخر (الشكل 1A-1B). ملء المضخة ببطء مع الدوستيرون أو مركبة. لاحظ الظل الظلام داخل المضخة التي تشير إلى مستوى السائل. مشاهدة هذا ارتفاع مستوى جنبا إلى جنب مع ملء المضخة.
    1. وقف ملء المضخة عندما ترتفع حبة سوائل خارج الجسم المضخة.
  4. بعناية إزالة أنبوب الملء وإدراج منظم التدفق في جسم مينيبومب (الشكل 1). تأكد من أن الجهة المنظمة ليجلس مشددة ضد الجسم المضخة. اترك المضخات ناضح شغلها في كوب يحتوي على المحلول الملحي المعقم في 37 درجة مئوية لمدة تصل إلى 24 ساعة قبل غرس في الماوس (الإجراء فتيلة).
  5. إجراء عملية جراحية في منطقة تطهيرها مع الإيثانول 70% يعزز أسيبسيس.
  6. ضع قطرات 1-3 في موقع شق من 0.25% bupivacaine وتخدير الحيوان مع إيسوفلوراني 3%. بدوره على إمدادات الغاز وتعيين مقياس التدفق إلى 500-1000 مل/دقيقة مكان الحيوان في قاعة توجيهي وختم الأعلى. قم بتشغيل المرذاذ إلى إيسوفلوراني 5% ورصد الماوس حتى راقد.
    1. تبديل نظام بالتدفق إلى نوسيكوني. إزالة الحيوان من الدائرة والموقف في نوسيكوني. في 2-3 دقائق، يبدأ الماوس توقظ. استئناف تدفق الغاز مع مقياس التدفق في 100-200 مل/دقيقة والمبخر في إيسوفلوراني 3%.
    2. ضمان العمق الكافي للتخدير قبل تنفيذ الإجراءات عن طريق اختبار سحب دواسة وردود الفعل بالبيبرال. مراقبة التنفس واستجابة للتحفيز أثناء الإجراء وضبط المبخر حسب الحاجة.
    3. حماية القرنيات من الجفاف عن طريق تطبيق مرهم العيون.
  7. إعداد الحيوان عن طريق إزالة الشعر من الموقع الجراحي باستخدام الشفرة (الشكل 1). الموقع المعتاد لغرس مضخة تحت الجلد على ظهره.
  8. إعداد موقع الجراحية مع لوحة غير المنسوجة مواد مشبعة بكحول الأيزوبروبيل 70%.
  9. استخدام مساحة نظيفة ومخصصة (تطهيرها مع الإيثانول 70 في المائة) ومغطاة ثني عقيمة. ضع تلميح الأدوات في معقم حبة زجاج. تبدأ عملية جراحية بأدوات معقمة والتعامل مع الصكوك أسيبتيكالي.
  10. استخدام مقص الجراحية جعل من 0.8-1 شق سم (حوالي 2 سم قريبة من الذيل)، كما هو مبين في أرقام 1E 1F. الحفاظ على العقم بعدم لمس أي شيء خارج مساحة مخصصة الجراحية مع قفازات معقمة أو تلميحات الأدوات.
  11. العناية بقطع الجلد فقط ولكن ليس الأنسجة الكامنة. استخدام يدا واحدة للاحتفاظ بالملقط لفتح الشق. استخدام اليد الأخرى لعقد تروكار ينتشر الجلد من أجل إنشاء جيب للمضخة من الخلف صعودا إلى الكتف (على الجانب الأيمن أو الأيسر للماوس).
  12. إدراج المضخة في الشق. بلطف دفع المضخة تماما إلى الجيب (الشكل 1 ح). ينبغي أن يكون هناك ما يكفي الجلد مجاني لإغلاق الجرح بأي توتر أو تمتد من الجلد بحاجة. بمجرد تم إدراج المضخة، خياطة الشق مع سلك الجراحة (بوليجلاكتين 910 مع خياطة الحجم 6-0)
    ملاحظة: يجب أن يكون رئيس الجهة المنظمة للتوجه نحو الجزء الأمامي الماوس (الشكل 1).
  13. تطبيق 10% البوفيدون/اليود مرهم موضعي مع مسحه نظيفة (رقم 1I) وإبقاء الحيوان في مرحلة الاحترار. لا تترك الفئران غير المراقب حتى أنهم استرداد ريكومبينسي القصية. تقييم وضع الماء وإدارة 0.5 مل محلول الملحي 0.9% تحت الجلد إذا لزم الأمر. العودة الحيوان السكن الروتينية.
  14. اتبع المبادئ التوجيهية المؤسسية للوثائق (مثلاً، ملء استمارة جراحية مع معلومات من المنطوق وبعد العمليات الجراحية، تحديث بطاقة القفص مع الإجراء والتاريخ) وتوفير المسكنات (البوبرينورفين، 0.05 مغ/كغ) تقليل الألم بعد الجراحة و المضادات الحيوية (انروفلوكساسين 85 مغ/كغ) لتجنب العدوى بعد الجراحة.
    1. مواصلة الرصد اليومي ودراسة لعلامات ألم. انتبه أن الجرح مغلق تماما وهو الحفاظ على مينيبومب في جيب تحت الجلد. وقد فتح الجرح وقد تفقد الماوس مينيبومب.

