ويصف هذا البروتوكول التوليف وتوصيف ترانس-سيكلوكتيني (TCO)-تعديل الأجسام المضادة وراديوليجاند لو المسمى تيترازيني (Tz) 177راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد (مدير). وبالإضافة إلى ذلك، أنها تفاصيل استخدام هذه الثوابت اثنين للدراسات الطولية العلاج في نموذج موريني سرطان القولون والمستقيم و في فيفو بيوديستريبوتيون.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد بناء على تفاعل ديلز-الدر الطلب إلكترون معكوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في حين راديويمونوثيرابي (RIT) نهجاً واعداً لعلاج السرطان، يمكن أن يؤدي نصف فترة طويلة الحرائك الدوائية للأجسام المضادة راديولابيليد جرعات إشعاع عالية للأنسجة السليمة. ربما ليس من المستغرب أن العديد من الاستراتيجيات المختلفة قد وضعت للالتفاف حول هذا القيد المثيرة للقلق. واحد الأكثر تبشيرا بالنجاح لهذه النهج راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد (مدير). مدير يقوم على فصل النويدات المشعة من الغلوبولين المناعي والحقن منهم على حدة، وثم السماح لهم الجمع في فيفو في النسيج المستهدف. وهذا النهج يسخر خصائص الأجسام المضادة لاستهداف الورم استثنائية بينما يتجنب سلبياتها الحرائك الدوائية، مما خفض جرعات الإشعاع على الأنسجة غير المستهدفة وتيسير استخدام النويدات المشعة مع إنصاف التي تعتبر قصيرة جداً للاستخدام في راديويمونوكونجوجاتيس التقليدية. على مدى السنوات الخمس الماضية، تطورت مختبرنا وآخرون نهج في فيفو بريتارجيتينج استناداً إلى تفاعل ديلز-الدر (إيدا) الطلب إلكترون معكوس بين ترانس-سيكلوكتيني (TCO) وتيترازيني (Tz). تم بنجاح تطبيق هذه الاستراتيجية إلى بريتارجيتيد التصوير المقطعي بانبعاث البوزيترون (PET) وانبعاث فوتون واحد المقطعي (SPECT) التصوير مع مجموعة متنوعة من نظم جسم مضاد-مستضد. في زوج من المنشورات التي صدرت مؤخرا، لقد أظهرنا كفاءة مدير المستندة إلى إيدا في نماذج مورين غدية الأقنية البنكرياس وسرطان القولون والمستقيم. في هذا البروتوكول، يصف لنا البروتوكولات لمدير استخدام راديوليجاند تيترازيني Lu-DOTA-المسمى 177(لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz) ومتغير تعديل تكلفة الامتلاك الكلية لسرطان القولون والمستقيم استهداف جسم huA33 (huA33-TCO). وبشكل أكثر تحديداً، ونحن سوف تصف بناء huA33-تكلفة الامتلاك الكلية، والتوليف و لو-DOTA-شماعة راديولابيلينج من [177لو]7-Tz، والأداء في فيفو بيوديستريبوشن والدراسات الطولية العلاج في نماذج مورين سرطان القولون والمستقيم.
المقدمة
راديويمونوثيرابي (RIT) – استخدام الأجسام المضادة لتسليم النويدات المشعة العلاجية للأورام – منذ فترة طويلة نهجاً تحريضية لعلاج السرطان1،2. والواقع أن هذا الوعد قد أكد موافقة اثنين من راديويمونوكونجوجاتيس لعلاج الأورام اللمفاوية عدم هودجكين الولايات المتحدة إدارة الأغذية والعقاقير في: 90إيبريتوموماب Y تيوكسيتان و 131-توسيتوموماب3 , 4-بعد حتى من بداياته، تعرقلت آفاق السريرية للفرقة مضاعفات حرجة: معدلات الجرعة العالية الإشعاع على الأنسجة السليمة5،6. وبصفة عامة، يتم المسمى رادي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
كافة في فيفو التجارب على الحيوانات ووصف في هذا العمل المنجز وفقا للبروتوكولات المعتمدة والمنفذة في إطار المبادئ التوجيهية الأخلاقية مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان ومركز ويل كورنيل الطبي، وكلية هنتر مؤسسات الرعاية الحيوانية واستخدام اللجان (إياكوك).
1. إعداد huA33-تكو
ملاحظة: تم توليف huA33-تكو سبق الإبلاغ عنها29. ومع ذلك، تسهيلا للقارئ، يتم إجراء نسخ متماثل هنا مع تعديلات للظروف المثلى.
