مقالة منهجية

تحديد "معدل إخصاب البيض" من حيث دراسة استخدام "تقنية الخلوية الوراثية"

DOI:

10.3791/59213

⸱

أبريل 1, 2019

 , 
1Graduate Interdisciplinary Program in Entomology and Insect Science, University of Arizona, 2Department of Entomology, University of Arizona

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم تقنية الخلوية الوراثية بسيطة باستخدام 4, 6-دياميدينو-2-فينيليندولي (DAPI) لتحديد معدل الإخصاب والابتدائي نسبة الجنس من الآفات هابلوديبلويد الغازية حيث دراسة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أنواع قليلة من مص ساب ويتيفليس هي بعض من الآفات الأرضية الأكثر ضررا في العالم بسبب أنها تلحق الضرر المحاصيل وفيروسات النباتات أنها متجهة. على الرغم من العديد من الدراسات لعلم الأحياء من هذه الأنواع في البيئات المختلفة، معلمة تاريخ حياته رئيسية، ذرية النسب بين الجنسين، تلقي اهتماما قليلاً، وهو بعد هام للتنبؤ بالديناميات السكانية. نسبة الجنس الأولية (نسبة الجنس في أوفيبوسيشن) من حيث دراسة قط أبلغ ولكن يمكن العثور عليها بتحديد معدل إخصاب البيض من هذه الحشرة هابلوديبلويد. الأسلوب الذي ينطوي على ديتشوريونيشن البيض مع التبييض، وسلسلة من خطوات التثبيت، والتطبيق العام الحمض النووي الفلورسنت وصمة عار، DAPI (4، 6-دياميدينو-2-فينيليندولي، وصبغة فلورسنت الحمض النووي ملزم)، لربط برونوكلي الذكور والإناث. نقدم هنا، التقنية، ومثالا لتطبيقه، اختبار ما إذا كان بكتيريا اندوسيمبيوتيك، الريكتسية sp. nr. بيلي، تتأثر نسبة الجنس الأولية من حيث (ب). قد يساعد هذا الأسلوب في الدراسات السكانية من ويتيفليس، أو في تحديد ما إذا كان يوجد تخصيص الجنس مع بعض المحفزات البيئية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دراسة تخصيص الجنس أو الاستثمار النسبي في نسل الذكور والإناث، حجر زاوية في الإيكولوجيا السلوكية1،،من23. بالإضافة إلى قوتها لاختبار نماذج التكيف للسلوك، يمكن أن يحسن معرفة استراتيجية تخصيص الجنس كائن نماذج في ديناميات السكان. في كثير من الأنواع، وتخصيص الجنس يسيطر الأمهات. لتحديد تخصيص الجنس، من المهم تحديد نسبة الجنس الأساسي أو نسبة الإناث في وقت ترسب البيض. وفيات الإنمائية التفاضلية بين الأحداث من الذكور والإناث على الرغم من أن نسبة الجنس عند ظهور الكبار قد توفر أدلة على تخصيص الجنس، قد يشيع تحرف نسبة الجنس الكبار إلى حد كبير. في بعض الأنواع من غشائيات الأجنحة، ترتيب الحشرات ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: التأكد من أن جميع الأعمال تتم في درجة حرارة الغرفة في منطقة جيدة التهوية، أو تحت غطاء دخان. يتم تعريف كافة 'قطرات' في هذا البروتوكول ك 5 – 20 ميليلتر، اعتماداً على تفضيل للمشغل.