3-تشريح القلب

  1. وقت التضحية، الفئران أنيستيثيزي مع 80-100 مغ/كغ زوليتيل التي تديرها عضليا. زوليتيل يستحث التخدير العميق. ملاحظة: تحقق من أن الفئران في عمق كاف للتخدير قبل تنفيذ الإجراءات عن طريق اختبار دواسة وردود الفعل بالبيبرال؛ وسوف perfused الفئران بينما تخديره من عميق. فتح تجويف الصدر، باستخدام المقص والملقط، بقطع الأضلاع أفقياً للقص، مع القص ويجري سحب نحو الرأس.
  2. نتخلل الماوس عبر البطين الأيسر بخطورة نظام التروية مع 10-15 مل المحلول الملحي الفوسفات مخزنة المثلج دولبيكو (PBS)، ومن ثم مع 40-50 مل من 10% فورمالين مخزنة محايدة لإصلاح المفرج. تتم الإشارة إلى التثبيت عند الفئران يحمل تقلصات عضلة قوية وتصبح جامدة.
    ملاحظة: تجري عملية إصلاح في 10-20 دقيقة. فمن الممكن لاستخدام الأجهزة الثابتة والأنسجة لإجراء الفلورة أو التحليلات إيمونوهيستوتشيميستري. الأهم من ذلك، لا يمكن استخدام هذه الأنسجة الثابتة للتعبير الجيني والتحليلات الغربية النشاف.
  3. فصل في القلب من الشريان الاورطي بعقد القلب مع الملقط وقطع مقص أو شفرة المبضع، أما عمودياً على المحور من الشريان الاورطي، أقرب ما يمكن إلى القلب دون التسبب في أضرار (الشكل 2A). استخدام شفرة المبضع لخفض العرض على طول خط مستقيم يربط النقاط السفلي من الاذين الأيمن والأيسر (الشكل 2).
  4. ملء الجزء العلوي من قلب مقطعة (من خلال تجويف القلب) مع قطع الأمثل المجمع (OCT) (الشكل 2D--2E). وضع الأنسجة داخل قالب بلاستيك كريوسيكشن مع المحور من الشريان الاورطي توضع عمودياً لقاعدة العفن مستطيلة وتغطي مع أكتوبر (الشكل 2 واو). ينبغي أن يكون هناك لا فقاعة هواء المحاصرين. في حالة وجود أي فقاعة، محاولة لتحل محل ذلك إلى الحافة.
  5. وضع لوحة معدنية على الثلج الجاف ومن ثم وضع بعناية العفن في (الشكل 2). عندما يصبح OCT أبيض، التفاف القالب برقائق الفضة ومن ثم تخزين في –80 درجة مئوية.