- في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.7 مل، تعد حلاً ميكروليتر 125 (ه)--سيكلوكت--4-أنيل 2.5-ديوكسو-1-بيروليدينيل كربونات (TCO--دائرة الصحة الوطنية) في الجافة ثنائي ميثيل ميثلامين (DMF) ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويستند على تصريف تكلفة الامتلاك الكلية إلى huA33 اقتران بين رد الفعل أمين TCO--دائرة الصحة الوطنية وبقايا يسين على سطح جسم مضاد. هذا الأسلوب هو قوية للغاية واستنساخه وغلة موثوق بها درجة من-العلامات من تكلفة الامتلاك الكلية/ماب 2-4. وفي هذه الحالة، كان يعمل ToF استخدام الطيف الكتلي للتأكد من درجة من وسم من تكلفة الامتلاك الكلية حوالي 4.0/ماب؛ قيمة مماثلة تم الحصول عليها باستخدام تيترازيني تعديل fluorophore ك مراسل24. يتم توليف ليجند تيترازيني في ثلاث خطوات: (1) اقتر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
واحدة من نقاط القوة في هذا النهج في فيفو بريتارجيتينج – خاصة فيما يتعلق باستراتيجيات مبنية على أجسام بيسبيسيفيك وراديولابيليد هابتينس – هو نمطية: يمكن إلحاق ترانس-سيكلوكتيني مويتيس بأي جسم، ويمكن راديولابيليد راديوليجاندس تيترازيني مع مجموعة غير عادية من النويدات المشعة دون إضعاف قدرتها على الرد مع شركائها في انقر فوق. بعد تكييف هذا النهج إلى نظام جسم/مستضد الأخرى ليست بهذه البساطة تكرار البروتوكول هو موضح هنا. وبطبيعة الحال، ينبغي أن يقترن أي محاولة لخلق إيمونوكونجوجاتي ماب-تكو جديدة أو راديوليجاند تيت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون الدكتور جاكوب هاوتون للمحادثات مفيدة. الكتاب أيضا يود أن يشكر المعاهد الوطنية للصحة لتمويلها السخي (R00CA178205 و U01CA221046).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| (ه) -Cyclooct-4-enyl 2،5-dioxo-1-pyrrolidinyl carbonate (TCO-NHS) | Sigma-Aldrich | 764523 | Store عند -80 درجة ؛ C |
| 2،5-Dioxo-1-pyrrolidinyl 5- [4- (1،2،4،5-tetrazin-3-yl)benzylamino] -5-oxopentanoate (Tz-NHS) | Sigma-Aldrich | 764701 | Store at -80 & deg; C |
| Acetonitrile (MeCN) Fisher | Scientific | A998-4 | |
| أسيتات الأمونيوم (NH4OAc) | فيشر Scientific | A639-500 | |
| Boc-PEG 7< / sub>-amine (O- (2-Aminoethyl) -O & prime ؛ - [2- (Boc-amino) ethyl] hexaethylene glycol) | Sigma-Aldrich | 70023 | يخزن في -20 درجة ؛ سي |
| ثنائي كلورو ميثان (DCM) | فيشر Scientific | D143-1 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) ، اللامائي | فيشر Scientific | D12345 | |
| EMD Millipore Amicon Ultra-2 وحدة تصفية الطرد المركزي | فيشر Scientific | UFC205024 | |
| GE Healthcare يمكن التخلص منها PD-10 أعمدة تحلية | المياه فيشر Scientific | 45-000-148 | |
| N ، N-Dimethylformamide (DMF) ، اللامائي | فيشر Scientific | AC610941000 | |
| ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) فيشر | Scientific | 70-011-044 | 10x مركز |
| p-SCN-Bn-DOTA | Macrocyclics | B-205 | يخزن عند -20 درجة ؛ سي |
| ثلاثي إيثيل أمين (TEA)فيشر | ساينتفيك | AC157911000 | |
| حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (TFA)جهاز | قياس الورم فيشر Scientific | A116-50 | |
| بيرا TM900 | بيرا TM900 |
المراجع
- Goldenberg, D. M. Targeted Therapy of Cancer with Radiolabeled Antibodies. Journal of Nuclear Medicine. 43 (5), 693-713 (2002).
- Goldenberg, D. M., et al. Radioimmunotherapy of B-cell Lymphomas with Iodine-131-labeled LL2 Monoclonal Anti....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