1-الإعداد الأولى

  1. السماح للنساء ويتيفليس أوفيبوسيت على أوراق نظيفة. وتشمل الأمثلة للساحات أوفيبوسيتيون أقفاص القصاصة أو يترك قطع لتناسب في أجار في طبق بتري. جعل حفرة تغطيها في قفص القصاصة أو غطاء صحن بيتري إدراج وإزالة الكبار. وبدلاً من ذلك، وضع سفينة التي تم جمعها من الكبار بسرعة على الجليد، وثم إيداعها على الورقة. يحدد الوقت الذي بين أوفيبوسيشن والتثبيت البيض أن لا يزيد عن 60 دقيقة، لضمان مراقبة انتقال الحيوانات المنوية إلى برونوك....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لاختبار ما إذا كان الريكتسية يؤثر معدل الإخصاب حيث MEAM1 الإناث، نحن تربى الريكتسية-إصابة (R+) أو وقاية (R–) حيث (ب) على نباتات اللوبيا (Vigna unguiculata) في فصل أقفاص في 27 درجة مئوية ورطوبة نسبية 70% من ضوء/8 ح 16 ح كبيرة مظلمة. R+ ويتيفليس الطور الرابع ص– بعناية إزالة من أوراق ومعزولة في 200 ميليلتر قطاع أنابيب. عندما ظهرت الكبار، أنها جمعت في مجموعات من الإناث 50% ونقل إلى أوراق نظيفة في أطباق بت.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول هو الأول من التقاط معدل الإخصاب أو نسبة الجنس الأولية من حيث (ب). التحدي المتمثل في هذا البروتوكول أنه يتطلب الباحثين لمعرفة كيفية التعامل مع البيض الذبابة بسرعة وضمان أن لا أكثر من ح 1 انقضى منذ كانت أوفيبوسيتيد البيض حتى أنها ثابتة. أثناء تجارب أولية، البيض التي تم إصلاحها في ح 3 أو أكثر بوستوفيبوسيشن كانت قديمة جداً لمراقبة الإخصاب، كما قد حدث سينجامي وانقسامات فتيلية جارية. بين 1 إلى 3 ح، أخذت برونوكلي على شكل مستدير. بينما يشير إلى الوجود المبكر هما نواة البويضة مخصبة، قليلاً في وقت لاحق، بدل.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا البحث بمنحه جبهة الخلاص الوطني (ديب-1020460) إلى M.S.H. ومنحة وزارة الزراعة أفري (2010-03752) إلى M.S.H. يشكر المؤلفون زيهر برينان لتلطيخ بيض الذبابة بقدر كبير من المهارة وزين. يشكر المؤلفون مايك ريلي للسماح باستخدام مجهر فلوري له للتصوير. يشكر المؤلفون سوزان كيلي وماركو جيبيولا للصور البيض. يشكر المؤلفون كيلي سوزان وجيمي كونواي للعون في اللحظات الحاسمة من خلال التجارب.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1x PBSأي
1x TBSTأيمحلول 5x مصنوع من 30 جم تريس ، 43.8 جم كلوريد الصوديوم ، 5 مل توين -20 و 1.0 جم NaN3< / sub> درجة الحموضة 7.5 ، ويتم إحضارها إلى 1 لتر مع ماء بدرجة PCR
BleachCloroxسيعمل أي مبيض منزلي طالما يمكن تخفيفه إلى 0.83٪ هيبوكلوريت الصوديوم
طلاء أظافر شفافأي
DAPI ثنائي اللاكتاتسانتا كروز التكنولوجيا الحيويةsc300415
الإيثانولأيمخفف إلى 70٪ EtOH
مجهر فلورينيكوننيكون Eclipse 50i تم استخدامه في هذه التجربة ، ولكن يمكن استخدام أي مجهر فلوري مع مرشح إثارة 340/380 نانومتر وتكبير 4-10x على الأقل يمكن استخدامه
حمض الخليك الجليديMallinckrodtUN2789
Glycerolأي
WildA Wild M5A في هذه التجربة ، ولكن يمكن استخدام أي مجهر حيث يمكن للمشغل رؤية بيض الذبابة البيضاء بوضوح
وأغطية شرائح المجهرأيطرق لأغطية شرائح بحجم 18 مم × 18 مم. ستحتاج إلى إضافة المزيد من وسائط التركيب لأغطية الشرائح الأكبر.
شرائح المجهر أي
دبابيس Minuten nadelBioQuip1208SAدبابيس Minuten nadel اختيارية للتشكيل كمجسات مع أطراف ماصة
NaClAny
NaN3< / sub>
n-propyl-gallateSigma / Santa Cruz BiotechnologyP3130 / sc-250794
Parafilmبيميس
باستورفيشر ساينتفيك13-678-20Aفيشربراند ماصات باستور زجاجية يمكن التخلص منها 5.75 بوصة. قد تكون هناك حاجة أيضا إلى موقد بنسن إذا كان المشغل يرغب في إطالة وتضييق الماصات
من درجة الماء من فئة PCRأي
أطراف ماصةأيأطراف ماصة اختيارية للتشكيل كمجسات مع دبابيس دقيقة
لمبة قطارة صغيرةأيتتناسب مع ماصة باستور
تريسأي
توين -20أي
تم استخدام مجهر ، ، أي ماصات يجب أن

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. The Theory of Sex Allocation. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).
  2. Godfray, H. C. J. Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).
  3. Bourke, A. F. G., Franks, N. R.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DAPI

مقالات ذات صلة