4-قطع المقاطع من "جذر الابهر"

  1. تعيين الجهاز كريوستات إلى –20 درجة مئوية. قبل قطع، ضع الأنسجة جزءا لا يتجزأ واتركه هناك لمدة حوالي 15 دقيقة لضبط درجة الحرارة هذه. ضبط درجة حرارة العينة حامل إلى-17 درجة مئوية (الشكل 3A).
  2. وضع كتلة القلب المجمدة داخل الجهاز كريوستات بتوازن درجة حرارة الكتلة إلى كريوستات (الشكل 3B) وتأخذ بها كتلة القلب المجمدة من العفن (الشكل 3). قص OCT الزائدة من كتلة المجمدة التكيف على نحو أفضل أبعاد كتلة لصاحب العينة (3D الشكل).
  3. جبل كتلة القلب المجمدة على صاحب العينة المنحى مع تواجه البطين إلى الخارج (الشكل 3 أي-3I) وإدراج صاحب العينة العينة توجيه رئيس (3J الشكل). ضبط اتجاه صاحب العينة للسماح بخفض كتلة بغية جعل جذر الاورطي عمودي على الشفرة (الشكل 3 K).
  4. قص الكتلة وتجاهل الشرائح حتى يتم الوصول إلى جذر الاورطي (الشكل 3 L-3N). جمع الأجزاء المسلسل ووضعها على الشرائح الزجاجية (3O الشكل). رصد الشخصية جذر الاورطي تشريحي تحت المجهر حتى تظهر جميع الصمامات الابهري 3 (الشكل 3 ف-3Q).
  5. تجميع المقاطع في 10 ميكرون/قسم "النفط س الأحمر" وتلطيخ "بيكرو سيريوس الأحمر"، وفي 6 ميكرومتر/قسم MAC3 لتلطيخ (3R الشكل). تجمع حولها شرائح 6-8 (لكل قلب) حتى واحد من ثلاث صمامات يختفي أو غير سليمة بعد الآن.

5-إيمونوهيستوتشيميستري

ملاحظة: يتم تنفيذ جميع الخطوات المصبوغة عنها في البروتوكولات التالية في الزجاج كوبلين المصبوغة الجرار.

  1. النفط يا أحمر وصمة عار للدهون محايدة
    1. إصلاح أبواب في 70 مل 37% فورمالدهيد للحد الأدنى 5 يغسل جيدا بماء الصنبور ولطخة خارج المياه الزائدة.
    2. تمييع 48 مل من "الزيت الأحمر يا" (0.5% في الايزوبروبانول) في 32 مل ماء المقطر للحصول على "النفط الأحمر يا" 0.3 في المائة.
    3. وصمة عار المقاطع في 70 مل من "الزيت الأحمر يا" 0.3% لأقسام الغسيل 10 دقيقة في الاستفادة من المياه لمدة 10 دقائق.
    4. وصمة عار لمدة 1 دقيقة في 70 مل لتوضع في ماير. أغسل المقاطع في مياه الحنفية لمدة 1 دقيقة.
    5. تزج المقاطع في 70 مل من كربونات الليثيوم 0.5%. تغسل بماء الصنبور لمدة 1 دقيقة.
    6. جبل المقاطع مع تصاعد مائية المتوسطة والتقاط صور باستخدام كاميرا رقمية التي شنت على مجهر ضوء.
  2. الأحمر سيريوس بيكرو وصمة عار للكولاجين
    1. قطع 10 ميكرون تجميد الأجزاء وجبل في الجزء السفلي من الشريحة.
    2. إصلاح أبواب في 70 مل من الأسيتون لمدة 5 دقائق والهواء الجاف والشطف بإيجاز في الماء المقطر.
    3. وضع المقاطع في 70 مل حمض فوسفوموليبديك 0.2% لأدنى 5 شطف بإيجاز في الماء المقطر.
    4. وضع المقاطع في 70 مل من 0.1% سيريوس بيكرو حل ل 90 دقيقة يشطف مرة واحدة مع 70 مل من 0.01 N HCl. تجاهل الحل.
    5. مكان في 70 مل من 0.01 N HCl للحد الأدنى 2 الشطف بإيجاز في ماء مقطر. الهواء الجاف.
    6. مكان بإيجاز في 70 مل إيثانول 70%.
    7. عندما يجف تماما، في 70 مل من مسح عامل أصل تربين وتحميل المقاطع باستخدام بولي (بيوتيل ميثاكريلات-co-ميثاكريلات الميثيل) على أساس تصاعد المتوسطة والتقاط الصور باستخدام كاميرا رقمية التي شنت على مجهر خفيفة.
      ملاحظة: واحد من المزايا لتلطيخ "بيكرو سيريوس الأحمر" أنه من الممكن التمييز بين النوع الأول (ألياف سميكة، وانكسار مزدوج الأصفر-البرتقالي) وشبكات الألياف الكولاجين "النوع الثالث" (ألياف رقيقة، وانكسار مزدوج الخضراء) بالاستقطاب مجهرية الخفيفة11 .
  3. Mac3 وصمة عار لتلطيخ بلعم
    1. قص 6 ميكرومتر تجميد الأجزاء وجبل في الجزء السفلي من الشريحة.
    2. إصلاح أبواب في 70 مل من الأسيتون البارد لأدنى 5 تزج في 70 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 2 دقيقة.
    3. استخدام ماصة، أقسام الغطاء مع 1% الصوديوم دوديسيل كبريتات الحل (الحزب الديمقراطي الصربي) واحتضانها لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (RT) لاسترجاع مستضد. تزج في 70 مل من برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق.
    4. استخدام ماصة، تغطي الشرائح مع بيروكسيد الهيدروجين 0.3% عن 20 دقيقة أغسل في 70 مل من برنامج تلفزيوني 3 مرات لمدة 5 دقائق.
    5. استخدام مجمعات عبدين-البيوتين (ABC)-"طقم برنامج الصحة الإنجابية" للخطوات التالية.
    6. استخدام ماصة، كتلة الأقسام في المصل "الأرنب العادي" في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. لا شطف.
    7. وصمة عار مع MAC3 (رافعة) ل 90 دقيقة في غسل الرايت في 70 مل من برنامج تلفزيوني 3 مرات لمدة 5 دقائق.
    8. وصمة عار مع الثانوية-بيوتينيلاتيد "مفتش" مكافحة الفئران (1: 200) لمدة 45 دقيقة في شطف الرايت مع 70 مل من برنامج تلفزيوني 3 مرات لمدة 5 دقائق.
    9. وتشمل الفروع مع أرنب مفتش ABC مدة 30 دقيقة في شطف الرايت مع 30 مل من برنامج تلفزيوني 3 مرات لمدة 5 دقائق.
    10. تغطية المقاطع مع 3-أمينو-9-اثيلكاربازولي (AEC) 10 دقيقة شطف مع 70 مل من الماء المقطر لعشر مرات.
    11. وصمة عار لمدة 1 دقيقة في 70 مل لتوضع في ماير. أغسل المقاطع في مياه الحنفية لمدة 1 دقيقة.
    12. تزج المقاطع في 70 مل من 0.5% كربونات الليثيوم. تغسل بماء الصنبور لمدة 1 دقيقة.
    13. جبل المقاطع مع تصاعد مائية المتوسطة والتقاط صور باستخدام كاميرا رقمية التي شنت على مجهر ضوء.

6-صورة التحليل الآفات تصلب الشرايين في الأقسام الجذر الابهري

ملاحظة: يمكن تحليل المقاطع جذر الاورطي ملطخة بالزيت الأحمر س أو MAC3 أو جسم مضاد لمصلحة استخدام البرمجيات المناسبة (المشار إليها في الجدول للمواد). مجموع بكسل تلطيخ إيجابية لعنصر المصلحة هو تطبيع إلى منطقة البلاك عموما. الصور تم جمعها وتحليلها من قبل محقق أعمى من العلاج.

  1. معايرة
    1. افتح البرنامج وثم حدد الصورة (في جي بي جي) يتم تحليلها.
    2. حدد في الصفحة الرئيسية | إنشاء | معايرة سريع.
    3. إعداد معايرة الصورة عن طريق رسم خط على طول شريط مقياس الصورة.
    4. حفظ الإعداد للمعايرة.
  2. تحليل الصور
    1. حدد معايرة الإعداد المحفوظ من قائمة خيارات | خيار معايرة المكانية.
    2. حدد المعايرة | تطبيق.
    3. حدد أداة المضلع في القائمة تحديد ورسم محيط على امتداد جميع الآفات تصلب الشرايين.
    4. تحديد عدد مرات وحجمه | أنواع. من القائمة، أضف في المائةو منطقة .
    5. من العد/حجم القائمة، سيتم فتح نافذة جديدة وتحديد دليل .
    6. من هذه النافذة انقر على أداة اختيار الألوان في الصورة وحدد وضع الجمعيتان .
    7. أشر مؤشر الماوس في بكسل إيجابية علامة الاهتمام لإنشاء مجموعة من الألوان.
    8. انقر فوق عدد والقيمة المبلغ، لوحظ في جدول القياس، يشير إلى النسبة المئوية لمنطقة علامة (معبراً عنه أيضا ميكرومتر2) فيما يتعلق بالمساحة الكلية لآفات تصلب الشرايين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في 8-10 أسابيع Apo-/-- الفئران، تم زرعها مينيبومبس لبث مع السيارة أو الدوستيرون (1E الرقم-1I) وتغذية نظام غذائي atherogenic (42 في المائة من الدهون حمية السعرات الحرارية المعدلة) لمدة 4 أسابيع. في نهاية العلاج، كانت الفئران euthanized و perfused مع برنامج تلفزيوني والفورمالين 10% كما هو موضح أعلاه. تم فصلها عن الجزء قمي من القلب جذر الاورطي وكان جزءا لا يتجزأ من أكتوبر (الشكل 2). المقاطع العرضية لجذور ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصلب الشرايين اضطراب التهابات مزمنة المرتبطة بالسفن الكبيرة والمتوسطة الحجم التي تنطوي على تفاعلات بين العديد من أنواع الخلايا، مثل الضامة اللمفاويات T وخلايا بطانية و خلايا العضلات الملساء1. على الرغم من محدودية موريني نماذج atherogenic، تتوفر مجموعة كبيرة من الأدلة على أن عملية تصلب الشرايين. تتميز هذه النماذج بسرعة توليد الأفواج تجريبية محددة العمر ونوع الجنس. كما تظهر الفئران خلفية وراثية محددة ومتجانسة.

تطوير لويحات تصلب الشرايين، ولاحظ في نماذج الماوس عرضه لتصلّب ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

كان يؤيد هذا العمل من المنح المقدمة من وزارة الصحة الإيطالية (كورينتي ريشيركا وغرام-2009-1594563 بي-2011-02347070 لمولودية)

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نظام غذائي معدل للسعرات الحرارية (42٪ من الدهون)EnvigoTD.88137نظام غذائي تصلب الشرايين
مضخة صغيرة تناضحية مع أنبوب تعبئةAlzetنموذج 1004للريالاز المستمر
AldosteroneSIGMAA9477هرمون
الإيثانولSIGMA34852-Mمذيب
Alchol Preps المشبع ب 70٪ كحول الأيزوبروبيلKendal Webcol6818
سلك جراحة مطهر (فيكريل 6.0)500004 ديماس
10٪ مرهم بوفيدون / يودأبليكير-ميريدن52380-0026-1مطهر
فورمالين 10٪SIGMAHT5012لإصلاح الأوعية
الدموية CryomoldBio-Optica07-MP1515لتضمين
O.C.T. مركبساكورا فينيتيك4583لتضمين
CryostatLeicaCM1900لتقسيم
الملح المخزن المؤقت من Dulbecco DulbeccoAurogeneAU-L0615-500محلول عازلة
التصاق البوليسينVWR631-0107مجهر
غطاءBio-Optica72015الغطاء
الفورمالديهايد 37٪المذيبات252549 SIGMA
محلول Red O (0.5٪ في الأيزوبروبانول)تلطيخSIGMAO1391
Mayer s HematoxylinSIGMAMHS32محلول تلطيخ
كربونات الليثيومSIGMA62470عازلة الغسيل المخزن
تصاعد مائي متوسطالحرارة العلميةTA-125-AM
محلول تركيب الأسيتونSIGMA179124المذيب
محلول حمض الفوسفوموليبديكSIGMAHT153لعلم الصحة
أحمر مباشر 80 (بيكوسيريوس أحمر)SIGMA365548محلول تلطيخ
Bio Clear (عامل تطهير من أصل التربين)Bio-Optica06-1782Dلإعداد عينات نسيجية
Eukitt وسط تركيب سريع التصلب (بولي (بوتيل ميثاكريلات - كو ميثيل ميثاكريلات) محلولتركيب SIGMA3989
مسحوق دوديسيل كبريتاتفلوكا71725
محلول بيروكسيد الهيدروجين (30٪)SIGMAH1009
Vectorstain ABC KIT بما في ذلك: مضاد للأرانب IgG ABC ، مصل أرنب عادي ، مضاد للفئران الثانوي البيوتينيل IgG ،مختبرات ناقلاتPK-6100محلول تلطيخ
3-amino-9-ethylcarbazoleVector LaboratoriesSK-4200محلول تلطيخ
Mac3 الأجسام المضادةBD Biosciences553322الأجسام المضادة
ImagePro Premier 9Media Cybernetics050910000-2534برنامج لتحليل الصور
جراحة أداة محلول شرائح نظارات نظارات نظارات زيت محلول المؤقت منتج محلول

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ross, R. Atherosclerosis--an inflammatory disease. New England Journal of Medicine. 340 (2), 115-126 (1999).
  2. Lafont, A. Basic aspects of plaque vulnerability. Heart. 89 (10), 1262-1267 (2003).
  3. Getz, G. S., Reardon, C. A. Animal models of atherosclerosis. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 32 (5), 1104-1115 (2012).
  4. Bentzon, J. F., Falk, E. Atherosclerotic lesions in mouse and man: is it the same disease? Current Opinion in Lipidology. 21 (5), 434-440 (2010).
  5. Getz, G. S., Reardon, C. A. Do the Apoe-/- and Ldlr-/- Mice Yield the Same Insight on Atherogenesis? Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (9), 1734-1741 (2016).
  6. Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).
  7. Schwartz, S. M., Galis, Z. S., Rosenfeld, M. E., Falk, E. Plaque rupture in humans and mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27 (4), 705-713 (2007).
  8. de Rita, O., Hackam, D. G., Spence, J. D. Effects of aldosterone on human atherosclerosis: plasma aldosterone and progression of carotid plaque. Canadian Journal of Cardiology. 28 (6), 706-711 (2012).
  9. Ivanes, F., et al. Aldosterone, mortality, and acute ischaemic events in coronary artery disease patients outside the setting of acute myocardial infarction or heart failure. European Heart Journal. 33 (2), 191-202 (2012).
  10. McGraw, A. P., et al. Aldosterone increases early atherosclerosis and promotes plaque inflammation through a placental growth factor-dependent mechanism. Journal of the American Heart Association. 2 (1), e000018(2013).
  11. Rittie, L. Method for Picrosirius Red-Polarization Detection of Collagen Fibers in Tissue Sections. Methods in Molecular Biology. 1627, 395-407 (2017).
  12. Caprio, M., et al. Functional mineralocorticoid receptors in human vascular endothelial cells regulate intercellular adhesion molecule-1 expression and promote leukocyte adhesion. Circulation Research. 102 (11), 1359-1367 (2008).
  13. Marzolla, V., et al. Essential role of ICAM-1 in aldosterone-induced atherosclerosis. International Journal of Cardiology. 232, 233-242 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Oil Red O OCT

مقالات ذات صلة